大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定

目的 探讨体外分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的生物学特性,对其表型和生长曲线进行初步鉴定.方法 采用全骨髓培养法提取培养MSCs,绘制原代及三代细胞生长曲线,利用免疫组化法检测表面标志物CD34、CD44;流式细胞分析法检测表面标志物CD90.结果 成功培养出MSCs,免疫组化CD44阳性表达,CD34阴性表达;流式细胞术CD90阳性表达.结论 该实验分离培养的细胞群与MSCs的生物学特性相吻合,说明MSCs易于体外分离、培养和扩增.     

复方丹参滴丸含药血清诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

目的观察复方丹参滴丸含药血清体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的能力。方法采用全骨髓直接贴壁的方法分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪鉴定细胞表面标记;采用复方丹参滴丸的含药血清体外定向诱导第四代MSCs,应用免疫细胞化学法、原位杂交组织化学法、透射电子显微镜鉴定心肌样细胞。结果大鼠MSCs细胞表面抗原CD90、CD106阳性,CD34、CD45、CD31阴性。经复方丹参滴丸含药血清诱导向心肌样细胞分化后,免疫细胞化学法显示α辅肌动蛋白(α-Actinin)、结蛋白(desmin)强阳性,原位杂交组织化学法显示肌球蛋白重链(MHC)强阳性表达。结论复方丹参滴丸含药血清能促使MSCs分化为心肌样细胞,为中药干预MSCs治疗缺血性心脏病提供干细胞实验依据。     

人骨髓间充质干细胞体外向血管内皮细胞诱导分化的研究

目的 体外研究人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化为血管内皮细胞的潜能,探讨作为血管组织工程种子细胞来源的应用前景.方法 用人淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法分离出成人骨髓单个核细胞,经贴壁法获取 MSCs ,体外扩增培养并进行鉴定.在内皮细胞生长培养基(DMEM)中以血管内皮细胞生长因子(VEGF) 、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导 hMSCs 向血管内皮细胞分化,观察细胞形态学变化,扩增培养后经流式细胞仪进行细胞表型鉴定和超微结构观察.结果 形态学观察显示,培养的人骨髓间充质干细胞经 bFGF 、VEGF 诱导后的 hMSCs 可见类似内皮细胞样改变,向血管内皮诱导分化24 d后,经流式细胞仪检测, CD34 表达转为阳性,而CD106、HLA-DR 表达明显上调.结论 在血管内皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子诱导作用下, hMSCs 具有向内皮细胞分化潜能,产生功能性内皮细胞.     

系统性红斑狼疮骨髓间质干细胞的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓间质干细胞（MSCs）生物学功能、细胞因子的表达异常与否.方法采用密度梯度离心和贴壁筛选法对10例SLE患者和11例正常人骨髓MSCs进行分离培养,流式细胞仪鉴定MSCs表面标志物及分析MSCs细胞周期和细胞凋亡,观察MSCs形态学改变,MTT法检测MSCs的生长情况,RT-PCR检测MSCs细胞因子mRNA水平表达.结果SLE骨髓MSCs传代率（30%）低于正常（100%）（P＜0.01）,SLE患者骨髓MSCs生长较正常活跃,凋亡率（2.36%）低于正常（6.79%）,两组MSCs均表达CD29、CD44、CD105,均不表达CD14、CD34、CD45,SLE患者骨髓MSCsIL-7mRNA表达低于正常.结论SLE骨髓MSCs生物学特性及细胞因子表达存在异常.     

结肠炎大鼠炎症黏膜提取液对骨髓间质干细胞增殖和表面分化抗原的影响

背景:动物实验和临床试验均表明间质干细胞(MSCs)对受损肠道组织有一定修复作用,然而目前尚不清楚肠道炎症微环境对MSCs移植治疗炎症性肠病(IBD)有何影响。目的:通过体外实验观察结肠炎大鼠模型肠道炎症黏膜提取液对骨髓MSCs增殖和表面分化抗原的影响。方法:以全骨髓贴壁法分离和原代培养大鼠MSCs并行传代扩增。取三硝基苯磺酸(TNBS)结肠炎大鼠模型肠道炎症黏膜提取液(0、1、2、3 ml)与MSCs共培养,倒置相差显微镜观察各组细胞贴壁和生长情况,绝对计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面分化抗原表达。结果:全骨髓贴壁法可成功分离MSCs,所获细胞CD29、CD44表达阳性,CD105表达低度阳性,CD34、CD45表达阴性。3 ml炎症黏膜提取液处理组MSCs接种6 h后见细胞贴壁,36 h开始克隆性增生,此后细胞增殖速度较空白对照组明显加快,第6 d即达100%融合,但表面分化抗原表达与空白对照组相比无明显变化。结论:结肠炎大鼠炎症黏膜提取液可促进骨髓MSCs增殖,但对细胞表面分化抗原无明显影响。     

骨髓间充质干细胞体外诱导和端粒酶活性的研究

目的:建立骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、纯化的方法,探讨其体外诱导条件和端粒酶活性。方法:取正常成人骨髓用含10%小牛血清的LG-DMEM培养液培养、扩增。流式细胞仪行细胞表面抗原检测,细胞化学染色鉴定其生物学特性,在特定培养条件下检测其向成骨和脂肪细胞分化的能力,采用TRAP(Telomerase repeat amplification protocol assay)-银染法测定其端粒酶的活性。结果:分离培养获得的贴壁细胞,碱性磷酸酶染色阳性。流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44、CD115、CD166表达阳性。经向成骨和脂肪细胞诱导3周后,可得到成骨和脂肪细胞,经茜素红染色、油红O染色得到证实。TRAP-银染法证实MSCs表达一定的端粒酶活性。结论:体外分离培养的MSCs可以向成骨、脂肪诱导分化,表达一定的端粒酶活性,具有干细胞的生物学特性。     

成人脂肪干细胞分离培养与鉴定

目的探讨成人皮下脂肪组织提取脂肪干细胞(ADSCs)的可能性。方法取健康成年人皮下脂肪组织,经酶消化法获得含有ADSCs的细胞悬液,差速贴壁法分离ADSCs、红细胞及少量脂肪细胞。体外培养第3代,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长曲线,免疫细胞化学法检测CD29、CD44、CD34及CD106,脂肪细胞诱导分化后进行油红O染色。结果倒置显微镜下观察原代培养细胞呈长梭形、漩涡状生长。免疫化学法检测结果显示细胞表面抗原CD44、CD29阳性表达,CD106、CD34阴性表达,说明分离培养的细胞是ADSCs。脂肪细胞诱导后进行油红O染色证明所得细胞具有向成熟脂肪细胞分化的能力。结论成人皮下脂肪组织可作为ADSCs种子来源,并且所得ADSCs具有分化能力。     

利用共培养法诱导人胎盘间充质干细胞向成骨细胞分化

目的观察体外人足月胎盘间充质干细胞(h PMSCs)和成骨细胞共培养体系条件下成骨细胞对h PMSCs分化的影响。方法采用胶原酶消化法从人足月胎盘中分离纯化间充质干细胞(MSCs),检测细胞表面标志物、生长曲线、细胞超微结构及成骨能力并对h PMSCs进行鉴定。共培养组将成骨细胞接种于Transwell双层培养皿底层,h PMSCs接种于上层;对照组上层与底层均接种h PMSCs。对诱导后细胞进行碱性磷酸酶染色鉴定。结果胎盘分离细胞经形态、生长速度、细胞表面标志物(CD44和CD29阳性表达为99%,CD34和CD106为1%),确定为胎盘间充质干细胞;头盖骨分离细胞经碱性磷酸酶染色确定为成骨细胞。采用Transwell共培养h PMSCs和成骨细胞组碱性磷酸酶活性染色阳性率为(21.7±5.3)%,表现成骨细胞特性,对照组染色呈阴性。结论人足月胎盘含MSCs,与其他来源MSCs生物学特性相似,成骨细胞生长过程提供的微环境对h PMSCs分化为成骨细胞具有诱导促进作用。     

糖尿病患者脂肪间充质干细胞的分离培养与鉴定

目的：探讨体外分离培养糖尿病患者脂肪间充质干细胞（ADSCs）的方法并分析其生物学特性。方法采用胶原酶消化法从糖尿病患者的脂肪组织中分离出ADSCs。对ADSCs进行体外培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态;绘制第3、6、8代传代细胞的生长曲线;流式细胞仪检测第3代细胞表面标记物（ CD34、CD45、CD29、CD44、CD105、CD90）;通过成脂诱导实验鉴定细胞的分化潜能（油红染色阳性判定为脂肪细胞,证实细胞可向脂肪细胞分化）。结果分离出的ADSCs,能稳定传代;其细胞表面标记物CD34、CD45呈阴性表达,CD29、CD90、CD44、CD105呈阳性表达。成脂诱导后油红染色阳性。结论在糖尿病患者脂肪组织中成功分离到ADSCs,在体外适宜条件下ADSCs可向脂肪细胞分化,具有分化潜能。     

骨髓基质干细胞种植体外修复内皮及对血管平滑肌细胞增生的影响

目的探讨骨髓基质干细胞(MSCs)种植体外修复内皮的可行性及对血管平滑肌细胞增生的影响。方法培养兔血管内皮、平滑肌和人MSCs,通过细胞共培养模拟血管内皮修复过程,用流式细胞仪分析MSCs分子表型特征,免疫荧光细胞化学法观察与内皮共培养的MSCsFlk1和vWF蛋白表达,根据下室内皮生长状态及是否接种MSCs将其分为对照组、单纯MSCs组、融合内皮组、对数内皮组和MSCs种植组。氚胸腺嘧啶脱氧核苷(3HTdR)掺入检测平滑肌细胞DNA合成,Westernblot检测平滑肌细胞中增殖细胞核抗原蛋白表达。结果分离的MSCs表达基质细胞标志CD105和CD166,不表达造血干祖细胞和内皮细胞标志CD34、Flk1、vWF;与内皮共培养5天时,vWF染色仍为阴性,但约25.71%MSCs开始表达Flk1;MSCs种植组平滑肌细胞3HTdR掺入虽高于融合内皮组,但与对数内皮组比较显著降低;MSCs种植组平滑肌细胞PCNA蛋白吸光度相对值虽高于融合内皮组,但与对数内皮组比较明显减少。结论MSCs种植能抑制平滑肌细胞增生,种植在成熟内皮中的MSCs具有微环境依赖向内皮分化的能力。     

青少年高血压的研究进展

随着人们生活和行为方式的改变,高血压发病明显呈年轻化趋势。在青少年时期识别高血压病高危人群有助于早期进行有效干预和治疗,降低未来高血压的发生率及其严重性。现试从青少年高血压的诊断、发病因素、特点、治疗策略等方面的研究进展作一综述。     

Morbidity in cardiovascular diseases in immigrants in Sweden

INTRODUCTION: Although immigration to Sweden has increased in the last few decades, the incidence rates of cardiovascular disease and coronary heart disease in immigrants are unknown. The aim of the present study is to estimate whether place of birth affects the incidence rates of cardiovascular disease and coronary heart disease. MATERIAL AND METHODS: The study was designed as a follow-up study on morbidity in cardiovascular disease and coronary heart disease between 1 January 1997 and 31 December 1998, including three and a half million persons with age range 35-64 years, of whom 550 000 were born abroad, from the database MigMed consisting of the whole Swedish population. Incidence rates and relative risks were estimated by indirect standardization and a proportional hazard model. RESULTS: The age-adjusted risk of coronary heart disease was higher in most foreign-born groups than in Swedes. For example, in nine of 12 male groups, the relative risks varied between 1.1 and 2.2, and in seven of 12 female groups, the relative risks varied between 1.4 and 2.5. When also adjusting for level of education and employment status, the risks were still high, but on a lower level. CONCLUSIONS: Foreign-born people possess an over-risk of cardiovascular or coronary heart disease(CVD/CHD) compared with Swedish-born persons, also when level of education and employment status are taken into account.     

C·肉毒杀鼠素(冻干剂)应用研究

目的为研究C·肉毒杀鼠索对杀灭达乌尔黄鼠(简称黄鼠)的大面积应用情况和对家畜、家禽的毒害作用,进行了C·肉毒杀鼠素的应用研究.方法大面积投毒采用ES-2药饵撒播机[1],间隔约80m进行条投.羊、鸡采用直接灌胃.结果大面积应用的灭鼠率为83.72%.对羊、鸡最高剂量分别为500万MLD、150万MLD,均未出现中毒现象.结论 C·肉毒杀鼠素是较为理想的草原大面积杀灭黄鼠的理想、首选药物.     

高龄老年高血压的临床研究进展

随着社会老龄化进程的加快,80岁以上高龄老人的绝对数量以及占总人口的比例均在增加,如何提高高龄老年高血压的防治水平备受关注。现试从高龄老年高血压的临床特点、治疗策略等方面的临床研究进展作一综述。     

中国老年性耳聋的研究与干预进展

老年性耳聋已成为影响我国老年人生活质量的最主要的慢性病之一。助听器是目前帮助听力损失的老年人克服交流障碍的主要手段。在我国,数字助听器已逐渐取代模拟助听器并且体现出了更好的效果。但是老年听力损失患者中使用助听器的比例仍然很小。人工耳蜗植入也已被应用在老年患者中。我国针对老年人的听力康复服务还有较长的路要走。     

Sex Differences in Ethanol-induced Dopamine Release in Nucleus Accumbens and in Ethanol Consumption in Rats

In vivo microdialysis was used to examine changes in nucleus accumbens and striatal dopamine, dihydrophenylacetic acid (DO-PAC), and homovanillic acid (HVA) following acute administration of ethanol (0.0, 0.25, 0.5, 1.0, or 2.0 g/kg) in male and female Long-Evans rats. Following dialysis, rats were trained to bar-press for oral ethanol reinforcement. In nucleus accumbens, females showed significant increases in extracellular dopamine following 0.25 or 0.5 g/ kg ethanol, but did not show significant increases over baseline at the higher doses. Males showed slight increases in dopamine at the lower doses and decreased dopamine at 2.0 g/kg. In striatum, both sexes showed increased dopamine at the lower doses and decreased dopamine at 2.0 g/kg. There were slight increases in nucleus accumbens DOPAC and HVA at some doses in both sexes, but no changes in striatal metabolite levels. In addition to showing increased responsiveness to ethanol-induced mesolimbic dopamine stimulation, females consumed more ethanol than males during behavioral testing. The pattern of both greater ethanol-induced nucleus accumbens dopamine release and greater ethanol consumption in females supports the hypothesis that ethanol reward is mediated, at least in part, by the mesolimbic dopamine system.     

Epstein-Barr virus in malignancies in renal transplant recipients in Japan

A role for Epstein-Barr virus (EBV) in the development of malignancies including lymphomas, and carcinoma of the stomach, nasopharynx, thymus and salivary gland is suggested. It is indicated that EBV evokes polyclonal-B-cell-proliferative diseases in immunocompromised hosts, such as transplant patients, which results in monoclonal malignant lymphomas. The suppression of immune functions in these patients is thought to lead to incomplete elimination of the cells expressing EBV latent infection genes. To examine the etiological role of EBV in the development of malignancies following renal transplant in Japan, 42 malignancies in 1744 cases of renal transplant were studied for the presence and type of EBV. The polymerase chain reaction revealed that 5 malignancies were positive for EBV, all type A: 2 of 2 cases of non-Hodgkin's lymphoma (NHL), 2 of 8 cases of gastric adenocarcinoma of the common type, and 1 of 2 cases of gastric plasmacytoma. In situ hybridization revealed positive signals in the nucleus of tumor cells in 2 cases of NHL and 1 of plasmacytoma. Positive signals were found in the small lymphoid cells but not in the tumor cells in 2 cases of gastric carcinoma. On the basis of these findings, a role for EBV in the development of malignancies in renal transplant patients is unlikely except for lymphoid neoplasias.Abbreviations PCB polymerase chain reaction - EBV Epstein-Barr virus - NHL non-Hodgkin's lymphoma     

糖尿病大鼠心室肌细胞钾通道的改变

目的研究糖尿病大鼠心室肌细胞钾通道的改变及增加葡萄糖代谢对其的作用。方法取体重150～200g的雄性SpragueDawley大鼠,腹腔注射链脲菌素(STZ)建立糖尿病模型,采用酶解法获得单个心室肌细胞,应用膜片钳全细胞记录技术记录钾电流。结果糖尿病大鼠心室肌细胞瞬间外向性钾流(Ito)密度较对照组显著降低[ 60mV时,分别为(15.90±1.19)pA/pF(n=25)和(28.55±0.97)pA/pF(n=12),P<0.001];分别用100nmol/L胰岛素及1.5mmol/L二氯乙酸在体外预处理心室肌细胞4～5h和3～4h使Ito密度恢复至对照组水平[ 60mV时,分别为(29.40±0.38)pA/pF(n=20)和(27.35±0.97)pA/pF(n=12)]。结论糖尿病大鼠心室肌细胞钾通道功能发生改变,增加葡萄糖代谢可逆转这一改变,提示葡萄糖代谢与Ito功能间存在一定关系。