脑缺血再灌注后蛋白激酶C,游离钙变化与神经细胞凋亡相关性研究

目的 探讨脑缺血再灌注后神经细胞内蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的激活与游离钙的变化与神经细胞凋亡的关系。方法 线栓法制做大鼠脑缺血再灌注模型;磷基转移法测定ＰＫＣ活性变化。结果 ＰＫＣ在脑缺血再灌注后出现了易位激活,细胞内游离钙含量增多及神经细胞凋亡。结论 脑缺血再灌注后ＰＫＣ和钙相互作用共同促进了神经细胞的凋亡。     

山莨菪碱在大鼠脑缺血再灌注时对神经元调亡的影响

目的：通过观察脑缺血再灌注后海马CAI区存活神经元数目、原位末端标记（TUNEL）阳性细胞数目、热休克蛋白70（HSP70）阳性细胞数目以及脑组织超微结构的变化,探讨山莨菪碱（Anisodamine,Ani）对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法：采用Pulsinelli法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。观察Ani在脑缺血再灌注的迟发性损伤阶段对海马CAI区存活神经元数目、TUNEL阳性细胞数目、HSP70阳性细胞数目以及脑组织超微结构的影响。结果：Ani可增加脑缺血再灌注后的HSP70的表达,减少神经元调亡的发生,提高神经元的存活数目。结论：Ani可减少脑缺血再灌注神经元调亡,提高神经元的存活数目,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

神经节苷脂QM-1对大鼠急性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的：研究神经节苷脂GM-1对大脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法：建立全脑缺血再灌注模型，应用二苯胺法和免疫组织化学方法观察脑缺血后3h、6h、24h脑组织DNA裂解率变化及PKC6表达，以及GM-1给药后的变化。结果：随着再灌注时间的延长，DNA裂解率变化明显增加，24h达高峰，PKC5表达于再灌注6h达高峰，以后逐渐呈下降趋势；GM-1给药组相应时间点的DNA裂解率及PKC6表达明显减少。结论：GM-1能抑制脑缺血再灌注后细胞凋亡的发生，并减少PKC6的表达，对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。     

脑缺血再灌注后bFGF和FGFR表达及藻蓝蛋白的干预作用

目的：观察脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及其受体（FGFR）的表达，探讨藻蓝蛋白对脑缺血损伤的干预作用。方法：成年健康雄性Wistar大鼠52只，应用线栓法建立大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO／R）模型，藻蓝蛋白进行治疗，TUNEL方法观察脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，免疫组化检测bFGF和bFGFR的表达。结果：脑缺血再灌注后6h，皮质区和纹状体区神经细胞凋亡逐渐增加，至第1d达高峰，第3d开始下降，第14d时仍高于假手术组；藻蓝蛋白治疗组凋亡细胞的变化与对照组相似，同一时间点相比较，均显著低于对照组。脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区神经元bFGF和FGFR表达增强，再灌注6h神经细胞即出现bFGF表达，第1d达高峰，后逐渐减弱，至第14d仍高于假手术组；藻蓝蛋白组神经细胞bFGF和FGFR表达的变化趋势与对照组相似，同一时间点比较，均明显高于对照组。结论：藻蓝蛋白可能通过促进bFGF和FGFR的表达，激活内源性神经保护机制而发挥抗凋亡作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞内游离钙的影响

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞内游离钙浓度 [Ca2 + ]i 的影响。方法　用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,采用Fura 2 /AM双波长荧光光度法检测脑组织悬液内 [Ca2 + ]i。结果　缺血再灌注组细胞 [Ca2 + ]i 显著高于假手术组 ,bFGF组细胞 [Ca2 + ]i明显低于缺血再灌注组。结论　bFGF可通过减轻脑缺血损伤后脑细胞内钙超载程度来发挥抗脑缺血作用。     

沙鼠脑缺血和再灌流后胞浆游离钙和ATP的相关性及东莨菪碱的影响

目的：探讨胞浆游离钙及ATP在脑缺血和再灌流损伤中的作用及相互关系以及药物的影响。方法：应用沙鼠建立脑缺血模型，缺血前15min腹腔注射药物，分别阻断双侧颈总动脉30min、50min，阻断颈动脉50min再灌流10min、再灌流60min及120min。检测神经细胞胞浆游离钙及脑组织ATP的变化以及应用东莨菪碱后的影响。结果：1）胞浆游离钙在脑缺血50min后大幅度升高，再灌流时再度升高，然后缓慢下降；2）脑缺血期ATP迅速下降，再灌流期先上升，此后再度下降；3）缺血期胞浆游离钙和组织ATP呈负相关，再灌流期无相关性。结论：东莨菪碱对减缓胞浆游离钙升高，减缓ATP的耗竭均有作用，提示对脑缺血和再灌流损伤有治疗意义。     

针灸对缺血性脑卒中细胞凋亡影响的研究概述

正缺血性脑卒中是严重危害人类健康的一种疾病。随着对其发病机制深入的研究,发现体内基础性物质的改变、炎症因子、凋亡因子及信号的激活等都与缺血性脑血管疾病的发生发展密切相关。[1]兰希发等[2]认为,脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制是一个复杂的多因素过程;并认为,近年来与脑缺血再灌注后与神经细胞凋亡有关的发生基因、钙超载、自由基和兴奋性氨基酸的毒性作用,线     

一氧化氮对大鼠局灶性脑缺血再灌注所致神经细胞损伤的影响

目的：观察应用硝普钠和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME对大鼠局灶性脑缺血再灌注所致神经细胞损伤的影响。方法：取SD大鼠44只，按随机数字表法分为4组：假手术组，脑缺血再灌注组，脑缺血再灌注加侧脑室微量注射L-NAME组，脑缺血再灌注加侧脑室微量注射硝普钠组。用栓线法复制大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型，自颈内、外动脉分叉处起始，假手术组的尼龙栓子插入13mm，其余3组插入(18．0&;#177;0．5)mm造成大脑中动脉完全缺血30mm，缓慢拔出尼龙栓子形成再灌注状态，L-NAME组和硝普钠组侧脑室微量注射L-NAME和硝普钠进行干预，假手术组和脑缺血再灌注组侧脑室注射等量生理盐水。于再灌注术后12，24h，2，4d分别处死动物取材，紫外分光光度计检测各脑组织一氧化氮含量，免疫组化法测脑组织NOS活性，TUNEL法检测调亡细胞。结果：脑缺血再灌注急性期(术后12h)，脑组织一氧化氮含量迅速增高[(10．14&;#177;1．97)mol／g]，L-NAME明显降低脑组织一氧化氮的含量[(3．86&;#177;1．35)mol／g]，硝普钠能明显增加脑组织一氧化氮的含量[(12．46&;#177;1．57)mol／g]，SPSS10．0统计分析软件LSD法统计结果，各组间比较，F=24．07，P&;lt;0．05，有明显显著性意义。术后12h L-NAME抑制NOS的活性[(16．0&;#177;1．2)个／视野]，硝普钠组NOS的表达增强[(62．0&;#177;42)个／视野]，组间比较，F=21．3，P=0．003，有显著的统计学意义，术后24h，L-NAME进一步抑制NOS的活性，硝普钠组NOS的表达仍高，组间比较差异有显著性意义(F=16．18，P=0．023)，再灌注2d，各组间NOS的活性表达无统计学意义。再灌注2d TUNEL法显示L-NAME组调亡细胞增多，硝普钠组调亡细胞减少，组间比较差异有显著性意义(F=123，P=0．019)。结论：一氧化氮能明显抑制神经细胞的调亡。     

肌苷对脑缺血再灌注后脑组织细胞周期蛋白D1基因表达的影响

目的:观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)mRNA的表达与神经细胞凋亡的关系以及肌苷的干预作用,从细胞增殖角度探讨肌苷的神经保护作用机制。方法:应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,腹腔注射肌苷注射液,应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别检测大鼠脑缺血再灌流不同时间点皮质区和纹状体区神经细胞CyclinD1mRNA的表达与凋亡的变化。结果:脑缺血再灌注2h后皮质区与纹状体区即出现少量凋亡神经细胞,皮质区1d达高峰(72.8±2.66)个/视野,纹状体区2d达高峰(96.75±4.37)个/视野,之后逐渐减少,至再灌注14d(5.50±0.65)个/视野接近假手术组水平(3.75±0.85)个/视野;肌苷治疗组凋亡神经细胞较对照组显著减少;脑缺血再灌流后皮质区与纹状体区的缺血周围区神经细胞CyclinD1mRNA的表达于2h逐渐增强,皮质区和纹状体区分别于12h和1d达高峰,以后逐渐下降;肌苷治疗组CyclinD1mRNA表达较对照组显著减弱。结论:脑缺血再灌流CyclinD1mRNA的表达时序先于凋亡细胞的出现,其异常表达可能诱导了神经元的凋亡。肌苷可在脑缺血再灌注后抑制CyclinD1mRNA的表达,从而减少神经细胞凋亡,起到神经保护作用。     

Nogo-A反义寡核苷酸对大鼠脑缺血再灌注PKC-RhoA信号通路的影响

目的:研究侧脑室注射Nogo-A反义寡核苷酸对大鼠脑缺血再灌注后蛋白激酶C(PKC)-Rho A信号通路的影响。方法:40只大鼠,随机分为假手术组(A组)、再灌注6 h组(B组)、再灌注24 h组(C组)、再灌注72 h组(D组)、再灌注1周组(E组)、再灌注2周组(F组)、Nogo-A 72 h组(G组)、Nogo-A 1周组(H组),每组5只。制备大鼠脑缺血再灌注模型,A组不造成缺血,B、C、D、E、F组缺血后分别再灌注6 h、24 h、72 h、1周、2周,G、H组分别在缺血后脑室注射Nogo-A反义寡核苷酸后再灌注72 h、1周。分别用RT-PCR及Western blot检测缺血周围区大脑皮质PKCγ、Rho A的m RNA及蛋白表达的变化。结果:与A组比较,B组大脑皮质PKCγm RNA表达明显增加(P<0.01),C组降至正常(P>0.05),D组出现第2次升高(P<0.01),E组最高(P<0.01),H组较E组表达明显下降(P<0.05)。与A组比较,B、D、E组Rho A m RNA表达明显增加(P<0.01),G、H组较D、E组表达明显下降(P<0.05)。与A组比较,B、D组的PKCγ蛋白表达增加(P<0.05),E组明显增加(P<0.01),G、H组较D、E组表达明显下降(P<0.05)。与A组比较,B、D、E组的Rho A蛋白表达增加,G、H组较D、E组表达明显下降(P<0.05)。结论:PKCγ及Rho A基因表达在大鼠脑缺血再灌注后有两个高峰,后一个高峰与Nogo A的升高相一致。脑室注射Nogo-A反义寡核苷酸能抑制PKCγ及Rho A的表达,表明缺血后Nogo-A的升高参与PKC/Rho A信号通路的激活。     

脑缺血再灌注时PKC活化,FOS、BCl-2表达与神经细胞凋亡

探讨脑缺血再灌注时ＰＫＣ活性的变化与ＦＯＳ,ＢＣｌ－２表达的关系,采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,用磷基转移片检测ＰＫＣ的活性,用免疫组化法检测ＢＣｌ－２及ＦＯＳ的含量。结果：缺血再灌注后膜ＰＫＣ活性持续啬。ＦＯＳ在缺血再灌注早期即有明显增加,至缺血再灌注２ｄ时仍有少量表达。ＢＣｌ－２表达的高峰是在缺血再灌注２ｄ时。提示缺血再灌注期间ＰＫＣ发生易位激活,ＰＫＣ促进了ＦＯＳ和ＢＣｌ０２的表达,这几     

人参皂甙Rgl对脑缺血后神经元型一氧化氮合酶的影响

目的：观察人参皂甙Rgl对大鼠海马神经元缺糖氧／复糖氧后钙内流和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的影响,并探讨其可能的脑保护机制。方法：建立大鼠海马神经元缺糖氧／复糖氧模型,随机分为正常对照组、模型组和人参皂甙Rgl干预组（5、20、60μmol／L）。复糖氧后24h以Fluo-3AM荧光染色法观察各组海马神经元细胞内钙离子浓度变化,以生物化学法观察nNOS活性的变化,并以Hochest染色法检测细胞凋亡。结果：与模型组相比,人参皂甙Rgl中、高剂量组海马神经元细胞内钙离子浓度和nNOS活性均降低,凋亡细胞减少,人参皂甙Rgl低剂量组变化不明显。结论：人参皂甙Rgl可通过减少缺糖氧神经元细胞内钙内流,进而抑制nNOS活性,发挥脑保护作用。     

缺血后处理对脑缺血再灌注损伤后ERK1/2和Akt磷酸化及神经细胞凋亡的影响

目的:观察缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后ERK1/2和Akt及神经细胞凋亡的影响。方法:成年健康SD大鼠72只,随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、缺血后处理(Postcond)组各24只,应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型。分别于再灌注10min、30min、6h、24h后留取大脑皮质。Western blot检测再灌注10min、30min、6h后ERK1/2和Akt活性变化;原位末端标记(TUNEL)检测再灌注后24h神经细胞凋亡。结果:Postcond组再灌注10min、30min、6h后ERK1/2和Akt活性高于I/R组(P<0.05);脑缺血再灌注24h后,Postcond组与I/R组比较,TUNEL阳性细胞减少(P<0.05)。结论:缺血后处理可提高大鼠脑缺血再灌注后皮质内ERK1/2和Akt活性,减少神经细胞凋亡。     

全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的表达

背景:脑缺血再灌注对中枢神经系统的影响,除了急性期的细胞坏死,还有迟发性的神经元凋亡.目的:观察大鼠全脑缺血不同再灌注阶段海马神经元凋亡率、坏死率及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的表达情况,并探讨其对全脑缺血再灌注损伤的调节作用.设计:随机对照实验.单位:首都医科大学附属北京天坛医院的神经外科和麻醉科.材料:实验于2003-01/2004-01在首都医科大学附属北京神经外科研究所完成.选择清洁级成年雄性健康Wistar大鼠33只,随机分5组,缺血再灌注24 h组7只、缺血再灌注48 h组7只、缺血再灌注72 h组7只、缺血再灌注7 d组7只和假手术对照组5只.干预:制备大鼠全脑缺血再灌注模型.分别于再灌注24,48,72 h和7 d取脑海马组织,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,坏死率,Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑海马神经元中的表达情况.主要观察指标:①流式细胞仪检测各组大鼠脑海马组织细胞凋亡率和坏死率.②Bcl-2和Bax蛋白表达百分率.结果:33只大鼠全部进入结果分析.①缺血再灌注7 d组海马神经元的凋亡率最高[(24.59±0.97)%],坏死率峰值出现在缺血再灌注24 h组[(16.67±1.04)%],明显高于假手术对照组[(1.28±0.50)%,(0.90±0.38)%](P＜0.01).②假手术对照组Bcl-2表达极低[(1.07±0.27)%],但Bax有高表达[(46.09±5.37)%].③Bcl-2蛋白峰值出现在缺血再灌注后48 h[(14.41±0.67)%],而Bax蛋白峰值出现在缺血再灌注之后72 h[(77.38±1.52)%].结论:全脑缺血再灌注损伤后海马神经元凋亡率逐渐增高,凋亡调控基因Bcl-2和Bax表达异常增高,提示Bcl-2和Bax蛋白参与了全脑缺血再灌注损伤的凋亡调节.     

葛根素对局灶性脑缺血/再灌流大鼠神经细胞凋亡的作用

目的：研究葛根素在局灶性脑缺血／再灌流过程中对神经细胞凋亡的作用。方法：测定葛根素干预后局灶性脑缺血鼠脑组织中神经细胞凋亡和突触体钙浓度。结果：葛根素有减少突触体钙超载和神经元阳性凋亡细胞出现率的作用。结论：葛根素有一定的抗神经细胞凋亡的作用，此效应与抑制突触体钙超载有关。     

缺血再灌注大鼠脑保护过程中蛋白激酶C同工酶抑制剂的作用

背景蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)抑制剂能明显减轻缺血性脑损害,但其毒副作用大、价格昂贵.灯盏花素注射液能明显抑制PKC活性,对缺血性脑损害有一定的保护作用.目的研究局灶脑缺血再灌注大鼠PKC抑制剂灯盏花素缺血脑保护作用的可能机制.设计完全随机设计,对照实验研究.主要观察指标采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型.于缺血1.5 h再灌注4,24,72 h观察PKC同工酶γ蛋白表达及神经元凋亡的变化规律.结果再灌注4h PKCγ及神经元凋亡明显升高,PKCγ在24h达高峰,72h开始下降(P＜0.05);神经元凋亡的变化规律同PKCy(P＜0.01);灯盏花素组再灌注24 h前能明显抑制PKCγ及神经元凋亡的表达(P＞0.05).结论灯盏花素的缺血脑保护作用可能与其下调PKCγ蛋白表达有关.     

左旋四氢巴马汀在大鼠全脑缺血再灌注时对脑组织钙含量及脑细胞凋亡的影响

目的　通过观察脑缺血再灌注时脑组织钙含量及脑细胞凋亡的变化 ,探讨左旋四氢巴马汀在全脑缺血再灌注损伤时的作用机制。方法　本实验在建立大鼠急性全脑缺血再灌注损伤模型的基础上 ,用原子分光光度仪检测脑组织钙含量 ,用流式细胞仪检测脑细胞凋亡。结果　脑缺血再灌注 12h钙含量较假手术组增高 (P <0 0 1) ,脑细胞凋亡数亦增加(P <0 0 1) ;2 4h钙含量进一步增高 (P <0 0 1) ,凋亡细胞数亦进一步增加 (P <0 0 1) ;左旋四氢巴马汀在脑缺血再灌注 12h和 2 4h均能抑制脑组织钙含量的增高 (P <0 0 1)并减少脑细胞凋亡数 (P <0 0 1)。各组脑组织钙含量与脑细胞凋亡数呈正相关 (P <0 0 5 )。结论　左旋四氢巴马汀可减少脑细胞凋亡 ,其机制与抑制缺血再灌注后脑组织钙聚集有关。     

左旋四氢巴马汀在大鼠急性脑缺血再灌注时对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的　观察左旋四氢巴马汀 (L tetrahydropalmatine ,L THP)在脑缺血再灌注时对凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达的影响。方法　建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组织化学法、原位末端标记法 ,分别检测假手术组 (S组 )、缺血再灌注组 (Ⅰ组 )、L THP治疗组 (T组 )海马CA1区Bcl 2、Bax蛋白表达水平及凋亡细胞数。结果　 (1)脑缺血再灌注时 ,海马CA1区Bcl 2蛋白的表达显著增加 (P<0 0 1) ,但随时间的延长 ,增加幅度逐渐减小 ;而T组Bcl 2蛋白表达于相应的时间点则明显大于I组 (P<0 0 1)。 (2 )I组各时间点Bax蛋白表达均大于S组 (P <0 0 1) ,且随时间延长增加幅度逐渐增大 ;而T组Bax蛋白表达在相应时间点则下降 (P <0 0 1)。 (3)T组的神经细胞凋亡数与Bcl 2 /Bax蛋白阳性细胞数比值的关系为负相关 :r=- 0 94 173,P <0 0 0 1。 (4)神经细胞凋亡数随再灌注时间延长而增加 ,L THP可减少细胞凋亡数。结论　在脑缺血再灌注细胞凋亡过程中 ,L THP可通过上调Bcl 2蛋白表达 ,下调Bax蛋白表达 ,减少神经元凋亡 ,对脑缺血损伤起保护作用     

高压氧治疗对海马区急性脑缺血再灌注损伤的远期疗效

目的探讨高压氧(hyperbaricoxygen,HBO)治疗对海马区急性脑缺血再灌注损伤的远期疗效。方法沙土鼠脑缺血20min后再灌注,同时应用24.52kPaHBO治疗,连续3d,停止治疗2d后,应用TUNEL标记神经元凋亡,观察HBO治疗停止后神经元凋亡的变化。结果24.52kPaHBO治疗停止2d后,海马神经元凋亡数比24.52kPaHBO治疗结束时显著减少(P<0.01),比单纯缺血再灌注5d组亦显著减少(P<0.01)。结论24.52kPaHBO治疗急性脑缺血损伤具有良好的疗效,未见“反跳”现象。