应用催产素反义肽识别催产素体复合物

应用催产素反义肽识别催产素体复合物陆凤先王伟汤特应用催产素反义肽识别催产素体复合物@陆凤先@王伟@汤特...     

[1,6-双(L-α,-二氨基丙酸)]催产素的合成

通过7 2片段组合方式,,采用液相法合成了全新的含非蛋白质氨基酸L-α,β-二氨基丙酸(L-D ap)的催产素的类似物。合成中所需的保护氨基酸的α-氨基均采用苄氧羰基(Z)保护,L-D ap的侧链氨基采用叔丁氧羰基(Boc)保护。先用逐步增长方式采用对硝基苯酚酯法缩合得到重要中间体七肽片段,再用叠氮法缩合得到保护九肽。Z-保护用催化氢化法脱除,Boc-保护用CF3COOH脱除。共合成了含L-D ap的新化合物8个,所有寡肽都通过了氨基酸分析以及质谱确证。     

[1,6-双(L-α,β-二氨基丙酸)]催产素的合成

通过7＋2片段组合方式，采用液相法合成了全新的含非蛋白质氨基酸L—α，β-二氨基丙酸（L—Dap）的催产素的类似物。合成中所需的保护氨基酸的α-氨基均采用苄氧羰基（Z）保护，L-Dap的侧链氨基采用叔丁氧羰基（Boc）保护。先用逐步增长方式采用对硝基苯酚酯法缩合得到重要中间体七肽片段．再用叠氮法缩合得到保护九肽。Z-保护用催化氢化法脱除，Boc-保护用CF3COOH脱除。共合成了含L—Dap的新化合物8个，所有寡肽都通过了氨基酸分析以及质谱确证。     

研究C5a反义肽的理论价值和实际意义

存在于蛋白质中某些相邻片段的微小表面之间的疏水作用力可以稳定天然蛋白质的构象 ,它也是小肽与蛋白质特异性结合过程中的主要驱动力。在正义DNA链上编码亲水性氨基酸残基的密码子 ,其同一阅读框内所对应的反义DNA链上大多会编码疏水性氨基酸 ,反之亦然。Mekler Biro Blalock模型 (MBB)认为正义 反义肽的相互作用是根据Kyte&Doolittle的疏水 亲水复合指数的疏水性反互补机制 (hydrophobicanticomplementarity)而实现的。在离体和在体实验中 ,都存在有正义 反义多肽发生相互作用的现象 ,如 :一氧化氮合成酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)的钙调蛋白结构域的反义肽 ,0 .0 1～ 1 .0mmol L的浓度就能够抑制结构型和诱导型NOS ,其IC(50 )值分别为 98mmol L和 56mmol L ;内皮素受体 (endothelinreceptor ,ETR A)一个片段的反义肽ETR P1 f可抑制内皮素诱导的颈动脉和股动脉血管收缩 ,1 .0 μmol LETR P f反义肽将明显抑制ET 1的功能活性。 0 .2 5μmol L的人C5a反义肽可以保护小鼠免受rh C5a的攻击 ,单独使用rh C5a会使小鼠发生中毒反应 ,血细胞减少     

浅谈催产素的正确使用

妊娠晚期由于孕妇或胎儿的原因,需要尽早终止妊娠,常常采用催、引产,方法很多,其中催产素则是产科医生经常选用的药物.使用催产素应该注意以下几点:①首先应该明确催产素的使用范围;②有下列情况者应禁用或停用催产素引、催产;③掌握使用催产素的方法并严格控制用量.     

人过敏毒素C5a反义肽与其正义肽的相互作用研究

目的　证实过敏毒素C5a与其反义肽分子间是否确实存在选择性相互识别作用 ,进一步以反义肽分子设计的思路 ,寻找过敏毒素C5a拮抗反义多肽的依据。方法　选择人过敏毒素C5a与其受体 (C5aR)相互作用的两个功能区域 ,按照反义肽分子设计的模型 ,分别设计合成其对应的反义肽 ,并利用生物分子相互作用分析 (BIA)技术 ,对C5a正、反义间相互作用进行分析。结果　在设计合成的 4条反义肽中 ,有一条反义多肽与全长C5a以及其对应的正义肽分子间均存在选择性相互作用 ,其解离平衡常数值分别为 6 .6 2× 10 - 6 M、4 .5 0 8× 10 - 6 M。结论　过敏毒素C5a及其反义肽分子间确实存在选择性相互作用 ,从反义肽的思路寻找C5a生物学效应的拮抗多肽 ,进行新药的设计和开发是可能的。     

分娩过程中应用催产素对分娩结局的影响

目的 探讨不同剂量催产素对分娩结局的影响,从而防止滥用催产素对分娩造成不良后果.方法 选择360例正常妊娠无合并症的孕妇,其中120例未用催产素分娩者为对照组A,240例为计划分娩或促进产程进展使用催产素后分娩者为观察者,根据催产素的用量分为B组(120例,催产素用量2.5U)和C组(120例,催产素用量7.5U).观察三组剖宫产发生率、阴道难产发生率、子宫收缩过强发生率、胎儿窘迫发生率等.结果 C组的剖宫产率为41.05%,阴道难产率为14.74%,胎儿窘迫和新生儿窒息率为30.12%,产后出血率为10.53%,均明显高于A、B两组.A、B两组间上述指标相比,差异无统计学意义.结论 催产素使用剂量较大(＞5U)时,分娩异常及相关并发症、剖宫产率、产后出血率均增加.因此,应严格把握产前使用催产素的指征,控制产前的用量,合理用药.     

B7反义肽抑制同种异基因移植排斥反应的研究

目的 :探讨B7反义肽竞争抑制CD2 8 B7共刺激通路、抑制移植排斥反应的作用 ,为该反义肽在器官移植方面的应用提供实验依据。方法 :固相合成法合成含有MYPPPYmotif的B7反义肽N’ EFMYPPPYLD C’ ,纯度 95 % ,分子量 (MW)为12 71 6 ;用灭活的C5 7(H 2 d)脾细胞和体外培养新生C5 7心肌细胞作为刺激细胞 ,以适当浓度的B7反义肽处理刺激细胞后 ,再与BALB C(H 2 d)脾细胞作为应答细胞进行混合培养 ,观察此反义肽在体外抑制淋巴细胞增殖的效果 ;用此反义肽预封闭新生C5 7小鼠心肌后 ,移植到BALB C小鼠耳后 ,观察此反义肽在体内抑制移植排斥反应、延长心肌移植存活的情况。结果 :B7反义肽能抑制前述两种淋巴细胞增殖反应 ,抑制率分别为 38 4 %和 36 6 % ;并呈现出明显的剂量依赖关系 ,此反义肽预处理过的新生C5 7小鼠心肌 ,移植到BALB C小鼠 ,可较对照组平均延长 5 4天 (n =6 ,P <0 0 0 1)。结论 :人工合成的B7反义肽在体外可以通过抑制CD2 8 B7共刺激通路 ,抑制淋巴细胞的增殖 ,并可用于延长心肌移植物存活 ,为进一步研究其在移植免疫方面的应用提供了有益的启示。     

分泌高效价抗催产素单抗杂交瘤细胞系的建立

为进一步研究催产素分子的生理功能及空间结构 ,制备识别其特有表位的单抗。用改良的碳二亚胺二步法交联催产素和牛甲状腺球蛋白 ,用常规方法制备针对催产素分子的单抗 ,测定了抗体的亚类、亚型和相对亲和力 ,并采用竞争ELISA法 ,检测各株细胞分泌的单抗和几种催产素的拟似物的交叉反应程度。结果制备出了 3株分泌高效价抗体的杂交瘤细胞 4G11、 2B11和 3F1,其亚类均为IgG1,亚型均为κ型 ,相对亲和力均较高。 3株中 4G11和 2B11可以特异性地和催产素反应 ,而 3F1与AVP、VAS及ASU有较强的交叉反应。催产素单抗可用于阻断催产素的生物学功能等研究     

催产素在大细胞基底核中对大鼠学习记忆的影响

目的：探讨催产素在大细胞基底核（NBM）内对大鼠学习记忆的影响。方法：于Wistar雄性大鼠大细胞基底核内微量注入不同剂量（0,0.2,2,8nmol）的催产素及催产素拮抗剂-阿托西班（Atosiban）,然后用水迷宫检测大鼠的学习记忆能力及其量效关系。结果：NBM内注入2及8nmol催产素组的大鼠找到平台的时间（潜伏期）显著延长,0.2nmol组与对照组比较未见有显著性差异,先注入催产素拮抗剂后再注入催产素,其找到平台的时间与正常组之间没有显著性差异。结论：NBM内的催产素损害了大鼠的学习记忆能力,其作用是通过催产素受体介导的。     

米非司酮联合催产素用于中期妊娠胎膜早破难免流产患者引产的临床分析

目的探讨米非司酮联合催产素用于中期妊娠胎膜早破患者引产的临床效果。方法104例中期妊娠胎膜早破者随机分成米非司酮联合催产素引产组（A组）和催产素引产组（B组）;A组首先口服米非司酮150mg,12小时后用催产素加入5％葡萄糖液中,静脉滴注;B组用催产素加入5％葡萄糖液中。静脉滴注,8滴／min开始,以后根据宫缩情况调节速度。结果米非司酮联合催产素组与单用催产素组两组流产所用时间及成功率比较有高度显著差异（P〈0．01）。结论米非司酮联合催产素用于中期妊娠胎膜早破难免流产患者中的运用,临床效果好、痛苦少,方法简便、安全可靠、副作用小,值得推广。     

控释前列腺素E2栓剂与催产素引产效果评价

目的评价控释前列腺素E2（商品名：普贝生）栓剂引产的安全性及有效性。方法病例对照研究的方法,选择114例孕妇,其中54例采用小剂量催产素引产,60例采用普贝生,通过比较两组用药前后的宫颈Bishop评分、临产时间、第一产程时间、第二产程时间来评价其引产的有效性;通过比较两组间出现高张宫缩、过频宫缩、宫缩乏力、新生儿窒息率、胎儿窘迫发生率、剖宫产率及自然分娩率等因素来评价其引产的安全性。采用SPSS软件处理所得数据。结果普贝生组促宫颈成熟作用明显高于催产素组（显效率94.2%∶11.1%）;普贝生组临产时间（912±334分∶2309±1042分;）、第一产程时间（307±94分∶538±152）均明显短于催产素组;普贝生组剖宫产率明显低于催产素组（13.3%∶31.2%）,自然分娩率明显高于催产素组（86%∶55%）;宫缩乏力的发生率明显低于催产素组（22.2%∶6.6%）;普贝生组在高张宫缩、过频宫缩、新生儿窒息率、胎儿窘迫发生率方面与催产素组无显著差异。结论与小剂量催产素引产相比较,普贝生具有良好的促宫颈成熟作用,在足月引产的使用中是安全有效的。     

催产素减轻新生大鼠海马神经元缺氧缺血性损伤

目的:探讨催产素(oxytocin)对新生大鼠缺氧缺血性损伤后海马CA1区神经元的作用及机制。方法:采用氧糖剥夺(OGD)制备体外缺氧缺血模型,取8只7~10日龄新生大鼠的急性分离脑片(6~8片/只)随机分为4组,即对照组、OGD 20 min组、OGD 40 min组和OGD+oxytocin组,进行TO-PRO-3染色实验观察催产素对神经元的作用。另取20只新生大鼠脑片随机分为4组,分别是OGD组、OGD+oxytocin组、OGD+d VOT(催产素受体阻断剂)+oxytocin组和OGD+bicuculline(GABAA受体阻断剂)+oxytocin组,用全细胞膜片钳记录不同药物作用下海马神经元缺氧去极化的出现时间。结果:TO-PRO-3染色结果显示海马CA1区神经元死亡数量随着氧糖剥夺时间延长而增加,催产素能显著减少OGD所致的死亡神经元数目(P0.05)。全细胞膜片钳记录结果显示,催产素可使缺氧去极化时间显著延长;d VOT及bicuculline可以消除这种效应。结论:催产素能减轻新生大鼠海马CA1区神经元缺氧缺血性损伤,其机制可能是通过结合催产素受体,增强抑制性神经传递,从而产生神经保护作用。     

光学生物传感器在研究正、反义肽间选择性相互作用中的应用

目的　观察生物分子间相互作用动力学、亲和力及特异性 ,研究C5a与其反义肽的相互作用规律。方法　应用生物分子相互作用实时分析系统IAsysPlus,以反义肽R4为固定相 ,L2和rhC5a为流动相 ,采用FASTplot软件对选择结果优化的反应模式 ,计算各动力学参数值。结果　反义肽R4与配体rhC5a相互结合的KD=6 .6 2× 1 0 -6mol,直线在Y轴上的截距(解离常数 )Kdiss为 0 .0 2 2 5s-1 ;与L2的KD=4 .5 0 8× 1 0 -6mol。结论　生物传感器技术可以用于正义 反义肽之间相互作用的研究中 ,且反义肽R4可与其正义肽、与rhC5a发生特异性相互作用     

经脐静脉推注催产素防止胎盘嵌顿的临床探讨

目的 探讨经济静脉推注催产素是否可防止胎盘嵌顿于子宫颈口。方法 把第三产程超过６分钟的产女１２０人随机分成Ａ，Ｂ，Ｃ三组，Ａ组为经脐静脉推注催产素，Ｂ组为经肘静脉推注催产素，Ｃ组为臂部肌肉注射催产素。观察每组胎盘嵌顿于子宫口的例数，胎盘娩出时间及胎盘粘连徒物取胎盘的情况。     

米非司酮联合催产素用于中期妊娠胎膜早破难免流产患者引产的临床分析

目的 探讨米非司酮联合催产素用于中期妊娠胎膜早破患者引产的临床效果.方法 104例中期妊娠胎膜早破者随机分成米非司酮联合催产素引产组(A组)和催产素引产组(B组);A组首先口服米非司酮150mg,12小时后用催产紊加入5%葡萄糖液中,静脉滴注;B组用催产素加入5%葡萄糖液中,静脉滴注,8滴/min开始,以后根据宫缩情况调节速度.结果 米非司酮联合催产素组与单用催产素组两组流产所用时间及成功率比较有高度显著差异(P<0.01).结论 米非司酮联合催产素用于中期妊娠胎膜早破难免流产患者中的运用,临床效果好、痛苦少,方法简便、安全可靠、副作用小,值得推广.     

孕妇静滴催产素与新生儿黄疸的关系

本文对我院９３例新生儿发生黄疸情况,及其与孕母应用催产素的关系进行分析。结果：孕母分娩中应用催产素的４３例新生儿第３天、第５天１第７天血清胆红素均值及新生儿高胆红素血症发生率均明显高于孕母分娩中未应用催产素的５０例新生儿,且随催们素用量增加,血清胆红素均值增加,二者之间在一定范围内呈正相关。说明母亲在分娩过程中应用催们素与新生儿血胆红素有密切关系。建议临床应用催们素适时适量,并以电解质溶液为溶剂,     

计划分娩中催产素滴速自适应模糊控制

根据临床经验，将产程进展、胎儿心率和宫缩状况作为调控依据，对计划分娩中催产素滴注过程采用自适应模糊控制方法，实现：①自动识别三种异常情况并作应急处理；②对不同产程分期（潜伏／活跃期）自动改变宫缩时间间隔量化曲线；③以表格查询学习法控制催产素滴速。从实录的催产素计划分娩过程胎心宫缩图（ＣＴＧ）数据中，随机抽取６１组数据作模拟实验，结果：控制器的输入－输出关系与临床的实际记录符合率是９６．７％。     

产程中安定与催产素协同作用的效果分析

目的探讨产程中安定与催产素协同作用加速产程的临床效果。方法选择单胎头位初产妇220例,随机分为研究组与对照组各110例,研究组在产程中使用安定加催产素静脉滴注,对照组单纯用催产素静脉滴注。结果研究组阴道分娩优于对照组,两组产程时间比较,差异有显著性,两组产后出血及新生儿窒息发生率比较,差异无显著性。结论产程中使用安定可加速宫颈扩张,缩短产程加速分娩。     

催产素抑制外周刺激诱发的大鼠海马LTP及Fos蛋白表达

 目的 探讨催产素对外周刺激诱发的大鼠海马LTP及Fos蛋白表达的影响。方法 单刺激诱发海马CA1区场电位；强直刺激坐骨神经，诱发海马CA1区长时程增强场电位（LTP）。在强直刺激前于侧脑室内微量注入催产素(Oxytocin，OT)及催产素受体拮抗剂－Atosiban，观察其对LTP的影响。用免疫组化法检测海马Fos蛋白表达。结果 单刺激坐骨神经在海马CA1区诱发出潜伏期固定(171.9±33.1) ms且可重复出现的以正波为主的场电位，平均幅度(25.7±8.4) μV。强直刺激诱导LTP产生，催产素可抑制海马LTP的诱导，但预先注射Atosiban后，海马CA1区仍能出现LTP，但持续时间比对照组短。强直刺激前，海马内c-fos表达为阴性；强直刺激后，表达增强，催产素组表达则较弱，催产素加拮抗剂组也呈强阳性表达。结论 催产素抑制海马LTP的诱导，减弱c-fos的表达，而Atosiban对该效应有一定的抑制作用。提示催产素可能是通过其受体发挥作用的。