急性排斥反应时Fractalkine及其受体在移植心脏中的表达

目的　探讨急性排斥反应过程中Fractalkine(FKN)及其受体CX3CR1在移植心脏局部表达的意义及环孢素A(CsA)对它们的影响。　方法　施行大鼠异位心脏移植术 ,移植大鼠分为 3组 ,每组 45只 ,对照组 5只。SD大鼠间的移植为同系移植组 (A组 ) ,Wistar至SD大鼠的移植分为未用CsA干预组 (B组 )及CsA干预组 (C组 ) ,健康SD大鼠为对照组。采用RT PCR方法检测排斥反应中移植心脏局部FKNmRNA的表达水平 ,免疫组化方法检测FKN和CX3CR1的蛋白表达水平。　结果FKNmRNA与蛋白在A组各时间点和对照组均呈低水平表达 ;在B组的表达变化与急性排斥反应的进程相关 ,术后第 7天FKNmRNA表达上调至峰值 (0 8± 0 2 6) ;C组应用CsA后 ,FKNmRNA表达峰值显著低于B组 (t=2 3 90 ,P <0 0 5 )。FKN和CX3CR1蛋白分别定位于移植心脏血管内皮细胞及间质浸润的单个核细胞中。　结论　急性排斥反应过程中 ,FKN及其受体CX3CR1表达上调 ,与移植物间质单个核细胞浸润密切相关 ;抑制FKN CX3CR1通路的活化可能是CsA发挥作用的又一分子免疫学机制     

大鼠异体肢体移植术后急性排斥反应阶段血管内皮细胞ICAM-1表达的动态变化

目的 研究大鼠异体肢体移植术后急性排斥反应阶段,移植肢体血管内皮细胞细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)动态变化及环孢素A(cyclosporine A,CsA)抗免疫排斥的作用.方法 建立大鼠肢体移植动物模型,随机分为对照组(Wistar大鼠→Wistar大鼠)、排斥组(SD大鼠→ Wistar大鼠)和CsA治疗组(SD大鼠→Wistar大鼠),术后1、4、7 d获取移植肢体股动脉行病理学观察,采用免疫组化法检测移植肢体血管ICAM-1表达的变化.结果 对照组供体移植肢体股动脉血管内皮细胞仅出现轻微肿胀与ICAM-1表达微弱;排斥组血管内皮细胞肿胀明显,淋巴细胞大量浸润,ICAM-1的表达强度和数量明显增加;CsA治疗组移植肢体血管内皮细胞仅有少量淋巴细胞浸润,ICAM-1表达较弱.结论 大鼠异体肢体移植术后急性排斥反应阶段,血管内皮细胞ICAM-1表达水平与排斥反应的发生和发展有关,CsA可降低移植肢体血管内皮细胞ICAM-1表达,抑制复合组织移植术后急性排斥反应.     

输血诱导免疫耐受对大鼠小肠移植急性排斥反应的影响

目的 观察供体特异性输血(DST)诱导免疫耐受对大鼠小肠移植后急性排斥反应的影响.方法 采用SD至Wistar大鼠异位小肠移植模型,实验组分别予以DST,环孢素(CsA)及DST联合CsA干预,Wistar大鼠同系间移植作为对照,于3、5、7 d观察移植肠管病理变化及受体血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ表达程度.结果 病理显示CsA干预组在7 d出现轻度移植排斥反应;DST联合CsA干预组与对照组结果相似,在3、5、7 d均无明显的移植排斥反应发生.并且DST联合CsA干预组TNF-α表达程度低于单独CsA干预组,在第7天时与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);IFN-γ表达程度低于单独CsA干预组,在第5、7天时与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异基因大鼠间小肠移植在CsA配合应用的情况下,进行DST可诱导其产生一定的免疫耐受,预防及减轻大鼠小肠移植急性排斥反应的发生及反应程度.     

大鼠小肠移植排斥反应时外周血T淋巴细胞上CD2分子的表达

目的探讨大鼠小肠移植急性排斥反应时外周血T淋巴细胞上CD2分子的表达。方法实验分3组进行,A组为假手术对照组(n=18),给予普通饲料喂养;B组(n=18)行SD大鼠到SD大鼠的同系小肠移植,术后常规补液,给予抗生素;C组(n=18)行SD大鼠到Wistar大鼠的小肠移植,术后处理同B组。各组于术后3、5、7d取肝素抗凝血,行流式细胞术检测,同时取移植肠组织,进行病理学检查。结果术后C组动物的存活时间为(7.0±2.1)d,B组为(33.3±2.3)d,A组>90d,C组与A、B组相比,差异有统计学意义(P<0.05);术后3、5、7d的外周血CD2阳性T淋巴细胞,A组分别为70.2%、69.8%和70.3%;B组为71.3%、69.7%和70.2%;C组为95.6%、88.1%和81.2%,C组各时点的CD2阳性细胞均高于A、B组相应时点(P<0.05);C组移植肠可见排斥反应的病理改变,且随术后时间的延长逐渐加重。结论小肠移植术后发生急性排斥反应时外周血CD2阳性T淋巴细胞表达率升高;术后早期CD2表达率的突然增高,提示可能发生急性排斥反应。     

大鼠心脏移植后动态监测血清RANTES和单核细胞趋化蛋白-1的意义

目的 探讨测定血清RANTES（regulated on activation normal T cell expressed and secreted)和单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）浓度在判断大鼠心脏移植急性排斥反应中的意义及环孢素A（CsA）对它们的影响。方法 施行大鼠异位心脏移植术,按术后免疫抑制方案的不同将动物分为未干预组（不给免疫抑制剂）、低剂量CsA组、高剂量CsA组,并设同系移植对照组;采用酶联免疫吸附法检测受者术前及术后不同时段血清RANTES和MCP－1的浓度。结果 血清RANTES浓度的动态变化与急性排斥反应的进程相关,峰值出现于排斥反应的早期;应用CsA者,其RANTES峰值出现延缓,但明显低于未干预组（P＜0．05）;血清MCP－1的浓度在术后6h及严重急性排斥反应时2次升高,应用CsA后第一峰出现延迟,但不影响其峰值浓度（P＞0．05）,高CsA组未出现第二个高峰。结论 术后动态观察受者血清RANTES和MCP－1的浓度,可能对诊断急性排斥反应及判断其严重程度有帮助。     

大鼠异种心脏移植中P选择素和细胞间粘附分子-1表达的意义

目的探讨大鼠异种心脏移植中P选择素和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的意义。方法建立金黄地鼠到SD大鼠的异种异位(腹部)心脏移植模型,然后将模型大鼠随机分为4组:对照组术后不采取任何治疗措施;环孢素A组(CsA组)于手术当天起每天腹腔注射CsA10mg/kg;脾切除组于手术当天切除脾脏;CsA联合脾切除组于手术当天切除脾脏,每天腹腔注射CsA10mg/kg。观察每组移植心脏的存活时间,定时和发生排斥反应时切取移植心组织,进行病理学检查,并以免疫组化方法观察移植物中P选择素和ICAM-1的表达。结果CsA联合脾切除组移植心脏存活时间为(34.2±8.98)d,较对照组、CsA组和脾切除组明显延长(P<0.05)。CsA联合脾切除组术后1~5d移植物中未见明显病理改变;7、14d时移植心脏组织结构清晰,未见血栓及出血;30d时移植心脏组织结构基本正常,排斥反应级别为Ⅰ~Ⅱ;其它三组的病理改变明显,对照组于术后1~2d、脾切除组及CsA组于术后4~7d发生延迟性排斥反应。CsA联合脾切除组术后各观察时点移植心脏组织中均未见P选择素和ICAM-1表达,其它三组的P选择素和ICAM-1均呈阳性。结论异种移植发生延迟性排斥反应时,P选择素和ICAM-1均有表达,可以作为判断异种移植免疫抑制治疗效果的指标之一。     

槐耳清膏在小鼠心脏移植排斥反应中作用的初步探讨

目的 探讨槐耳清膏在小鼠心脏移植急性排斥反应中的作用.方法 实验分为3组:A组:同种异基因移植后槐耳清膏处理组(槐耳清膏组);B组:同种异基因移植财照组(移植排斥组)及C组:同系移植对照组(同系移植组).观察各组移植心脏的存活时间、术后第5天供心的组织病理改变.用免疫荧光检测移植心脏中CD8+T淋巴细胞的浸润和颗粒酶B的表达水平.结果 A组移植心脏的平均存活时间为(6.38±0.69)d,与B组(8.31±0.59)d相比明显缩短(P<0.01);心肌组织呈3级急性排斥反应病理改变,CD8+T淋巴细胞弥漫性浸润及颗粒酶B表达与两个对照组相比明显增强(P<0.05).结论 在术后早期单用槐耳清音会促进小鼠心脏移植物的急性排斥反应,可能机制足促进CD8+T淋巴细胞的组织浸润并增强颗粒酶B的表达.     

细胞因子在心脏移植急性排斥反应中的表达及其作用机理

目的观察同种大鼠心脏移植急性排斥反应中,局部细胞因子网络的变化及其机理.方法健康雄性Wistar大鼠(受体)和SD大鼠各48只,将接受移植心脏的Wistar大鼠分4组,每组12只.A组对照组;B组抗白介素2单克隆抗体(IL-2Mab)组;C组环孢菌素A(CsA)组;D组IL-2Mab加CsA组.4组大鼠分别静脉给予生理盐水、抗白介素2单克隆抗体及口服CsA、静脉给予抗白介素2单克隆抗体加口服CsA,采用改良的移植术式建立移植模型.常规监测排斥反应发生情况.应用RT-PCR的方法于术后第1、3、5、7、9、11、14天动态检测移植物局部细胞因子IL-1β、IL-2、CD25、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、TNFα、IFNγ的表达水平.结果移植心脏存活时间,A组为(8.3±1.7)d;B组为(29.2±7.1)d;C组为(26.4±5.7)d;D组为(55.0±11.6)d.B、C、D组移植心脏存活时间显著延长,与A组相比,差异有极显著性意义(P＜0.01).存活时间较长的移植心脏的淋巴细胞浸润和心肌坏死的程度比存活时间较短的心脏明显减轻.IL-1β的表达在各组均较高;IL-4、IL-5、IL-6、IL-10的表达水平在移植心脏存活时间较长的组较高;而IL-2、CD25、IFN-γ、TNFα的表达则相对较低;4组相比差异有显著性意义(P＜0.05).结论细胞因子网络在心脏移植排斥反应中发生了相应的变化,并与干预的因素及移植物存活时间有密切的关系.IL-2Mab、CsA联合用药促使TH1类细胞因子向TH2类细胞因子整体偏离,这种免疫偏离使移植心脏存活时间显著延长.     

环孢素A与盐酸小檗碱联用预防大鼠心脏移植排斥反应

目的探讨环孢素A(CsA)与盐酸小檗碱联用对同种异基因大鼠心脏移植排斥反应的抑制效果。方法建立Wistar大鼠心脏到SD大鼠的异位(腹腔内)心脏移植模型,术后单独使用CsA、盐酸小檗碱以及联合使用CsA和盐酸小檗碱进行免疫抑制治疗,观察各组移植心脏的存活时间。结果单独使用不同剂量CsA者移植心脏的存活时间较安慰剂组明显延长(P<0.01);CsA和盐酸小檗碱联用组移植心脏的存活时间较单用小剂量CsA组明显延长(P<0.01);单用盐酸小檗碱组与安慰剂组相比,移植心脏存活时间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论CsA与盐酸小檗碱联用预防大鼠心脏移植后的排斥反应具有协同作用。     

大鼠肝移植排斥反应时γ干扰素及白细胞介素10的表达及意义

目的 探讨大鼠肝移植排斥反应时γ干扰素(IFN-γ)及白细胞介素10(IL-10)的表达及意义.方法 采用改良的Kamada"二袖套法"制备大鼠原位肝移植模型,同系移植组供、受者均为SD大鼠;同种异体移植组的供者为Wistar大鼠,受者为SD大鼠;另设假手术组.术后7 d处死动物,观察移植肝脏的组织学变化,检测血清IFN-γ和IL-10的含量,以及移植肝脏内IFN-γ和IL-10 mRNA的表达.结果 同种异体移植组移植肝脏有较多坏死肝细胞,汇管区及中央静脉周围可见以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,胆管上皮细胞可见胞浆空泡变性、核固缩或碎裂,整个肝小叶结构紊乱.同系移植组肝脏组织结构仅有轻度缺血再灌注损伤表现,汇管区有较少炎症细胞浸润,胆管上皮细胞结构和肝小叶结构基本正常.同种异体移植组血清IFN-γ为(386.7±14.4)Pg/ml,明显高于同系移植组的(159.8±16.5)pg/ml(P<0.05);同种异体移植组血清IL-10为(126.3±13.1)pg/ml,明显低于同系移植组的(288.3±17.1)pg/ml(P<0.05).同种异体移植组移植肝组织内IF-γ mRNA表达水平明显高于同系移植组(P<0.05),而IL-10 rnRNA表达水平明显低于同系移植组(P<0.05).结论 大鼠肝移植排斥反应时IFN-γ表达明显升高,IL-10表达明显降低;T_H1/T_H2型细胞因子的动态平衡可能在大鼠肝移植排斥反应中起着重要作用.     

白细胞介素-15在心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 探讨白细胞介素-15（IL-15）在心脏移植排斥反应中的表达及其与排斥反应的关系。方法 采用小鼠颈部心脏移植模型，随机分为2组：同基因移植组，供、受体均为C57BL／6小鼠；异基因移植组，供、受体分别为BALB／C、C57BL／6小鼠。以pactin作内参照，分别于术后第1、3、5、7天取移植心脏，用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）法观察IL-15的表达情况。结果 随着术后天数的增加，异基因移植组IL-15表达逐渐升高，第5天达高峰（与同基因移植组相比，P〈0．01）。结论 IL-15的表达与心脏移植急性排斥反应的发生发展密切相关，可作为心脏移植急性排斥反应的监测指标，对急性排斥反应的早期诊断和移植物的预后估计具有重要的临床意义。     

抑制趋化因子受体CCR5减轻小鼠同种异体移植心脏急性排斥反应的研究

目的 研究抑制趋化因子受体CCR5减轻小鼠同种异体移植心脏急性排斥反应的作用机制.方法 采用小鼠颈部心脏移植模型,将96只小鼠用随机数字表法分为4组,每组24只,供、受者各12只,A组术后给予anti-CCR5 mAb和CsA,B组术后给予anti-CCR5 mAb,C组术后给予CsA,D组为对照组,术后给予生理盐水.于术后第7d取各组移植心组织6例,检测CCR5及IL-2和IL-10的表达差异,其余6例用于观察移植心脏存活时间.结果 A、B、C组小鼠移植心脏存活时间明显延长,其CCR5及IL-2的表达较D组明显减少,IL-10的表达明显增加.结论 抑制趋化因子受体CCR5对同种异体移植心脏有明显的保护作用,可能与细胞因子的表达有关.     

血小板转化生长因子与移植心脏血管病和纤维化关系的研究

目的 探讨血小板转化生长因子(PDGF)与移植心脏排斥反应之间的关系.方法 建立大鼠颈部心脏移植的动物模型.采用供体脾细胞(SPC)和环磷酰胺(CP)以及环孢素A(CsA)治疗移植受体,在移植术后的不同时间,采集移植心脏,对移植心脏血管病和心肌纤维化以及PDGF的表达水平等进行分析.结果 急性排斥反应和CsA治疗的移植组中,冠状动脉的外膜和中层有大量胶原纤维浸润,并有内膜的水肿、血管壁增厚和血管腔狭窄,PDGF在冠状血管和心脏组织中呈高水平表达.SPC和CP预处理后,移植心脏的存活时间明显延长,PDGF在冠状血管和心肌组织中呈低水平表达,移植心脏血管病和心肌纤维化明显减轻.结论 PDGF的表达水平与移植心脏血管病和心肌纤维化的严重程度密切相关,测定移植受体的PDGF水平可以预测移植器官的功能状况,为移植排斥反应的早期诊断和预防提供依据.     

氨基胍与环孢素A联用对大鼠心脏移植后急性排斥反应的影响

目的：探讨氨基胍与环孢素A联用对同种大鼠心脏移植后急性排斥反应的影响。方法：受体SD大鼠心脏移植后分为4组：（1）对照组：术后不作任何处理;（2）低剂量环孢素A（CsA)组;术后0－7d肌肉注射CsA2mg.kg^-1.d^-1;（3）氨基胍（AG）组：术后0－7d皮下注射AG600mg.kg^-1.d^-1;（4）低剂量CsA加AG组;术后0－7d肌肉注射CsA2mg.kg^-1.d^-1及皮下注射AG600mg.kg^-1.d^-1。术后4d测定急性排斥反应时移植心的诱生型一氧化氮合酶（iNOS)的表达及血清一氧化氮（NO）含量,并观察移植心存活时间。结果与低剂量环孢素A组相比较,低剂量环孢素A与氨基胍联用组不仅显著地抑制移植心iNOS表达与NO产生（P＜0．05）;而且显著地减轻急性排斥反应（P＜0．01）,延长了移植心存活时间（P＜0．05）。结论低剂量环孢素A与氨基胍联用,协同抑制急性排斥反应时移植心iNOS活性及NO产生;显著地延长移植物存活时间。     

吲哚胺2,3双加氧酶在诊断肝移植急性排斥中的作用

目的 探讨外周血吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)基因表达对大鼠肝移植急性排斥反应(AR)的诊断价值.方法 建立大鼠原位肝移植模型,分为4组:A组:同基因移植组(Wistar-Wistar,n=32);B组:异基因移植组(SD-Wistar,n=32);C组:异基因移植+长期环孢素A组(CsA,n=32);D组:异基因移植+短期CsA组(用药剂量同C组,第3天起停药,n=32).应用实时聚合酶链反应(Real-time PCR)方法 分别检测术后第0、1、2、3、4、5、7、9天外周血IDO mRNA值,同时检测各时间点血清谷草转氨酶(AST)、总胆红素(T-BIL)、碱性磷酸酶(ALP)水平,并取肝脏病理切片.结果 A组外周血IDO mRNA呈持续低水平,AST、T-BIL、ALP逐渐降至正常,病理无排斥反应.C组检测结果 与A组相似.B组IDO mRNA显著上升为术后第2天(P<0.05),AST、T-BIL、ALP值显著上升为术后4d(P<0.01),病理切片判断轻度排斥为术后5d(χ2=4.8,P<0.05).D组IDO mRNA显著上升为术后第4天(P<0.05),AST、T-BIL、ALP值显著上升为术后5d(P<0.01),病理切片判断轻度排斥为术后7d(χ2=4.8,P<0.05).结论 外周血IDO mRNA检测可较病理检查更早诊断大鼠肝移植AR的发生,且方法 简单、安全.

Abstract：

Objective To study the diagnostic value of indoleamine 2, 3-dioxygenase (IDO) gene expression in acute liver rejection in rat orthotopic liver transplantation model. Methods The rat orthotopic liver transplantation models were divided into four groups: group A, isograft transplantation group (Wistar to Wistar); group B, allograft transplantation (SD to Wistar); group C, allograft transplantation and cyclosporine; Group D, allograft transplantation and cyclosporine (the drug was withdrawn on the 3rd day after the operation). The samples (peripheral blood and liver tissue) were obtained on the operation day, 1st, 2nd, 3rd, 4th, 5th, 7th and 9th day post-operation. Luorescent quantitative polymerase chain reaction (PCR), pathological study and serum test were performed on each sample. Results In groups A and C, the IDO mRNA was expressed at a low level, aspartate aminotransferase (AST), total bilirubin (T-BIL) and alkaline phosphatase (ALP) were decreased to the normal level, and the pathological test found no acute rejection (AR). In group B, the IDO mRNA was dramatically increased on the day 2 (P<0.05), AST, T-BIL and ALP rose dramatically on the day 4 (P<0.05), and mild AR was detected on the day 5 (χ2=4.8,P<0.05). In group D, the IDO mRNA was dramatically increased on the day 4 (P<0.05), AST, T-BIL and ALP rose dramatically on the day 5 (P<0.01), and mild AR was detected on the day 7 (χ2=4.8,P<0.05). Conclusion Comparing with pathological study, detecting IDO mRNA of peripheral blood can diagnose AR of rat at earlier stage and the technique is safe and simple.     

肾移植患者术后早期应用霉酚酸酯的临床观察

目的 观察肾移植术后早期不同剂量霉酚酸酯（ＭＭＦ）与环孢素Ａ（ＣｓＡ）和泼尼松（Ｐｒｅｄ）联用预防急性排斥反应的效果及安全性。方法 将６４例肾移植患者分为３组,分别给予ＭＭＦ２．０ｇ／ｄ（Ａ组）、１．５ｇ／ｄ（Ｂ组）及Ａｚａ ５０～１００ｍｇ／ｄ（Ｃ组）,每组均联用ＣｓＡ及Ｐｒｅｄ（剂量相同）。观察肾移植术后６个月内急性排斥反应的发生率、移植肾功能及药物的副作用。结果 Ａ、Ｂ、Ｃ组急性排斥反应的发     

小剂量环孢素A联用细胞毒T淋巴细胞A4-Ig治疗器官移植排斥反应

目的　研究小剂量环孢素A(CsA)联用细胞毒T淋巴细胞A4 Ig(CTLA4 Ig)治疗器官移植排斥反应的效果。　方法　采用Ono′s方法建立大鼠心脏移植排斥反应动物模型 ,将实验动物分为 4组。A组 :对照组 ,未给予任何治疗 ;B组 :腹腔内注射CsA ,10mg·kg-1·d-1,连续 7d ;C组 :术后第 2天 1次性注射CTLA4 Ig 10 0 μg ;D组 :术后 1～ 7d连续腹腔内注射CsA ,2mg .kg-1.d-1,术后第 2天加用CTLA4 Ig 5 0 μg。观察移植心脏存活天数及术后IL 2含量和组织学变化。　 结果　A、B、C、D 4组大鼠移植心脏存活时间分别为 ( 7 2± 0 7)、( 19 4± 2 1)、( 3 1 6± 1 8)和 ( 2 4 6± 2 1)d ,与对照组相比 ,各治疗组大鼠心脏存活时间明显延长 ,差异有显著性意义 (q =3 2 7 83 ,P <0 0 5 ) ,D组与C组相比差异无显著性意义 (q =1 86,P >0 0 5 ) ;各治疗组术后IL 2含量明显减低 ,与对照组相比差异有非常显著性意义 (q=9 82 ,P <0 0 1) ;A、B、C和D组排斥反应分级分别为Ⅳ、Ⅲ、Ⅰ和Ⅰ级。　结论　CTLA4 Ig抗排斥反应能力比CsA强 ,小剂量CsA联合使用CTLA4 Ig能增强治疗排斥反应疗效 ,两者具有正协同作用。