盐霉素抑制耐格列卫的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv增殖并诱导其凋亡

目的: 探讨盐霉素对耐格列卫的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv抑制增殖和诱导凋亡的作用及其机制。方法: 采用CCK-8的方法检测盐霉素对K562/Glv细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧、细胞内Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)和线粒体膜电位(ΔΨ_m);比色法检测caspase-3、-8和-9活性;Western blotting 分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对K562/Glv细胞生长具有剂量依赖性抑制作用,0.2 μmol/L时细胞增殖抑制率为(36.70±2.31)%,细胞凋亡率为(19.66±2.43)%;0.2 μmol/L盐霉素作用于K562/Glv细胞,ΔΨ_m显著下降,24 h时下降至对照组的(19.8±2.4)%,细胞内活性氧和[Ca²⁺]_i在短期显著升高。Caspase-3、-8和-9活性均显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Bcl-2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。同时,盐霉素也减少K562/Glv细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素不仅通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导耐格列卫人慢性粒细胞白血病细胞K562/Glv的凋亡,而且通过抑制Wnt信号途径抑制K562/Glv细胞增殖。     

盐霉素增强吉非替尼诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的作用

 目的：探讨盐霉素联合吉非替尼诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的协同作用。方法：采用MTT的方法检测盐霉素对A549细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;比色法检测caspase-3、-8和-9活性;Western bloting 分析细胞色素C、Bcl-2、p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白水平。结果：盐霉素与吉非替尼单用均出现不同程度的细胞增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用;而盐霉素与吉非替尼联合作用,能更显著地抑制细胞增殖,且凋亡细胞显著增加（P<0.05）。盐霉素单独作用A549细胞,线粒体膜电位显著下降,细胞内活性氧和Ca2+在短期内显著升高,胞浆细胞色素C含量以及caspase-3、-8和-9活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义;吉非替尼单用则主要表现为对p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达的抑制作用,而对胞浆细胞色素C含量以及caspase-3、-8和-9活性影响较少。Western blotting检测发现,联合用药组的Bcl- 2、p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达量明显减少,但是对EGFR、Akt和ERK总蛋白水平无显著影响。结论：盐霉素与吉非替尼联用具有较好的协同作用,可能通过Bcl-2途径及线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,提高A549细胞对吉非替尼的敏感性。     

miR-24对肺癌A549细胞化疗敏感性的影响

目的:探究微小RNA(miR)-24对肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及可能的作用机制。方法:Real-time PCR实验检测肺腺癌细胞系A549及肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达情况。转染miR-24抑制序列(miR-24 inhibitor)下调A549/DDP细胞中的miR-24后,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、细胞色素C(Cyt C)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和P53的蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-24可能的靶基因。结果:耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达水平明显高于A549细胞(P0.05)。miR-24 inhibitor可诱导肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的凋亡,增加细胞对顺铂的敏感性;此外还可下调Bcl-2/Bax比值,同时上调P53、p-ERK、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及Cyt C的蛋白水平。而应用ERK特异性抑制剂U0126可部分恢复miR-24 inhibitor转染的细胞活力。生物信息学分析显示p53是miR-24的可能作用靶点基因,在A549/DDP细胞中共转染miR-24 inhibitor和P53 siRNA可部分逆转miR-24 inhibitor对细胞活力的影响。结论:下调肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达可增加细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与靶向p53基因同时激活ERK/P53信号通路后促进细胞经线粒体途径的凋亡有关。     

shRNA 沉默CCAT2 通过抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549 化疗敏感性的 影响

目的:探究shRNA沉默CCAT2抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及机制。方法:细胞分为A549/DDP组、Scramble组、CCAT2 shRNA组,转染相应的shRNA处理细胞,RT-PCR检测CCAT2基因表达水平,CCK8检测A549/DDP的细胞活力,Hoeschst和流式细胞法检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活性半胱天冬酶3(cl-caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平。结果:与A549细胞株相比,A549/DDP细胞株中CCAT2表达水平显著升高。与A549/DDP组相比,CCAT2 shRNA组CCAT2表达水平显著降低,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Bax、cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平比率显著降低,Beclin1蛋白表达水平降低,p62蛋白表达水平升高。结论:沉默CCAT2可提高非小细胞肺癌细胞A549株化疗敏感性,作用机制可能与抑制自噬作用有关。     

光敏化促进姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡

目的: 探讨光敏化促进姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及其机制。方法: 用MTT法检测光敏化姜黄素对胃癌MGC-803细胞株的增殖抑制率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位、细胞内活性氧和Ca²⁺;比色法检测caspase-3、8和9酶活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax和热休克蛋白70(HSP70)水平。结果: 单纯姜黄素(5.0μmol/L)对MGC-803细胞增殖抑制率为(29.74±2.30)%,在光学显微镜下可见部分凋亡细胞,凋亡率为(12.54±1.75)%。而光敏化姜黄素组细胞增殖抑制率则为(44.93±3.61)%,在光学显微镜下能见明显细胞核形态改变,染色质凝集,凋亡小体形成,凋亡率为(26.58±2.67)%,细胞周期主要阻滞于G₀/G₁期。光敏化姜黄素显著降低线粒体膜电位,显著增加细胞色素C、细胞内活性氧和Ca²⁺以及caspase-3、8和9酶活性,与单纯姜黄素组比较,差异显著(P<0.01)。Western blotting结果显示光敏化姜黄素同时显著抑制Bcl-2和HSP70蛋白表达水平。结论: 光敏化姜黄素通过Bcl-2和线粒体途径增强其诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。     

GeXP 检测rhIL-24 联合DDP 对人肺腺癌A549 / DDP 细胞凋亡相关基因的实验研究

目的:利用多基因遗传表达分析系统(GeXP)探讨重组人白细胞介素-24(rhIL-24)联合顺铂(DDP)诱导人肺腺癌顺铂耐药株A549/ DDP 细胞6 个凋亡相关基因的变化。方法:用rhIL-24、DDP 及rhIL-24+DDP 干预A549/ DDP 细胞,应用多基因遗传表达分析系统(GeXP)同时检测Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase3、Rb 与P53 等6 个凋亡相关基因。结果:rhIL-24 蛋白可引起A549/ DDP 细胞Bax 基因、Caspase3 基因、Rb 基因转录上调;Bcl-2 基因、Survivin 基因转录下调,但抑癌基因P53 变化无规律,rhIL-24 联合DDP 后Bax、Survivin、Rb 表达较单独rhIL-24 组变化更加显著。结论:rhIL-24 蛋白可通过上调Bax,下调Bcl-2、Survivin,激活Caspase3,上调抑癌基因Rb 诱导人肺腺癌A549/ DDP 细胞凋亡。     

芹菜素对人肺癌A549细胞凋亡及相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响

目的研究芹菜素对人肺癌 A549细胞增殖抑制和凋亡诱导作用与 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法10~80μmol/L 不同浓度芹菜素作用 A549细胞,采用 MTT 法检测芹菜素对 A549细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察芹菜素诱导细胞凋亡形态学的变化;流式细胞仪 AnnexinV- FITC/PI 双染色法检测细胞凋亡率;Western blot 法检测凋亡相关蛋白 Bax 和 Bcl-2表达的变化。结果 MTT 法显示,芹菜素对 A549细胞有显著的增殖抑制作用（P <0.01）,且具浓度和时间依赖性;荧光显微镜下观察到芹菜素处理组细胞出现典型的凋亡形态学改变：细胞核固缩、染色质凝集和核碎片化等;流式细胞仪分析结果显示,芹菜素呈浓度依赖性诱导 A549细胞凋亡;Western blot结果显示,促凋亡蛋白 Bax 随着芹菜素浓度升高表达增加,抗凋亡蛋白 Bcl-2随着芹菜素浓度升高表达减少。结论芹菜素具有抑制人肺癌 A549细胞增殖,诱导其凋亡的作用,其机制可能与上调 Bax 蛋白表达和下调 Bcl-2蛋白表达有关。     

柚皮苷对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞的逆转作用

目的:探究柚皮苷(naringin,NRG)对人肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测柚皮苷和顺铂对A549/DDP细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法对两药的联合效应进行评价;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)、p-Akt、CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4, CXCR4)、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:顺铂耐药株A549/DDP细胞中P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4蛋白的水平显著高于非顺铂耐药株A549细胞(P0.05);柚皮苷和顺铂可剂量依赖性地抑制A549/DDP细胞活力(P0.05),IC_(50)分别为36.92μmol/L和129.77μmol/L;当抑制率超过15%时,二者联用呈协同效应;柚皮苷与顺铂可诱导A549/DDP细胞凋亡(P0.05),并且两药联用组的细胞凋亡率高于顺铂组(P0.05);柚皮苷和顺铂可上调Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05),下调Bcl-2的蛋白水平(P0.05),同时柚皮苷还可剂量依赖性地下调P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4的蛋白水平(P0.05)。结论:柚皮苷可增强人肺癌A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。这可能与柚皮苷上调Bax的蛋白水平,下调Bcl-2、P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4的蛋白水平有关。     

环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax表达的影响。方法加不同浓-1度塞来昔布与A549肺癌细胞共培养,MTT法检测细胞增殖,50μmol·L塞来昔布作用于A549细胞48 h,实时定量PCR方法检测各组细胞的Bcl-2和Bax基因表达水平,Western blot方法检测各组细胞的Bcl-2和Bax蛋白表达。结果塞来昔布在体外对细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性;各组细胞培养48h后,相比于对照组,塞来昔布组细胞Bcl-2 m RNA和蛋白表达显著下调,Bax m RNA和蛋白表达显著上调,Bcl-2/Bax比值显著降低(<0.01)。结论塞来昔布可能通过调节Bcl-2和Bax的表达抑制A549细胞增殖。     

Integrin β1对胃癌细胞SGC7901多药耐药性的影响

目的:探究整合素β1(integrinβ1)对胃癌多药耐药性的影响及可能的作用机制。方法:Western blot法及q PCR实验检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达情况。采用integrinβ1反义寡核苷酸转染,敲减胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测integrinβ1、Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、细胞色素C(CytC)和p-AKT/AKT的蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中integrinβ1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中加入顺铂、长春新碱及5-氟尿嘧啶等化疗药物刺激后,integrinβ1的蛋白表达水平明显升高。敲减integrinβ1的表达可诱导胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的凋亡,增加细胞对化疗药物的敏感性;此外下调Bcl-2/Bax、p-AKT~(Ser473)和p-AKT~(Thr308)的蛋白水平,同时促进线粒体Cyt-C的释放,上调cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:敲减胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的integrinβ1表达可恢复细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞经线粒体路径的凋亡,其机制可能与抑制AKT的磷酸化,阻断该信号通路有关。     

左旋门冬酰胺酶与盐霉素联合作用对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖凋亡的影响

 目的：研究左旋门冬酰胺酶（L-asparaginase,L-ASP）与盐霉素（salinomycin,Sal）联合作用对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响及其机制。方法：CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况;Western blotting方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3、caspase-8、caspase-9及细胞色素C表达的变化;流式细胞术分析各实验组细胞凋亡率之间的差别。结果：不同浓度的L-ASP和Sal单独处理Jurkat细胞株后均显示出明显的增殖抑制作用,L-ASP的IC50为812 IU/L,Sal 的IC50为0.75 μmol/L。而两药联合使用的增殖抑制作用更显著（P<0.05）;合用指数计算公式结果显示两药为协同作用。Western blotting 显示联合用药组与L-Asp、Sal单独处理组相比,Bcl-2蛋白表达明显减少,caspase-3、caspase-8、caspase-9和胞浆细胞色素C水平明显增高;干预48 h后行流式细胞术检测结果显示L-ASP（25 IU/L）单独处理组和Sal（0.5μmol/L）单独处理组细胞凋亡率分别为（7.11±0.23）%和（25.43±047）%,与对照组（6.67±0.13）%比较差别有统计学意义（P＜0.05),联合用药组细胞凋亡率（39.12±1.97）%分别与L-ASP、Sal单独处理组比较,差别有统计学意义（P＜0.05)。结论：左旋门冬氨酸酶与盐霉素联合作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

紫草素对卵巢癌细胞SKOV3/DDP顺铂耐药的逆转作用

目的:探讨紫草素是否逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP的顺铂耐药效应及其作用机制。方法:采用CCK-8法确定紫草素和顺铂的最佳作用条件,流式细胞术检测细胞的周期分布及凋亡率;Western blot检测周期及凋亡相关调控因子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、P18、p-Rb、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:CCK-8实验结果显示,相较于单用顺铂,联合使用紫草素对顺铂耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP的生长抑制作用较为显著。此外,联用紫草素和顺铂可显著抑制细胞周期G_1/S转化,并增加细胞早期凋亡率。Western blot结果显示,相较于顺铂处理组,紫草素和顺铂联用组的cyclin D1、CDK2、p-Rb及Bcl-2的蛋白水平显著降低,而P18、Bax及cleaved caspase-3的蛋白表达显著增加。结论:紫草素可逆转卵巢癌SKOV3/DDP细胞的顺铂耐药效应,其作用机制可能与影响细胞周期及凋亡相关因子的表达,进而抑制细胞活力促进细胞凋亡相关。     

miRNA-181a在人肺腺癌细胞中的表达及对细胞功能的影响

目的:研究微小RNA-181a(mi RNA-181a)在不同人肺腺癌细胞中的表达及其转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP后对其细胞功能的影响及机制。方法:利用实时荧光定量PCR方法检测mi RNA-181a在人正常肺上皮细胞系BEAS-2B、人肺腺癌细胞系A549、人肺腺癌耐药细胞系A549/DDP中的表达;利用p Genesil-mi RNA-181a真核表达质粒转染A549/DDP细胞,同时设置未转染组和空载组;分别采用实时荧光定量PCR、MTT法、流式细胞术、Transwell实验以及Western blot法检测mi RNA-181a转染前后的表达情况、对A549/DDP细胞活力、细胞周期、细胞侵袭能力和顺铂(DDP)作用下的细胞生长抑制率、细胞凋亡率的影响以及对A549/DDP细胞中mi RNA-181a的靶基因bcl-2和p53蛋白表达的影响。结果:mi RNA-181a在A549和A549/DDP中的表达量显著低于BEAS-2B(P0.05),且在A549/DDP中表达量最低;mi RNA-181a转染A549/DDP细胞后其表达显著升高(P0.05)且能够抑制A549/DDP细胞活力、细胞周期和细胞侵袭能力(P0.05),同时升高DDP作用下A549/DDP细胞的生长抑制率和细胞凋亡率(P0.05);mi RNA-181a转染A549/DDP细胞后抑制Bcl-2蛋白的表达而促进P53蛋白的表达(P0.05)。结论:mi RNA-181a可能参与了肺腺癌的发生发展,mi RNA-181a可作为人肺腺癌治疗的新靶点。     

靶向沉默Ku80增强顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡

目的:观察沉默Ku80能否增强顺铂诱导的人肺腺癌耐药细胞的细胞凋亡。方法:首先采用RT-PCR、Westernblot方法比较Ku80在人肺腺癌亲代(A549)与耐药细胞系(A549/DDP)的表达水平;将Ku80siRNA及si-Scramble转染至A549/DDP细胞后,加药组转染后48小时加顺铂作用24小时;应用MTT法检测顺铂对各组细胞的抑制率,采用流式细胞仪检测凋亡率,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活化程度。结果:Ku80 mRNA、蛋白在A549/DDP表达水平显著高于其亲代A549;si-Ku80组A549/DDP细胞的Ku80的mRNA、蛋白表达水平下调;顺铂对si-Ku80组细胞的抑制率明显高于si-Scram-ble组与Control组;在6μg/ml顺铂作用24小时后,si-Ku80组细胞凋亡率及Caspase-3活化程度高于si-Scramble组和Control组(P<0.05)。结论:靶向Ku80siRNA导入人肺腺癌耐药细胞特异性下调Ku80的表达,增强顺铂诱导的人肺腺癌耐药细胞凋亡作用。