野西瓜正丁醇萃取物对HepG2细胞线粒体膜电位和［Ca2+］i的影响

目的 研究野西瓜正丁醇萃取物诱导人肝癌细胞 HepG2 细胞凋亡的机制,观察其对 HepG2 线粒体膜电位和细胞内 Ca²⁺ 浓度［Ca²⁺］_i 的影响。方法 经流式细胞仪观察野西瓜正丁醇萃取物对线粒体膜电位的影响;激光共聚焦显微镜检测野西瓜正丁醇萃取物作用前后,HepG2 细胞［Ca²⁺］_i 的变化。结果 野西瓜正丁醇萃取物可不同程度降低 HepG2 细胞线粒体跨膜电位,此外,中、高剂量的野西瓜正丁醇萃取物还可以显著升高［Ca²⁺］_i,造成钙稳态平衡。结论 野西瓜正丁醇萃取物降低线粒体膜电位,开放 MPTP 孔道,造成细胞内 Ca²⁺ 超载,诱导 HepG2 细胞凋亡。     

Ca2+和SA对高温胁迫下桔梗抗逆及光合生理指标影响研究

通过分析不同浓度Ca²⁺与SA对高温胁迫下对桔梗抗逆生理指标及相关光合参数的影响,了解Ca²⁺,SA对桔梗高温胁迫伤害调控的相关性,为缓解桔梗高温胁迫提供依据。该实验以盆栽桔梗为材料,叶面喷施不同浓度CaCl₂,SA溶液,然后置于 35 ℃/25 ℃(昼/夜),光照3 600 lx 的光照培养箱内,进行高温胁迫处理,以常温25 ℃喷施蒸馏水和高温胁迫下喷施蒸馏水处理为对照,测定桔梗叶片相关光合参数,膜透性,脯氨酸,丙二醛,可溶性蛋白,ASA,GSH含量,以及SOD,CAT活性。结果表明,6 mmol·L^-1 CaCl₂,1.5 mmol·L^-1 SA可显著增强桔梗叶片SOD,CAT酶活性,提高叶片游离脯氨酸及可溶性蛋白含量,有效减少高温胁迫对细胞膜的破坏,显著降低相对电导率,同时,处理提高了叶片中叶绿素与类胡萝卜素含量,提高了叶片光合效率,有效增加ASA,GSH的含量,从而抵御高温造成的氧化胁迫,但随着浓度的增大,桔梗叶面抵御高温胁迫的能力则会下降。喷施一定浓度CaCl₂,SA溶液可减轻高温胁迫对桔梗叶片的伤害。     

羊栖菜多糖对SGC-7901人胃癌细胞内[Ca2+]i的影响

[目的]观察羊栖菜多糖对人胃癌细胞内Ca^2 含量的变化，揭示其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。[方法]采用Fluo-3／AM探针标记，激光共聚焦技术观测细胞内[Ca^2 ]i。[结果]SFPS可使SGC-7901细胞内[Ca^2 ]i先升高然后下降，给CaCl2后，[Ca^2 ]i又升高。[结论]SFPS诱导肿瘤细胞凋亡是通过升高SGC-7901细胞内[Ca^2 ]i而达到的，[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞内钙库释放。     

葛根素对氧糖剥夺大鼠海马神经细胞Ca2+和NO的影响

 目的研究葛根素(puerarin,Pur)对缺氧缺糖状态下海马神经细胞内Ca²⁺和NO水平的影响。方法选用新生大鼠体外培养8 d的海马神经细胞,进行3 h的氧糖剥夺(oxygen/glucose deprivation,OGD)或30 min的L-谷氨酸(0.5mmol·L^-1)处理后再正常培养24 h,Pur处理组在OGD或谷氨酸处理的同时和以后24 h给予不同剂量(40,100μmol·L^-1)Pur,Annexin V联合流式细胞仪检测细胞的凋亡率和坏死率;以Fluo-3或DAF-2为荧光标记,用激光共聚焦显微镜观测30 min的OGD过程中海马神经细胞Ca²⁺和NO的动态变化以及Pur的影响。结果OGD诱导海马神经细胞Ca²⁺和NO水平快速升高,其最高值分别达正常对照组的2.9和1.9倍;Pur明显减缓OGD期间神经细胞Ca²⁺内流和NO合成,与OGD组相比,40和100μmol·L^-1的Pur分别使细胞Ca²⁺峰值降低29.2%和37.1%(P<0.05和P<0.01),NO峰值降低23%和33%(P<0.05和P<0.01),显著抑制细胞内Ca²⁺和NO水平的升高;同时Pur可有效抑制OGD和谷氨酸引起的神经细胞死亡。结论Pur可通过抑制神经细胞谷氨酸/Ca²⁺/NO通路的活动而有效保护缺氧缺糖对神经细胞的损伤作用。     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞胞浆游离Ca2+浓度的影响

 目的:探讨灵芝多糖(GLP)对免疫细胞信号转导过程的影响?方法:采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术,动态监测GLP均一体组分GLB₇对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)胞浆游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]i)的影响?结果:GLB₇(20μg·ml^-1)引起小鼠腹腔MΦ中[Ca²⁺]i明显升高,升高值为(248±18)%(n=6);GLB₇引起小鼠腹腔MΦ外钙内流及MΦ内IP₃敏感和IP₃非敏感钙池释放Ca²⁺,[Ca²⁺]i升高值分别为(76±10)%,(58±10)%,(41±8)%(n=6);GLB₇对MΦ[Ca²⁺]i的影响与K⁺通道及其引起的膜电位变化无关?结论:MΦ是灵芝多糖作用的靶细胞;GLB₇引起MΦ中[Ca²⁺]i快速升高,可能是灵芝多糖产生作用的重要途径?     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的线粒体通路研究

 目的观察龙葵碱诱导HepG₂细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG₂细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG₂细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca²⁺]_i的变化。结果龙葵碱对HepG₂细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG₂细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca²⁺]_i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca²⁺顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca²⁺浓度启动细胞凋亡机制。     

龙葵碱对雄性小鼠睾丸支持细胞毒性的初步研究

目的 初步探讨龙葵碱对睾丸支持细胞的毒性。方法 原代培养睾丸支持细胞,MTT 法检测不同浓度龙葵碱对于支持细胞的毒性作用;激光共聚焦显微镜观察细胞内线粒体膜电位的变化以及［Ca²⁺］_i 的改变。结果 龙葵碱作用于睾丸支持细胞 72 h 的 IC₅₀ 为 22.29 μmol/L。随着剂量的增大,细胞内线粒体膜电位降低,［Ca²⁺］_i 升高。结论 龙葵碱通过损伤小鼠睾丸支持细胞线粒体,升高细胞 ［Ca²⁺］_i,从而对睾丸支持细胞产生毒性作用。     

维拉帕米对心肌及红细胞Ca2+-ATPase的不同作用

 本文研究了维拉帕米对心肌及红细胞Ca²⁺-ATPase的作用。将40只家兔随机分为2组，分别给予维拉帕米（0.5mg/kg）和等量20%GS静脉注射，结果发现：维拉帕米可使兔心肌Ca²⁺-ATPase活力升高，使红细胞Ca²⁺-ATPase的活力明显下降。     

旋覆代赭汤对RE模型大鼠食管黏膜Na+-K+-ATP酶及 Ca2+-Mg2+-ATP酶的影响

目的: 观察旋覆代赭汤对反流性食管炎(RE)模型大鼠食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的影响,探讨RE食管黏膜细胞能量代谢障碍与黏膜损伤的关系以及旋覆代赭汤治疗RE的作用机制。方法: 将96只雄性Wistar大鼠随机分成6组,即假手术组、模型组、旋覆代赭汤组高、中、低剂量组(24,12,6 g·kg^-1)及西药对照组(奥美拉唑10 mg·kg^-1+2 mg·kg^-1莫沙必利),每组16只。采用"食管-十二指肠端侧吻合术"制备胃及十二指肠液混合RE模型。从术后第3天开始,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,药物治疗组分别给予旋覆代赭汤高、中、低剂量、西药(奥美拉唑10 mg·kg^-1+莫沙必利2 mg·kg^-1)灌胃,连续7天,记录大鼠体重变化及死亡情况,于第8天处死大鼠留取标本,观察食管下段黏膜大体及病理组织学变化;化学法检测食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性。结果: 与假手术组比,模型组大鼠体重明显减轻(P<0.05),食管黏膜肉眼及镜下病理改变明显,评分增高(P<0.05);食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.05);与模型组及西药组比,旋覆代赭汤高、中剂量组大鼠死亡率明显降低(P<0.05):与模型组比,旋覆代赭汤高、中剂量组、西药组肉眼及病理评分显著降低(P<0.05);食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性明显提高(P<0.05)。结论: 旋覆代赭汤能明显提高RE大鼠食管黏膜细胞膜Na⁺-K⁺-ATP 酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性, 从而保持食管黏膜细胞完整性,减轻黏膜损伤。     

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg2+-ATPase,Ca2+-ATPase抑制作用的动力学研究

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg²⁺-ATPase,Ca²⁺-ATPase有显著的抑制作用,对Mg²⁺-ATPase的抑制机制分别为竞争性抑制(Mg²⁺,Ki=4.93×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=1.06×10^-4mol/L),对Ca²⁺-ATPase的抑制机制分别为混合型抑制(Ca²⁺,Ki=5.07×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=3.27×10-4mol/L)。     

羊栖菜多糖对软脂酸诱导的HL-7702细胞凋亡的保护作用

目的:探讨羊栖菜多糖(SFPS)对软脂酸诱导的肝细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法:SFPS不同浓度(25、50、100μg/mL)预处理24h后,0.5mmol/L软脂酸(PA)作用48h诱导正常人肝细胞株(HL-7702)凋亡。MTT比色法检测SFPS对细胞增殖的影响;Annexin V-FITC标记法检测细胞的凋亡;RT-PCR法检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达并计算其比值(Bcl-2/Bax)。结果:0.5mmol/L PA处理48h的HL-7702细胞存活率下降为正常对照组的64.9%,细胞凋亡率为35.1%,Bax表达上升,Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值明显下降(均P<0.05);与模型组相比,SFPS不同浓度(25、50、100 ug/ml)预处理后细胞存活率逐渐升高,细胞凋亡率显著降低,Bax表达逐渐下降,Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值逐渐上升(均P<0.05)。结论:SFPS对PA诱导的肝细胞凋亡有较好的保护作用,其作用机制可能与调节Bcl-2、Bax基因的表达有关。     

参麦注射液对慢性再生障碍性贫血患者血清肿瘤坏死因子及骨髓CD34+细胞凋亡的影响

目的:探讨参麦注射液治疗慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)的疗效及其作用机制。方法:将65例CAA患者随机分为治疗组和对照组,治疗组采用参麦注射液配合西药常规治疗,对照组单用西药治疗,治疗后进行疗效评价,并分别于治疗前后检测患者血清肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)水平,以及采用免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化骨髓CD₃₄⁺细胞,用DNA末端原位标记(TUNEL)技术分析骨髓CD₃₄⁺细胞原位凋亡状况。结果:治疗组总有效率为63.6%,对照组总有效率为40.6%,治疗组疗效明显优于对照组(P<0.01);治疗前,CAA患者血清TNF-α浓度、骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡率均明显高于健康对照组(P<0.01),治疗后,治疗组血清TNF-α浓度明显降低(P<0.01),骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡率减低(P<0.05),与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。结论:参麦注射液治疗CAA疗效确切,其机制可能为降低CAA患者血清TNE-α浓度,减少骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡。     

肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca2+变化及TRPA1和TRPM8 mRNA表达的影响

目的:观察肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca~(2+)浓度变化,并探讨其对瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和M8(TRPM8)mRNA表达的影响。方法:取大鼠原代背根节神经细胞置于0℃冷应激状态,噻唑蓝(MTT)法检测不同时长冷应激状态下细胞的活性;加入肉桂醛,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内外Ca~(2+)分布的变化;另以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测其TRPA1,TRPM8 mRNA的表达。结果:不同时长的冷应激状态下,细胞存活度无明显差异;冷应激可降低背根神经节(DRG)神经细胞胞浆内Ca~(2+)浓度(P0.05),一定量的肉桂醛则能使Ca~(2+)浓度显著升高(P0.01)。Real-time PCR检测显示,长时间冷应激TRPA1 mRNA表达上调(P0.05);长时间冷应激TRPM8 mRNA表达明显要高于短时冷应激(P0.05);适当浓度的肉桂醛使冷应激大鼠DRG神经细胞TRPA1 mRNA表达升高(P0.05,P0.01),对TRPM8 mRNA的影响尚不明显。结论:冷应激能影响TRPA1,TRPM8 mRNA的表达,降低胞浆内Ca~(2+)浓度,作用机制可能为肉桂醛通过活化TRPA1通道,升高细胞浆内Ca~(2+)浓度。     

三七皂苷R1对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护机制. 方法: MTT法检测细胞存活率;PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中Bax,Bcl-2的表达;ELISA法检测caspase-3,caspase-8及caspase-9的酶活性. 结果: 6.25,12.5,25,50,100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡均有一定保护作用,并呈剂量依赖关系;PI/Annexin V双染流式细胞术检测结果表明Aβ_1-42可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可显著降低细胞凋亡率.Western blot结果显示,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;ELISA分析显示不同剂量的三七皂苷R₁可抑制Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞caspase-3和caspase-9的激活,但对caspase-8的激活没有影响. 结论: 三七皂苷R₁通过抑制线粒体相关的凋亡通路激活,减少Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡.     

四君子汤(生晒参/红参)对H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用研究

该研究首先筛选了四君子汤(红参)等药液组体外干预H9c2心肌细胞的给药浓度,优选其中高、中、低3个剂量组进行后续实验;建立了体外H₂O₂诱导H9c2心肌细胞凋亡模型以考察四君子汤(生晒参/红参)对其保护作用,从而为优选用于临床治疗缺血性心脏病的四君子汤中的人参炮制品提供参考,以更好地体现其疗效;并考察其对SOD,MAD和LDH等指标影响以初步阐明作用机制。结果表明,四君子汤中用红参较生晒参对H₂O₂诱导心肌细胞损伤保护作用为好,二者均可提高SOD活性,减少MDA产生和LDH释放,从而明显减少心肌细胞凋亡数量,起到一定的保护作用。     

基于Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca2+载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用

目的 探讨小陷胸汤对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响，并探讨其可能的机制。方法 通过CB-DOCK在线平台（http： //clab. labshare. cn /cb-dock /）预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子（NFAT）分子对接。使用质量浓度为10 μg·L^-1的TGF-β₁建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组（0.1、0.2、0.4 g·L^-1），为进一步探讨Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用，将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞，分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤（0.4 g·L^-1）组和Wnt5a-OE+小陷胸汤（0.4 g·L^-1）组。分别使用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指蛋白（Snail）、Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p）-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca²⁺浓度变化。结果 分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路。与模型组比较，小陷胸汤（0.1、0.2、0.4 g·L^-1）能明显促进MGC-803细胞活力的丧失，可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞，并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合，并促进E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达（P<0.05，P<0.01）。进一步实验表明，与模型组比较，小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca²⁺浓度，且可逆转Wnt5a的作用（P<0.05，P<0.01）。结论 小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化（EMT），从而减弱TGF-β₁诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。     

人参多糖介导Wnt/β-catenin信号转导诱导人鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡

目的: 观察人参多糖(ginseng polysaccharide, GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖和凋亡的影响以及可能的机制探讨. 方法: CCK8法观察人参多糖对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响.取对数生长期的CNE-2细胞,用不同质量浓度人参多糖(GPS)0,0.1,0.2,0.3,0.4 g·L^-1分别作用48 h后,流式细胞术检测其对CNE-2细胞凋亡的诱导作用;Hoechst-33258染色和电镜观察细胞的形态改变.Real-time PCR检测细胞β-catenin mRNA的表达.采用免疫荧光染色检测细胞中β-catenin,TCF4蛋白定位及表达量的变化.Western blot检测细胞中β-catenin,Bcl-2,Bax蛋白的变化. 结果: CCK8法测得人参多糖能明显抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈剂量、时间依赖性,GPS处理细胞48 h的IC₅₀为0.39 g·L^-1;质量浓度分别为0.1,0.2,0.3,0.4 g·L^-1的GPS作用人鼻咽癌CNE-2细胞48 h后细胞凋亡率分别为(5.69±0.29)%,(10.3±0.63)%,(15.4±0.74)%,(35.7±1.86)%,与对照组(2.08±0.11)%比较均有显著性差异(P<0.05);Hoechst-33258染色结果显示细胞凋亡特征.电镜下可见0.4 g·L^-1GPS诱导48 h后可使CNE-2细胞出现凋亡小体.Real-time PCR显示β-catenin mRNA表达明显降低.激光共聚焦结果显示人参多糖作用48 h后β-catenin和TCF4在胞核中表达明显减少,β-catenin表达区域由胞核向胞膜转移.Western blot结果显示经浓度梯度增加的人参多糖作用CNE-2细胞48 h后,β-catenin和抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;而促凋亡蛋白Bax表达上调(P<0.05). 结论: 人参多糖可明显抑制CNE-2细胞增殖促进细胞凋亡.Wnt/β-catenin信号通路的受阻可能是GPS诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的一个重要机制.     

定心方通过上调CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达对PM2.5所致动脉粥样硬化的影响

目的:观察定心方(DXR)在小鼠吸入PM2.5所致动脉粥样硬化(AS)过程中对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs)表达调控的影响。方法:50只载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠喂食高脂饲料并吸入严重污染的自然空气,随机分为5组,DXR低、中、高剂量组分别灌胃DXR 9.29,18.59,37.18 g·kg~(-1)·d~(-1);辛伐他汀组灌胃辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1);模型组灌胃等剂量生理盐水;10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料吸入过滤空气设为正常组。16周后检测小鼠血清脂质、酶联免疫吸附测定测定(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素~(-1)0(IL~(-1)0)及转化生长因子-β(TGF-β)水平;流式细胞法检测脾脏CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量;苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉AS斑块形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉AS斑块Foxp3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠主动脉AS斑块形成,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显升高,IL~(-1)0及TGF-β水平明显降低,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显减少,Foxp3蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,辛伐他汀组,DXR中、高剂量组小鼠AS斑块面积明显减小,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显降低,IL~(-1)0及TGF-β水平明显升高,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显增加,Foxp3蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:DXR可通过上调CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs表达发挥抗PM2.5所致AS功效。     

基于Wnt/Ca2+信号通路探究盘龙七片干预大鼠实验性膝骨关节炎疼痛的作用机制

目的 基于网络药理学整合体内验证方法探索盘龙七片对膝骨关节炎疼痛大鼠的干预作用及相关机制。方法 从疾病及药物相关数据库筛选盘龙七片药物作用靶点及膝骨关节炎疼痛相关靶点，根据拓扑特征值筛选关键靶标后，进行基因本体（gene ontology，GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析。采用改良Hulth法建立大鼠膝骨关节炎疼痛模型，设置假手术组、模型组、美洛昔康（1.5 g/kg）组和盘龙七片低、中、高剂量（0.15、0.30、0.60 g/kg）组，给予药物干预42 d，测量给药后大鼠机械痛阈值、冷痛觉超敏反应评分及双后肢负重差，并对网络药理预测结果进行体内实验验证。结果 共筛选出175个盘龙七片治疗膝骨关节炎疼痛的潜在核心靶点，生物学功能富集在调节神经细胞对各种刺激反应、炎症反应、细胞内信号传导及代谢反应4个过表达模块，其中Wnt/Ca²⁺途径核心靶标富集较为显著，也是在调节神经细胞对各种刺激反应生物学过程富集程度最高的通路。体内实验结果显示，盘龙七片可明显升高给药3～12 d及24～30 d膝骨关节炎大鼠机械痛阈值（P＜0.05、0.01、0.001），显著降低给药3～42 d时膝骨关节炎大鼠冷痛觉超敏反应评分与双后肢负重差（P＜0.05、0.01、0.001），抑制膝骨关节炎疼痛大鼠脊髓中无翅型MMTV整合位点家族成员5A（wingless type MMTV integration site family member 5A，WNT5A）、重组磷脂酶C（phospholipase C，PLC）、蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）蛋白表达及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1b）、前列腺素E₂（prostaglandin E₂，PGE₂）水平（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 盘龙七片对大鼠实验性膝骨关节炎急性发作期和慢性持续性的疼痛均有缓解作用，其机制可能与调节Wnt/Ca²⁺信号通路有关。     

EGCG和PC-B2 联合用药对AFB1 致肝细胞损伤的保护作用及其机制

目的:探讨多酚类植物化学物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与原花青素B2(PC-B2),对黄曲霉素B1(AFB1)起的肝细胞损伤保护作用及机制。方法:选用人胚肝细胞(L-02细胞)进行体外实验研究,实验分为6组,分别为空白组,溶剂对照组,AFB_1染毒组,AFB_1染毒+EGCG组,AFB_1染毒+PC-B_2组和AFB_1染毒+EGCG+PC-B_2组。采用MTT检测细胞存活度,通过单细胞凝胶电泳试验(SCGE)检测细胞DNA损伤,通过流式细胞法检测细胞凋亡,采用Western blot法检测凋亡信号通路相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9,p53蛋白表达的水平。结果:EGCG与PC-B_2均能降低AFB_1所致L-02细胞的生长抑制,使AFB_1对肝细胞的生长抑制率从61.12%降至42.18%和46.72%;EGCG与PC-B_2联用则效果更佳。SCGE实验结果表明EGCG与PC-B_2单用与联用均能减小AFB_1引起的L-02细胞DNA损伤(P0.05)。EGCG与PC-B_2单用与联用均能显著降低AFB_1所致L-02细胞的早期凋亡率(P0.05)。Western blot实验结果表明,AFB_1染毒后,EGCG和/或PC-B_2处理均能显著降低Caspase-3,Caspase-9的表达(P0.01),提高Bcl-2/Bax比值,而对p53表达影响不明显。结论:EGCG与PC-B_2通过降低L-02细胞DNA损伤与细胞凋亡率,从而降低AFB_1对人肝细胞的损伤作用,其作用机制可能与下调Caspase-3,Caspase-9的表达,升高Bcl-2/Bax有关。