尼美舒利对耐药胃癌细胞SGC7901/VCR的逆转作用

目的：研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对耐药胃癌细胞药物敏感性的影响及其作用机制，为COX-2抑制剂应用于胃癌的联合化疗提供支持依据。方法：以长春新碱（VCR）诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901／VCR为研究对象。应用MTT法观测尼美舒利对SGC7901／VCR耐药性的逆转作用。采用高效液相色谱（HPLC）法分析尼美舒利对SGC7901／VCR细胞内VCR浓度的影响。结果：尼美舒利能逆转耐药细胞SGC7901／VCR对长春新碱的耐药，且呈浓度依赖性，逆转倍数在尼美舒利浓度为100、200、400Izmol／L时分别为1．38、3．07、6．45倍：400μmol／L尼美舒利能增加SGC7901／VCR中VCR的浓度3．22倍。结论：尼美舒利能增加耐药细胞内VCR浓度．从而部分逆转胃癌细胞SGC7901／VCR对VCR的耐药     

shRNA干扰MDR1基因逆转胃癌细胞多药耐药性的研究

目的利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)技术沉默多药耐药基因1(multidrug resistance,MDR1),探讨其对SGC7901/L-OHP细胞株多药耐药性的逆转作用。方法采用逐步增加药物浓度法建立耐奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)的胃癌细胞株SGC7901/L-OHP,用shRNA技术沉默MDR1基因在SGC7901/L-OHP细胞中的表达,以real-time PCR检测细胞中MDR1mRNA的表达,Western blot检测细胞中P糖蛋白(P-glycopmtein,P-gp)的表达,MTT法检测转染后SGC7901/L-OHP细胞对L-OHP和5-FU的敏感性。结果shRNA沉默SGC7901/L-OHP细胞株MDR1基因后,与空白组和阴性质粒组比较,MDR1mRNA表达抑制(P0.01),且P-gp表达下调(P0.05)。干扰后的SGC7901/L-OHP细胞对L-OHP和5-FU的敏感性显著升高(P0.05)。结论shRNA可有效沉默SGC7901/L-OHP胃癌耐药细胞株MDR1基因的表达,提高耐药的胃癌细胞对化疗药的敏感性。     

As2O3对人胃癌多药耐药细胞模型的逆转耐药作用

目的体外建立人胃癌细胞多药耐药模型,研究多药耐药机制及三氧化二砷（As2O3）对其逆转耐药作用。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADM,MTT法检测SGC7901/ADM细胞对ADM、长春新碱（VCR）、紫杉醇（TAX）的敏感性及As2O3对其逆转耐药倍数,免疫细胞化学法（PV法）检测细胞P-糖蛋白（P-gp）、Caspase3表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 SGC7901/ADM细胞对ADM、VCR和TAX均耐药,耐药倍数分别是7.49、7.56及5.33。在As2O3作用48h后,3种抗癌药物对SGC7901/ADM细胞生长抑制50%时的浓度（IC50）明显降低,差异有显著性（F=169.766-1 199.812,q=6.86-70.40,P〈0.01）;耐药细胞经As2O3及环孢素A（CsA）作用后,P-gp表达明显下调,差异有显著性（F=42.870,q=7.70-21.50,P〈0.01）;As2O3高浓度组细胞中Caspase3表达上调,差异有显著性（F=7.220,q=6.63,P〈0.05）。As2O3作用组SGC7901/ADM细胞凋亡率随As2O3浓度增加而增加（F=1 986.63,q=21.23-95.08,P〈0.05）。结论 SGC7901/ADM细胞具有多药耐药性,As2O3可逆转其耐药,并呈剂量依赖性。     

CYP1B1及MDR1在两种人胃癌细胞中的差异表达

目的:比较细胞色素P4501B1(C YP1B1)及多药耐药基因(MDR1)在人胃癌细胞SGC7901和SGC7901/VCR细胞中的差异表达。方法:采用实时荧光定量PCR法检测C YP1B1及MDR1在二种人胃癌细胞中的表达情况。结果:CYP1B1及MDR1在SGC7901/VCR细胞中的表达量(0.726±0.074及0.545±0.068)明显高于SGC7901细胞(0.391±0.045及0.321±0.084,P0.05),且两者在SGC7901/VCR细胞中的表达呈明显正相关(r=0.7859,P=0.0120)。结论:CYP1B1及MDR1可能共同参与了胃癌细胞对长春新碱(vincristine,VCR)的耐药。     

胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的建立及其耐药机制研究

目的建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/DDP,并对其生物学特性及发生多药耐药的可能机制进行初步评价。方法采用逐步递增顺铂浓度持续作用法诱导获得SGC7901/DDP,采用CCK-8法检测药物敏感性,并计算半数抑制浓（IC50）和耐药指数RI,流式细胞仪分析细胞周期分布与细胞内罗丹明123积累量;采用实时荧光定量PCR检测耐药相关基因MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、 MRP-5、ERCC1、 Survivin的mRNA表达,及凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Bcl-2的mRNA的表达。用Western blotting法检测耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP与其亲代药物敏感胃癌细胞株 SGC7901凋亡相关蛋白 Survivin及耐药相关蛋白P-糖蛋白的表达。结果成功建立胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP,对顺铂的耐药指数为9.86,并对盐酸阿霉素,氟尿嘧啶交叉耐药,SGC7901/DDP细胞与亲本细胞SGC7901相比,生长缓慢,倍增时间延长,细胞周期分析发现S期细胞减少,G1、G2期细胞增多,细胞蓄积罗丹明123能力下降,MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2表达升高,细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3表达下降, Survivin、P-糖蛋白上升。结论耐药机制可能与MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2的表达上调和Bax、Caspase-3表达下调有关,以及Survivin与P-糖蛋白表达上调,提示多种耐药机制参与顺铂引起的胃癌细胞耐药。     

胃癌细胞中可溶性耐药相关钙结合蛋白表达水平对P-糖蛋白表达的影响

目的:探讨胃癌细胞中可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)的表达水平对P-糖蛋白(P-gP)表达的影响.方法:采用Western Blot分别检测sorcin高表达的sorcin转染SGC7901细胞(SGC7901-SOR)、亲代SGC7901细胞及转染sorcin反义寡核苷酸的SGC7901-SOR细胞中P-gP蛋白表达水平的变化;用MTT法研究P-gP拮抗剂维拉帕米(VRP)对SGC7901-SOR细胞药物敏感性的影响.结果:Western Blot结果显示sorcin高表达的SGC7901-SOR细胞中P-gP的表达水平较SGC7901细胞明显升高,而sorcin反义寡核苷酸抑制SGC7901-SOR细胞sorcin的表达后,其P-gP的表达水平也随之降低;MTT结果显示维拉帕米可部分逆转sorcin高表达的SGC7901-SOR细胞的耐药.结论:sorcin可能通过调节P-gp水平参与胃癌细胞耐药的形成.     

五味子提取物逆转K562／DOX细胞阿霉素耐药的实验研究

目的探讨五味子提取物对阿霉素耐药细胞株K562／DOX的耐药逆转作用。方法MTT法检测单独应用阿霉素或阿霉素与五味子提取物联合作用的K562／DOX细胞的生存率;RT-PCR检测MDR1、MRP1 mRNA表达;Western blotting检测MDR1蛋白的表达。结果与对照组相比,单独应用阿霉素组细胞的生存率未见明显变化;而阿霉素与五味子提取物联合作用组细胞存活率显著降低,MDR1、MRP mRNA表达降低;MDR1蛋白表达下降。结论五味子提取物可能通过下调MDR1、MRP水平进而逆转K562／DOX细胞对阿霉素的耐药性,增加肿瘤耐药细胞对化疗药物的敏感性。     

mdr1及bcr-abl阳性白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571耐药的逆转

为了探索bcr—abl和mdr-1阳性的白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571是否有交叉耐药及其逆转方法，采用MTT法检测STI571对K562-n／VCR细胞的抑制作用，采用多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA)、他莫西芬(TAM)、α-干扰素(IFN—α)单用及CsA与IFN—α联合应用研究对STI571耐药的逆转作用。结果表明：K562-n／VCR细胞对STI571有交叉耐药性。CsA，IFN-α，TAM3种逆转剂对其均有不同程度的逆转作用，逆转倍数分别为5．18倍、1．67倍及1．82倍。而半量CsA IFN—α对K562-n／VCR细胞STI571的逆转倍数为34．87倍。结论：多药耐药基因mdrl的扩增可以导致bcr—abl阳性白血病细胞对STI571的耐药。多药耐药逆转荆CsA，TAM和IFN-α对STI571耐药有明显的逆转作用，CsA与IFN—α半量联合对K562-n／VCR细胞的杀伤作用显超过全量CsA或IFN—α的逆转耐药作用。本研究结果提示对STI571发生耐药的患加用CsA和IFN-α可能会提高其疗效。     

低频低剂量超声逆转卵巢癌细胞多药耐药及机制研究

目的 研究低频低剂量超声逆转卵巢癌耐药细胞株(SKVO3/MDR1)多药耐药的有效性及其机制.方法 MTT法检测获得0.3 MHz,1.0 W/cm2超声辐照下逆转SKVO3/MDR1多药耐药的最适辐照时间,免疫荧光法检测最适超声辐照前后多药耐药糖蛋白P-gp的表达变化.结果 40 s为逆转肿瘤细胞多药耐药的最适超声辐照时间.最适辐照有效逆转了SKVO3／MDR1多药耐药性,显著降低了P-gp的表达(P＜0.01).结论 低频低剂量超声能有效逆转SKVO3/MDR1细胞株的多药耐药性,其机制与降低细胞膜P-gp的表达密切相关.     

中药复方君子汤联合环孢霉素A逆转白血病细胞諯562/VCR耐药性的实验研究

本研究观察中药复方君子汤(FFJZ)联合环孢霉素A(cyclosporine A,CsA)逆转白血病耐药细胞系K562/VCR细胞耐药性的效果,以便寻找有效的联合逆转剂.采用MTT法、流式细胞术研究FFJZ联合CsA逆转白血病耐药细胞系K562/VCR耐药性的作用.结果表明FFJZ联合CsA在体外对K562/VCR细胞的耐药性有明显的逆转作用(p＜0.01),能提高K562/VCR细胞对阿霉素(ADM)的敏感性,且在药物有效浓度范围内对细胞本身无毒性作用.FFJZ联合CsA对K562/VCR细胞的P-gp表达的阳性率无明显影响.结论复方君子汤联合环孢霉素A可能成为治疗白血病多药耐药的安全有效的耐药逆转药物.     

孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药及其分子机制研究

本实验室已研究证实,在细胞水平孤啡肽(OFQ)单独用药可逆转K562/ADM细胞多药耐药。本研究目的是探索OFQ联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及其与MDR1 mRNA/P-gp表达的相关性。MTT法检测OFQ和ADM单药及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测P-gp的相对表达量。结果显示,OFQ(0.1μmol/L)联合ADM(15 mg/L)后细胞增殖抑制率增加,与ADM组比较,48 h数据具有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.01);OFQ联合ADM作用于细胞后MDR1 mRNA/P-gp表达水平明显低于ADM单独用药组(P<0.01),且MDR1 mRNA(r=0.91)及P-gp(r=0.98)表达水平在48 h内呈时间依赖性。结论:OFQ联合ADM可时间依赖性的逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48 h为最佳逆转时间,逆转机制与下调MDR1 mRNA和P-gp的表达量相关。     

热疗对胃癌细胞株化疗敏感性的影响

目的:探讨热疗时胃癌细胞株对紫杉醇(paclitaxel,TAX)敏感性的变化。方法:用对TAX敏感的胃癌细胞株MKN-45经浓度梯度递增法建立胃癌TAX耐药细胞株,命名为MKN-45/TAX。采用免疫细胞化学染色法检测MKN-45/TAX和MKN-45细胞中多药耐药相关基因(multi-drug resistance gene,MDR1)的表达;采用CCK-8法检测不同温度和不同TAX浓度作用下2种细胞的增殖抑制率;采用实时荧光定量–聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法、蛋白质印迹(Western blotting)法检测经靶向siRNA处理前后MDR1 mRNA和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果:成功建立MKN-45/TAX。MDR1在MKN-45/TAX中高表达而在MKN-45中低表达。随着紫杉醇浓度的增加,其对MKN-45及MKN-45/TAX的增殖抑制率增加;42℃时紫杉醇对MKN-45/TAX的增殖抑制率降低,而对MKN-45的增殖抑制率则升高。转染MDR1 siRNA后MDR1 mRNA和P-gp的表达水平均下降。结论:热疗联合化疗可增强耐药胃癌细胞株对TAX的耐药性,而增强敏感胃癌细胞株对TAX的敏感性,其机制可能与MDR1表达有关。     

复发难治性急性白血病多药耐药性及耐药逆转的体内外研究

目的 :探讨复发难治性急性白血病多药耐药性及耐药性的逆转。方法 :采用RT PCR法检测白血病细胞的多药耐药性 ,采用MTT法进行体外药敏及耐药逆转试验。结果 :35例患者中MDR1mRNA阳性表达例数为 2 6例(74.3% ) ,体外耐药逆转环胞素组逆转率 6 4.7%、异搏定组 41.2 %、两药合用组 76 .5 % ;临床耐药逆转环胞素组逆转率 14.3%、异搏定组 45 .8%、两药合用 37.5 % ;结论 :复发难治性急性白血病MDR1mRAN高表达 ,环胞素和异搏定单用及两药联合应用体外逆转效果明显优于临床疗效 ,耐药逆转药物的剂量及给药方式可能是影响逆转疗效的重要因素     

大黄素对HL-60／ADR耐药细胞多药耐药逆转作用的研究

本研究旨在探讨大黄素（emodin）对人急性白血病HL-60／ADR耐药细胞多药耐药（mulfidrugresistance,MDR）逆转作用及其相应的作用机制。采用MTT法检测HL-60／ADR细胞对大黄素以及8种临床常用化疗药物的耐药性,比较大黄素联合化疗药物后对HL-60／ADR细胞耐药逆转效果,应用DNA倍体和DNALadder分析检测大黄素与阿霉素联合用药后细胞凋亡改变,RT-PCR和Westernblot分别检测耐药相关基因和蛋白表达变化,流式细胞术检测大黄素处理后HL-60／ADR细胞内阿霉素荧光阳性率和柔红霉素平均荧光强度（MFI）,激光共聚焦显微镜检测细胞内柔红霉素分布变化。结果表明：大黄素对HL-60／ADR耐药株和相应HL-60细胞敏感株的IC5值接近,分别为24．09±1.72μmol/L和23．18±0．87μmol／L,对阿霉素（ADR）、柔红霉素（DNR）、依托泊苷（VP16）、长春新碱（VCR）、阿糖胞苷（Ara-C）、高三尖杉酯碱（HHT）、米托蒽醌（MTZ）和吡柔比星（THP）呈现不同程度耐药。小剂量大黄素对8种药物耐药逆转倍数介于1．58-4．12之间,其中对ADR的耐药细胞逆转效果最好。大黄素与ADR联合用药组可见明显的亚二倍体凋亡峰和典型的DNA降解梯状带形成。与单药组比较,联合用药组MRP1、TOPOⅡB、GSTπ、BcL-2耐药相关基因mRNA和蛋白表达水平下调明显,细胞内ADR和DNR蓄积水平增加,胞浆和胞核DNR分布增加,该作用与大黄素呈浓度依赖性。结论：大黄素具有逆转HL-60／ADR细胞多药耐药作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因表达水平、增加细胞内化疗药物蓄积和促进细胞凋亡作用有关。     

汉防己甲素、托瑞米芬及其联合应用逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

本研究探讨汉防己甲素（Tet）、雌激素受体抑制剂托瑞米芬（Tor）及其联合应用对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用。采用噻唑蓝法（MTT）测定阿霉素（ADR）的半数抑制量,RT-PCR法检测MDR1基因mRNA表达水平,FCM检测P-gp的表达和细胞内ADR浓度。结果表明：ADR对K562/A02和K562细胞的IC50分别为57.43和1.16mg/L,Tet（1μmol/L）和Tor（2.5μmol/L）单用及两药联用处理K562/A02细胞时,ADR的IC50值分别为14.12,20.74和9.14mg/L。Tet及Tor单独作用后耐药株MDR1 mRNA下调微弱,联合用药下调效果明显。Tet及Tor均可降低P-gp蛋白的表达,且具有协同作用。Tet及Tor作用后细胞内ADR浓度增加,两药联合作用时效果增强。结论：Tet及Tor均可逆转K562/A02细胞多药耐药,联合作用时效果增强。     

胃癌多药耐药的研究进展

胃癌为我国最常见的恶性肿瘤之一,早期发现率低,多数为进展期胃癌,单纯手术常难以根治,化疗在综合治疗中发挥了重要作用,成为治疗胃癌的主要方法之一。但化疗的效果还远不够理想,原发性或获得性多药耐药（MDR）成为阻碍化疗效果提高的主要素之一。多药耐药（MDR）是指肿瘤细胞接触一种化疗药物并产生耐药性,同时对其他多种结构和作用机制不同的化疗药物也产生耐药。因此胃癌多药耐药的机制、临床意义及耐药逆转成为肿瘤研究中的热点之一。     

抗疟药氯喹增强胃癌裸鼠移植瘤对顺铂的化疗敏感性

目的：探讨抗疟药氯喹（CQ）增强顺铂（DDP）抑制胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长的作用。方法建立胃癌SGC7901细胞裸鼠异位移植瘤模型,将24只荷瘤鼠随机分为对照组、DDP组、CQ组和CQ＋DDP组。腹腔注射给药,给药后每3日测量肿瘤体积。给药结束时处死裸鼠,剥离移植瘤,称重。Western Blot检测肿瘤组织beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰcaspase3和P-gp表达,RT-PCR技术检测MDR1 mRNA水平。结果与对照组相比,DDP组移植瘤生长缓慢,体积较小,抑瘤率为47.6%,而且Beclin1和LC3表达增加,LCⅠ转换LCⅡ增多。联合氯喹后,抑瘤率提高至84.7%（P＜0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降;检测到caspase3蛋白水平升高,MDR1/P-gp表达下降（均P＜0.05）。结论氯喹能增强胃癌裸鼠移植瘤对顺铂的化疗敏感性,这一作用可能与抑制自噬活性和下调多药耐药基因MDR1/P-gp的表达有关。     

bcl-2小干扰RNA对HL-60/VCR细胞耐药性逆转的研究

为了探讨以bcl-2基因作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性,构建bcl-2基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60/VCR细胞,在G418筛选后应用Western blot进行鉴定;MTT法检测细胞转染前后生长速度和药物敏感性的变化;Western blot检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bax和耐药相关蛋白ZNRD1的表达变化.结果表明：成功构建了bcl-2的小干扰RNA载体并转染HL-60/VCR;经蛋白质水平检测证实成功建立了bcl-2低表达的白血病细胞模型;转染后的细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性增强,且低表达耐药相关蛋白ZNRD1.结论：bcl-2小干扰RNA真核表达载体能在一定程度上逆转白血病细胞的耐药性.     

小柴胡汤逆转人肝癌细胞BEL-7402／5-FU 的多药耐药作用

目的:研究小柴胡汤对BEL-7402/5-FU细胞多药耐药的逆转作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同化疗药物以及小柴胡汤对BEL-7402/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC50),计算耐药指数和小柴胡汤的逆转倍数;流式细胞仪检测细胞内阿霉素的荧光强度;RT-PCR检测mdr1基因表达;western blot检测p-gp蛋白表达。结果:BEL-7402/5-FU耐药株对5-FU和阿霉素顺铂均具有耐药性,耐药指数分别是6 501.99和31.73;0.5 mg/ml小柴胡汤和5-FU、阿霉素联合应用,其逆转倍数分别是1.66、1.50;1.0 mg/ml小柴胡汤和5-FU、阿霉素联合应用,其逆转倍数分别是3.44、5.58;小柴胡汤增强阿霉素的荧光强度;小柴胡汤降低mdr1基因表达和p-gp蛋白表达,各个浓度均具有统计学意义。结论:小柴胡汤可以抑制mdr1基因编码蛋白产物p-gp的表达,增加细胞内化疗药物的浓度,从而逆转了肝癌细胞的多药耐药性。     

c-FLIP调节TRAIL诱导胃癌细胞凋亡敏感性的研究

目的探讨凋亡抑制蛋白c-FLIP对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法采用RNAi技术干扰c-FLIP的表达,MTT法测定细胞活力、采用Hoechst 33258染色及流式细胞仪检测细胞凋亡,定量PCR和Western blot法检测c-FLIP,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(caspase-8)的表达。结果特异性的RNAi能够显著抑制c-FLIP mRNA和蛋白的表达。单独使用不同浓度TRAIL处理SGC7901细胞24 h后,发现细胞的存活率有所降低,但没有显著差异。在干扰c-FLIP表达的同时用TRAIL 100 ng/ml作用胃癌细胞SGC7901不同时间(6 h,12 h,24 h),发现作用24 h后,细胞的存活率为对照组的62.8%,显著降低(P0.05),而处理后不同时间的对照组细胞存活率无显著差异(P0.05)。凋亡实验显示在二者共同作用SGC7901细胞24 h后,能够促进细胞的凋亡。Western blot结果显示二者共同作用24 h后,c-FLIP显著降低、caspase-8及激活型caspase-8(p-18)的表达均显著升高。结论抑制c-FLIP的表达增强了TRAIL诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡。