MEBO联合微粒皮种植对糖尿病足创面组织中VEGF、EGF表达水平的影响

【摘要】 目的 探讨湿润烧伤膏 (MEBO) 联合微粒皮种植对糖尿病足创面组织中血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子 (EGF) 表达水平的影响。方法 给予2018年1月至2020年12月广州医科大学附属第五医院收治的38例Wagner 2 ~3级糖尿病足患者创面行MEBO联合微粒皮种植治疗,观察创面愈合情况,并对比治疗前与治疗第 7、14 天创面面积以及创面组织中VEGF、EGF含量。结果 治疗2个月后,33例患者创面完全愈合、5例患者创面明显缩小。治疗过程中,38例患者创面组织中VEGF及EGF含量均呈逐渐升高趋势,其中各时间点创面组织中VEGF含量对比差异均具有统计学意义 (q =10.310、23.280、12.970,P均<0.001); EGF含量除治疗前与治疗第7天对比,差异无统计学意义(q =1.797,P =0.945)外,其余各时间点对比,差异均具有统计学意义(q = 12.040、10.240,P 均 < 0.001)。Pearson相关系数分析结果显示,创面组织中VEGF、EGF含量与创面面积无明显相关性(r =0.181、0.205,P =0.833、0.094)。 结论 MEBO联合微粒皮种植促进糖尿病足创面愈合的机制可能与MEBO 能够上调创面组织中VEGF、EGF的表达水平有关。     

AGEs-RAGE信号通路与糖尿病难愈合创面

糖尿病难愈合创面是糖尿病比较严重的并发症和致残原因,故国内外学者对它的研究越来越多。创面愈合是炎性细胞、修复细胞及细胞因子等多种因素共同调控的复杂过程,其中晚期糖基化终末产物(Advanced Glycationend Products,AGEs)及其受体协同的AGEs-RAGE信号通路是目前研究的热点,本文就其进行概述。     

AGEs交联蛋白裂解剂的研究进展

葡萄糖和其他还原糖与蛋白的非酶糖基化反应导致晚期糖基化终产物(advanced glycosylation end products，AGEs)以及由AGEs引发的蛋白交联物的形成，这是糖尿病和衰老过程中引起并发症的主要原因。动物模型和临床前实验表明AGEs抑制剂以及AGEs交联结构裂解剂，如ALT-711，可以从不同的阶段打断AGEs的形成，特别是AGEs裂解剂能够逆转或软化由AGEs造成的组织、器官以及血管的硬化，因而有希望成为一类新型治疗药物，用于治疗糖尿病和衰老过程中由于AGEs引发的各种并发症。     

糖尿病大鼠表皮角质形成细胞生物学变化的机制研究

目的 通过体内、外2部分实验,研究糖尿病状态下表皮角质形成细胞(KCs )增殖能力的变化及其信号转导途径.方法 STZ(streptozotocin,链脲佐菌素)诱导正常SD大鼠,成模后8周(晚期糖尿病大鼠模型),荧光自显影技术检测皮肤组织中晚期糖基化终末产物(advanced glycation end-products,AGEs)的沉积;ELSA法检测表皮层中EGF(epidermal growth factor表皮生长因子)含量;提取大鼠KCs,用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)法测定细胞增殖速度;检测细胞周期;观察KCs核内NF-κB活性.分离培养正常SD大鼠KCs,加入不同浓度AGEs干预细胞,选择细胞反应敏感,差异显著的100mg/L AGEs干预组进行实验:测定细胞增殖速度;细胞对EGF的利用;检测KCs周期的变化,观察KCs核内NF-κB的活化状态.抑制NF-κB活性后观察细胞周期、细胞对EGF利用的变化.结果 晚期糖尿病大鼠KCs细胞周期循环阻滞,细胞的增殖能力受到了抑制;体外100mg/L AGEs可以明显抑制KCs的增殖.抑制NF-κB的活性后,部分恢复细胞的增殖能力.结论 AGEs可以通过NF-κB途径影响糖尿病大鼠表皮角质形成细胞的增殖能力.     

MEBO联合微粒皮种植术治愈1例糖尿病足截肢后残端创面

目的探讨糖尿病足创面的修复方法。方法对1例糖尿病足截肢患者截肢后的残端创面用湿润烧伤膏(MEBO)换药治疗30 d后,在肉芽组织中种植微粒皮修复创面。结果微粒皮种植术后65 d,患者截肢后残端创面完全愈合。结论 MEBO联合微粒皮种植术是一种全新的、技术要求简单、手术限制条件少,并且能降低截肢平面的治疗糖尿病足的方法。     

MEBO联合微粒皮种植术治愈糖尿病足截肢后残端创面1例

【】 目的 探讨MEBO联合微粒皮种植术治疗糖尿病足截肢后残端创面的临床效果。 方法 对1例糖尿病足截肢后的残端创面用湿润烧伤膏(MEBO)培养肉芽组织后,微粒皮种植术来修复创面。 结果 经过40余天的治疗,患者截肢后的残端创面完全愈合。结论MEBO联合微粒皮种植术修复糖尿病足创面效果可靠。     

自体点柱状微粒皮种植术的初步临床研究

目的观察自体点柱状微粒皮种植术治疗慢性难愈合创面的临床疗效。方法对延安大学附属医院烧伤整形手外科2015年9月至今收治的6例慢性难愈合创面患者清创后采用自体点柱状微粒皮种植术联合原位再生医疗技术治疗,观察治疗效果。结果6例患者慢性难愈合创面均于治疗2~6周后愈合,愈后皮肤平整、光滑,无瘢痕增生;6例患者供皮区创面均无瘢痕愈合,随访2个月,供皮区创面愈后皮肤与正常皮肤无差异。结论自体点柱状微粒皮种植术是一项创新型微粒皮种植技术,其联合原位再生医疗技术治疗慢性难愈合创面,操作简便、价格低廉、疗效显著,值得临床推广应用。     

晚期糖基化终产物的病理学作用及其信号传导机制

慢性肾功能衰竭（Chronic renal failure CRF）患者心血管并发症发生率较同龄正常人高10—20倍，且发病年龄提前，被称为“加速性动脉粥样硬化”。Miyata等在罹患动脉粥样硬化的CRF患者动脉血管壁中发现晚期糖基化终产物（advanced glycation end products AGE）沉积。AGE与细胞表面AGE受体相互作用产生多种效应，被认为参与了CRF患者远期并发症如心血管病变、动脉粥样硬化及透析相关性淀粉样变的发生和发展。作为一种“尿毒症毒素”，AGE越来越引起人们重视。AGE修饰蛋白作用于不同类型细胞或诱导不同生物学效应，其经由通路可能不同。对AGE及其介导众多病理生理作用进行深入研究，将有助于阐明AGE的致病作用。     

多技术联合治疗 Wagner 3～5 级糖尿病足疗效分析

【摘要】 目的 探讨多技术联合治疗Wagner 3～5 级糖尿病足的临床效果。方法 给予2018年7月至 2021年7月韶关市第一人民医院收治的 72 例糖尿病足患者在全身综合治疗的基础上联合应用创疡再生医疗技术 (MEBT/ MEBO)、负压封闭引流、微粒皮种植等技术治疗局部创面, 观察治疗效果。结果 72 例患者中除7例(9.72%）患者保足治疗失败行踝关节以上截肢手术外, 其余 65 例患者均顺利完成保足治疗, 创面完全愈合。结论 MEBT/MEBO、负压封闭引流、微粒皮种植等多技术联合能够有效促进 Wagner 3～5 级糖尿病足创面愈合, 提高治愈率, 降低截肢率, 最大限度保留患足功能。     

糖基化终末产物对人表皮角质形成细胞周期调控的影响机制

目的通过体外试验探讨糖基化终末产物（AGEs）对表皮角质形成细胞周期调控的影响机制。方法体外培养的人表皮角质形成细胞经AGEs（150mg／m1）作用后,用噻唑兰（MTT）法研究其增殖活力、流式细胞仪研究细胞周期和凋亡率。用小片断RNA干扰（siRNA）的方法阻断细胞中AGEs受体（receptor of AGEs,RAGE）mRNA的表达,realtime PCR鉴定其阻断效率。RT-PCR法检测RAGE阻断前后各组细胞内RAF-1、黏着斑激酶（FAK）、周期素（cyclin）D1、cyclinBl、周期表依赖性激酶4（CDK4）的核酸水平表达差异。结果经AGEs干预后表皮角质形成细胞增殖活性下降,凋亡率升高,细胞周期G2期的比例显著增高,而细胞周期调控相关因子及信号因子RAF．1、cyclinDl、cyelinBl、CDK4的核酸表达较对照组却明显升高,用RAGE阻断以上因子后表达则与对照组相比无差异。结论在上述体外模型下,表皮角质形成细胞的周期调控因子升高,而增殖却下降且凋亡增加,可能是AGEs干预后细胞内启动内源性代偿调控机制,且这种调控机制与其受体（RAGE）途径相关;AGEs也可能还通过以上细胞周期调控因子以外的其他途径或机制影响细胞生物学功能。     

晚期糖基化终产物修饰蛋白刺激人血管内皮细胞表达粘附分子的研究

为探讨透析相关性淀粉样变 (DRA)时血管内皮细胞粘附分子表达上调的机制 ,采取分离正常人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,将晚期糖基化终产物 (AGE)修饰的人血清白蛋白 (AGE HSA)、人血清白蛋白 (HSA)与HUVEC在体外共同培养的方法 ,并用荧光单克隆抗体染色 ,流式细胞仪定量检测内皮细胞表面细胞间粘附分子 1(ICAM 1)、血管细胞间粘附分子 1(VCAM 1)、E 选择素 (E selectin)的表达。结果显示 ,正常人脐静脉内皮细胞表达ICAM 1和VCAM 1,但无E selectin的基础表达。AGE HSA能以时间和剂量依赖的方式上调血管内皮细胞粘附分子ICAM 1、VCAM 1、E selectin的表达 (P <0 .0 5 ) ,而HSA对血管内皮细胞上述粘附分子的表达均无影响。提示AGE能上调血管内皮细胞粘附分子的表达 ,从而促进DRA时单核 /巨噬细胞的浸润。     

促炎症介质对B型滑膜细胞晚期糖基化终产物受体的调节作用

探讨促炎症介质对B型滑膜细胞晚期糖基化终产物（AGE）受体的调节作用。通过体外实验，观察TNF－α、IL-1β和AGE修饰的人血清白蛋白（AGE－HSA）对B型滑膜细胞AGE受体mRNA表达的影响，以及中和性抗TNF－α和抗IL－β抗体对AGE－GHSA调节作用的阻断能力。结果显示，滑膜B型细胞表达RACE和AGE－R3mRNA;AGE-HSA和TNF－α能以时间和剂量依赖的方式下调B型滑膜细胞RAGEmRNA的表达，上调AGE－R3mRNA的表达；IL－1β能以时间和剂量依赖的方式上调B型滑膜细胞AGE－R3mRNA的表达，而对RAGEmRNA的表达无影响；AGE－HSA对B型滑膜细胞AGE受体mRNA表达的调节作用被抗TNF－α抗体所阻断。提示促炎症介质对 滑膜细胞不同的AGE受体具有不同的调节作用。     

ELISA法检测人血清晚期糖基化终产物及在血液透析病人的应用

用牛血清ＡＧＥ（ＢＳＡ－ＡＧＥ）作为包被抗原，采用对氧化糖基化产物－Ｎ＾ε羧甲基赖氨酸（ＣＭＬ）特异的抗体（抗ＫＬＨ－ＡＧＥ）作为检测抗体，建立竞争ＥＬＩＳＡ检测系统。将该法和荧光分光光度法所测ＡＧＥ水平进行比较，并对１１７例长期血液透析（ＨＤ）病人的血清ＡＧＥ水平进行定量观察。结果显示：ＥＬＩＳＡ法检测血清ＡＧＥ的最低检测限为０．１μｇ／ｎｌ，平均批内变异系数（ＣＶ）为２．２％，批间ＣＶ为９．０％，回收率为９７％～１０７％。用该法 １１７例血透病人血清ＡＧＥ水平中位数为０．５μｇ／ｍｌ，而年龄匹配的正常人中仅有９．４％的血清ＡＧＥ含量〉０．１μｇ／ｍｌ。同时用ＥＬＩＳＡ法和荧光分光光度法检测４４例病人血清ＡＧＥ，两处方法所得结果相关非常显著（Ｐ〈０．０１）。上述结果表明，竞争ＥＬＩＥＡ法测定人血清ＡＧＥ水平，     

人关节滑膜细胞晚期糖基化终产物结合蛋白的表达及其调节

为探讨人关节滑膜细胞是否表达晚期糖基化终产物 (AGEs)结合蛋白 ,并研究其表达的调节因素 ,分离、培养正常人关节A型和B型滑膜细胞 ,用放射性配体 受体结合法检测滑膜细胞表面AGEs结合蛋白 ,并观测TNF α、IL 1β和AGE修饰的白蛋白 (AGE HSA)对滑膜细胞AGEs结合蛋白表达的影响。结果显示 ,滑膜细胞表面存在AGEs结合蛋白 ,A型细胞Kd =(1.2 7± 0 .19)× 10 -6M ,B型细胞Kd =(1.38± 0 .16 )× 10 -7M。TNF α、IL 1β和AGE HSA能上调滑膜细胞AGEs结合蛋白的表达。提示人类关节滑膜细胞可表达对AGEs特异的结合蛋白 ,关节固有细胞可能参与了透析相关性淀粉样变的发病过程     

高迁移率族蛋白B1对树突细胞作用的受体机制研究

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对大鼠脾脏树突细胞(DC)作用的受体机制.方法 分离正常Wistar大鼠脾脏DC,置于96孔培养板(1×105/孔),HMGB1刺激后采用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞术检测DC表面晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达强度.同时观察抗RAGE抗体对HMGB1刺激后DC表面共刺激分子CD80、CD86和主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ表达的影响.结果 1μg/ml HMGB1刺激48h后,DC表面受体RAGE表达明显上调(P＜0.01);在1:50、1:100、1:200稀释度的抗RAGE多克隆抗体作用后,HMGB1刺激诱导DC表面CD80、CD86和MHC Ⅱ表达减弱(P＜0.01),其中1∶100稀释度时表达减弱最明显.结论 HMGB1能诱导DC受体RAGE表达增强,RAGE可能是参与HMGB1诱导DC成熟分化的重要受体.     

用T7噬菌体展示系统筛选与晚期糖基化终产物受体胞内段相结合的蛋白

目的 用T7噬菌体筛选系统筛选在细胞内与晚期糖基化终产物受体(RAGE)结合的蛋白。方法 以重组RAGE为靶蛋白,用谷胱甘肽亲和树脂为介质,筛选T7人肺cDNA文库。结果 筛选6轮后选择64个噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片段,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了25个编码蛋白的序列。结论 T7噬菌体展示筛选系统是筛选新的结合蛋白的一种简单、快速和有效的手段,所筛选的与RAGE胞内段相互作用的蛋白对进一步研究其信号转导通路的复杂功能和调节机制提供了很好的靶点。     

比较肝素和低分子量肝素对人单核细胞表面AGE受体的影响

用放射性受体－配体结合分析法,观察肝素和低分子量肝素对正常人和慢性肾功能衰竭血液透析患者单核细胞表面晚期糖基化终产物（AGE）受体的,结果表明,肝素对正常人和慢性肾功能衰竭血液透析患者单核细胞表面的AGE受体均有作用,且这种封闭作用具有剂量依赖性;低分子量肝素对GE受体无封闭作用,提示肝素可以干扰AGE的清除和降解,而低分子量肝素对AGE的清除和降解无影响。     

单核／巨噬细胞在透析相关性淀粉样变发病学中的作用

透析相关性淀粉样变（DRA）是导致透析病人骨关节破坏性病变的致残性并发症,发病机制不明。淀粉样沉积周围有单核／巨噬细胞浸润是DRA的组织病理学特征,但导致单核细胞浸润的原因及其在DRA发病学中的作用尚未阐明。笔者近期的研究证实,淀粉样纤维中的β2微球蛋白（β2m）可通过与晚期糖基化终产物（AGE）修饰的I型胶原的结合,在原位被AGE所修饰。AGE修饰的β2m(AGE-β2m)通过直接趋化作用或通过对关节滑膜成纤维细胞趋化因子生成的调节募集单核细胞,AGE－β2m并能延缓单核细胞的自发性凋亡, 从而导致关节局部的单核细胞聚集。单核／巨噬细胞的募集、活化又可以通过释放促炎症细胞因子导致局部组织的炎症反应并刺激滑膜细胞表达粘附分子和产生降解基质蛋白的胶原酶,最终引起骨关节组织的破坏性病变。