山东省健康儿童肠道病毒带毒状况调查

[目的 ]了解山东省健康儿童肠道病毒带毒状况。 [方法 ]按照随机抽样的原则 ,1998年分别于肠道病毒感染的高发季节 ( 7月 )和低发季节 ( 11月 ) ,在 5个县 (市 )随机采集城镇和乡村共 10 16份 15岁以下健康儿童的粪便标本 ,采用Hep 2和RD细胞同时进行肠道病毒的分离、鉴定。 [结果 ]高发季节肠道病毒的带毒率 ( 13 0 8% )高于低发季节( 3 83% ) ,高发季节不同县 (市 )、不同年龄组之间的带毒率不同 (P <0 0 5 ) ,低发季节的差异则无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;城镇、乡村带毒率相近 ,但不同县 (市 )城、乡之间仍存在差异 ;男、女之间的带毒率差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;两次采样分离的肠道病毒均以ECHO病毒为主 ,其次为其他未定型肠道病毒、Coxackie病毒、脊髓灰质炎病毒 (类疫苗株 )和肠道病毒 70型 ;有 9名儿童两次采样均分离到肠道病毒 ,其中 6人两次分离的病毒一致 ,分别为ECHO6、ECHO7、E CHO19、ECHO2 0 和Coxackie病毒B5、B6;两次采样RD细胞的分离率 ( 6 89% )高于Hep 2细胞 ( 3 74% )。 [结论 ]健康儿童肠道病毒带毒 (特别是在夏秋季节 )较为普遍 ,并可能存在长期带毒状况 ;未发现脊髓灰质炎野病毒。     

济宁市健康人群肠道病毒动态变化与手足口病发病研究

摘要:目的 了解健康人群肠道病毒动态变化及手足口病肠道病毒型别,探讨健康人群肠道病毒在手足口病传播过程中的作用。方法 采用多阶段整群抽样的方法,分别于手足口病流行前期(3-4月)、流行高峰期(6-7月)、流行后期(10-11月)采集健康人群及手足口病病例粪便标本,采用荧光定量PCR进行肠道病毒核酸检测。结果 3次共采集健康人群粪便标本1235份,肠道病毒通用引物阳性177份,阳性率为14.33%,检出COAX16型肠道病毒1株,非EV71非CoxA16其它型肠道病毒176株;手足口病病原学以EV71和CoxA16型为主,非EV71非CoxA16其他肠道病毒仅占26.98%。不同时期、不同年龄组带毒率有统计学意义(P<0.05)。<1岁组健康人群肠道病毒阳性率最高,而发病率最低,呈相反趋势;1～组发病率最高,从1～组呈相同趋势。健康人群肠道病毒阳性率与发病率无相关性(P>0.05)。结论 健康人群以携带非EV71非CoxA16肠道病毒为主,健康人群肠道病毒带毒在手足口病传播意义不大。     

健康人群EV71、CA16及其他肠道病毒携带率调查

目的了解健康人群肠道病毒携带状况,探讨健康人群肠道病毒携带率与手足口病传播的关系及危害。方法 2011—2012年采集健康人群粪便标本500份。粪便提取核酸后应用实时荧光RT-PCR技术检测人肠道病毒(HEV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16),按照年龄、职业、季节分别进行带毒情况分析。结果 500份标本中,HEV通用引物阳性57份(11.40%),其中EV71、CA16和其他肠道病毒阳性标本分别为9份(1.80%)、7份(1.40%)和41份(8.20%)。各个年龄段肠道病毒携带率差异无统计学意义(P0.05)。医生、幼儿园工作人员和其他人群的EV71、CA16及其他肠道病毒携带率差异有统计学意义(P0.05)。按月份分布来看,检出EV71和CA16的标本75.00%分布在5—9月份,检出其他肠道病毒的标本48.78%分布在11月—次年1月份。结论健康人群中肠道病毒携毒率相对较高,EV71和CA16的检出季节分布与手足口病发病的季节分布吻合;医生和幼儿园工作人员等人群病毒携带率较普通人群高,其在手足口病的传播中可能具有重要作用。     

2002年云南非脊灰病毒测序定型和ECHO13病毒基因特征分析

目的对云南省2002年急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中非脊灰病毒(non-polio,NPV)的带毒情况及埃柯病毒13型(echovirus 13,E13)的基因特征进行描述。方法按Obster等介绍的方法,对2002年云南省脊灰实验室分离到的21株NPV进行基因测序定型。结果 2002年云南省共报告267例AFP病例,共采集到<15岁AFP病例的合格粪便标本257份,257份便标本中共检测到NPV43株(带毒率为16.7%),其中脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)22株(阳性率8.6%),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;检测到非脊灰病毒(NPV)21株(阳性率8.2%)。21株EV中,12株为人类肠道病毒B组(HEV-B,11个血清型,其中3株为E13),3株为人类肠道病毒C组(HEV-C,1个血清型),未分离到HEV-A和HEV-D组病毒。结论 2002年云南省AFP病例中非脊灰病毒携带率不高。对3株常见的E13进行基因进化分析,表明E13病毒存在基因多样性特点(即存在不同的基因型)。     

2003年云南省AFP病例中非脊灰病毒的测序定型和ECH07病毒的基因特征分析

目的 分析云南省2003年急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中非脊灰病毒(non-polio,NPV)的带毒状况和埃柯病毒7型(echovirus 7,E7)的基因特征.方法 按Obster等介绍的方法,对2003年云南省脊灰实验室分离到的18株NPV进行基因测序定型并对埃柯7病毒的基因特征进行分析.结果 2003年共采集到＜15岁AFP病例粪便标本215份,在34株阳性标本(带毒率为15.8％)中,脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV) 16株(阳性率4.7％),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;非脊灰病毒(NPV) 18株(阳性率8.4％),其中1株为人类肠道病毒A组(human enterovirus A,HEV-A,1个血清型),14株为人类肠道病毒B组(HEV-B,9个血清型,其中3株为埃柯病毒7型,echovirus7,E7),3株为人类肠道病毒C组(HEV-C,2个血清型),未分离到HEV-D组病毒.结论 2003年云南省AFP病例中非脊灰病毒携带率(8.4％)与往年持平,3株E7病毒存在基因多样性特点(即存在不同的基因型).     

山东省健康儿童肠道病毒带毒状况调查

目的：了解山东省健康儿童肠道病毒带毒状况。方法：按照随机抽样的原则，1998年分别于肠道病毒感染的高发季节（7月）和低发季节（11月），在5个县（市）随机采集城镇和乡村共1016份15岁以下健康儿童的粪便标本，采用Hep-2和RD细胞同时怕道病毒的鉴定。结果：高发季节肠道病毒的带毒率（13．08）高于低发季节（3．83％），高发季节不同县（市），不同年龄组之间的带毒率不同（P＜0．05），低发季节的差异则无统计学意义（P＞0．05），城镇，乡村带毒率相近，但不同县（市）城，乡之间的仍存在差异，男，女之间的带毒率差异无统计学意义（P＞0．05）；两次采用分离的肠道病毒均以ECHO病毒为主，其次为其他未定型肠道病毒，Coxackie病毒，脊髓灰质炎病毒（炎症苗株）和肠道病毒70型，有9名儿童两次采样均分离到肠道病毒，其中6人两次分离的病毒一致，分别为ECHO6，HCHO7，ECHO19，ECHO20和Coxackie病毒B5，B6；两次采样RD细胞的分离率（6．89％）高于Hep-2细胞(3．74％），结论：健康儿童肠道病毒带毒（特别是在夏秋季节）较为普遍，并可能存在长期带毒状况；未发现脊髓灰质炎野病毒。     

烟台市人群带肠道病毒的分布与型别构成的调查研究

本文报告了我市首次对人群带肠道病毒的分布与型别构成的调查研究结果,从201份粪标本中,用原代人胚肾单层细胞进行了病毒分离与鉴定。实验结果表明,我市人群带肠道病毒率为15.92%,不同地点带病毒率不一,农村明显高于城镇。不同年龄组带病毒率也有差异,以0~7岁范围内带病毒率最高。
调查中分离出32株脊灰病毒以外的肠道病毒,以ECHO为主,占68.75%在ECHO中,15型ECHO病毒占ECHO病毒株总数的68.18%,这一结果为预防肠道病毒性疾病提供了可靠科学依据,且为今后研究其它肠道病毒和有关科学试验提供了部分病毒株。     

2010年云南边境地区健康儿童肠道病毒带毒调查

目的 对2010年云南省与缅甸接壤地区15岁以下健康儿童肠道病毒带毒情况进行调查.方法 采集边境地区15岁以下健康儿童的粪便标本(每个儿童1份),对共400份标本进行病毒分离和基因测序定型.结果 400份便标本中检测到非脊灰病毒( non - polio virus,NPV)21株,NPV分离率5.3％.21株病毒全为HEV - B组病毒,未分离到HEV - A、HEV - C、HEV - D组病毒和脊灰病毒.结论 2010年云南省边境地区健康儿童中肠道病毒以B组病毒为主.     

江西省2007年-2012年急性弛缓性麻痹病例监测分析

目的通过对江西省2007年-2012年急性弛缓性麻痹(AFP)病例实验室监测结果进行分析,为本省保持无脊髓灰质炎状态提供依据。方法采用L20B、RD细胞进行脊髓灰质炎病毒PV分离,脊髓灰质炎毒株通过微量中和实验分型后送至国家脊髓灰质炎实验室进行型内鉴定。结果 2007年-2012年共接收2 084份AFP病例粪便标本,其中有71份分离出脊髓灰质炎病毒、300份分离出非脊髓灰质炎肠道病毒(NPEV),分离率分别为3.41%、14.40%;分离出的脊髓灰质炎病毒中Ⅲ型脊髓灰质炎病毒的构成比最高,为51.19%;2010年-2012年脊髓灰质炎病毒的分离率显著低于2007年-2009年;分离出的脊髓灰质炎病毒均为疫苗相关株。结论江西省脊髓灰质炎病毒学监测处于较高水平,2007年-2012年急性弛缓性麻痹病例未发现脊髓灰质炎野病毒和VDPV,Ⅲ型脊髓灰质炎疫苗株病毒是分离株中的优势株,应继续加强监测。     

2010年安阳市正常人群手足口病隐性感染调查

目的了解安阳市2010年成人及健康儿童手足口病隐性感染情况。方法选取我市滑县王庄镇刘草滩村作为现场,开展人群感染率状况调查。调查对象分10个年龄组,0岁~、1岁~、2岁~、3岁~、4岁~、5岁~、6岁~,7~12岁、13~18岁、>18岁组各10人;共调查100人。每人采集粪便标本5~8 g,进行实时荧光PCR肠道病毒核酸检测(包括肠道病毒通用型,肠道病毒71型,柯萨奇病毒A16型)。结果肠道病毒通用型阳性35份,阳性率35.00%,35份阳性标本中EV71型1份,CA16型0份。35例阳性标本中,33例为6岁以下儿童,占94.28%。结论我市健康人群中的肠道病毒隐性感染较为普遍;6岁以下儿童为主要感染人群;通常引起手足口病的CA16和EV71亚型的隐性感染在健康人群中较为少见。     

中国云南省与缅甸接壤地区健康儿童肠道病毒携带情况调查

目的 了解缅甸入境健康儿童和云南省口岸地区健康儿童肠道病毒(EV)携带情况及病毒型别特征.方法 在10个边境口岸＜15岁的健康儿童中采集粪便标本,进行病毒分离和型别鉴定.共采集到319份粪便标本.脊髓灰质炎(脊灰)病毒(PV)用抗体中和试验鉴定,并送国家脊灰实验室进行型内鉴别;非脊灰肠道病毒(NPEV)用基因测序方法进行鉴定;腺病毒用血清学方法鉴定.结果 共检测到EV 53株(带病毒率为16.6%),其中PV23株(阳性率7.2%)经国家脊灰实验室证实均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;NPEV 30株(阳性率9.4%),经VP1区核苷酸序列测定,除1株未被所有EV通用引物扩增外,其余29株分别属于HEV-A组(1株,1个血清型,占3.3%)、HEV-B组(20株,11个血清型,占66.7%),HEV-C组(8株,4个血清型,占26.7%),未检测HEV-D组病毒.同时还检测到腺病毒4株,阳性率为1.25%.分别做B组和C组病毒基因树,相同型别的分离株都与对应的标准株聚集在一起.同源性计算表明,分离株与对应标准株的核苷酸同源性及氨基酸同源性分别在75%和85%以上,符合国际测序定型标准.结论 在中国云南省与缅甸接壤地区,EV携带率较高,特别是PV阳性率高于急性弛缓性麻痹常规监测.EV中以HEV-B组病毒为主,病毒血清型的分布具有多样性,并发现EV73(2株)、EV75(1株)、EV80(1株)和Ev96(4株)等新型EV.     

2017—2018年湖南省急性弛缓性麻痹病例病原学监测分析

目的 分析2017—2018年湖南省脊灰实验室所用细胞系的滴度值、急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例病原学特征、非脊髓灰质炎肠道病毒(non-polio enterovirus,NPEV)分离率及分布情况,为维持无脊灰状态及预防其传播提供依据。 方法 依照WHO《脊髓灰质炎病毒检验手册》(2004年第四版)方法,对AFP病例粪便标本采用鼠肺细胞(mouse L cells expressing the human poliovirus receptor, L20B)和人横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma, RD)进行肠道病毒(enterovirus, EV)分离,L20B细胞阳性分离物转RD细胞阳性者再进行脊髓灰质炎型内鉴定实验,脊髓灰质炎阳性毒株送中国疾病预防控制中心国家脊髓灰质炎实验室进行型内鉴定。 结果 在506例(1 011份)AFP病例标本中,分离出脊髓灰质炎病毒(polioviru,PV)2株、NPEV 77株,分离率分别为0.20％、7.62％;2株I型PV阳性毒株均有2个核苷酸序列变异,未发现脊髓灰质炎野病毒和疫苗衍生脊灰病毒,0～1岁组AFP病例NPEV分离率最高。 结论 2017—2018年湖南省脊灰实验室所用细胞系对脊灰病毒的敏感性良好,未发现脊灰野病毒,继续维持了无脊灰状态。     

福建省1994～1996年急性弛缓性麻痹病例病毒分离情况分析

对福建省１９９４～１９９６年急性弛缓性麻痹（ＡＦＰ）监测系统送检的２５７例粪便标本进行病毒分离，共检出脊髓灰质炎（脊灰）病毒（ＰＶ）２１株，其中４株为Ｉ型野毒株。３年ＰＶ分离阳性率分别为１９．６％、４．９％、６．４％；分离到非脊灰肠道病毒（ＮＰＥＶ）２４株，阳性率分别为０、５．９％、１６．５％。结果表明，福建省ＰＶ季节高峰已消除，野病毒已连续２年未分离到，而ＮＰＥＶ分离率逐年在提高。ＡＦＰ病例的病原型别也从以往的Ｉ型野病毒为主转为以ＮＰＥＶ和疫苗株为主。其中Ⅱ型疫苗株检出率明显上升。此外，还揭示了福建省５岁以下婴幼儿ＰＶ携带率最高，ＮＰＥＶ感染仍以夏秋季为主。     

Report of the Australian National Polio Reference Laboratory. 1 July to 31 December 1999

Since 1994, as part of the global eradication of poliomyelitis, the Australian National Polio Reference Laboratory (NPRL) at the Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory (VIDRL) has been responsible for virological testing to confirm the absence of poliomyelitis in Australia. Samples from patients with acute flaccid paralysis are transported to VIDRL for viral culture. Polio and enteroviruses are referred for intratypic differentiation as wild or Sabin (vaccine) strains. A total of 23 faecal specimens from 17 patients were processed for enterovirus culture in the period 1 July to 31 December 1999. Since 1995, 1,078 enterovirus isolates from six states have been tested for the presence of wild poliovirus. To date, 562 strains were confirmed as Sabin vaccine-like, one non Sabin-like strain was identical with a laboratory control virus and the other strains were non-polio enteroviruses or other viruses. A World Health Organization (WHO) workshop in diagnostic polio polymerase chain reaction techniques was held at VIDRL in November 1999. The laboratory was reaccredited as a regional polio reference laboratory for the WHO Western Pacific region and a national laboratory for Australia, the Pacific Island countries and Brunei Darussalam. Planning is proceeding for the polio-free certification and containment of laboratory stocks of wild poliovirus infectious materials in Australia.     

Report of the Australian National Polio Reference Laboratory. 1 January to 31 December 1998.

The Australian National Polio Reference Laboratory was established at the Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory (VIDRL) in late 1994 to carry out virological confirmation of the eradication of poliomyelitis in Australia. The laboratory is responsible for transporting samples from all Australian patients with acute flaccid paralysis (AFP) to VIDRL for poliovirus culture, identification and intratypic differentiation. The laboratory also performs polio serology on selected serum samples from AFP patients when faecal samples are not available. In 1998, faecal specimens were received from 11 patients with AFP. Adenovirus type 2 was isolated from 1 patient and an untypable non-polio enterovirus from another. No viruses were isolated from the other 9 patients. Since 1995, over 820 isolates have been transported to VIDRL from laboratories in five Australian states for testing. Three hundred and seventy three (45%) were confirmed as Sabin vaccine-like polioviruses, 416 (51%) were non-polio enteroviruses and 24 (3%) yielded no virus or viruses other than enteroviruses. Eight polioviruses are still uncharacterised.     

肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR法快速检测

目的建立一种特异、灵敏、快速的荧光定量RT-PCR方法检测肠道病毒核酸,应用于暴发疫情的实验室应急检测。方法根据GenBank登录的肠道病毒基因序列,应用生物学软件进行序列比对,在肠道病毒基因的保守区设计特异性引物和TaqMan探针;对荧光RT-PCR反应条件进行优化,验证方法的特异性和灵敏度。同时对疑似肠道病毒感染者的临床样本进行检测。结果该方法对肠道病毒的检测有高度的特异性,可检出脊髓灰质炎、柯萨奇和埃可等肠道病毒,与腮腺炎、麻疹、风疹、乙型脑炎等病毒均无交叉反应。检测的灵敏度达0.1病毒效价滴定（TCID50）;可直接从疑似肠道病毒感染者的脑脊液、疱疹液和粪便等标本中检测肠道病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3 h左右。结论所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR是一种快速检测肠道病毒特异、敏感的方法,适用于由肠道病毒感染引起的应急疫情的实验室早期诊断。     

人肠道病毒分类和鉴别方法研究进展

在10多年消灭脊髓灰质炎(脊灰)的肠道病毒(EV)检测中,中国的脊灰实验室网络分离了大量的EV。由于受EV鉴别方法的限制,EV感染的公共卫生学意义一直未能受到应有的重视。随着分子生物学技术的发展,特别是基因测序自动化和生物信息学的进步,基于序列分析鉴定EV的方法发展迅速。该文对人EV最新分类和鉴别方法进行了综述。     

毛蚶中肠道病毒的浓缩方法

取人工污染病毒的毛蚶腮和消化道匀浆，用ｐＨ９．０，３％牛肉膏液洗脱，洗脱液用ＰＥＧ－６０００沉淀，沉淀物再悬于０．１５ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４中，此浓缩方法对ｐｏｌｉｏⅠ型病毒及甲型肝炎病毒回收效果好。ＰｏｌｉｏⅠ的平均回收率为７２．４％。该方法操作较简便，不需特殊试剂和仪器，适合一般实验室使用。     

中国2003年脊髓灰质炎实验室网络的运转与监测

2 0 0 3年 ,中国 31个省 (自治区、直辖市 ,下同 )疾病预防控制中心 (CDC)脊髓灰质炎 (脊灰 )实验室 ,从 5 0 1 4例急性弛缓性麻痹 (AFP)病例中收集了 9987份粪便标本 ,所有粪便标本用L2 0B、RD细胞同时进行肠道病毒分离。从 373例AFP病例粪便标本中分离到脊灰病毒 (PV) ,分离率为 7 4%。然后对所有病毒做了血清定型 ,其中Ⅰ型5 5例 ,Ⅱ型 1 32例 ,Ⅲ型 70例 ,混合型 74例 ,PV与非脊灰肠道病毒 (NPEV)混合 1 6例。从 4 79例AFP病例粪便标本中分离到NPEV ,分离率为 9 6 %。中国CDC病毒病预防控制所国家脊灰实验室共收到送检的 4 75株PV标本 ,其中 373株来源于AFP病例 ,1 0 2株从AFP病例接触者、流动人口、非AFP病例、健康人群等分离到。对送检的 4 75株进行了血清型中和试验复核 ,并使用酶联免疫吸附试验 (ELISA)和聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性分析 (PCR RFLP)两种方法进行型内鉴定。血清型中和试验复核和PCR RFLP鉴定结果显示 :4 75株中 ,PVⅠ型疫苗株 80株 ,Ⅱ型疫苗株 1 4 6株 ,Ⅲ型疫苗株 1 0 5株 ,混合型疫苗株 98株 ,PV NPEV1 7株 ,疫苗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型变异株分别为 1 0、1 0、9株。将PV混合株进行单型分离后 ,所有单型毒株共 5 96株 ,经ELISA试验鉴定 ,其中疫苗类似株 (SL) 5 73株 ,占     

The response of institutionalized Down's syndrome subjects to enterovirus infections

In a study comparing the responses of institutionalized Down's syndrome (DS) and non-Down's (ND) inmates to enterovirus infections, the frequency of wild enteric viruses and the excretion patterns of oral polio vaccine (OPV) viruses were similar in both groups. Antibody titres developed to poliovirus types 2 and 3 following vaccination were similar in DS and ND vaccinees, but the response to type I virus was significantly less in DS vaccinees. As judged by the development of poliovirus antibody in non-vaccinees, the spread of virus from OPV-immunized to unimmunized subjects in the institution was not noticeably different in DS and ND subjects. An unexpected finding was that the excretion patterns of all three serotypes of poliovirus were strikingly similar for each individual, although the patterns varied considerably from individual to individual. The similarity of excretion occurred despite wide differences within an individual in the titres of neutralizing serum antibodies to the three serotypes. It is suggested that the rate at which a given individual eliminates enteroviruses may be largely determined by factors, the activities of which are not reflected in serum antibody titres.