磷酸化STAT5、FOXP3在急性白血病患者骨髓中的表达及意义

目的观察急性白血病患者骨髓中单个核细胞磷酸化STAT5及FOXP3的表达水平及其临床意义。方法采用蛋白磷酸化流式细胞术分别检测45例急性白血病患者（AL）[急性髓系白血病（AML）29例,急性淋巴细胞白血病（ALL）16例]及12名对照组骨髓单个核细胞磷酸化STAT5（P-STAT5）及FOXP3阳性细胞的百分率。结果 AL患者组骨髓单个核细胞PSTAT5表达（2.35±0.82）%较对照组（0.58±0.16）%增高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;AL患者组FOXP3（3.98±1.17）%高于对照组（0.96±0.45）,差异具有统计学意义（P〈0.05）;AML组P-STAT5及FOXP3水平（2.51±0.91）%,（3.72±1.12）%和ALL组（2.27±0.78）%,（4.03±1.18）%比较无显著差异（P〉0.05）。AL患者P-STAT5及FOXP3表达水平显著正相关（r=0.81,P〈0.05）。结论磷酸化STAT5及Foxp3可能共同参与了急性白血病的发生过程,同时检测可以提供有临床意义的实验依据。     

铁代谢异常对贫血患者EPO-STAT5信号通路的影响

目的:研究铁代谢异常对贫血患者EPO-STAT5信号通路的影响。方法:根据疾病将患者分为较低危骨髓增生异常综合症(MDS)组30例,其中铁过载16例,非铁过载14例,对其中12例铁过载患者进行祛铁治疗;慢性病贫血(ACD)组(12例),缺铁性贫血(IDA)组(12例),另设健康对照组10例;检测患者铁代谢指标铁蛋白(SF),血清铁(SI)、总铁结合力(TIBC),血清红细胞生成素(EPO)、血浆中P-STAT5及外周血中STAT5 mRNA表达。分析铁代谢异常对各组贫血患者EPO及STAT5表达的影响。结果:与非铁过载组相比,铁过载组MDS患者EPO水平明显升高(P 0.05),STAT5 mRNA及P-STAT5表达明显降低(P 0.05)。祛铁治疗后EPO水平明显下降(P 0.05),STAT5 mRNA及P-STAT5表达明显升高(P 0.05)。与健康对照组相比,ACD组EPO表达明显下降(P 0.05),STAT5 mRNA表达无差异,P-STAT5表达明显降低(P 0.05);IDA组EPO表达明显升高(P 0.05),STAT5 mRNA及P-STAT5表达明显升高(P 0.05)。结论:过量铁负荷或慢性炎症可能抑制EPO-STAT5通路激活,加重贫血。     

重型再生障碍性贫血患者树突细胞亚群及其与淋巴细胞转录因子T-bet表达的相关性

目的 探讨树突细胞(DC)亚群和淋巴细胞转录因子T-bet、GATA-3表达在获得性重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫失衡中的意义.方法 采用流式细胞术检测29例SAA患者及16名健康人外周血DCI(HLA-DR+Lin-CD11c+)、DC2(HLA-DR+Lin-CD123+)数值及比例,半定量RT-PCR检测外周血T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达,ELISA法检测血浆IFNγ、IL-4水平.结果 SAA初治组、恢复组DC1占外周血单个核细胞比例分别为(0.44±0.24)%、(0.73±0.30)%,明显高于正常对照组[(0.29±0.10)%,P<0.05].三组DC2分别为(0.18±0.14)%、(0.28±0.20)%、(0.29±0.13)%,初治组低于对照组(P<0.05).SAA初治组、恢复组DC1/DC2比值分别为3.45±2.71、2.90±0.95,明显高于对照组(1.15±0.56),初治组与恢复组DC1/DC2比值差异无统计学意义(P>0.05).SAA初治组、恢复组及对照组T-bet的相对表达量分别为0.37±0.07、0.20±0.07、0.17±0.05,初治组明显高于恢复组和对照组(P<0.05).三组中GATA-3的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05).初治组T-bet/GATA-3比值为0.72±0.13,明显高于恢复组(0.33±0.08)和对照组(0.35±0.11).初治组血浆IFNγ/为(50.9±1.1)ng/L,明显高于恢复组[(49.7±0.9)ng/L]和正常对照组[(49.7±0.7)ng/L].T-bet表达与DC1/DC2比值、IFNγ水平呈显著正相关(r=0.445和r=0.402,P<0.01).结论 DC1/DC2和T-bet/GATA-3比值失衡可作为判断SAA患者免疫状态的指标.T-bet的相对表达量与SAA患者的病情有关,病情好转后T-bet/GATA-3恢复平衡.SAA患者DC亚群恢复迟于血常规恢复,因此不可过早停用免疫抑制剂.     

STAT3在艾滋病相关弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的:探讨STAT3在艾滋病相关弥漫性大B细胞淋巴瘤(ADIS/HIV-related diffuse large B-cell l y m p h o m a,H I V-D L B CL)中的表达及意义。方法:收集2 1例H I V-D L B CL组织标本作为实验组。对照组15例标本,分别为6例HIV阴性的DLBCL(non-HIV-DLBCL)、4例HIV阳性淋巴结反应性增生(HIV-reactive hyperplasia,HIV-RH)、5例HIV阴性淋巴结反应性增生(non-HIV-RH)。采用免疫组化检测各样本中STAT3的表达情况,并结合患者的临床病理因素分析。结果:HIV-DLBCL中STAT3总阳性表达率为76.19%,以胞核表达为主占81.25%;non-HIV-DLBCL中STAT3总阳性表达率为66.67%,以胞核表达为主占50%;两组总阳性率及核阳性率差异无统计学意义(P0.05)。H I V-R H和n o n-H I V-R H中,STAT 3仅表达于淋巴滤泡细胞;H I V-D L B CL中STAT 3表达率与良性病变组具有显著性差异(P0.05)。STAT3在non-GCB型HIV-DLBCL中的表达明显高于GCB型HIVDLBCL(P0.01),与性别、年龄、发病部位及临床分期等因素无关(P0.05)。结论:STAT3在HIVD L B CL和n o n-H I V-D L B CL中均呈高表达,且以核表达为主,提示STAT 3过表达与D L B CL的发生有关;STAT3表达与HIV-DLBCL的免疫表型有关,因不同免疫表型DLBCL的预后存在差异,提示STAT3可能是HIV-DLBCL的潜在预后标志物。     

白血病患者SHIP和其他相关基因表达及其临床意义

目的 观察含有SH2结构域的肌醇5位磷酸酶(SHIP)基因在急性白血病(AL)患者的表达,评价SHIP基因的改变在急性白血病和慢性粒细胞白血病(CML)发病中的作用以及对预后的影响.方法 以半定量逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测78例AL患者、18例CML患者SHIP、半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶3(casepase-3)的表达.结果 在初治的AL组中,SHIP的阳性率为69.6%,平均表达水平为0.167±0.121,其表达水平明显低于正常对照组.复发AL组中患者SHIP的表达阳性率为54.5%,平均表达水平为0.211±0.224,其表达水平明显低于正常对照组(P＜0.05),较初治AL组相比表达水平低,差异无统计学意义(P＞0.05).在缓解AL组中,SHIP的阳性率为95.2%,平均表达水平为0.851±0.591,与正常对照组(1.945±1.804)相比表达水平显著降低(P＜0.05);同时表达高于初治AL组(P＜0.05).半胱氨酸蛋白酶1和半胱氨酸蛋白酶3在AL mRNA的阳性率为分别为80.0%和100.0%,表达水平分别为1.785±1.168和1.887±0.838,低于正常对照组(3.345±1.284)和(5.122±2.025)(P＜0.05).CML慢性期SHIP的表达阳性率为100.0%,表达水平为0.951±0.921,低于正常对照组(1.945±1.804)(P＜0.05);CML急变期SHIP mRNA表达阳性率为71.4%,表达水平为0.278±0.191,低于正常对照组(P＜0.05);SHIP的表达水平在CML慢性期和急变期比较,差异有统计学意义.AL组SHIP阳性缓解率为71.0%,AL组SHIP阴性缓解率为23.1%(P＜0.05).AL组半胱氨酸蛋白酶1阳性缓解率为63.9%,AL组半胱氨酸蛋白酶阴性缓解率为25.0%(P＜0.05).运用直线相关分析表明在AL中半胱氨酸蛋白酶1、半胱氨酸蛋白酶3与SHIP的相关系数分别为r=0.372,r=0.437,P＜0.05,半胱氨酸蛋白酶1、半胱氨酸蛋白酶3与SHIP表达呈正相关.结论 SHIP在急性髓系白血病患者中低表达或不表达,动态观察SHIP mRNA的表达可作为预测急性髓细胞白血病(AML)疗效的一个指标.     

创伤脓毒症患儿外周血中Helios在CD4~+Foxp3~+Tregs中的表达比例变化及其意义

目的探讨创伤脓毒症患儿外周血中Helios在CD4~+Foxp3~+调节性T细胞(Tregs)中表达比例的变化及其意义。方法该院2015年1月至2017年6月收治的60例创伤脓毒症患儿纳入脓毒症组,同期入院但未患脓毒症的60例创伤患儿纳入创伤组,健康体检儿童60例纳入对照组。采集所有研究对象外周血,应用流式细胞学技术检测外周血中Helios在CD4~+Foxp3~+Tregs中的表达比例;实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测外周血单核淋巴细胞转录因子Helios及Foxp3的mRNA表达水平,应用酶联免疫吸附试验检测受试儿童外周血血浆中白细胞介素(IL)-10,转化生长因子(TGF)-β1的表达水平。结果脓毒症组、创伤组及对照组外周血中转录因子Helios在CD4~+Foxp3~+Tregs中的表达比例分别为(85.37±11.25)%、(66.56±10.86)%、(63.72±9.88)%,脓毒症组明显高于创伤组、对照组,差异有统计学意义(P0.05)。脓毒症组、创伤组及对照组外周血单核淋巴细胞Helios的mRNA表达水平分别为4.88±1.77、3.21±1.29、0.96±0.18,脓毒症组明显高于创伤组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。脓毒症组IL-10、TGF-β1水平明显高于创伤组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论创伤脓毒症患儿外周中Helios在CD4~+Foxp3~+Tregs中的表达比例及相关细胞因子表达水平均明显升高。     

STAT3基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的:探讨STAT3基因在初诊急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达及其与临床特征的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR检测38例AML患者骨髓中STAT3 mRNA表达水平,分析其与临床特征及预后的相关性;利用Western blot检测AML患者骨髓中STAT3蛋白表达水平。选择15例正常人作为对照组。结果:在mRNA水平上,AML组的STAT3表达水平明显高于正常对照组(P0.05);AML组的STAT3表达水平与危险程度呈正相关(P=0.01,r=0.592),高危组的STAT3表达水平明显高于标危组及对照组,其差异均有统计学意义(P0.01,P0.01),其余各组间差异无统计学意义(P 0.05);M5组STAT3表达水平显著高于对照组,且有统计学差异(P=0.01);M2与M5及对照组之间STAT3表达水平无统计学差异(P=1,P=0.066)。STAT3低表达组患者的中位生存时间长于高表达组,但其差异无统计学意义(P=0.146)。在蛋白水平上,AML组STAT3表达水平高于对照组(P=0.017)。结论:STAT3基因在AML患者中存在高表达,且与患者免疫分型、危险度具有相关性。     

rs7574865位点多态性与不明原因复发性自然流产相关的机制研究

目的:探讨信号转导与转录激活因子4(STAT4)基因rs7574865位点多态性与不明原因复发性自然流产(URSA)的易感相关性及其不同基因型对STAT4表达的影响。方法:分别采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测246例URSA患者和183名正常女性STAT4基因rs7574865位点的基因型分布;采用免疫组织化学技术测定86例URSA患者和77名正常女性蜕膜组织STAT4基因的蛋白表达。结果:rs7574865G/T基因型频率在URSA组和对照组中分别为G/G基因型36.2%、46.5%,G/T基因型47.2%、45.4%,T/T基因型16.2%、8.2%,两组基因型频率分布比较差异具有统计学意义(P<0.05),其中T等位基因明显增加URSA的发病风险(OR=1.51,P<0.05)。URSA组和对照组的蜕膜组织中STAT4基因蛋白表达量比较差异具有统计学意义(P<0.05)。URSA组内和对照组中,3种基因型的蜕膜组织STAT4蛋白存在明显的表达差异(P均<0.05),携带T/T基因型的蜕膜组织中STAT4蛋白高表达于G/G基因型(P均<0.05)。URSA组和对照组对应G/G、G/T和T/T三种基因型的STAT4蛋白的表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:rs7574865位点多态性可能通过其危险基因型T/T增加STAT4基因在母体蜕膜组织的表达增加URSA患者的发病风险。     

槲皮素对宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达及其信号通路的影响

目的初步探讨信号转导子和转录激活子STAT3在宫颈癌发生发展中的作用以及槲皮素对宫颈癌细胞中STAT3表达的影响。方法用RT-PCR检测不同浓度的槲皮素作用人宫颈癌HeLa细胞中STAT3 mRNA的表达,并以细胞免疫荧光技术观察凋亡细胞内STAT3和磷酸化STAT3(P-STAT3)的改变。结果槲皮素处理HeLa细胞后,当槲皮素浓度从6.25μmol/L增加到50μmol/L,相同时间HeLa细胞内STAT3 mRNA表达逐渐降低,除6.25μmol/L组与溶剂对照组相比无统计学差异(P>0.05)外,余差异全部有统计学意义(P<0.05),且处理24h后,STAT3 mRNA表达量与给药浓度呈负相关,r1=-0.861,P=0.000;各时间段不同浓度组(6.25、12.5、25、50μmol/L)两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着时间变化,相同浓度组中STAT3 mRNA表达明显降低,在给予6.25μmol/L槲皮素后,STAT3 mRNA的表达量呈时间依赖性,r2=-0.539,P=0.000。运用免疫荧光技术观察到STAT3蛋白及磷酸化水平随槲皮素浓度及时间增加表达呈明显下降趋势。结论槲皮素能明显抑制HeLa细胞的生长;槲皮素可抑制细胞内STAT3表达,从而可能通过抑制JAK/STAT信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡。     

自然杀伤T细胞、转录因子RORγt及Foxp3在白癜风患者外周血中的表达水平及其意义

【目的】探讨自然杀伤T细胞(NK-T)、孤独核受体(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)在白癜风患者外周血中的表达水平及其意义。【方法】选取2019年4月至2021年5月本院诊治的89例白癜风患者(观察组),另外选取同期在本院体检的36例健康志愿者(对照组)。检测并比较两组研究对象外周血NK-T、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平;比较不同病期、病型、皮损面积的白癜风患者外周血NK-T、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平,分析皮损面积与NK-T及RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平相关性。【结果】观察组患者外周血RORγt mRNA水平显著高于对照组,NK-T、Foxp3 mRNA水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与稳定期相比,进展期患者RORγt mRNA水平较高,NK-T、Foxp3 mRNA水平较低,差异有统计学意义(P<0.05);不同病型的白癜风患者NK-T、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同皮损面积间NK-T、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);RORγt mRNA与皮损面积呈正相关(rs=0.509,P<0.05),NK-T、Foxp3 mRNA与皮损面积呈负相关(rs=-0.348、-0.307,P<0.05)。【结论】外周血NK-T及RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平异常与白癜风发病及病情发展密切相关,白癜风患者皮损面积与RORγt mRNA呈正相关,与NK-T、Foxp3 mRNA呈负相关。     

聚酰胺抑制基因转录研究进展

聚酰胺（polyamide）是一类人工合成的小分子,能以序列特异性与DNA小沟结合,从而干扰天然转录因子与特定DNA序列的结合,实现对特定基因表达的调控。此类小分子发展迅速,近年来与烷化剂连接而提出了基因沉默新途径,具有特异基因治疗的潜力。本文总结了聚酰胺对特定基因转录抑制的研究进展。     

活化T细胞核因子与肿瘤的研究进展

活化T细胞核因子(NFAT)是一组在哺乳动物组织细胞中广泛表达的转录因子,具有多向调节功能,在细胞分化、生长过程中起重要作用。近年来,越来越多的研究发现NFAT与多种信号转导通路存在相互作用,在肿瘤的形成、生长、恶性转化、血管生成、侵袭浸润和肿瘤转移等方面发挥着重要的功能,与肿瘤的发生和浸润转移有着十分密切的关系。NFAT分子目前已成为肿瘤研究中的热点,并有可能成为新的肿瘤治疗靶点。本文主要对NFAT分子在肿瘤发生、发展过程中的作用作一综述。     

NF-к B/Rel转录因子与白血病

NF-кB/Rel蛋白家族是一类参与炎症、免疫、应激、细胞生长及癌症发生等诸多生物学过程中基因调节的重要转录因子。已经发现许多癌症的发生与之相关。本文综述了NF-к B/Rel蛋白在白血病发生及治疗方面的研究进展。NF-кB是正常髓系骨髓细胞转化的调节因子。人类T细胞性白血病病毒Ⅰ型编码的Tax蛋白能通过激活NF-кB而参与人类成人T细胞白血病的发生。一些染色体易位可能影响NF-кB/IкB之间的平衡,从而参与白血病及淋巴瘤的发生。一系列与NF-кB/Rel转录因子相关的白血病化疗药物正在探索之中。     

逆转录实时荧光定量PCR检测p73 mRNA在结肠癌的表达

目的:建立一种实时定量PCR方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于其在癌旁组织的表达(P<0.01);表达水平与肿瘤的恶性程度、分化及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:p73的高表达可能与结肠癌的发生、发展及预后有联系。     

优化RT-PCR法相对定量检测RNA的研究

目的探讨应用RT-PCR法相对定量检测RNA含量时应该注意的几个因素。方法以端粒酶RNA组分基因的RNA为实验材料,进行不同条件下的RT-PCR反应。结果在PCR反应中,扩增内参照和目的基因的引物比例、底物浓度以及PCR反应的循环次数对产物的影响较大,而退火温度的影响较小。结论在相对定量检测RNA含量时,应预先摸索最佳反应条件之后再检测样品。