参丹酮ⅡA诱导人鼻咽癌细胞凋亡及其作用机制的体外实验研究

目的：探讨丹参酮ⅡA诱导人鼻咽癌细胞（CNE－1）凋亡的作用及其机制。方法：在体外细胞培养的基础上用0．5ug/ml丹参酮ⅡA处理CNE－1细胞4天，而后应用光镜，电镜，集落形成试验，DNA凝胶电泳及流式细胞仪分析CNE－1细胞增殖及凋亡的改变。结果：经丹参酮ⅡA处理后，CNE－1细胞增殖明显被抑制，镜下可见典型典型的凋亡细胞的特征性改变，细胞DNA呈现“梯状”断裂现象，流式细胞仪分析细胞凋亡的指数为16．9％，而对照组为6．4％，细胞凋亡相关基因fas,bax,p53及细胞周期负调基因p21表达明显增加，bcl-2表达明显降低。结果：丹参酮ⅡA具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用。其机制可能与其诱导某些凋亡及周期调控相关基因的表达有关。     

丹参酮ⅡA诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡

目的研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对人鼻咽癌CNE1细胞诱导凋亡及肿瘤相关基因Bcl-2和COX-2启动子表达的影响。方法不同浓度的TanⅡA体外干预CNE1细胞,用MTT比色法检测TanⅡA对CNE1细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测CNE1细胞凋亡、细胞周期及抗凋亡基因Bcl-2的表达,双荧光素酶法检测CNE1细胞COX-2启动子的活性。结果经TanⅡA干预后,CNE1细胞生长出现抑制,抑制率与TanⅡA浓度及作用时间呈依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01);TanⅡA组细胞凋亡率较对照组升高(P<0.01),凋亡率随TanⅡA浓度的增加而上升;细胞周期被阻滞于G2/M期。Bcl-2蛋白表达在短时间(6 h)内被TanⅡA抑制,且随TanⅡA浓度的增加而上升,差异有统计学意义(P<0.05);TanⅡA处理24 h后,Bcl-2蛋白表达随着TanⅡA浓度的增加先升高后抑制,差异有统计学意义(P<0.05);COX-2启动子活性随TanⅡA浓度增加而下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TanⅡA对CNE1细胞具有抑制生长、促进凋亡的作用,Bcl-2蛋白的表达下调和COX-2基因启动子活性下降可能是TanⅡA诱导CNE1细胞凋亡作用的机制之一。     

丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响

目的探讨丹参酮ⅡA（TanⅡA）诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度（0.5、1、2、4、8 mg/L）TanⅡA处理24、48、72 h对HeLa细胞的抑制率;免疫印记法（Western blot）测定Cx43及skp2表达。结果 MTT实验显示TanⅡA对宫颈癌hale细胞的生长具有明显抑制作用,其作用强度随药物作用时间及浓度的增加而增强;免疫印记法显示丹参酮ⅡA上调cx43,同时降低skp2表达。结论丹参酮ⅡA能明显抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,其机制可能与上调cx43的表达,抑制skp2的表达有关。     

丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞中凋亡抑制蛋白XIAP的影响。方法:通过MTT实验、流式细胞术、细胞形态观察检测丹参酮ⅡA对细胞增殖和凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹的方法检测丹参酮ⅡA对细胞中凋亡抑制蛋白XIAP、凋亡蛋白caspase-3以及PARP蛋白的影响。结果:MTT、细胞形态结果显示丹参酮ⅡA对SMMC-7721细胞的生长抑制作用成时间和剂量依赖性,免疫印迹结果显示,0.5μg/mL丹参酮ⅡA作用肝癌细胞24 h后,caspase-3前体、凋亡抑制蛋白XIAP表达明显下调,活化的caspase-3、剪切形式的PARP含量显著增加。结论:丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP,活化caspase-3,促进PARP剪切诱导肝癌细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA抗人黑素瘤A875细胞作用

目的 观察丹参酮ⅡA在体外对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞的影响.方法 体外培养A875细胞,0 μg/ml、4 μg/ml、8 μg/ml、16 μg/ml、32 μg/ml丹参酮ⅡA作用A875细胞24 h、48 h,用MTT法检测丹参酮ⅡA对A875细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态;Western blot法检测Caspase-3蛋白表达水平变化.结果 丹参酮ⅡA有抑制A875细胞增殖作用,并且呈明显的浓度、时间相关性;随药物作用时间延长,Caspase-3蛋白表达量逐渐升高.结论 丹参酮ⅡA促进Caspase-3高表达,诱导A875细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

丹参酮ⅡA与三氧化二砷联合诱导MR2细胞凋亡的研究

目的 研究丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA,TanⅡA)联合三氧化二砷(As2O3)对耐维甲酸的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞(MR2)诱导凋亡的协同效应,探讨其对MR2细胞P糖蛋白(Pgp)表达的作用. 方法以0.5、2.0、5.0 μmol/L As2O3单独及联合1.0 μg/mL TanⅡA 作用于MR2细胞,应用MTT比色法检测细胞的增殖活性,Annexin V/PI标记法观察细胞的凋亡效应,免疫组化法观察细胞Pgp表达. 结果临床剂量(0 5、2.0 μmol/L)As2O3联合 TanⅡA 作用下,随着作用时间延长,对MR2细胞增殖抑制作用逐步增强,药物作用168 h两组的细胞增殖抑制率分别为(90.67±5.52)%和(86.70±3.04)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P<0.01);诱导MR2细胞凋亡也逐步增强,168 h两组的细胞凋亡率分别为(81.52±7.23)%和(90.75±6.44)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P<0.01).同时As2O3 和TanⅡA单用及联合用药均能明显降低MR2细胞Pgp表达(P<0.01).结论 TanⅡA联合As2O3对MR2细胞诱导凋亡有协同作用,同时下调Pgp的表达.     

丹参酮ⅡA诱导人鼻咽癌细胞凋亡及其作用机制的体外实验研究

目的　探讨丹参酮 A诱导人鼻咽癌细胞 (CNE- 1)凋亡的作用及其机制。方法　在体外细胞培养的基础上用 0 .5 μg/m l丹参酮 A处理 CNE- 1细胞 4天 ,而后应用光镜、电镜、集落形成试验、DNA凝胶电泳及流式细胞仪分析 CNE- 1细胞增殖及凋亡的改变。结果　经丹参酮 A处理后 ,CNE- 1细胞增殖明显被抑制 ,镜下可见典型的凋亡细胞的特征性改变 ,细胞 DNA呈现“梯状”断裂现象 ,流式细胞仪分析细胞凋亡指数为 16 .9% ,而对照组为 6 .4% ,细胞凋亡相关基因 fas、bax、p5 3及细胞周期负调基因 p2 1表达明显增加 ,bcl- 2表达明显降低。结论　丹参酮 A具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用 ,其机制可能与其诱导某些凋亡及周期调控相关基因的表达有关     

丹参酮ⅡA诱导NB4细胞凋亡时Caspase3活性变化

目的：研究Caspase3在丹参酮ⅡA(TanⅡA)诱导NB4细胞凋亡过程中的变化及与凋亡的关系。方法：通过细胞形态学、DNA含量分析及DNA片段比率，证实TanⅡA是否可诱导NB4细胞凋亡，用荧光分光光度仪检测Caspase3活性及N-乙酰-天冬氨酸-谷氨酸-颉氨酸-天冬氨酸-7氨基-4甲基-香豆素(AC-DEVD-AMC)行Caspase3抑制试验探讨细胞凋亡与Caspase3间的关系。结果：TanⅡA可诱导NB4细胞凋亡，并伴有Caspase3活性增高。AC-DEVD-乙醛(AC-DEVD-CHO)可抑制TanⅡA诱导NB4细胞凋亡。结论。TanⅡA诱导NB4细胞凋亡可通过激活Caspase3而实现。     

丹参酮IIA对人肺癌细胞H2009凋亡的影响

目的 研究丹参酮IIA(Tan IIA)是否增敏顺铂(cDDP)对肺癌细胞的杀伤作用,以及初步探讨其可能的机制。方法 H2009细胞分为对照组,Tan IIA单药组,cDDP单药组以及Tan IIA+cDDP联合用药组。处理细胞48～72 h,生长期末在显微镜下观察细胞凋亡情况,CCK-8实验检测细胞抑制率,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测细胞的凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3的表达水平。结果 分别以cDDP(3、6、9μM)联合Tan IIA(1μM)处理H2009细胞后,联合用药组抑制率(53.05%)较单药组明显增加(P<0.05),同样,Tan IIA(1、2、3μM)联合cDDP(9μM)处理H2009后,联合用药组抑制率(57.47%),与两单药组相比,明显增加(P<0.05);流式细胞术发现Tan IIA(1μM)联合cDDP(9μM)处理H2009细胞后,早期和晚期的细胞凋亡率较对照组及两个单药组明显增加(35.9%vs. 8.6%、20.0%;7.9%vs. 1.7%、2.7%),表明Tan IIA可显著增强cDDP诱导的细胞凋亡;进一步通过western blot研究发现,联合用药组中Cleaved-Caspase3蛋白表达明显增高,表明Tan IIA可能是通过上调Cleaved-Caspase3的表达而促进了肿瘤细胞的凋亡,以上研究结果差异均有统计学意义。结论 TanⅡA可增敏cDDP对肺癌细胞H2009的杀伤作用,且呈剂量-时间依赖性,其可能机制是促进了Cleaved-Caspase3凋亡蛋白的表达。     

丹参酮ⅡA抑制Hela细胞生长及诱导凋亡的体外实验研究

目的探讨丹参酮ⅡA对宫颈癌细胞生长抑制及诱导细胞凋亡作用的研究。方法采用体外宫颈癌细胞培养方法取0～8．0μg／mL浓度的丹参酮ⅡA作用Hela细胞，72h后，观察细胞生长抑制情况，电镜观察细胞凋亡的形态学变化。流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA对细胞凋亡的影响。结果丹参酮ⅡA作用于Hela细胞后，对该细胞有明显的抑制作用，72h后0．5、1．0、2.0、4．0和8．0μg／mL不同浓度的丹参酮ⅡA对细胞生长的抑制率分别为17．23％、24．27％、31．75％、39．37％和55．45％。与对照组比较差异有显著性。电镜显示：核皱缩、核碎裂、形成凋亡小体。流式细胞仪测定72h后不同丹参酮ⅡA浓度与细胞凋亡率分别为0．5、1．0、2．0、4．0和8．0μg／mL；12．37％、25．81％、27．98％、34．13％和45．84％。与对照组比较，0μg／mL；2．09％差异均有显著性。结论丹参酮ⅡA对宫颈癌细胞生长有明显的抑制作用并诱导宫颈癌细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA与5-FU抑制HeLa细胞生长及诱导细胞凋亡的研究

目的 探讨丹参酮ⅡA与5-氟尿嘧啶(5-Fu)对宫颈癌HeLa细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡的影响.方法 采用MTT方法 、荧光染色、流式细胞仪及电镜技术等研究丹参酮ⅡA与5-Fu对HeLa细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用.结果 丹参酮ⅡA对宫颈癌HeLa细胞增殖有明显抑制作用,并呈现浓度和时间的依赖性.与5-Fu合用后细胞增殖抑制率明显增强.8.0μg/mL丹参酮ⅡA作用72h后,电镜下出现细胞核固缩,形成凋亡小体.流式细胞仪检测丹参酮ⅡA 4.0和8.0μg/mL作用HeLa细胞72 h后细胞凋亡率为34.13%、45.84%,在浓度增至32.0μg/mL时细胞凋亡无明显增加.结论 丹参酮ⅡA具有直接抑制宫颈癌HeLa细胞增值作用且在一定浓度范围内诱导细胞凋亡,同时具有增强5-Fu的抗肿瘤作用.     

丹参酮ⅡA对白血病 K562 细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病 K562 细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA (10～50 μmol/L) 作用于体外培养的 K562 细胞 24、48、72 h,应用 MTT 法检测细胞生长抑制率,流式细胞术 (FCM) 检测细胞凋亡率,并对 50 μmol/L 的药物作用不同时间后亚 G1 期细胞进行检测。应用免疫印迹法 (Western blotting) 检测 Caspase-3 及其裂解底物多聚 ADP-核糖聚合酶 (PARP) 的表达水平,并对凋亡调节蛋白 Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid 的表达水平进行检测。结果20 μmol/L 以上的丹参酮ⅡA可显著抑制 K562 细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM 检测结果表明 50 μmol/L 丹参酮ⅡA 作用不同时间后,亚 G1 期细胞 (凋亡细胞) 逐渐增多。20 μmol/L 以上的丹参酮ⅡA 作用 48 h 后 Caspase-3 逐渐被活化出现 17 000 的亚单位,Caspase-3 的作用底物 PARP 被活化裂解出现 89 000 的亚单位片段,而且 Caspase-3 的激活以及 PARP 的裂解可被 Caspase-3 的特异性抑制剂 z-DEVD-FMK 所阻断,促凋亡蛋白 Fas 以及 Bax 的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白 Bcl-2 及其他促凋亡蛋白 Bak 和 Bid 的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病 K562 细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白 Fas 和 Bax 的表达水平及激活 Caspase-3 可能是丹参酮ⅡA诱导白血病 K562 细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

DADS诱导小细胞肺癌细胞株NCI-H446凋亡及其分子机制

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人肺癌细胞株NCI-H446凋亡及其分子机制.方法 流式细胞仪检测DADS诱导NCI-H446细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜检测NCI-H446细胞内Ca2+水平变化;利用免疫细胞化学法检测NCI-H446细胞内Bcl-2蛋白表达.结果 与对照组相比,DADS处理组细胞的凋亡率显著增加(P＜0.05);DADS处理组细胞内Ca2+水平升高(P＜0.05).DADS下调Bcl-2(P＜0.05).结论 DADS诱导小细胞肺癌细胞株NCI-H446凋亡,其具体机制可能与DADS下调Bcl-2蛋白表达和促进细胞内Ca2+水平升高有关.     

丹参酮ⅡA对非小细胞肺癌患者的疗效及P糖蛋白表达的影响

目的:研究丹参酮ⅡA对非小细胞肺癌患者的疗效及治疗前后P糖蛋白(P-gp)表达的变化。方法:选取患非小细胞肺癌非手术治疗的患者72例,随机分为对照组和观察组,每组各36例。对照组患者只采用紫杉醇(PXL)和顺铂(DDP)联合化疗方案化疗;观察组患者在联合化疗方案的基础上配合丹参酮ⅡA进行治疗,跟踪观察2个周期。结果:观察组患者的有效率为62.2%,显著高于对照组的32.1%;两组患者治疗前、后的P糖蛋白变化差异有统计学意义。结论:丹参酮ⅡA能明显提高对非小细胞肺癌患者的疗效,抑制P糖蛋白的表达,提高预后的质量,是提高非小细胞肺癌的治疗效果的有效药物。     

丹参酮ⅡA联合5-Fu诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的影响

目的 研究丹参酮Ⅱ A 联合5-Fu 诱导人乳腺癌细胞系MCF-7 凋亡的影响.方法 应用MTT 法分析细胞增殖抑制作用,瑞氏- 吉姆萨染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术测定细胞周期和凋亡率,Western blot 法检测Bcl-2、bax 蛋白的表达.结果 丹参酮ⅡA 与5-Fu 均可抑制乳腺癌MCF-7 细胞的增殖及阻滞周期于G0/G1 期,并能诱导MCF-7 的凋亡,而当这两药联合时,以上作用得到明显加强,凋亡率显著升高;两药均可使Bcl-2 表达下调及bax 表达上调,当两药联合时这种作用更明显.结论 丹参酮ⅡA 与5-Fu 联合具有协同抑制乳腺癌MCF-7 细胞增殖及诱导其凋亡的作用.     

丹参酮ⅡA抑制HepG2细胞生长及诱导其凋亡的实验研究

目的:研究丹参酮ⅡA对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用和凋亡诱导作用.方法:以0μg/mL丹参酮ⅡA作阴性对照,MTT法检测0.5～10.0 μg/mL丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞HepG2 24,48,72 h的生长抑制率;HT33258荧光染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA作用HepG2细胞72 h后的细胞凋亡.结果:0.5～10.0 μg/mL丹参酮ⅡA均能抑制人肝癌细胞HepG2生长,并有明显的时间和剂量依赖性;在24,48,72 h的半数抑制浓度分别为14.7,7.4,3.9 μg/mL;经丹参酮ⅡA作用后,荧光染色可以观察到典型的凋亡细胞形态特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示除1.0 μg/mL组外均可见明显的凋亡细胞形成的梯状条带;流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA作用72 h后的细胞凋亡率分别为20.32%±2.16%,28.01%±2.35%,33.87%±3.43%,46.73%±4.08%和57.85%±3.74%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:丹参酮ⅡA在体外能明显抑制人肝癌细胞HepG2生长,抑制其生长的机制可能是诱导细胞凋亡.     

NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:研究NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制。方法:通过实验细胞培养、MTT试验、细胞形态变化、A549细胞survivin的mRNA表达、A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达来对NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制进行分析研究。结果:NS398对A549细胞增殖的影响受到浓度的影响,NS398浓度越大,A549细胞增殖抑制率越大;A549细胞在不同浓度的NS398试剂中表现出不同的细胞形态;survivin的mRNA表达随着NS398浓度的增加而减弱,A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达随着NS398浓度的增加而增强。结论:NS398对A549细胞的凋亡具有诱导作用,使肿瘤生长受到抑制,其抗肿瘤机制与AKT磷酸化的抑制、survivin蛋白表达的下调有关。     

丹参酮ⅡA联合顺铂对Hela细胞的凋亡作用

目的研究丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)联合顺铂(DDP)在体外对宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及凋亡蛋白Bax与Bcl-2表达水平的变化。方法采用苏木素-伊红染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定Bax与Bcl-2蛋白在Hela细胞中的表达水平。结果对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见凋亡细胞;除对照组外其他各组均可检测到细胞亚二倍体凋亡峰,Tan ⅡA+DDP组凋亡率高于两药单用组凋亡率,差别均有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白在各组中均有表达,但表达水平变化不明显(P>0.05);Bax蛋白在对照组中几乎不表达,而在各药物处理组中均有表达,且两药联合组中表达水平高于两药单用组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论Tan ⅡA与DDP二者联合可以增加Hela细胞凋亡率,其中通过增加Bax蛋白的表达,使Bax/Bcl-2比值升高,可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。