siRNA对胰腺癌细胞c-Src表达的影响

目的 应用小干扰RNA(siRNA)干扰胰腺癌PANC-1细胞的c-Src表达,为后续试验做准备.方法 将c-Src siRNA,经LipofectamineTM2000脂质体转染胰腺癌PANC-1细胞后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)分别检测c-Src基因mRNA和c-Src蛋白表达的变化.结果 转染后胰腺癌PANC-1细胞的c-Src的mRNA与蛋白表达明显减少.结论 运用RNA干扰技术,可以有效地干扰胰腺癌PANC-1细胞c-Src的表达.     

siRNA干扰△Np63基因表达对人宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡影响研究

目的 通过抑制宫颈癌细胞株Siha中△Np63的表达,探讨△Np63对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 将宫颈癌细胞株Siha分为实验组和对照组,实验组转染△Np63的特异性siRNA,对照组转染阴性对照siRNA.实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及蛋白质印迹法检测Siha细胞转染前后△Np63基因在mRNA及蛋白水平的变化;CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的mRNA表达为0.32±0.06,低于阴性对照组0.95±0.08(t=10.92,P＜0.05).实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的蛋白表达为0.32±0.09,低于阴性对照组1.00±0.06(t=9.78,P＜0.05).实验组Siha细胞生长速度明显低于阴性对照组,实验组Siha细胞凋亡率为2.13±0.75,低于阴性对照组14.19±1.36(t=15.36,P＜0.05).结论 人宫颈癌细胞株中存在△Np63的表达,特异性siRNA可下调宫颈癌细胞株Siha中△Np63基因的表达,对细胞的增殖具有负性调节作用,并能诱导细胞凋亡.     

siRNA对胰腺癌细胞c-Src表达的影响

目的应用小干扰RNA（siRNA）干扰胰腺癌PANC—1细胞的c—Src表达，为后续试验做准备。方法将c—Src siRNA，经Lipofeetamine^TM2000脂质体转染胰腺癌PANC-1细胞后，用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹技术（Western blot）分别检测c—Src基因mRNA和c—Src蛋白表达的变化。结果转染后胰腺癌PANC—1细胞的c—Src的mRNA与蛋白表达明显减少。结论运用RNA干扰技术，可以有效地干扰胰腺癌PANC—1细胞c—Src的表达。     

叶黄素对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨叶黄素对体外培养的人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法选择对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,采用随机数字表法,将其随机分为6组:20,40,80,160,320μmol/L叶黄素组及对照组,叶黄素组分别加入200μL含20,40,80,160,320μmol/L叶黄素终浓度的RPMI1640培养基及HeLa细胞,对照组仅加入200μL RPMI1640培养基及HeLa细胞。采用噻唑蓝(MTT)法检测人宫颈癌HeLa细胞增殖抑制率,并采用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率。采用统计学方法分析相同时间不同浓度叶黄素培养及相同浓度叶黄素培养不同时间的HeLa细胞增殖抑制率及凋亡率差异。结果 HeLa细胞在培养时间相同(为24h或48h或72h)时,随着叶黄素浓度依次增加(分别为20,40,80,160,320μmol/L)均较前一低浓度组的增殖抑制率及凋亡率显著升高,且差异均有统计学意义(P<0.01);HeLa细胞在叶黄素浓度相同(为20μmol/L或40μmol/L或80μmol/L或160μmol/L或320μmol/L)培养时,随着培养时间增加(分别为24,48,72h)均较前一时间点的增殖抑制率及凋亡率显著升高,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论叶黄素可抑制体外培养的人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,并且HeLa细胞体外培养的增殖抑制率及凋亡率分别随着叶黄素浓度增加及作用时间延长而升高。     

姜黄素通过Notch途径抑制人宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖

目的:探讨姜黄素对人宫颈癌细胞株HeLa细胞体外增殖抑制及凋亡诱导作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度姜黄素对HeLa细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测HeLa细胞Notch1、Notch2、Jagged1、Bcl-2、Bax基因表达情况。结果:姜黄素对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。随着姜黄素剂量的增加,Notch1、Notch2、Bcl-2mRNA的表达逐渐下降,Bax mRNA的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax亦逐渐减小,Jagged1mRNA无明显变化。结论:姜黄素可能通过Notch信号途径改变凋亡蛋白的表达,抑制HeLa细胞增殖。     

人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道的表达

目的 探讨人宫颈鳞状上皮细胞癌(简称鳞癌)组织中电导钾离子通道(IKCa1)mRNA及其蛋白产物与正常宫颈上皮组织中钙激活性的差异.方法 采用免疫组织化学法及RT-PCR法分别检测30例不同分化程度的宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCa1 mRNA及其蛋白产物的表达情况.结果 (1)IKCa1 mRNA阳性表达率15例子宫颈鳞癌组织中分别为73.3 %,表达水平为(1.2±0.5),18例正常宫颈上皮组织中分别为11.1%,表达水平为(0.9±0.2),差异均有统计学意义;(2)30例宫颈鳞癌组织细胞核及细胞膜上IKCa1蛋白产物均呈阳性表达;正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达,差异有统计学意义;(3)宫颈鳞癌组织中IKCa1 蛋白产物的表达与癌细胞分化程度呈正相关.结论 IKCa1的高表达与宫颈鳞癌的发生和发展密切相关.     

Rab25基因siRNA对人卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:通过RNA干涉抑制Rab25在人卵巢上皮性癌的过表达,观察Rab25基因siRNA对卵巢癌细胞增殖及诱导凋亡的效果。方法:构建针对Rab25基因的siRNA重组质粒,稳定转染A2780细胞,通过RT-PCR检测Rab25的表达;MTT法观察细胞增殖,绘制细胞生长曲线;Hoechst33258荧光染色和透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果:成功构建Rab25的siRNA,稳定转染靶细胞后可显著降低Rab25的表达,细胞生长速度减慢、增殖能力下降;荧光显微镜和电镜观察到细胞胞质浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成。结论:Rab25基因的siRNA能抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,为卵巢癌基因治疗开辟新途径。     

干扰MTDH基因表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖及侵袭研究

目的：研究干扰MTDH基因表达对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法：构建MTDH shRNA表达质粒,将其转染Hela细胞并设置相应的对照组,Western-blot检测各组细胞中MTDH、VEGF-A、E-Cadherin蛋白表达情况;同时MTT法检测各组细胞增殖情况;Transwell检测各组细胞侵袭能力。结果：与对照组相比,MTDH干扰组Hela细胞中MTDH、VEGF-A蛋白表达明显下降,E-Cadherin蛋白表达显著上升。MTDH干扰组Hela细胞增殖受到明显抑制,且细胞侵袭能力显著下降。结论：干扰Hela细胞中MTDH基因表达能够下调VEGF-A表达并增强E-Cadherin的表达,从而抑制Hela细胞增殖及侵袭。     

C/EBPα基因对子宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的作用分析

目的:探索CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)基因对HeLa细胞增殖和定向迁移的影响。方法:用MTT方法检测C/EBPα基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组对HeLa细胞增殖的影响。用Transwell侵袭转移模型评价He-La细胞的迁移情况。其中,不同上室中分别加入C/EBPα基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组的HeLa细胞,下室中加入含20%FBS的培养基。结果:C/EBPα基因重组质粒转染组、转染空质粒组和未转染HeLa细胞组的吸光度值分别为0.21±0.01、0.24±0.01和0.24±0.02,重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验发现重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组相比,细胞迁移能力减弱,细胞穿膜数分别为12.0±2.2、39.0±3.2和39.6±2.6,重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:C/EBPα基因能抑制子宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移能力。     

甲基硒酸对HeLa细胞增殖和迁移功能影响的研究

目的探讨甲基硒酸(Me Se A)对He La细胞增殖和迁移功能的影响。方法体外培养He La细胞,采用不同浓度的Me Se A处理12~72 h,MTT和划痕实验检测He La细胞的增殖和迁移能力。结果采用3μmol/L的Me Se A处理He La细胞,细胞的增殖和迁移速度明显降低(P0.01,P0.05)。与对照组相比,Me Se A处理组的细胞增殖抑制率达40%,4 h和8 h的迁移抑制率分别为29%和26%。结论Me Se A可以抑制宫颈癌细胞系He La细胞的增殖及迁移,表现出抗癌活性。     

钙激活性中电导钾离子通道在人子宫颈癌组织中的表达及其在细胞增殖中的作用

目的:研究钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)在宫颈癌组织中的表达变化及其在宫颈癌HeLa细胞增殖中的作用。方法:应用RT-PCR技术检测18例正常宫颈组织及15例宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的表达;利用IKCa1通道的阻断剂(克霉唑)处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法观察细胞增殖的变化。结果:宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为73.33%、1.14±0.45)明显高于正常宫颈组织(分别为11.11%、0.86±0.23),P<0.05。克霉唑以浓度和时间依赖的方式阻滞HeLa细胞增殖,抑制HeLa细胞的生长,降低IKCa1 mRNA的表达水平。结论:IKCa1的异常表达可能与宫颈癌的发生、发展密切相关,降低其表达可能抑制宫颈癌细胞的增殖和生长。     

穿心莲内酯诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其机制

目的:明确穿心莲内酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞株,经穿心莲内酯处理后MTS法检测细胞的增殖情况,荧光显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,蛋白印迹(Western blot)方法检测内质网应激相关蛋白CHOP、凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达变化.结果:穿心莲内酯可以剂量依赖地抑制HeLa细胞的增殖(P＜0.05),引起细胞凋亡相关的形态学变化,诱导细胞凋亡(P＜0.05),引起CHOP蛋白的表达上调,活化Caspase-3和Caspase-9蛋白.结论:穿心莲内酯可以通过内质网应激途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡.     

siRNA沉默FOXF2基因对宫颈癌Hela细胞迁移与增殖的影响研究

目的 探究siRNA沉默FOXF2基因对宫颈癌Hela细胞迁移与增殖的影响研究。方法 在该院于2018年1月-2018年12月检测siRNA沉默FOXF2,选择Western Blot、Real Time-PCR法,之后Hela细胞中蛋白表达、FOXF2基因mRNA的变化。siRNA沉默FOXF2后细胞增殖,选择CCK8检测;siRNA沉默FOXF2后细胞迁移选择划痕试验检测。结果 多重对比各组,选择Dunnett T3,结果显示:3条siRNA链沉默FOXF2后,相较于Hela细胞SNC组合Hela细胞,siRNA-FOXF2 mRNA显著降低(65%~85%),对比差异有统计学意义(P<0.05);相较于Hela细胞SNC组及Hela细胞组,Hela细胞FOXF2蛋白表达水平出现显著降低;在siRNA沉默FOXF2基因后,经细胞划痕试验显示,相较于Hela细胞SNC组及Hela细胞组,Hela细胞的迁移能力显著较高;较Hela细胞SNC组及Hela细胞组,siRNA-FOXF21415组增殖率显著较高,对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 宫颈癌患者针对其Hela细胞的迁移与增殖能力,选择SiRNA沉默FOXF2基因有极大的促进作用,具有临床应用价值。     

C/EBP基因对HeLa细胞增殖、凋亡和迁移作用

目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)基因对HeLa细胞增殖、凋亡和定向迁移的影响。方法用噻唑蓝法检测C/EBPβ基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组对HeLa细胞增殖影响;用annexin V/PI双色法流式细胞仪检测HeLa细胞凋亡;Transwell侵袭转移模型评价HeLa细胞迁移情况,其中,不同上室中分别加入C/EBPβ基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组的HeLa细胞,下室中加入含20% 胎牛血清(FBS)培养基。结果转染组、空质粒组和未转染组HeLa细胞吸光度(A)值分别为(0.38±0.12)、(0.59±0.17)和(0.68±0.17),组间比较,差异有统计学意义(F=9.769,P<0.01);转染组、空质粒组和未转染组HeLa细胞凋亡率分别为(6.99±0.75)%、(3.48±0.74)%和(3.23±1.07)%,转染组与空质粒组和未转染组比较,差异有统计学意义(F=17.541,P<0.01);与空质粒组和未转染组比较,转染组细胞迁移能力减弱,细胞穿膜数分别为(16.0±2.3)、(39.0±3.2)和(39.6±2.6)个,组间比较,差异有统计学意义(F=121.785,P<0.01)。结论C/EBPβ基因能抑制子宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力,并促进细胞凋亡。     

SGK1基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用

目的观察血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用,为探讨乳腺癌治疗靶点提供实验依据。方法采用RNA干扰技术,以pGenesil 3为载体,建立针对SGK1的短发卡RNAC(shRNA)干扰质粒pGen-3-siSGK1和阴性对照质粒pGen-3-control,转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经筛选得到稳定SGK1基因沉默的乳腺癌细胞模型;采用实时定量PCR法、免疫荧光法以及蛋白免疫印迹法,检测shRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中SGK1的表达;采用体外浸润实验、细胞迁移实验检测各组细胞的侵袭和转移能力,噻唑蓝比色法检测细胞体外生长能力。结果成功构建针对SGK1基因的shRNA干扰质粒,建立稳定的SGK1基因沉默乳腺癌细胞模型;模型细胞中SGK1蛋白表达量与对照组相比下降了60%(P<0.01);β-catenin与SGK1表达条带亮度均明显下降;PGen-3-siSGK1组SGK1 mRNA相对含量(RQ) 为0.35,低于其他2组(分别为0.96、1.00),与pGen-3-control组相比下降了65.5%,差异有统计学意义(P<0.05),高倍显微镜视野下,pGen-3-siSGK1组的穿膜细胞数为22个/HPF,其他2组分别为66、62个/HPF;pGen-3-siSGK1组的细胞迁移率为17.01%,其他2组分别为72.22%、68.47%;凝血酶不同浓度下pGen-3-siSGK1组细胞生长均受到抑制,生长速度缓慢,其中0.1、1.0 U/mL浓度下,细胞含量(吸光度)分别为0.10、0.05,远低于其他2组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论SGK1基因沉默可抑制SGK1基因表达,可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231株的浸润能力、迁移能力下降,抑制乳腺癌细胞生长。     

CXCR2和CXCR4对人宫颈癌HeLa细胞作用

目的 了解 CXCR2 和 CXCR4 对 HeLa 细胞迁移、增殖和分泌 VEGF 的影响。方法 Transwell 检测 HeLa 细胞迁移情况;MTT 法检测 CXCR2 和 CXCR4 对HeLa细胞增殖的影响;ELISA法检测HeLa细胞VEGF表达情况。结果 敲除 CXCR2 或 CXCR4 后,宫颈癌 HeLa 细胞迁移率分别为（2.1±0.8）和（2.6±0.9）,未敲除组迁移率为（3.6±1.1）,差异有统计学意义（P<0.05）;激活 CXCR2 或 CXCR4 后,HeLa 细胞增殖率分别为（86.1±15.3）% 和（83.9±15.9）%,未激活组HeLa细胞增殖率为（66.7±8.7）%（P<0.05）,激活 CXCR2 或 CXCR4 后,VEGF 表达水平分别为（6.84±0.19）和（6.59±0.14） pg/L ,未激活组为（0.74±0.03） pg/L（P<0.05）。结论 HeLa细胞表面高表达的 CXCR2 和 CXCR4 在诱导 HeLa 细胞迁移、增殖和分泌 VEGF 方面具有重要的作用。     

特异性siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白表达的抑制作用

目的:探讨特异性siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中肿瘤-睾丸抗原OY-TES-1蛋白表达的影响。方法:针对OY-TES-1基因设计、化学方法合成的siRNA通过脂质体转染体外培养的卵巢癌SKOV3细胞,在转染后24、36、48、72 h,通过免疫细胞化学检测OY-TES-1蛋白的表达水平。结果:靶向OY-TES-1基因siRNA转染SKOV3细胞后,OY-TES-1蛋白的表达明显降低,其抑制作用在转染后24 h出现,转染后36 h几乎完全被抑制,转染后72 h开始出现RNAi衰减现象。结论:OY-TES-1特异性siRNA(1 486～1 504)序列可在体外有效地干扰SKOV3细胞中OY-TES-1基因的表达。     

脉冲电场对宫颈癌Hela细胞黏附和侵袭能力影响的实验研究

目的:探讨脉冲电场对肿瘤细胞黏附侵袭能力的影响及其可能的作用机制.方法:分别将场强为0 V/cm、500 V/cm、1 000 V/cm和1 500 V/cm的脉冲电场作用于宫颈癌Hela细胞,采用基质胶黏附实验观察脉冲电场对Hela细胞黏附能力的影响;采用Transwell小室实验观察脉冲电场对Hela细胞侵袭能力的影响;采用免疫荧光法检测脉冲电场作用后Hela细胞中MMP-2、TIMP-2的表达情况.结果:经脉冲电场作用后,Hela细胞黏附能力下降,侵袭能力受到抑制,MMP-2的表达水平下调,TIMP-2的表达水平上调.结论:脉冲电场能抑制Hela细胞的黏附和侵袭能力,这种抑制作用可能与其下调MMP-2的表达水平和上调TIMP-2的表达水平有关.     

苯丁酸钠对宫颈癌Hela细胞增殖及p21WAF1/CIP1和CDK7表达的影响

目的:探讨苯丁酸钠(SPB)在体外诱导宫颈癌Hela细胞生长抑制和细胞周期阻滞以及对p21WAF1/CIP1和CDK7基因表达的影响。方法:体外培养Hela细胞,应用MTT法检测苯丁酸钠对Hela细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期的变化,半定量RT-PCR法检测细胞p21WAF1/CIP1和CDK7基因表达水平。结果:苯丁酸钠明显抑制Hela细胞增殖,呈时间-剂量依赖性;苯丁酸钠诱导Hela细胞周期阻滞于G0/G1期,使S期细胞数减少;苯丁酸钠促进抑癌基因p21WAF1/CIP1的表达,对CDK7基因的表达有抑制作用。结论:苯丁酸钠在体外抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,使之阻滞于G0/G1期,可能与上调p21WAF1/CIP1基因表达、下调CDK7基因表达有关。     

奈达铂对宫颈癌Hela及Siha细胞的作用

目的:比较奈达铂(NDP)体外对人宫颈腺癌细胞Hela细胞及鳞癌细胞Siha的抑制作用并探讨其作用机制。方法:以2.5～40μg/ml NDP分别作用于Hela及Siha细胞24 h,48 h,72 h,MTT法检测抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);利用流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡率及周期变化;半定量PCR法分析基因半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3,Caspase 9)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达变化。结果:NDP对宫颈癌Hela细胞及Siha细胞均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性,NDP对Hela细胞的抑制率大于Siha细胞;FCM显示,随时间、浓度增加,Hela及Siha细胞凋亡率增加,相同浓度和作用时间下,Hela细胞的凋亡率大于Siha细胞(P<0.05),S期细胞的比例增加,G0/G1期比例减少,G2/M期比例变化不明显;与对照组相比,Caspase 3,Caspase 9表达增加,MMP-2表达减少。结论:NDP可抑制宫颈腺癌细胞Hela及鳞癌细胞Si-ha的增殖,NDP体外对Hela细胞的抑制作用更强。NDP的作用机制与诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞、上调Caspase3和Caspase9的表达有关;下调MMP-2的表达可能有利于降低宫颈癌细胞的侵袭力。