利用聚羟基乙酸构建组织工程皮肤的实验研究

目的 以聚羟基乙酸(PGA)为培养支架，用组织工程方法在体外构建双层、有活性皮肤。方法应用酶消化法分别获取人成纤维细胞(FB)和表皮角质形成细胞(KC)，体外扩增培养。接种HF与PGA上1周后，在复合物表面接种KC，共培养1周将复合物置于气-液界面继续培养。于不同时间段取材。行组织学、超微结构及免疫组织化学检测。结果接种表皮角质形成细胞在“FB-PGA”复合物表面1周后可见2～3层连续的HK在复合物上生长良好；4周时PGA已部分降解，表皮分层分化较完善，抗involucrin染色阳性，透射电镜观察可见表皮细胞分层分化良好。细胞的相邻面有桥粒连接。结论 采用组织工程技术可以在体外构建双层、有活性的人工皮肤；组织工程皮肤具有和正常皮肤相似的组织学特征及生化成分。     

角质形成细胞与皮肤创面愈合瘢痕形成

创伤的愈合是一个复杂的连续的生物学过程，创伤的愈合和组织的重塑有赖于上皮再生、基底膜重建和表皮屏障功能的恢复。随着近年来在细胞生物学、生物化学和分子生物学领域对皮肤创面愈合的研究不断深入，人们对角质形成细胞(KC)在皮肤炎症、创面愈合、瘢痕形成和组织重塑方面起了关键的调节作用这一观点已形成共识。     

Notch信号在表皮及皮肤疾病中的研究进展

Notch信号通路是人体重要信号通路,其信号分子在机体内的各个器官中均有表达,其作用涉及细胞周期调节、细胞增殖及凋亡。皮肤作为人体重要的器官,在人的生命活动中一直不断的更新。据近期一系列研究报道,在包括角质形成细胞等多种表皮细胞的表面,Notch及其配体均有大量表达,且特异性的Notch信号活化在维持皮肤细胞自身更新及分化过程中起重要作用。本文就Notch信号在表皮及皮肤疾病中的研究进展和现状综述如下。     

皮肤角质形成细胞的免疫学特性与基因调控研究进展

角质形成细胞(KC)是构成表皮的主要细胞,具有免疫原性且发挥着重要的免疫作用。KC介导的免疫反应在固有免疫应答中发挥着始动作用。KC主要通过Toll样受体和核苷酸结合寡聚化结构域样受体识别抗原,活化后通过信号转导途径上调细胞因子、趋化因子和抗菌肽的表达,帮助启动皮肤免疫应答;通过吸引炎症细胞和固有免疫细胞,如肥大细胞、...     

双氯灭痛对豚鼠表皮角质形成细胞/黑素细胞比值及前列腺素E2含量影响的实验观察

目的 研究双氯灭痛对豚鼠皮肤前列腺素E2含量变化及自体全厚皮片表皮内角质形成细胞／黑色素细胞(KC／MC)比值与色素沉着的影响。方法 借助放射免疫分析方法动态观察皮片内前列腺素E2(PGE2)含量的变化及双氯灭痛的影响；借助组织学及组织化学方法观察皮片表皮内KC／MC比值变化。结果 在手术对照组，移植早期PGE2含量升高伴随着KC／MC比值的升高；而实验后期KC与MC的比值(KMR)减小。在双氯灭痛组，早期PGE不升反降，KMR减小；相应的实验后期KMR增大，皮片色泽较浅。结论 在移植早期应用双氯灭痛可以减轻炎症反应对表皮黑色素单位的损伤，减弱其增殖反应，从而降低KMR，减轻皮片色素沉着的程度。     

一种组织工程皮肤种子细胞高效快速的获取方法

为适应组织工程皮肤研究以及临床大面积皮肤缺损自体皮肤细胞种植的要求,我们摸索了一种高效、快速获取表皮细胞(keratinocyte,KC)的方法,从而有效解决了高活性的种子细胞-KC的来源这一组织工程皮肤研究的难题.     

原子力显微镜对角质形成细胞与黑素细胞共培养模型的观察研究

目的：用原子力显微镜观察人表皮黑素细胞（MC）、角质形成细胞（KC）单独培养和共培养的表面形态以及α-促黑素（α-MSH）对细胞表面形态的影响。方法：分别纯化培养来自人包皮的表皮MC和KC,MC以自配的添加MC生长物质的MCDB153培养基培养,KC以KC无血清培养基（K-SFM）常规培养。传第2代后以1：10的比例将两细胞接种到3Cm×3Cm的小培养皿中,以K-SFM培养基继续培养,单独或混合培养的细胞经添加含或不含100nMα-MSH的培养基干预3天后,0．5％戊二醛固定10min,原子力显微镜常温常压下,触摸式扫描。结果：正常人表皮MC有3个树突,每个树突有明显的二级分枝,除主干和分支见到膨出的颗粒物质,我们在树突的侧缘底侧和顶端还发现有丝状伪足结构,经α-MSH刺激后树突明显变长、变细,主干和分支表面膨出颗粒物质更为密集,许多已脱离枝干,丝状伪足则未有明显变化。表皮KC表面可见许多片状或钩状突起。共培养后,KC与MC接触部位可见明显的丝状伪足样结构,未连接部位则未见到丝状伪足样结构,添加α-MSH后,两细胞连接处的丝状伪足样结构明显增多。结论：通过胞吐和丝状伪足输送可能是黑素小体从MC向KC传递的两种主要方式,α-MSH可能通过促进这两种结构的发生而发挥促黑素传递的作用。     

热损伤角质形成细胞外泌蛋白的差异表达

目的 初步探索热损伤表皮角质形成细胞(keratinocytes,KC)培养上清蛋白质的整体变化规律.方法 选用人源性表皮角质形成细胞建立KC热损伤模型,收集正常培养及热损伤后12 h的KC培养上清,超滤、冻干,获得蛋白样品.运用固相pH梯度双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常及热损伤后KC培养上清中的总蛋白质,凝胶银染显色后选用ImageMaster 2D图像分析软件,进行比较分析识别差异表达的蛋白质.结果 ①正常培养及热损伤后KC培养上清凝胶的平均蛋白质点数分别为1 898±113和1 877±97,经匹配每张胶上用于统计学分析的点为1118个.②正常培养及热损伤后KC的双向凝胶电泳图谱中差异表达蛋白点数为26个,其中16个点在正常KC培养上清中高表达,10个点在热损伤后KC培养上清中高表达.③经质谱分析、数据库搜索,成功鉴定了16个差异蛋白质点,包括10种蛋白.热损伤后表达下调的蛋白质点有:alpha-enolase,actin cytoplasmic2,peroxiredoxin-4,phosphoglycerate mutase 1,G proteinregulated inducer of neurite outgrowthl;表达上调的蛋白质点有:purine nucleoside phosphorylase,tumor necrosis factor ligand superfamily member10,proteasome subunit alpha type-7,UDP-glucose 6-dehydrogenase.结论 通过建立正常及热损伤KC培养上清的双向凝胶电泳图谱,发现两者间存在一些差异表达的蛋白,为进一步从中优选调控组织损伤修复的主要作用分子,明晰创面修复过程中修复细胞间的调控机制提供了一定的理论依据.

Abstract：

Objective To compare the difference of protein expression in the supernatant of heat injured keratinocytes ( KC) and normal KC. Methods A model of heat injured KC was produced in vitro. The supernatant of normal KC and heat injured KC was collected after culture for 12 hours, and was ultrafiltered and lyophilized to get the protein. The protein sample was separated by immobilized pH gradient based two dimensional gel electrophoresis (2-DE). The gel was stained and the different expression of protein was analyzed using ImageMaster 2D analysis software. Results ①Average protein spots were 1 898 ±113, 1 877 ±97 in the supernatant of normal and heat injured KC and 1118 protein spots could be used for statistical analysis. ②Statistical result showed that 26 protein spots were significantly different between the two groups. 16 protein spots were higher in the supernatant of normal KC and then 10 protein spots were lower in the normal group. @16 protein spots, which included 10 kinds of proteins, were identified successfully as different spots. Lower expression proteins were alpha-enolase, actin cytoplasmic2, peroxiredoxin-4, phosphoglycerate mutase 1, G protein-regulated inducer of neurite outgrowth 1 in the supernatant of heat injured KC. Higher expression proteins in heat KC were purine nucleoside phosphorylase, tumor necrosis factor ligand superfamily memberl0, proteasome subunit alpha type-7, UDP-glucose 6-dehydrogenase in the supernatant of heat injuryed KC. Conclusions The result indicated that there are some significant different expression proteins in the supernatant of normal KC and heat injured KC.These findings provide new data for screening major molecules of tissue repair and finding the mechanism of wound repair.     

组织工程皮肤的应用研究

目前，人们对人工活性皮肤替代物（细胞工程或组织工程人工皮肤）的研究已进行了约半个世纪。将表皮细胞培养于经辐照的鼠成纤维细胞（Fb）滋养层，是组织工程皮肤治疗大面积烧伤的里程碑。由于培养基的改良与商品化，促使角质形成细胞的无血清层和无滋养层培养成功，结合早期切痂和应用临时皮肤覆盖物，     

角质干细胞及其在皮肤组织工程中的应用前景

表皮是一种持续更新的组织，其更新过程始于基底层的角质干细胞的增殖与定向分化。在向上迁移的过程中，经历程序化的终末分化，最后成为死亡的角化扁平细胞从皮肤表面脱落。在正常稳定状态下，干细胞的增殖与表层细胞的丢失保持着精确的平衡^[1]。角质干细胞有两个重要特征：一是在体内属于静止的或慢细胞周期的细胞；二是具有无限的增