BmKNJX10对大鼠背根神经节神经元外向钾电流的影响

目的:作者运用柱层析和高效液相色谱的方法,从东亚钳蝎毒素中分离纯化获得一个长链组分BmKNJX10, 质谱报告结果显示其相对分子质量为7214。本文研究其对神经元钾电流的影响。　方法:采用全细胞膜片钳技 术,观察了BmKNJX10对大鼠背根神经节(DRG)神经元外向钾电流(IK)的作用。　结果:BmKNJX10以浓度依赖 的方式对IK有明显的促进作用。在刺激电压为+20mV时,10mg/L、30mg/L、50mg/L和70mg/LBmKNJX10对 IK的增大率分别为(17.1±3.9)%(n=4)、(25.1±6.2)%(n=4)、(45.3±2.8)%(n=5)和(70.2±11.1)%(n= 3)。　结论:BmKNJX10具有开放钾通道的功能,可能属于一个新的钾通道毒素多肽。     

和厚朴酚对小鼠背根神经节河豚毒素敏感型钠电流的影响

采用全细胞膜片钳技术,观察和厚朴酚(honokiol,Hnk)对急性分离的小鼠背根神经节上河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流及其通道动力学的影响,探讨Hnk可能的镇痛机制及作用靶点。结果显示:和厚朴酚浓度依赖性地抑制TTX-S钠电流,30 μmol/L和厚朴酚可以使稳态激活曲线向较正电压方向偏移达10.2 mV,通道失活后恢复时间明显延长,但对稳态失活动力学特征无明显的影响。     

糖尿病大鼠背根神经节神经元TTX-R钠离子通道电流变化及意义

目的:通过研究大鼠糖尿病神经病理性疼痛(DNP)中背根神经节(DRG)神经元TTX-R钠离子通道特征的变化,以探讨此疾病引起痛觉过敏可能的发生机制。方法:8只SD大鼠腹腔注射链尿佐菌素诱导制作糖尿病神经病理性疼痛模型(DNP组),取L5⁶DRG,贴壁消化法行神经元培养,电生理全细胞膜片钳记录离子通道电流;8只同月龄大鼠为正常对照。结果:大鼠糖尿病神经病理性疼痛小直径DRG神经元TTX-R INa电流密度较对照组增高。与对照组比较激活曲线向超极化移动3.9 mV(P<0.05),DNP组具有重复放电的神经元的比率增加。结论:大鼠糖尿病神经病理性疼痛小直径DRG神经元TTX-R钠通道电流的变化是痛觉过敏形成的原因之一。     

东亚钳蝎毒素多肽纯化组份BmK AS-1对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠通道电流的作用

目的 研究国产东亚钳蝎（ｂｕｔｈｕｓ ｍａｒｔｅｎｓｉ Ｋａｒｓｃｈ,ＢｍＫ）毒素多肽的纯化单体组分ＢｍＫ ＡＳ－１对大鼠奶神经节（ＤＲＧ）神经元河豚素不敏感（ＴＴＸ－Ｒ）钠电流的作用。方法 采用膜片箝全细胞记录方法,观察ＢｍＫ ＡＳ－１对单个ＤＲＧ细胞ＴＴＸ－Ｒ钠电流幅值的影响。结果 ＢｍＫ ＡＳ－１剂量依赖地抑制ＴＴＸ－Ｒ钠电流,且高剂量（１０μｇ／ｍｌ）ＢｍＫ ＡＳ－１几乎完全抑制ＴＴＸ－Ｒ     

地昔帕明对大鼠背根神经节神经元钠电流的影响

目的:研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠背根神经节神经元电压依赖性钠电流的影响。方法:分离单个大鼠背根神经节,应用全细胞膜片钳技术观察地昔帕明对内向钠电流(INa)的影响。结果:地昔帕明浓度依赖性地抑制INa,即分别加入10,50,100μmol/L的DMI可使钠电流的抑制率达(5.56±0.62)%,(54.67±13.39)%和(86.63±16.08)%,并且,50μmol/L的DMI可使INa稳态失活曲线左移,V1/2分别由对照组的-(43.71±0.79)mV降低至-(47.91±1.14)mV,k值无明显变化。结论:DMI浓度依赖性地抑制背根神经节神经元Na+通道,并改变通道的失活,这可能是其影响痛觉传导通路,产生镇痛作用的机制之一。     

缺氧对小鼠背根神经节细胞IK电流的影响

目的:探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法:应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录IK电流。结果:当小细胞缺氧时,钾通道在3 min之内即可发生变化,表现为绝大多数(86%,6/7)细胞的IK减弱,1个细胞(14%,1/7)的IK电流增强;缺氧1 min时IK减弱,3 min时产生最大抑制。当测试电位从 10 mV至 70 mV时,急性缺氧显著性降低IK,IK电流密度降低最大幅度从(304.4±122.9)降为(253.9±106.4)pA.pF-1,但IK稳态激活曲线无明显变化。结论:急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞IK电流,而IK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。     

缺氧对小鼠背根神经节细胞ⅠK电流的影响

目的：探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法：应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录ⅠK电流。结果：当小细胞缺氧时,钾通道在3min之内即可发生变化,表现为绝大多数（86％,6／7）细胞的ⅠK减弱,1个细胞（14％,1／7）的ⅠK电流增强;缺氧1min时以减弱,3min时产生最大抑制。当测试电位从＋10mV至＋70mV时,急性缺氧显著性降低ⅠK,ⅠK电流密度降低最大幅度从（304．4&#177;122．9）降为（253．9&#177;106．4）pA&#183;pF^-1,但ⅠK稳态激活曲线无明显变化。结论：急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞ⅠK电流,而ⅠK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。     

硫化氢对小鼠背根神经节河豚毒素敏感型钠电流的影响

研究硫化氢(H₂S)对小鼠背根神经节(DRG)细胞河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流的影响。急性分离小鼠DRG细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察H₂S供体NaHS对TTX-S钠电流的影响。结果显示,NaHS浓度依赖性地增加TTX-S钠电流,其半数最大激活浓度(EC₅₀)为119 μmol/L,Hill系数为1.105;100 μmol/L NaHS可使TTX-S钠电流激活曲线向去极化移动约9.8 mV,稳态失活曲线向去级化方向移动约10.4 mV,但对恢复曲线无明显影响。因此,H₂S能增加TTX-S钠通道电流,并改变TTX-S钠通道稳态激活和失活动力学特征,这可能是H₂S参与疼痛发生发展的机制之一。     

多巴胺对大鼠脊髓背根神经节神经元ATP—激活电流的调制作用

目的 :研究多巴胺 (DA)对ATP -激活电流 (IATP)的调制作用。方法 :在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术 ,记录DA对IATP的影响。结果 :大部分受检细胞 (89.5 % ,77/86 )对ATP敏感 ,10 -6～ 10 -3 mol/LATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流。在此 77个细胞中 ,预加DA对IATP的影响如下 :在 5 0 .6 % (39/77)的细胞产生抑制作用 ,2 8.6 % (2 2 /77)的细胞产生增强作用 ,其余的无明显作用 (2 0 .8% ,16 /77)。在浓度 10 -7～ 10 -3 mol/L范围DA对IATP的抑制或增强作用依赖于多巴胺的浓度。胞内透析GDP - β -s上述抑制或增强作用可完全被取消。结论 :DA对IATP的抑制作用可能是由于多巴胺受体激活后经G蛋白偶联使ATP(P2X)受体磷酸化所致     

槲皮素对大鼠DRG神经元Nav1.8电流的作用及机制

研究槲皮素(Que)对大鼠脊髓背根神经节(DRG)神经元Nav1.8通道电流(I_Nav1.8)的作用。在急性分离的大鼠DRG神经元上,用全细胞膜片钳技术,观察Que干预I_Nav1.8的剂量-反应关系以及Que影响的Nav1.8通道电压依赖的激活和失活特性。结果显示Que(10,30,100 μmol/L)可浓度依赖地抑制DRG神经元I_Nav1.8峰值,峰值抑制率分别为(15.32±3.43)%,(22.92±8.24)%和(47.29±11.42)%,半数抑制浓度(IC₅₀)为121.38 μmol/L,Hill系数为0.76;100 μmol/L Que可使DRG神经元的Nav1.8通道激活曲线向去极化方向偏移了0.83 mV,失活曲线向超极化方向偏移了1.86 mV;且与干预前比,半数失活电压(V_1/2)为-(40.23±0.25)mV,有显著性差异(P<0.01)。说明Que可浓度依赖和电压依赖地抑制DRG神经元Nav1.8通道活性,进而降低痛觉信息的传递,改善慢性内脏痛。     

罗哌卡因对CCI模型鼠DRG神经元GABA 激活膜电流的影响

目的观察罗哌卡因对坐骨神经慢性压榨损伤(CCI)模型大鼠的背根神经节(DRG)神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活膜电流的影响,探讨罗哌卡因可能存在的镇痛机制。方法运用全细胞膜片钳技术,分3组记录CCI模型大鼠手术侧、手术对侧及假手术组急性新鲜分离的DRG神经元在预灌流罗哌卡因30s后,GABA受体激活电流(IGABA)的变化。结果 (1)与手术对侧、假手术组及对照组比较,CCI模型大鼠手术侧组的热缩足潜伏期显著缩短(P<0.05);(2)CCI手术对侧组DRG神经元上不同浓度(0.1~1 000μmol/L)GABA激活电流幅值显著大于手术侧组和假手术组;(3)预灌流罗哌卡因(0.1~1 000μmol/L)后CCI模型大鼠手术侧组、手术对侧及假手术组DRG神经元对100μmol/L GABA激活电流均表现为不同程度的增强作用,并且CCI手术对侧组的增强幅度显著大于手术侧组和假手术;(4)预灌流100μmol/L的罗哌卡因后CCI模型大鼠手术侧组DRG神经元GABA(0.1~1 000μmol/L)激活电流的量效曲线左移,两EC50之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论罗哌卡因对CCI模型大鼠DRG神经元GABA激活电流具有增强作用,可能是罗哌卡因产生麻醉和镇痛作用的原因之一。     

Modulation of BmKAS-1 and BmK1-3-2 to sodium channel in rat dorsal root ganglion neurons

Objective To investigate what effects BmKAS-1 (a polypeptide purified from the Chinese sc orpion Buthus martensi Karsch ［BmK］ and named as BmK activator of skeletal -muscle ryanodine receptor) and its upstream mixture BmK1-3-2 have on Na(+) c hannels in dorsal root ganglion (DRG) small diameter neurons.Methods The whole-cell patch-clamp technique was used to investigate the effects of BmKAS-1 and BmK1-3-2 on Na(+) current in rat small diameter DRG neurons.Results About 50% peak Na(+) current was suppressed by 10 μg/ml of BmK1- 3-2. 1.62 μg/ml of BmKAS-1 also blocked 50% peak Na(+) cu rrent, and there was an obvious dose-dependent relationship.Conclusion Both BmK1-3-2 and BmKAS-1 have a blocking effect on Na(+) channels, and this may one of the mechanisms for the analgetic effect of BmK1-3-2 and BmKAS-1.     

大鼠坐骨神经损伤后ATP对背根节神经元兴奋性的影响

目的　应用膜片钳全细胞记录技术 ,探讨ATP对坐骨神经损伤所引起的背根节神经元兴奋性的影响。方法　Wistar大鼠分为对照组和损伤组 ,损伤组建立大鼠坐骨神经离断模型 ,采用酶加机械分离方法急性分离背根节神经元 ,应用膜片钳全细胞记录技术测定神经元被动膜电特性 ,观察坐骨神经损伤后背根节神经元兴奋性的变化及ATP对其作用的影响。结果　与对照组比较 ,坐骨神经损伤后 1、10、10 0 μmol LATP引起神经元产生动作电位的去极化反应上升幅度比率分别为 45 8%、187%、75 %(P <0 0 1)。结论　坐骨神经损伤后背根节神经元兴奋性提高 ,ATP受体对ATP反应敏感性增强     

SiRNA抑制大鼠背根神经节神经元电压依赖型钠通道Nav1.8表达的实验研究

目的 应用小片段干扰RNA(SiRNA)转染原代培养背根神经节(DRG)神经元,观察SiRNA干扰DRG神经元基因Nav1.8表达的有效性.方法 根据RNA干扰的原理及SiRNA的设计原则,设计2个长度为21 bp的以Nav1.8基因为靶点的SiRNA(SiRNAa和SiRNAb),另选择相同长度的无义双链RNA作为阴性对照RNA.T7 RNA聚合酶的作用下体外转录合成SiRNA,阳离子脂质体转染试剂将SiRNA导人体外培养DRG神经元,于转染后48 h提取RNA,采用RT-PCR和荧光定量PCR检测Nav1.8基因的表达情况.结果 在靶向Nav 1.8的两个SiRNA序列中,SiRNAa转染神经元后导致Nav1.8基因表达显著降低(48.32±6.84)％,SiRNAb使Nav1.8表达降低(23.32±3.19)％,P均＜0.01,阴性对照SiRNA对Nav1.8的表达不产生影响.结论 利用体外转录合成的SiRNA成功转染原代培养的DRG神经元,并诱导产生内源性Nav1.8基因的特异性表达抑制.具有较高干扰效应的SiRNA片段可应用于抑制Nav1.8基因表达,进而研究Nav1.8的功能及在疼痛治疗中的作用.