丙泊酚调控miR-133a/SOX4表达对结直肠癌HCT116细胞增殖凋亡的影响

目的探讨丙泊酚对结直肠癌HCT116细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法以1、5和10μg/mL丙泊酚处理HCT116细胞后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞检测细胞凋亡,real-time PCR检测细胞中miR-133a的表达,Western blot检测细胞中SOX4蛋白的表达。采用双荧光素酶基因报告实验检测miR-133a与SOX4的靶向关系。将HCT116细胞分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+anti-NC组和丙泊酚+anti-miR-133a组,采用脂质体法将miR-133a inhibitor转染至HCT116细胞后,观察miR-133a低表达对10μg/mL丙泊酚作用下HCT116细胞增殖、凋亡和SOX4蛋白表达的影响。结果丙泊酚呈浓度-时间依赖性抑制HCT116细胞增殖,丙泊酚显著促进HCT116细胞凋亡和miR-133a表达并抑制SOX4蛋白的表达,且表现为浓度依赖性。双荧光素酶基因报告实验证实SOX4是miR-133a的靶基因。与对照组相比,丙泊酚组、丙泊酚+anti-miR-NC组和丙泊酚+anti-miR-133a组细胞中miR-133a表达显著升高,而SOX4蛋白的表达水平显著降低,细胞增殖能力显著受到抑制,而细胞凋亡显著增强,差异均有统计学意义(P<0.05);与丙泊酚组相比,丙泊酚+anti-miR-133a组中miR-133a表达水平显著降低,而SOX4蛋白的表达水平显著升高,细胞的增殖能力显著增强,而细胞凋亡能力显著减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);而丙泊酚+anti-miR-NC组细胞中miR-133a和SOX4蛋白的表达以及细胞的增殖和凋亡能力均无显著改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚可通过调控miR-133a/SOX4表达抑制HCT116细胞增殖并促进细胞凋亡。     

c-Fos对结直肠癌细胞HCT-116影响

目的 探讨AP-1转录因子组成成分之一c-Fos对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 将合成的siRNA转染入HCT-116细胞中,实时定量PCR法检测其中c-Fos的含量;利用四甲基偶氮唑盐（MTT）显色法检测c-Fos被敲低后对细胞生长增殖的影响;Etoposide诱导细胞凋亡,溴化丙啶（PI）染色、流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。结果 siRNA转染结直肠癌细胞HCT-116 48 h后,与对照组相比,c-Fos的含量降低约50%;MTT实验中RNAi组细胞增殖速度时间增加,加入etoposide（100 μmol/L）12 h后,对照组细胞凋亡率为（27.6±2.07）%,RNAi组细胞的凋亡率为（39.1±4.84）%,凋亡率降低。结论 c-Fos在HCT-116细胞中发挥着促进细胞生长和抑制凋亡的作用。     

S100A6siRNA对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的探讨S100A6蛋白表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法以卵巢癌细胞A2780为研究对象,利用RNA干扰技术特异性降低S100A6表达水平后,分别用实时定量PCR和Western blot检测S100A6 siRNA对S100A6表达水平的抑制效率。用流式细胞术检测S100A6 siRNA转染前后A2780细胞的细胞周期变化,用Transwell试验观察S100A6siRNA转染前后侵袭能力的变化,用MTT法检测S100A6 siRNA对A2780细胞顺铂敏感性的影响。结果S100A6siRNA转染组细胞中S100A6 mRNA和蛋白表达水平与S100A6 siRNA呈浓度、时间依赖性明显下调,抑制效率可达63．75％～80．68％。在与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,S100A6 siRNA出现了G0／G1期比例升高,S期比例降低,差异有统计学意义（X^2=6．211,P=0．045）。Transwell试验表明,6．25、12．5nmol／LS100A6 siRNA分别转染48h后,A2780细胞芽膜细胞数目分别为78±7．51和27±8．24,与阴性对照组（91±5．78）相比,穿膜细胞显著减少,差异有统计学意义（X^2=3．898,P=0.048）。MTT法测定S100A6 siRNA转染后A2780细胞对顺铂敏感性的影响结果显示,S100A6 siRNA引起顺铂对A2780细胞的抑制率增加（X^2=9．609,P=0．022）,而空白对照组和阴性对照siRNA组之间无明显差异。对顺铂半数致死剂量（IC50）的计算结果显示,分别转染6．25、12．5nmol／LS100A6 siRNA的A2780细胞对顺铂IC50值分别为13．42μmol／L和11．32μmoL／L,与空白对照组和阴性对照siRNA组相比均显著降低,差异有统计学意义（X^2=5．566,P=0．018）。结论S100A6 siRNA转染卵巢癌A2780细胞后,引起A2780细胞GO／G1期阻滞,侵袭能力降低,同时对顺铂的敏感性有所增强,可能是卵巢癌靶向治疗的候选基因。     

miR-5787通过靶向HSPG2基因对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响

目的:观察微小RNA(miR)-5787在乳腺癌组织及多种乳腺癌细胞系中的表达,分析过表达miR-5787对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-5787在47例乳腺癌组织及癌旁组织、4种乳腺癌细胞系及正常乳腺上皮细胞中的表达。选择miR-5787表达...     

siRNA干扰△Np63基因表达对人宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡影响研究

目的 通过抑制宫颈癌细胞株Siha中△Np63的表达,探讨△Np63对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 将宫颈癌细胞株Siha分为实验组和对照组,实验组转染△Np63的特异性siRNA,对照组转染阴性对照siRNA.实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及蛋白质印迹法检测Siha细胞转染前后△Np63基因在mRNA及蛋白水平的变化;CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的mRNA表达为0.32±0.06,低于阴性对照组0.95±0.08(t=10.92,P＜0.05).实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的蛋白表达为0.32±0.09,低于阴性对照组1.00±0.06(t=9.78,P＜0.05).实验组Siha细胞生长速度明显低于阴性对照组,实验组Siha细胞凋亡率为2.13±0.75,低于阴性对照组14.19±1.36(t=15.36,P＜0.05).结论 人宫颈癌细胞株中存在△Np63的表达,特异性siRNA可下调宫颈癌细胞株Siha中△Np63基因的表达,对细胞的增殖具有负性调节作用,并能诱导细胞凋亡.     

siRNA沉默FOXF2基因对宫颈癌Hela细胞迁移与增殖的影响研究

目的 探究siRNA沉默FOXF2基因对宫颈癌Hela细胞迁移与增殖的影响研究。方法 在该院于2018年1月-2018年12月检测siRNA沉默FOXF2,选择Western Blot、Real Time-PCR法,之后Hela细胞中蛋白表达、FOXF2基因mRNA的变化。siRNA沉默FOXF2后细胞增殖,选择CCK8检测;siRNA沉默FOXF2后细胞迁移选择划痕试验检测。结果 多重对比各组,选择Dunnett T3,结果显示:3条siRNA链沉默FOXF2后,相较于Hela细胞SNC组合Hela细胞,siRNA-FOXF2 mRNA显著降低(65%~85%),对比差异有统计学意义(P<0.05);相较于Hela细胞SNC组及Hela细胞组,Hela细胞FOXF2蛋白表达水平出现显著降低;在siRNA沉默FOXF2基因后,经细胞划痕试验显示,相较于Hela细胞SNC组及Hela细胞组,Hela细胞的迁移能力显著较高;较Hela细胞SNC组及Hela细胞组,siRNA-FOXF21415组增殖率显著较高,对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 宫颈癌患者针对其Hela细胞的迁移与增殖能力,选择SiRNA沉默FOXF2基因有极大的促进作用,具有临床应用价值。     

SiRNA干扰靶向抑制酪氨酸蛋白激酶Lck对哮喘小鼠T细胞功能的影响

目的通过siRNA技术靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达,研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠T细胞功能的影响。方法化学法合成小鼠T细胞Lck基因21—23bp的RNA片段,以INTERFERinTMsiRNA Transfection Reagent作为转染试剂,将合成的siRNA片段转染哮喘小鼠脾脏来源的T细胞,作用48h后再与哮喘小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC）混合反应48h,收集细胞上清液,ELISA法检测细胞因子IL4、IL-13、IL-2、INF-1;Western Blot法检测T细胞Lck蛋白的含量,判断其表达是否被沉默。结果siRNA干扰组T细胞中几乎检测不到Lck蛋白的表达,且其细胞上清液中IL-4、IL-13的水平（10．19±1．66、12．34±0．79）较非siRNA干扰组（28．06±2．88、27．87±1．61）及对照组（22．07±2．51、20．47±2．37）明显下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论特定的21—23bp的RNA片段能够以siRNA干扰的方式有效的抑制特定基因的表达,Lck特异性siRNA可以阻断哮喘小鼠T细胞的激活和分化,减少哮喘炎症因子的释放。     

RNA干扰对卵巢癌细胞mTOR表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人卵巢癌细胞SKOV3中mTOR的表达及对细胞增殖与凋亡的影响。方法:培养SKOV3细胞系,设计合成mTOR siRNA实验分4组:正常培养组:未转染的正常培养SKOV3细胞;空白对照组:转染空脂质体的SKOV3细胞;转染组:转染mTOR siRNA的SKOV3细胞;无义对照组:转染无义siRNA的SKOV3细胞。采用Western blot法检测各组细胞中的mTOR蛋白表达水平;应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:mTOR siRNA转染组SK-OV3细胞mTOR蛋白的表达显著低于各对照组(P<0.05);mTOR siRNA转染组SKOV3细胞增殖低于各对照组(P<0.05);mTOR siRNA转染组细胞凋亡率高于各对照组(P<0.05)。结论:mTOR siRNA对SKOV3细胞中mTOR蛋白的表达有明显的抑制作用,特异性阻断mTOR基因表达可显著抑制SKOV3细胞的增殖并促进其凋亡。     

亚硒酸钠介导人结肠癌HCT116细胞死亡的机制研究

目的 探讨亚硒酸钠杀伤结肠癌肿瘤细胞的潜在机制.方法 应用MTS方法和DCFH-DA法分别检测亚硒酸钠对人结肠癌细胞系HCT116存活率和细胞内活性氧水平的影响,同时应用小分子干扰RNA片段研究JNK1和p53在亚硒酸钠介导的细胞死亡过程中的作用.结果 实验结果表明亚硒酸钠通过显著提高HCT116细胞内的活性氧水平,致使细胞发生氧化应激,激活应激相关蛋白JNK1和p53,从而达到杀伤肿瘤细胞的作用.结论 亚硒酸钠能有效杀伤结肠癌肿瘤细胞,同时JNK1和p53在亚硒酸钠介导的细胞死亡过程中发挥了重要作用.     

Deoxycholic acid can induce apoptosis in the human colon cancer cell line HCT116 in the absence of Bax

In the human colon cancer cells HCT116, deoxycholic acid (DCA) induces apoptosis via the mitochondrial pathway by triggering the release of mitochondrial factors such as cytochrome c. To elucidate if Bax, a proapoptotic member of the Bcl-2 family known to trigger cytochrome c release in response to various types of apoptotic stimuli, is involved in DCA-induced apoptosis in HCT116 cells, we analyzed DCA-induced apoptosis in Bax-knockout (Bax(-/-)) HCT116 cells. Cytochrome c release and caspase-9 activation were detectable after 5 min in both Bax(-/-) and Bax(+/-) HCT116 cells. Caspase-3 and caspase-8 activation was observed after 15 and 30 min, respectively. Bax(-/-) cells were protected from apoptosis by treating them with ursodeoxycholic acid for 12 h prior to DCA treatment. These results are consistent with our previous observations that were obtained by using wild-type HCT116 cells and suggest that Bax is not indispensable for DCA-induced apoptosis in HCT116 cells.     

降低胃癌细胞硫氧还蛋白5基因表达影响增殖及浸润的研究

目的探讨降低硫氧还蛋白5(EndoPDI)基因表达对于胃癌细胞增殖状态、细胞周期、凋亡等生物学特性及浸润转移能力的影响。方法 EndoPDI基因特异的核糖核酸干扰(RNAi)载体通过脂质体介导法转染人胃癌细胞系细胞(MKN45),筛选获得稳定转染的细胞系,经过免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及蛋白免疫印记(Western-blot)法证实。使用生长曲线法、平板克隆形成实验、细胞迁徙实验等方法分析稳定转染株相关生物学特性的变化,每种检测实验均设立RNAi载体转染细胞组、点突变对照组和空白MKN45细胞组。结果稳定转染的EndoPDI RNAi细胞系经过免疫细胞化学法、RT-PCR法及Western blot法证实,表达抑制率可达70%左右。与对照组细胞相比,EndoPDI RNAi组细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组(P0.05);流式细胞仪检测细胞周期显示,S期比例显著低于对照组,G0-G1期比例显著高于对照组(P0.05)。平板克隆形成实验结果显示,EndoPDI RNA i组克隆形成率显著低于对照组(P0.05);细胞迁徙实验结果提示,EndoPDI RNA i组穿膜率显著低于对照组(P0.05)。结论 EndoPDI基因可能具有促进细胞生长增殖作用,降低EndoPDI表达可减少处于分裂周期细胞比例、提高凋亡比例,降低EndoPDI基因表达可能对胃癌细胞的恶性生物学行为有抑制作用。     

普伐他汀对人肝癌细胞株HepG2增殖及侵袭能力影响的初步研究

目的 观察普伐他汀(Pra)抑制肝癌细胞株HepG2增殖及侵袭、运动的作用及机制.方法 培养HepG2细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度Pra对HepG2细胞增殖的抑制效应,并与对照组作比较.以Matrigel侵袭实验和迁移实验检测Pra对HepG2细胞的侵袭、运动能力的影响;p38活性试剂盒测定p38活性;Western印迹法测定磷酸化p38(p-p38)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MKP-1)、RhoC及基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达.结果 MTT比色法及Matrigel侵袭和迁移实验显示,Pra明显抑制HepG2细胞增殖及侵袭、运动能力;Pra可抑制p38活性,并抑制p-p38、RhoC及MMP-2表达,同时上调MKP-1表达.以0.01 g/LPra组为例,其抑制HepG2细胞增殖率为(89.51±9.55)%,对照组为100.00%(F=19.76,P＜0.05);对p38活性的影响:0.01g/L Pra组为p38活性为(87.45±8.22)%,对照组为100.00%(F=22.29,P＜0.05).结论 Pra通过抑制p38活性及p-p38表达、提高MKP-1表达,抑制肝癌HepG2细胞株增殖,并通过下调RhoC及MMP-2表达,抑制其侵袭、运动能力.     

盐亭食管癌高发区饮食对人食管癌细胞增殖的影响

目的采用血清生理学方法,观察盐亭食管癌高发区饮食喂饲大鼠血清对人食管癌细胞Eca-109生长增殖的影响。方法将24只雄性SD大鼠分为3组,分别喂饲大鼠常规饲料、健康成人饮食及盐亭饮食7天,每天定时记录采食量及体重。用MTT法探讨用大鼠血清培养人食管癌细胞的适宜条件;分别以人正常肝上皮细胞HL7702及10%灭活小牛血清作为对照,采用细胞生长曲线、细胞群体倍增时间、3H-TDR掺入实验研究盐亭饮食喂饲大鼠血清对人食管癌细胞生长增殖的影响。结果喂饲健康成人饮食与常规饲料的大鼠其采食量及体重无差异;用5%未灭活大鼠血清取代10%灭活小牛血清适合人食管癌细胞培养;盐亭食管癌高发区饮食喂饲大鼠血清可明显促进人食管癌细胞生长,却不利于人正常肝上皮细胞生长,且与其他3个组均有统计学差异(P<0.05)。结论盐亭食管癌高发区饮食具有促进人食管癌细胞Eca-109生长增殖的作用。     

瘦素对结肠癌HT-29细胞增殖及c—myc基因表达的影响

目的观察瘦素（Leptin）对结肠癌HT-29细胞的数量及c—myc mRNA表达水平的影响;探讨瘦素时．HT-29细胞增殖的作用及相关机制。方法体外分组培养的HT,29细胞分别加入不同浓度的瘦素作用72h后,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞生长情况;逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）检测各组细胞e—myc mRNA表达情况。结果经不同浓度的瘦素作用后,结肠癌HT-29细胞增殖水平及c—myc mRNA表达水平较对照组均有明显提高,在一定范围内呈现浓度依赖性。结论瘦素不但能够促进结肠癌HT-29细胞的增殖,还可提高HT-29细胞c—myc基因的表达水平。瘦素提高c—mye基因表达水平的作用可能是其促癌机制之一。     

RNA沉默Slug基因对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及血管生成的影响

目的:研究Slug-shRNA-1干扰Slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果:siRNA-Slug作用于Slug基因后能明显降低MCF-7穿透Matrigel的能力(P<0.05),抑制MCF-7诱导HUVEC形成管腔样结构的能力(P<0.05)。结论:Slug-shRNA-1作用于Slug基因后能明显降低MCF-7的侵袭潜力,抑制MCF-7诱导管腔形成能力。     

Differential inhibition of human cancer cell proliferation by citrus limonoids

Limonoids have been shown to inhibit the growth of estrogen receptor-negative and -positive human breast cancer cells in culture. The primary objective of this study was to test the antiproliferative activity of limonoids (obacunone 17 beta-D-glucopyranoside, nomilinic acid 17 beta-D-glucopyranoside, limonin, nomilin, and a limonoid glucoside mixture), found in high concentrations in mandarin (Citrus reticulata Blanco), against a series of human cancer cell lines. The human cancer cell lines included leukemia (HL-60), ovary (SKOV-3), cervix (HeLa), stomach (NCI-SNU-1), liver (Hep G2), and breast (MCF-7). The growth-inhibitory effects of the four limonoids and the limonoid glucoside mixture against MCF-7 cells were significant, and the antiproliferative activity of the different citrus limonoids was also dose and time dependent. No significant effects were observed on growth of the other cancer cell lines treated with the four individual limonoids at 100 micrograms/ml. At 100 micrograms/ml, the limonoid glucoside mixture demonstrated a partial inhibitory effect on SKOV-3 cancer cells. With use of flow cytometry, it was found that all the limonoid samples could induce apoptosis in MCF-7 cells at relatively high concentrations (100 micrograms/ml). Considering the high concentration needed to induce apoptosis, it is unlikely that this is the primary mechanism of action for the cytotoxic effects seen with limonoids in this study. Further work is needed in this area to establish the mechanism of action of citrus limonoids on human breast cancer cells.