人心肌特异性肌钙蛋白T单克隆抗体的制备与鉴定

目的　制备抗人心肌肌钙蛋白T的单克隆抗体。方法　利用纯化的人心肌肌钙蛋白T免疫BALB/C小鼠 ,常规方法制备抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体 2株N15C和N16D。结果　利用普通ELISA方法检测 2株单抗 ,小鼠腹水N16D滴度可达 1/ 32 0 0 0 ,N15C滴度达 1/ 80 0 0 ;斑点酶联免疫吸附试验证明N16D对急性心肌梗塞患者血清中出现的肌钙蛋白T有较好的亲和性。结论　N16D株单抗对人心肌肌钙蛋白具有较好的特异性和亲和性     

检测H5N1型高致病性禽流感病毒抗体的间接ELISA方法的初步建立

目的建立一种快速检测H5N1病毒感染的血清学方法。方法以H5N1病毒作为抗原包被96孔板,与待检血清作用后,以辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG作为二抗,用ELISA方阵法确定最佳抗原、血清稀释浓度。结果感染7 d小鼠血清中抗体水平很低,感染14 d血清抗体水平较高,最佳抗原稀释度1∶100,最佳血清稀释度1∶200。结论这种快速检测H5N1病毒的诊断方法直接有效、方便易行,有助于H5N1病毒感染的早期诊断     

生物素-链霉亲和素技术一步法检测人心肌肌钙蛋白T

目的：用已获得的两株抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体N15C和N16D建立检测cTnT的生物素—链霉亲和素技术一步法。方法：应用酯化生物素对N15C进行标记,应用辣根过氧化物酶对N16D进行标记。将待检血清或抗原标准品、生物素标记的N15C和酶标记N16D加入经链霉亲和素包被的96孔酶标板微孔中,然后加入OPD,硫酸终止反应后,在λ=490nm处读取A值,根据标准曲线求出各样本值。结果：建立的方法检测cTnT,检测灵敏度为1．0μg／L,可定量检测范围为2．0～32．0μg／L。11例AMI患者和10例正常人用该法进行血清检测,与Enzymun—Test TnT试剂盒相比,阳性符合率为82％,特异性为100％。经重复检测表明本方法检测低浓度cTnT批内变异系数为4．70％,批间变异系数为9．36％;检测高浓度cTnT批内变异系数为3．20％,批间变异系数为8．25％。结论：该方法特异性高,重复性好,较常规双抗体夹心ELISA法有更高的灵敏度。     

抗IL-18单克隆抗体的标记

目的　用辣根过氧化物酶 (HRP)标记抗IL - 18的单克隆抗体 ,为进一步研究IL - 18单克隆抗体的特性提供实验素材。方法　采用过碘酸钠法对抗IL - 18的单克隆抗体进行标记。结果　用HRP标记抗IL - 18单克隆抗体 ,标记率为 4 7.3% ,酶标抗体的效价为 1∶6 4 0 0 ,最佳工作浓度为 1∶32 0 0。结论　用HRP标记抗IL - 18单克隆抗体的效果满意 ,为IL - 18抗原酶联免疫检测的建立奠定了基础     

蛋白质转移电泳技术在单克隆抗体检测中的应用

抗原(粗制)经聚丙烯胺凝胶电泳分离后,将凝胶上的蛋白质条带经电泳转移到硝酸纤维素膜上。在硝酸纤维素膜上抗原与加入的相应单克隆抗体结合,再与辣根过氧化物酶标记的第二抗体反应。然后通过酶对底物的催化作用,在抗原位置上出现棕褐色条带,证明了单克隆抗体与相应抗原的特异结合。     

斑点金免疫渗滤法快速检测乙肝表面抗原

目的：建立斑点金免疫渗滤法检测乙肝表面抗原的快速方法。方法：将兔抗乙肝表面抗原的抗体点子硝酸纤维素薄膜上,用来捕获血清中的乙肝表面抗原,通过胶体金标记的抗表面抗原单克隆抗体来直接显色。     

夹心ELISA法快速检测肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制剂-1

目的：建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的双抗体夹心ELISA，了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系．方法：以不同浓度的抗人TIMP-1单克隆抗体（mAb）为包被抗体，加入待测抗原以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定，建立双抗体夹心ELISA，并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP-1的水平．结果：方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg／L，血清稀释倍数1：100，HRP标记mAb的最佳工作浓度为1：400．     

双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素

目的 应用酶联免疫吸附分析方法（ELISA）检测待测样品中的蓖麻毒素。方法 用蛋白 G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体（4C13,3D74,5E4和5H6）,以3D74及辣根过氧化物酶(HRP)标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果 抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2.5 μg·L^-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2.5～5.0 μg·L^-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱。结论 双抗体夹心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。     

大鼠脑巨细胞网状核和颈髓神经元纤维联系的实验研究

目的探讨网状结构与运动调控密切相关的伸肌抑制区内的重要核团-巨细胞网状核与颈段脊髓神经元的纤维联系。方法采用麦芽凝集素-辣根过氧化物酶在巨细胞网状核的微量注射，48h后用TMB显色方法检测巨细胞网状核和颈段脊髓灰质内麦芽凝集素-辣根过氧化物酶的表达情况。结果在巨细胞网状核内注射麦芽凝集素-辣根过氧化物酶，可在颈段脊髓灰质Ⅰ、Ⅱ板层发现顺行标记，在Ⅶ、Ⅷ板层发现逆行标记。结论通过对WGA-HRP示踪的检测，说明以巨细胞网状核为主的脑干网状结构抑制区和颈段脊髓神经元之间存在纤维联系。从巨细胞网状核到脊髓的投射纤维多经由颈段脊髓灰质的Ⅰ、Ⅱ板层，而颈段脊髓灰质向巨细胞网状核的投射纤维多起源于Ⅶ、Ⅷ板层。     

应用ELISA法检测结核病患者血清抗体最佳条件的筛选

检测了影响ELISA法检测结核病患者血清抗体结果的有关因素 ,筛选出抗原最佳浓度为2 5 μg/ml、患者血清稀释度为 1∶40、酶结合物浓度为 1∶10 0 0 ,此时P/N值最大 ,非特异现象最弱。     

单克隆抗体酶联免疫吸附测定甲胎蛋白方法的建立

应用二种抗甲胎蛋白(AFP)不同抗原决定簇的单克隆抗体分别与纤维素及酶结合,建立酶联免疫吸附测定(ELISA)法。应用这种方法测定18例人血清标本,结果与放射酶免疫测定比较,二者趋于一致。此外,本文对单克隆抗体的ELISA与抗血清的RIA进行了比较与讨论。     

抗氯霉素单克隆抗体4D10的特性鉴定

目的对抗氯霉素单克隆抗体4D10进行纯化与特性鉴定,以获得可用于检测氯霉素残留试剂盒的单克隆抗体。方法用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体,用间接酶联免疫吸附试验、竞争ELISA等方法测定抗体效价、特异性、敏感性与亲和性以及抗体与其它氯霉素结构类似物的交叉反应率。结果纯化后抗体的纯度高达95%;对抗体进行相关性质的鉴定得出：4D10效价为1∶2.56×105,其亲和力常数可达2×108M-1,该抗体与CAP-BSA,CAP-OVA有反应,与BSA、OVA无反应;与氯霉素琥珀酸钠、氯霉素反应,而与其它氯霉素结构类似物无交叉反应。结论抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、特异性强、亲和力高,可利用该抗体制备检测氯霉素残留的ELISA试剂盒。     

人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体的初步鉴定

目的：制备高效价的人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体（GPA McAb),为研制快速全血凝集试剂提供关键的双功能抗体成分。方法：首先用MNGP亚型GPA,经SPDP与小鼠血清白蛋白连接后,常规免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备GPA McAb;用ELISA和血凝方法对克隆进行筛选和鉴定。结果：4次融合共获3个可分泌高效价GPA McAb细胞株（3F6、5C7和5G3）。分泌的单克隆抗体均与GPA发生特异性反应,但均不引起人A、B、AB和O型红细胞凝集,属于人红细胞GPA的特异性非凝集抗体。在3株抗体中,2株为IgG1亚型,1株为IgG2亚型。结论：小分子GPA经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白连接后用作免疫抗原,研制的2株IgG1亚型抗体可用于全血凝集试剂中双功能抗体的制备。     

补体抑制免疫复合物沉淀作用的实验研究

本文以辣根过氧化物酶（ＰＯ）作抗原，与相应抗体（抗－ＰＯ）混合，加入血清，对血清补体抑制免疫复合物沉淀作用（ＩＩＰＣ）进行了研究。结果，在抗原抗体最适比例时形成免疫复合物最多；原血清及１：２稀释血清ＩＩＰＣ最强，ＯＤ值为０．５７和０．５４，血清的进一步稀释对ＩＩＰＣ有一定影响；孵育时间以３０ｍｉｎ最宜，ＯＤ值为０．５６；离心时间在２５～４５ｍｉｎ时ＯＤ值最大为０．５０～０．５６；在最适条件下，正常人混合血清ＯＤ值为０．４９；５６℃３０ｍｉｎ灭活血清为０．１４；５０℃１５ｍｉｎ处理血清为０．３８；ＥＤＴＡ处理血清为０．０９；ＥＧＴＡ处理血清为０．２１；对２０例健康人血清ＩＩＰＣ测定结果为０．３９～０．６２，平均０．４８±０．０７。表明正常血清补体对免疫复合物的沉淀有明显抑制作用。各种因素处理血清对ＩＩＰＣ均有一定影响，而以５６℃３０ｍｉｎ和ＥＤＴＡ处理血清最明显。文中还对该法的影响因素进行了讨论。     

酶联免疫吸附试验测定血清苯妥英钠浓度

建立酶联免疫吸附实验测定苯妥英钠血药浓度的方法。方法采用碳二亚胺法将化学修饰后的苯妥英钠与人血清白蛋白结合,再与被氧化物酶结合,作为酶标抗原,自制免抗苯妥钠多克隆抗体。结果抗苯妥英钠ＩｇＧ稀释倍数１：２００、酶标记抗原１：１００时,标准曲线最理想;该方法的测定灵敏度为２．８７μｇ／ｍｌ,线性范围２．９－３０μｇ／ｍｌ,批内变异系数３．３％－１０．２％,批间变异系数５．１％－１３．２％,回收率９０％     

一种快速、简便检测鸭乙型肝炎病毒抗原、抗体的方法

本文报道检测鸭乙型肝炎表面抗原(DHBsAg)及抗体的斑点酶免疫测定法(Dot Euzyme Immunoassay,Dot EIA)。以硝基纤维素膜为载体依次加被检血清、抗DHBV免疫血清、辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(SPA-酶结合物),可测标本中DHBsAg。依次加纯化DHBV、被检血清、SPA-酶结合物则可测血清中抗体及效价。用此法检测自然感染鸭血清40份,实验感染鸭血清220份,并与DHBV核酸斑点杂交法比较分析,两种方法符合率94.2％。用本方法测定本室制备的兔抗DHBV免疫血清,抗体效阶为1/3200。Dot EIA简单、快速、敏感、特异,是研究DHBV较有实用价值的一种方法。     

适于标记的HFRS病毒组特异性McAb的建立及其应用

用陕西81-14A株HFRSV,免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得分泌抗HFRSV抗体的C_4株杂交瘤细胞系。C_4株McAb与我国各地的28株及朝鲜的76-118株、Seoul株HFRSV均产生免疫反应,表明是HFRSV组特异性扩体,并适用于荧光素及辣根过氧化物酶标记。经初步应用,效果满意。     

大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价

目的:制备高效价、高纯度、特异性好、荧光强度高及稳定的抗大肠杆菌O157∶H7 异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,初步探讨其在大肠杆菌荧光免疫检测试验中的应用。方法：复苏培养E.coli O157∶H7标准菌株,甲醛灭活制备疫苗免疫家兔。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,经辛酸-饱和硫酸铵法粗提后应用蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行 gG纯化,借助SDS-PAGE电泳、BCA试剂盒法、间接ELISA法分别对蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价进行测定。应用不同FITC与蛋白量比值以及不同标记反应条件对多克隆抗体进行标记。比较荧光抗体F485/535,结合差异性显著分析对FITC与蛋白量比值及反应条件进行合
理选择,应用标记抗体与E.coli O157∶H7和金黄色葡萄球菌混合菌液反应验证标记效果。结果：HiTrap Protein G进行E.coli O157∶H7多克隆抗体纯化的最佳纯化方法为35%、100%二梯度洗脱,制备抗体效价为1∶25　600,与沙门氏菌、阴沟肠杆菌等8种肠杆菌无交叉反应,最佳FITC与蛋白量比值为1∶10,最佳标记反应条件为20℃、2 h。由最佳条件制得的荧光抗体与E.coliO157∶H7反应明显 ,强荧光连续照射15 min后仍显示高亮度荧光反应,且不与金黄色葡
萄球菌反应。结论：本实验首次制备出纯度高、荧光强度高、持续时间长的E.coli O157：H7 FITC标记多克隆抗体,为E.coli O157：H7荧光免疫检测方法的建立完成了关键步骤。
     

捕获法检测嗜肺军团菌IgM抗体的建立及应用

目的建立一种捕获法检测嗜肺军团茵IgM抗体的方法。方法用羊抗人IgM抗体包被微孔板,选择辣根过氧化物酶标记的兔抗嗜肺军团茵抗体和培养的嗜肺军团茵抗原最适浓度,以西班牙VIR—CELL公司PNEUMOSLIDE—M间接免疫荧光试剂盒为参照,优化样品稀释液和酶结合物稀释液的最佳配方。结果酶结合物工作浓度1／2000、抗原浓度1／1000为最适浓度,在样品稀释液中加入20％羊血清,在酶结合物稀释液中加入20％兔血清可以消除因使用多克隆抗体而引起的假阳性,假阳性率降低3．24％。建立的IgM捕获法与西班牙V1RCELL公司间接免疫荧光法的阳性符合率为93．26％（83／89）,阴性符合率为93．67％（326／348）,与其他呼吸道病原体lgM抗体没有显著交叉反应,不受类风湿因子的干扰。结论建立的捕获法检测嗜肺军团菌IgM抗体方法操作方便,与商品化间接免疫荧光试剂盒有较高的符合率,具有临床诊断价值。