兔角膜内皮细胞的新法培养

目的：介绍一种全新的角膜内皮细胞培养方法。方法：在体视显微镜下撕下角膜后弹力层及内皮细胞层并剪切成小块,分置于培养皿中,将盖玻片叠加在组织块上进行培养。结果：角膜内皮细胞很快自组织块迁移生长,结论：本法培养内皮细胞不需用酶,具有简便,可靠,不易污染,细胞量大的优势,值得推广。     

低能量激光对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响

目的 观察低能量激光照射对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响.方法 传代的兔角膜内皮细胞分为两组:一组为处理组,采用低能量激光照射,1次/d,连续7 d;另外一组为对照组,不行激光照射.通过扫描电镜及透射电镜等检测观察兔角膜内皮细胞经激光照射前后形态学超微结构的变化.结果 扫描电镜和透射电镜检测表明,与对照组相比,激光照射组内皮细胞表面可见丰富的微绒毛,细胞核较大,细胞核膜结构清晰,核仁明显且数目较多,染色质丰富,胞浆内细胞器发达.结论 角膜内皮细胞经低能量激光照射后的超微结构变化表明其增殖活性提高.     

屈光性角膜切除术对兔角膜内皮细胞的影响

目的：探讨ArF准分子激光对角膜内皮细胞的影响。方法：运用ArF准分子激光对15只新西兰白兔（30眼）行冰同深度（100、200、300μm）屈光性角膜切除术（PRK），通过扫描和透射电镜观察急性期角膜内皮细胞的形态和结构变化。结果：消融深度为100μm和200μm的标本中，角膜内皮细胞的形态和结构没有变化。切削深度为300μm组中扫描电镜示术后30min可见角膜内皮细胞明显水肿，面积增大（195μm^2),形态不清，内皮细胞表面微绒毛减少其细胞间的连接也不肾密。术后3d内皮细胞水肿较前减轻（169μm^2)，微绒毛增多。术后7d时内皮细胞恢复至正常状态（128μm^2)。结论：一定深度的准分子激光才会对角膜内皮细胞造成影响，且随着时间的推移这种损伤会得到修复。     

屈光性角膜切除术对兔角膜内皮细胞的影响

目的探讨ArF准分子激光对角膜内皮细胞的影响.方法运用ArF准分子激光对15只新西兰白兔(30眼)行不同深度(100、200、300μm)屈光性角膜切除术(PRK),通过扫描和透射电镜观察急性期角膜内皮细胞的形态和结构变化.结果消融深度为100μm和200μm的标本中,角膜内皮细胞的形态和结构没有变化.切削深度为300μm组中扫描电镜示术后30min可见角膜内皮细胞明显水肿,面积增大(195μm2),形态不清,内皮细胞表面微绒毛减少,其细胞间的连接也不紧密.术后3d内皮细胞水肿较前减轻(169μm2),微绒毛增多.术后7d时内皮细胞恢复至正常状态(128μm2).结论一定深度的准分子激光才会对角膜内皮细胞造成影响,且随着时间的推移这种损伤会得到修复.     

膜片钳技术在角膜研究中的应用进展

膜片钳技术产生于1976年,自20世纪90年代以来,这一技术被应用于角膜各层细胞的研究中．研究结果显示,在角膜上皮细胞、内皮细胞上存在着多种离子通道,它们对于维持角膜的透明性具有重要意义．在研究中,多种模式的膜片钳技术被应用其中．研究者不仅记录了角膜多种细胞的离子通道活动,还对细胞的静息膜电位和膜电容进行了测量,同时对于通道的表达调控进行了初步研究。     

揭膜法培养兔角膜内皮细胞的改进

目的探讨培养兔角膜内皮细胞的最佳方法。方法在手术显微镜下撕下兔角膜后弹力层及内皮细胞层并使之完整覆盖于盖玻片上,避免其卷曲和折叠并剪切成均匀小块,使内皮面向上置于培养瓶中进行培养。结果未加入任何促细胞分裂剂的情况下,细胞在体外生长良好,角膜内皮细胞很快自组织片迁移生长,1周后组织块周围长出细胞晕,2周内铺满瓶底,可以快速获取角膜内皮细胞。结论本法培养的内皮细胞不需用酶,具有组织片无折叠,贴壁更牢固,细胞更易移行、增殖等优点,可为角膜内皮的研究提供较多的纯内皮细胞。     

兔角膜内皮细胞移植治疗角膜内皮损伤

目的 研究兔角膜内皮细胞（CECs）移植的可行性和移植后细胞的形态和功能。方法 体外培养兔CECs并用Brdu标记后接种在Gelatin膜载体上;采用α-氰基丙烯酸脘基酯作为组织黏合剂,将接种有兔CECs的载体与机械去除了内皮细胞的自体兔角膜植片相黏合,原位缝合对21只新西兰白兔的右眼进行CECs移植;另外17只兔的右眼作为对照仅移植没有接种任何细胞的载体膜。术后1、2、4、8、12周观察兔眼角膜移植片的透明情况、眼压和植片厚度,并利用共焦显微镜进行移植细胞的形态观察和计数。观察12周后处死动物,角膜标本分别进行组织切片、免疫组织化学染色和电镜观察。结果 CECs在Gelatin膜载体上生长良好,体外培养3—5d后细胞汇合,细胞密度可以达到约2700个／mm^2。术后2周,所有植片均发生了水肿,并逐渐浑浊。CECs组植片在术后4周左右逐渐水肿减退,开始恢复透明;而对照组角膜植片则持续水肿,逐渐浑浊。术后移植细胞的密度随时间推移逐渐降低,术后12周时,移植细胞的平均密度为（2023±330）个／mm^2。Brdu单克隆抗体免疫组织化学染色显示,植片上的细胞为移植细胞。结论 Gelatin膜作为内皮细胞培养载体并进行内皮细胞移植是一种可行的方法。     

不同浓度牛磺酸对兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨牛磺酸对兔眼角膜内皮细胞的毒副作用.方法 取家兔6只(共12眼),每只眼制取6片组织片,用组织块培养法培养兔角膜内皮细胞,细胞接种于12孔培养板,分别加入2%、4%、6%、8%、10%的牛磺酸液(同一动物的左右眼加同一浓度牛磺酸溶液),设立空白对照.倒置显微镜观察角膜内皮细胞的生长情况;在培养的第1、2、4、6、8天,将部分培养细胞用Wright染色后观察细胞形态.结果 空白对照和加入2%、4%、6%牛磺酸溶液培养的角膜内皮细胞,1周后均形成内皮细胞层,细胞形态呈六角形或类圆形.加入8%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第4天时生长不良,细胞胞体小;第8天时培养细胞死亡.加入10%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第2天时出现生长不良,细胞胞体小,部分细胞已死亡.同一动物的左右眼角膜内皮细胞生长速度和细胞形态相似.结论 2%～6%牛磺酸对兔角膜内皮细胞的生长无不良影响,提示该浓度范围的牛磺酸对角膜内皮细胞无毒副作用.     

角膜内皮细胞培养的研究进展

角膜盲是当今主要的致盲原因之一，角膜的透明和脱水状态主要是依靠角膜内皮细胞(Corneal cndothelial cell，CEC)来维持．一些角膜内皮的疾病如大泡性角膜病变、Fuch’s角膜内皮营养不良、内眼手术后内皮失代偿等是导致角膜混浊和视力下降的重要原因，因此研究CEC的功能和结构具有重要意义。离体培养的CEC具有体内的角膜内细胞相同或相近的特性，是研究CEC功能的主要材料和手段．所以CEC的培养和移植成为角膜研究的热点。本文就CEC培养的研究进展综述如下。     

不同浓度牛磺酸对兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨牛磺酸对兔眼角膜内皮细胞的毒副作用。方法 取家兔6只（共12眼）,每只眼制取6片组织片,用组织块培养法培养兔角膜内皮细胞,细胞接种于12孔培养板,分别加入2%、4%、6%、8%、10%的牛磺酸液（同一动物的左右眼加同一浓度牛磺酸溶液）,设立空白对照。倒置显微镜观察角膜内皮细胞的生长情况;在培养的第1、2、4、6、8天,将部分培养细胞用Wright染色后观察细胞形态。结果 空白对照和加入2%、4%、6%牛磺酸溶液培养的角膜内皮细胞,1周后均形成内皮细胞层,细胞形态呈六角形或类圆形。加入8%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第4天时生长不良,细胞胞体小;第8天时培养细胞死亡。加入10%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第2天时出现生长不良,细胞胞体小,部分细胞已死亡。同一动物的左右眼角膜内皮细胞生长速度和细胞形态相似。结论 2%~6%牛磺酸对兔角膜内皮细胞的生长无不良影响,提示该浓度范围的牛磺酸对角膜内皮细胞无毒副作用。     

真空冷冻干燥和保存兔角膜内皮细胞活性的实验研究

目的 :观察真空冷冻干燥和保存的兔角膜的内皮细胞活性。方法 :真空冷冻干燥和保存兔角膜后 ,检测内皮细胞密度 ,存活率。结果 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜复水后 ,角膜内皮细胞密度为 (2 339± 2 0 5 .73)个 /mm2 ,存活率 78.5 7%。结论 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜经过复水后可以保持角膜内皮细胞的活性     

应用酶组织细胞化学技术对真空冷冻干燥保存兔角膜内皮细胞的研究

目的:探讨真空冷冻干燥保存法对于兔角膜内皮细胞活性的影响.方法:将冷冻及冻干保存兔角膜片分别复水及复温后,与新鲜角膜同时行内皮细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的酶组织细胞化学染色,观察3组酶活性的差异.结果:3组样本ATPase及SDH酶组化染色均呈阳性反应.实验组与对照组间ATPase和SDH酶的平均积分光密度值(IOD)差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:真空冷冻干燥保存法可使离体角膜组织保持一定的活性.与新鲜及冷冻角膜相比,冻于法有望成为一种新的角膜长期保存方法.     

兔角膜内皮细胞损伤与修复过程的形态学观察

本研究以高浓度无环鸟苷行家兔眼前房内注射，造成角膜内皮损伤，应用角膜内皮显微镜及扫描电镜观察其损伤及修复过程的形态学改变。结果表明：注药后３日，内皮细胞损伤最重，出现变性、坏死等改变，７日开始修复，１４日基本修复。     

角膜内皮细胞体外培养促增殖因素的研究进展

引言 角膜内皮细胞（CEC）是维持角膜透明的关键,一旦损伤可引起功能紊乱导致角膜水肿,使角膜部分甚至全部失去透明性。由于人类角膜内皮细胞（HCEC）几乎无增生能力,或增生能力非常弱,临床上许多仅有CEC病变的疾病如大疱性角膜病变、角膜内皮营养不良、人工晶体植入或其他内眼手术后内皮损伤过多等较难治愈,对此类疾病仅移植角膜内皮便可以达到治疗的目的。所以CEC的体外培养及移植从20世纪50年代就成为国内外眼科学者们研究的重点。     

羊膜作为载体培养血管内皮细胞替代自体角膜内皮细胞的研究

目的将羊膜作为血管内皮细胞的生长载体,探讨血管内皮细胞代替自体角膜内皮细胞生理功能的可行性,为大泡性角膜病变的治疗新方法提供实验依据.方法取实验家兔的一侧颈静脉(约3~4 cm),用0.25%胰蛋白酶 0.02?TA灌注法收集血管内皮细胞进行原代培养.取新鲜羊膜并去除其表皮细胞,剪成1.5 cm×1.5 cm大小,表皮面向上平铺于24孔培养板中,再将原代培养的血管内皮细胞传代于羊膜表面,当血管内皮细胞贴壁并长满整个羊膜表面后,我们将载体同血管内皮细胞一起移植到带有大泡性角膜病变的角膜内表面,1~2个月后观察其角膜透明度的变化.结果术后12 d左右,实验组和实验对照组(各10只)的角膜水肿及透明度有明显差别.实验组术后4~5 d时植片呈白色,高度水肿,通过植片看不见前房,10 d后,水肿开始减轻,角膜混浊开始好转,其中7只实验家兔的角膜透过植片能看见前房的组织结构.实验对照组的绝大部分角膜植片水肿加剧,部分角膜植片由于高度水肿而出现坏死溃疡,经统计学分析P<0.05,两者具有差异性.结论血管内皮细胞具有类似于角膜内皮细胞的生理功能,但其长期的功效有待于进一步的观察和探讨.     

VitE对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响

目的探讨Vitamin E对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制。方法前房内分别注入M-K液,以及含有25、50、100mol／L Vitamin E的M—K液,全眼球保存兔角膜。在保存1、3、5d后,分别进行角膜内皮细胞活性染色以及角膜内皮显微镜检查。结果保存后实验组内皮细胞存活率高于对照组。保存后各实验组的六边形细胞百分率、细胞平均密度均较对照组高。结论在角膜中期保存液中加入一定剂量的Vitamin E,能够提高内皮细胞的抗氧化能力,延长角膜的保存时间。     

中期保存的兔角膜内皮细胞的形态学观察

目的　通过对兔角膜内皮细胞形态结构的观察 ,了解中期保存对内皮细胞的影响。方法　前房内注入M K液 ,全眼球保存兔角膜。在保存 1、3、5、7d后 ,分别进行角膜内皮显微镜检查、角膜内皮细胞活性染色及电镜学检查。结果　随着保存时间的延长 ,角膜内皮细胞的活性不断降低。尤其在保存 7d后 ,角膜内皮细胞存活率及六边形细胞百分率明显下降。超微结构显示细胞膜连续性破坏 ,细胞器丢失 ,细胞死亡。结论　角膜中期保存液保存角膜的最佳时间为 1～ 5d。     

硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制。方法 前房内分别注入M-K液，以及含有3μmol／L、5μmol／L、8μmol／L亚硒酸钠的M-K液后。全眼球保存兔角膜。在保存1、3、5d后。分别行内皮细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力检测、角膜内皮细胞活性染色、角膜内皮显微镜检查。结果 保存后实验组GSH-Px活力明显高于对照组。保存3d及5d后实验组内皮细胞存活率高于对照组。内皮显微镜显示。保存后的六边形细胞百分率各实验组均较对照组高。保存5d后实验组细胞平均密度高于对照组。结论 在角膜中期保存液中加入一定剂量的硒，能够提高内皮细胞的抗氧化能力，延长角膜的保存时间。