植物药金边瑞香对小鼠肠道Peyer''''s结的影响

目的:采用环磷酰胺所致小鼠肠道黏膜相关淋巴组织损伤模型,观察植物药金边瑞香浸膏对小鼠肠道Peyer’s结的影响。方法:实验于2005-01/2005-08在赣南医学院分析实验室完成。44只昆明种小鼠随机分为正常组、金边瑞香组、金边瑞香 环磷酰胺组及环磷酰胺组4组,每组11只,给予正常组小鼠生理盐水灌胃,每天1次,每次0.02mL/g,连续7d;环磷酰胺组小鼠第7天1次腹腔注射100mg/kg环磷酰胺,其他同正常组;金边瑞香组用金边瑞香浸膏(浓度400g/L,由江西省中医药研究院提供,含生药量5g/mL,临用时用蒸馏水稀释至所需浓度,批号:050310)灌胃,每天1次,每次0.02mL/g,连续7d;金边瑞香 环磷酰胺组,方法同金边瑞香组和环磷酰胺组。第8天麻醉下脱颈椎处死全部动物,立即小心取出全小肠,肉眼观察其形态并计数小肠Peyer’s结的数量、随后用生理盐水冲洗肠腔,用针头小心取出Peyer’s结按常规方法制备细胞悬液后计数细胞。观察正常组、金边瑞香组、金边瑞香 环磷酰胺组及环磷酰胺组4组小鼠Peyer’s结,计数Peyer’s结细胞总数,比较Peyer’s结的数量及细胞数。结果:①正常组、金边瑞香组、金边瑞香 环磷酰胺组Peyer’s结的数目及结内细胞总数明显高于环磷酰胺组[(5.818±1.991),(7.273±1.678),(6.364±1.690),(3.818±0.874);(4.223±1.197)×109L-1,(6.658±3.758)×109L-1,(6.884±1.807)×109L-1,(1.451±1.024)×109L-1,F=14.28,9.044,P<0.05～0.001]。②金边瑞香 环磷酰胺组、金边瑞香组及正常组之间两两比较Peyer’s结的数目及结内细胞总数差别无统计学意义(P>0.05)。结论:金边瑞香可对抗环磷酰胺诱导的小鼠肠道Peyer’s结的损伤,提示金边瑞香可能对肠道黏膜免疫具有改善作用。     

天灸对肺癌小鼠骨髓有核细胞和外周白细胞的影响及其抗肿瘤作用

目的：观察天灸籍药物穴位敷贴及药物本身的治疗作用对顺铂化疗Lewis肺癌小鼠骨髓有核细胞的影响，以及肿瘤生长的抑制。 方法：实验于2005-02在北京中医药大学针灸学院针灸机理实验室进行。将40只C57BL／6J近交系小鼠随机分为4组：正常组、模型组、化疗组、天灸＋化疗组，各10只。正常组：不做肺癌移植肿瘤模型造模，不处理；模型组：只造模，不处理；化疗组：造模4d后，腹腔注射顺铂，0．2mL／只，含顺铂0．05mg，连用5d。天灸＋化疗组：在造模化疗的同时，贴天灸膏（药物组成为麝香、淫羊藿、三七、黄芪、辣椒，按1：20：20：20：40比例调配），8h／次，1次／d，共治疗11次。天灸治疗结束后次日，即第14d统一处死取材。观察天灸后各组小鼠净体质量变化、瘤质量、抑瘤率，以及天灸对化疗小鼠骨髓有核细胞、外周血白细胞的影响。 结果：40只小鼠均进入结果分析。①化疗组和天灸＋化疗组净体质量与模型组相比，明显降低，而天灸有减轻小鼠体质量下降的趋势[（21.57&;#177;0.56） g, （15.75&;#177;0.40） g,（15.03&;#177;0.63） g, t=8．35，6．78，P〈0．001]。②化疗组和天灸＋化疗组瘤质量与模型组相比，均明显降低，但天灸＋化疗组减轻的程度较大[ （2.35&;#177;0.27） g, （2.2&;#177;0.13） g, （3.44&;#177;0.28） g; t=3.56, 4.65, P 〈 0.01]；在抑瘤率方面，天灸＋化疗组亦比化疗组高（36．0％，31．7％）。③天灸＋化疗组外周白细胞数目与模型组相比明显上升[（8.32&;#177;0.55）&;#215;10^9 L^-1, （10.88&;#177;0.84）&;#215;10^9 L^-1; t=2.76, P 〈 0.05]，而化疗组外周白细胞数目较正常组明显下降[（7.38&;#177;0.56）&;#215;10^9 L^-1, （9.85&;#177;0.93）&;#215;10^9 L^-1, t=2.51, P 〈 0.05]，且天灸＋化疗组与化疗组之间有显著性差异（t=3．86，P〈0．01）。④化疗组骨髓有核细胞数目与模型组相比明显减少[（3.36&;#177;0.72）&;#215;10^6 L^-1, （1.77&;#177;0.33）&;#215;10^6 L^-1, t=2,96, P 〈 0.05]，而天灸＋化疗组的骨髓有核细胞数目，比化疗组明显升高[（3.37&;#177;0.48）&;#215;10^6 L^-1, t=2.43, P 〈 0.05]。 结论：天灸膏有增强化疗抗肿瘤的作用，减轻化疗的毒副作用。这种辅助治疗效果可能与显著提高化疗处理中肺癌模型小鼠骨髓有核细胞数目，以及提高化疗过程中肺癌小鼠血液白细胞数目有关。     

不同剂量活血祛瘀剂对小鼠免疫功能影响的差异

目的：分析活血祛瘀剂对小鼠细胞及体液免疫功能的影响。方法：实验于2005—01／06在泰山医学院分析实验室完成。选择昆明种小白鼠80只，按随机抽签法分为8组，即活血祛瘀剂3．0g/kg，1．5g/kg，0．75g/kg组、通塞脉片组、活血祛瘀剂3．0g/kg＋环磷酰胺组、活血祛瘀剂1．5g/kg＋环磷酰胺组、免疫低下模型组及正常对照组，每组10只。（D活血祛瘀剂3．0g／kg，1．5g/kg，0．75g／kg组及活血祛瘀剂3．0g／kg＋环磷酰胺组、活血祛瘀剂1．5g/kg＋环磷酰胺组小鼠分别给予10mL／kg的活血祛瘀剂（主要有黄芪、丹参、葛根等组成）3．0g/kg，1．5g/kg，0．75g／kg，3．0g／kg，1．5g/kg灌胃，1次／d，连续14d。其中后两组小鼠均于给药后第3天腹腔注射环磷酰胺（75mg／kg）1次。②通塞脉片组给予1．05g/kg通塞脉片灌胃，1次／d，连续14d。③免疫低下模型组于实验第5天腹腔注射环磷酰胺（75mg／kg）1次，制备免疫低下模型。④正常对照组每日给予等量的生理盐水。通过巨噬细胞吞噬功能实验、溶血素水平（以吸光度413表示）测定及淋巴细胞转化率（以吸光度。表示）实验，观察活血祛瘀剂对小鼠免疫功能的影响。结果：纳入80只小鼠全部进入结果分析，无脱失。①各组小鼠巨噬细胞吞噬率比较：活血祛瘀剂3．0g／kg组显著高于正常对照组[（29．40&;#177;11．510）％，（19．10＋9．231）％，（P〈0．01）1。活血祛瘀剂3．0g/kg＋环磷酰胺组、活血祛瘀剂1．5g/kg＋环磷酰胺组均显著高于免疫低下模型组[（22．90&;#177;9．267）％，（19．50＋6．485）％，（9．00＋3．091）％，（P〈0．01）]。②各组小鼠血清溶血素水平（吸光度413）比较：活血祛瘀剂3．0，0．75g/kg组均显著高于正常对照组[0．680&;#177;0．015，0．570&;#177;0．068，0．403&;#177;0．045，（P〈0．01）]。活血祛瘀剂3．0g／kg＋环磷酰胺组、活血祛瘀剂1．5g／kg＋环磷酰胺组均显著高于免疫低下模型组[0．519&;#177;0．032，0．387&;#177;0．041，0．290&;#177;0．068，（P〈0．01）1。③各组小鼠脾淋巴细胞转化率（吸光度，570-630）比较：活血祛瘀剂3．0g／kg组显著高于正常对照组[0．530&;#177;0．060，0．458&;#177;0．048，（P〈0．01）1。活血祛瘀剂3．0g/kg＋环磷酰胺组，活血祛瘀剂1．5g/kg＋环磷酰胺组均显著高于免疫低下模型组[0．647&;#177;0．036，0．555&;#177;0．038，0．225&;#177;0．043，（P〈0．01）]。结论：不同剂量的活血祛瘀剂虽对正常小鼠免疫指标的影响有所不同，但对免疫抑制剂引起的细胞和体液免疫功能低下均有一定的保护和促进作用。     

琼玉膏干预实验肺癌小鼠骨髓抑制的效应

背景：骨髓抑制是应用抗肿瘤药物治疗的主要副反应。目的：观察传统中药方琼玉膏对实验性肺癌小鼠化疗导致的骨髓抑制的干预效应。设计：随机对照试验。单位：暨南大学医学院。材料：实验于2001—03／10在暨南大学医学院中心试验室完成。选用48只健康的6～8周龄C57／BL小鼠。方法：使用癌细胞接种的方法制造小鼠肺癌模型，造模后随机均分3组，每组16只。①对照组，接种后次日用生理盐水0．2mL灌胃，同时以5μL／g体质量腹腔注射生理盐水，1次／d。②化疗组，顺氨氯铂20mg，用生理盐水稀释成0．2g／L，以5μL／g体质量腹腔注射，1次／d；同时以生理盐水0．2mL灌胃，1次／d。③联合组，除按化疗组用顺氨氯铂外，同时用琼玉膏0．2mL灌胃，1次／d。于用药后21d，检测外周血红细胞、白细胞、血小板数及骨髓有核细胞计数。主要观察指标：各组小鼠外周血红细胞计数、白细胞计数、血小板计数及骨髓有核细胞计数。结果：对照组有3只，化疗组有4只，联合组有4只未成瘤，被排除。在实验过程中对照组、化疗组各有2只死亡，联合组也有1只死亡，进入结果分析数对照组为11只、化疗组为10只、联合组为11只。①联合组及对照组的外周血红细胞、白细胞及血小板皆明显高于化疗组[红细胞：（8．54&;#177;0．81），（8．65&;#177;0．77），（4．56&;#177;1．00）]&;#215;10^12L^-1；白细胞：[（9．04&;#177;0．60），（9．14&;#177;0．71），（3．31&;#177;0．96）]&;#215;10^9L^-1；血小板：[（949．09&;#177;111．31），（955．54&;#177;87．13），（399．30&;#177;131．36）1&;#215;10^9L^-1，P〈0．01]。②化疗组骨髓有核细胞数明显低于联合组与对照组[（5．30&;#177;1．12），（10．51&;#177;1．15），（14．36&;#177;1．02）]&;#215;10^6，P〈0．01）。而联合组与对照组相比，对照组又高于联合组（P〈0．05）。结论：琼玉膏能提高肺癌小鼠化疗后外周血红细胞、白细胞、血小板及骨髓有核细胞计数，改善化疗所致的骨髓抑制状况，但尚不能完全拮抗化疗的骨髓抑制。     

淫羊藿、鹌鹑复方对免疫力低下小鼠免疫功能的影响

目的：观察验方淫羊藿、鹌鹑复方对免疫力低下小鼠免疫功能的影响。 方法：实验于2005—09／10在三峡大学医学院天然药物实验室完成。①选用昆明系雄性小鼠30只，鼠龄三四个月，体质量（20&;#177;2）g。将昆明系雄性小鼠随机分为3组：空白对照组、模型组和中药复方治疗组，每组10只。②空白对照组：实验进程中正常饲养不作任何处理；模型组：腹腔内注射80mg／kg环磷酰胺造成免疫力低下模型。1次／d。同时灌服生理盐水25mL／（kg&;#183;d）；中药复方治疗组：腹腔内注射80mg／kg环磷酰胺造成免疫力低下模型，1次／d,同时灌胃淫羊藿、鹌鹑复方粉剂溶解液（复方粉末来源于淫羊藿、鹌鹑复方胶囊。由三峡大学第一临床医学院和长阳县人民医院制备，其主要成分为淫羊藿、鹌鹑、肉苁蓉等中药材。淫一鹑胶囊为医院制剂，2g／粒）25g／（kg&;#183;d）。3组均连续干预10d。③用药10d后，取其脾制成脾细胞悬液。采用流式细胞仪检测脾组织T细胞亚群。④组间计量结果差异比较采用t检验。 结果：30只小鼠均进入结果分析。①型组小鼠脾脏CD^3＋，CD^4＋ T细胞亚群百分比和CD^4＋／CD^8＋明显低于空白对照组[（36．95&;#177;2．17）％，（26．27&;#177;2．58）％，1．61&;#177;0．21；（47．11&;#177;1．72）％，（36．14&;#177;1．95）％，1．89&;#177;0．12，P〈0．05—0．01]；中药复方治疗组明显高于模型组[（44．04&;#177;2．02）％，（28．20&;#177;1．37）％，2．23&;#177;0．11。P〈0．05-0．01]。②模型组小鼠脾脏CD^8＋T细胞亚群百分比明显低于空白对照组[（16．34&;#177;1．72）％，（19．16&;#177;2．02）％，P〈0．05]。高于中药复方治疗组[（12．65&;#177;1．12）％。P〈0．01]。 结论：淫羊藿、鹌鹑复方能够显著改善免疫力低下小鼠的免疫功能。     

体外诱导骨髓间质干细胞分化为心肌样细胞及其低免疫源性实验

目的：通过体外诱导骨髓间质干细胞向心肌样细胞分化，验证其多能分化特性，检测分化后的细胞进行免疫源性。方法：①实验于2003-03／2004-09在华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科实验室完成。实验选用1月龄Wistar大鼠20只。②贴壁法体外培养骨髓间质干细胞，用化学物质5-氮杂胞苷诱导24h.免疫组化检测诱导后的细胞心肌特异性蛋白的表达，单向混合淋巴细胞反应检测诱导分化后的骨髓间质干细胞的免疫源性。③实验分组如下，对照组1：单独的反应细胞组；对照组2：刺激细胞＋反应细胞。实验组1：不同数量诱导分化后的骨髓间质干细胞1&;#215;10^7，1&;#215;10^8，1&;#215;10^9L^-1＋反应细胞；实验组2：不同数量诱导分化后的骨髓间质干细胞1&;#215;10^7，1&;#215;10^8，1&;#215;10^9L^-1＋刺激细胞＋反应细胞。以抑制率表示诱导分化后的骨髓间质干细胞的免疫调控活性。④多均数比较采用方差分析，进行方差齐检验后，均数间两两比较采用LSD法。两样本均数比较采用t检验。结果：20只大鼠均进入结果分析。①部分诱导后的细胞胞浆结蛋白，心肌特异性肌钙蛋白，连接蛋白—43免疫组化呈阳性反应。②实验组1（加入的骨髓间质干细胞为1&;#215;10^7，1&;#215;10^8，1&;#215;10^9L^-1时）同种异体淋巴细胞的每分钟脉冲值明显低于对照组1（4610．106&;#177;276．16，3704．55&;#177;159．50,2881．317&;#177;114．62，8232．333&;#177;351．71，P〈0．05），各剂量骨髓间质干细胞组间差异明显（P〈0．05）。③实验组2（加入的骨髓间质干细胞为1&;#215;10^7,1&;#215;10^8，1&;#215;10^9L^-1时）对混合淋巴细胞反应的抑制率明显高于对照组1（43．9％，55．1％，65．7％，1．65％，P〈0．05），各剂量骨髓间质干细胞组间差异明显（P〈0．05）。结论2骨髓间质干细胞具有向心肌样细胞分化的潜能，分化后的骨髓间质干细胞能呈剂量依赖性地抑制同种异体淋巴细胞增殖，可以抑制正在进行的混合淋巴细胞反应，具有低免疫源性，可用于同种异体移植。     

苦豆子总碱对大鼠实验性结肠炎CD4^＋CD25^＋,CD8^＋CD28^-表达的影响

目的：观察苦豆子总碱对实验性结肠炎大鼠的外周血和结肠组织中调节性T细胞CD4^＋CD25^＋，CD8^＋CD28^-表达的影响。方法：实验于2006—03／08在南方医科大学实验室进行。①分组：将72只SD大鼠数字表法随机分成正常对照组，模型组，5-氨基水杨酸组，苦豆子15，30，60mg／kg组共6组，每组12只。②造模：除正常对照组外，其他5组采用三硝基苯磺酸灌肠法制备结肠炎大鼠模型，正常对照组给予等量生理盐水灌肠。③给药：造模第2天开始灌胃给药，2mL／只，1次／d。5-氨基水杨酸组灌胃5-氨基水杨酸400mg／kg，苦豆子15，30，60mg／kg组灌胃酸苦豆子总碱15，30，60mg／kg，其他2组灌等量生理盐水。④取材：在第1周和第3周各组分别取6只大鼠处死，测定结肠黏膜组织和外周血中CD4^＋CD25^＋，CD8^＋CD28^-的表达水平，观察苦豆子总碱对模型大鼠急慢性期T细胞亚群的影响。结果：72只大鼠进入结果分析。①建模第1周：模型组结肠内T细胞亚群CD4^＋CD25^＋，CD4^＋CD25＋／CD25^-，CD8^＋CD28^-及CD8^＋CD28^-／CD28^＋高于正常对照组（P〈0．05，0．01），苦豆子各剂量组数据虽低于模型组，但经统计学处理后差异不显著（P〉0．05）。②建模第3周：模型组大鼠外周血中的CD8^＋CD28和CD8^＋CD28^-／CD28^＋的表达高于正常对照组和苦豆子30，60mg／kg组[CD8^＋CD28：（11.3&;#177;1．3）％，（5．4&;#177;2．2）％，（5．8&;#177;3．2）％，（6．0&;#177;4．2）％；CD8^＋CD28^＋／CD28^＋：（1．2&;#177;0．8）％．（0．4&;#177;0．1）％，（0．5&;#177;0．2）％，（0．5&;#177;0．4）％；P〈0．05，0．01]；结肠组织中的CD8^＋CD28^-和CD8^＋CD28^-／CD28^＋的表达也高于正常对照组和苦豆子30，60mg／kg组[CD8^＋CD28^-：（17．4&;#177;4．2）％，，（3．8&;#177;4．5）％，（3．9&;#177;4．0）％．（4．2&;#177;3．6）％；CD8^＋CD28^-／CD28^＋：（1．8&;#177;0．3）％，（0．7＋0．3）％．（0．7＋0．2）％，（0．7&;#177;0．3）％：P〈0．05，0．01]。结论：苦豆子总碱30，60mrg／kg能下调实验性结肠炎大鼠慢性期高表达的CD8^＋CD28-T细胞。     

金边瑞香浸膏对小鼠免疫功能影响的量效关系

目的：通过检测小鼠灌服具有抗炎症、抑菌、抗脂质过氧化和抗衰老等作用的中药金边瑞香后的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫功能的变化情况，观察不同剂量金边瑞香对小鼠免疫功能的影响及其量效关系。 方法：实验于2004—03／2004—06在江西医学院免疫学教研室完成。选用昆明小鼠60只，随机分为生理盐水对照组和1，2，4，8，16g／（kg&#183;d）金边瑞香浸膏实验组共6组，每组10只，分别灌胃0．02mkVg相应不同剂量药物或生理盐水，连续14d。每鼠腹腔注射10mL／L鸡红细胞悬液1mL，1h后麻醉下颈椎脱臼处死小鼠。取腹腔洗液0．5mL滴片，37℃温育30min，甲醇固定，瑞氏染液染色。计数100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数，计算吞噬百分率和吞噬指数。取胸腺和脾脏称重，并计算胸腺指数和脾脏指数。四甲基偶氮唑蓝比色法测定小鼠脾脏T淋巴细胞对ConA诱导的增殖反应，免疫比浊法测定血清免疫球蛋白的含量。对比各组小鼠的胸腺指数和脾脏指数、刺激指数、吞噬百分率和吞噬指数、血清IgG、IgM、IgA的含量，分析不同剂量金边瑞香对小鼠免疫功能的影响及其量效关系。 结果：纳入小鼠60只，最终进入结果分析60只，无脱失值。①金边瑞香1，2，4，8，16g/（kg&#183;d）剂量组的胸腺指数、脾脏指数和血清IgG，IgM，IgA含量与对照组相比差异无显著性（F=1．217，0．840，1．085，1．156，0．363，P〉0．05）。②金边瑞香4，8g/（kg&#183;d）剂量组T淋巴细胞增殖刺激指数明显高于对照组（1．55&#177;0．19．1．48&#177;0．09，1．22&#177;0．06，F=6．674．P〈0．01）。③金边瑞香4，8g/（kg&#183;d）剂量组的小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数明显高于对照组及1，2，16g／（kg&#183;d）剂量组[（29．13&#177;14．03）％，（40．68&#177;9．70）％，（12．72&#177;2．61）％．（15.37&#177;4．36）％．（15．18&#177;4．22）％，（20．66&#177;7．19）％，F=14．344，P〈0．01；1．62&#177;0．24，1．69&#177;0．18．1．35&#177;0．18，1．38&#177;0．19，1．29&#177;0．14，1．43&#177;0．13．F=6．511．P〈0．01]。 结论：金边瑞香具有一定的免疫调节作用。1，2，4，8，16g/（kg&#183;d）剂量金边瑞香浸膏对小鼠的非特异免疫、细胞免疫功能有明显的增强作用，8g／（kg&#183;d）剂量金边瑞香对小鼠的免疫功能增强作用最为有效。     

次声波对成骨样细胞生物学特性的影响

目的：观察100dB条件下不同频率次声波对小鼠成骨样细胞增殖和分泌功能等生物学特性的影响。方法：实验于2003-03／06在解放军第四军医大学放射生物学教研室完成。复苏培养后的细胞随机分为空白对照组、4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组。将冻存的细胞株复苏。选择对数生长期的细胞，以1&;#215;10^7L^-1细胞浓度接种在48孔培养板中，共接种4板并确定细胞贴壁。次日起每天上午8时将各组细胞放人次声仓内。4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组分别给予相应频率和声压级参数的次声作用，空白对照组在次声仓内无次声输出，30min／d。共5d。5d后进行细胞增殖计数。观察次声波作用后小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达的变化。结果：①不同参数的次声波对小鼠成骨样细胞增殖的影响：小鼠成骨样细胞的形态为不规则的多角形。受次声波作用后形态无明显改变。次声波作用第5天。4Hz100dB组、12Hz100dB组，20Hz100dB组小鼠成骨样细胞密度均明显高于空白对照组【（52．25&;#177;8．52），（50．33&;#177;7．99），（49．82&;#177;7．05），（39．92&;#177;7．38）10^7L^-1，P均〈0．051。②次声波作用后小鼠成骨样细胞骨钙素的表达情况：次声波作用5d后。4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组小鼠成骨样细胞骨钙素浓度均明显高于空白对照组『（1．4012&;#177;0．53l9），（0．8775&;#177;0．2589），（2．2575&;#177;0．8307），（0．5925&;#177;0．1725）μg／L；P=0．001，0．023，0．00051。（3）次声波作用后小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶活性的变化：次声波作用5d后．各组的小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶表达均较低，4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组与空白对照组的吸光度值基本相似（0．016&;#177;0．008，0.013&;#177;0．005。0．014&;#177;0．005．0．013&;#177;0．005．P=0．92，1．0．0．95）。结论：4．12Hz100dB次声波作用可明显促进细胞增殖，20Hz100dB次声波作用具有显著分泌骨钙素的作用。提示100dB次声波不同频率下可以促进成骨样细胞的体外增殖和分泌功能。     

外源性一氧化碳对脂多糖性大鼠肠道损伤的保护作用

目的：观察CO吸入和CO腹腔内注射两种不同的外源性给气方法中CO对脂多糖所致大鼠肠道损伤的保护作用，并探讨保护作用与自由基生成以及促炎细胞因子血小板活化因子的关系。方法：实验于2005—03／08在南京医科大学动物实验中心实验室完成，实验动物选用96只健康雄性SD大鼠，通过脂多糖静脉内注射复制脂多糖大鼠肠道损伤模型，随机数字法分为6组，对照组6只；其余各组每组18只，每组设1，3，6h三个观察时间点。分别对对照组（静脉注射等量生理盐水）、脂多糖组（5mg／kg的脂多糖静脉注射），CO吸入组（2．5&;#215;10^-4的CO吸入），CO腹腔内注射组（2mL／kg的CO一次性腹腔内注射）、脂多糖＋CO吸入组（5mg／kg的脂多糖静脉注射并2．5&;#215;10^-4的CO吸入）、脂多糖＋CO腹腔内注射组（5mg／kg的脂多糖静脉注射并2mL／kg的CO一次性腹腔内注射）在3个时间点上进行观察。应用硫代巴比妥酸法测定肠道丙二醛含量和比色法测定髓过氧化物酶活性，并应用夹心酶联免疫吸附法测定肠道血小板活化因子的变化。结果：实验大鼠96只进入实验结果。①实验大鼠肠道丙二醛含量：给予脂多糖后1，3，6h三个时点与对照组相比显著升高；脂多糖＋CO吸入组3，6h时点与脂多糖组相比分别减少；脂多糖＋CO腹腔内注射组1，3h时点与脂多糖组相比分别减少[对照组（0.614&;#177;0．057）nmol／g，1，3，6h各时点脂多糖组为（1．443&;#177;0．255），（2．747&;#177;0．385），（4．023&;#177;0．762）nmol／g，脂多糖＋CO吸入组（1．172&;#177;0．328），（1．740&;#177;0．174），（3．417&;#177;0．556）nmol／g，脂多糖＋CO腹腔内注射组（0．918&;#177;0．177），（1．857&;#177;0．320），（3．581&;#177;0．606）nmol／g，P〈0．05或0．011。②实验大鼠肠道髓过氧化物酶活性：脂多糖＋CO吸入组与脂多糖组相比3，6h显著降低；脂多糖＋CO腹腔内注射组与脂多糖组相比1，3，6h均显著降低[1，3，6h脂多糖组为（39．875&;#177;4．551），（68．080&;#177;18．670），（80．333&;#177;16．187）nkat／g，脂多糖＋CO吸入组为（31．823&;#177;5．018），（52．077&;#177;14．653）．（67．730&;#177;8．918）nkat／g，脂多糖＋CO腹腔内注射组为（29．839&;#177;4．801），（51．577&;#177;12.386），（69.814&;#177;10.669）nkat／g，P〈0．05或0．01]。②实验大鼠血小板活化因子的含量：脂多糖组1，3，6h分别比对照组升高；脂多糖＋CO吸入组较脂多糖组3，6h降低；脂多糖＋CO腹腔内注射组l，3，6h较脂多糖组降低[对照组（0．432&;#177;0．079）ng／g，l，3，6h脂多糖组分别为（0．612&;#177;0．013），（1．103&;#177;0．208），（1A66&;#177;0．135）n异／g，脂多糖＋CO吸入组分别为（0．565&;#177;0．031），（0．878&;#177;0．181），（1．308&;#177;0．087）ng／g，脂多糖＋CO腹腔内注射组分别为（0．499＋0．021），（0．772＋0．074），（1．433＋0．073）ng／g，P〈0．05或0．011。④实验大鼠动脉血COHb变化：2．5&;#215;10^-4的CO吸入和2mL／kg的CO腹腔内注射，均可使COHb升高，但均未超过10％的安全范围。⑤两种方法作用比较：腹腔内注射CO比CO吸入对于肠道影响作用迅速，而CO持续吸入对肠道作用相对持久。结论：低浓度的CO吸入和小剂量腹腔内CO注射，对肠道的血小板活化因子具有抑制作用，同时提高髓过氧化物酶的活性，增强了肠道的抗氧化能力，而对脂多糖造成的肠道损伤提供了保护作用。腹腔内注射CO作用迅速，而CO吸入则维持持久，两种方法均作用明显。     

粒细胞集落刺激因子在自体外周血干细胞移植治疗缺血性下肢血管病中的作用

目的：观察缺血性下肢血管病患者进行自体外周血干细胞移植时。应用粒细胞集落刺激因子后细胞成分的变化以及对自身身体状况的近期影响。 方法：选取2004-11／2005—04解放军第四六三医院内分泌科收治的126例接受粒细胞集落刺激因子动员的缺血性下肢血管病患者，全部接受皮下注射粒细胞集落刺激因子5-12μg（kg&;#183;d），连续4-5d。为防止血黏度增加引起心脑血管意外，在干细胞动员的同时应用低分子肝素钙5000u，皮下注射1次／d。连续4～5d。每天监测血细胞计数和凝血3项。同时采用流式细胞仪监测外周血中CD34^＋细胞数。观察并记录动员后及采集过程中、后出现的毒副反应。 结果：按意向处理分析。实验纳入126例缺血性下肢血管病患者。全部进入结果分析。①全部患者动员过程中外周血象的变化：粒细胞集落刺激因子动员前白细胞数量为（5．35&;#177;1．64）&;#215;10^9L^-1，动员第5天为（42．17&;#177;18．56）&;#215;10^9L^-1．第6天为（44．23&;#177;17．47）&;#215;10^9L^-1。动员后比动员前提高5～13倍（P〈0．01）；血红蛋白和血小板动员前后无明显变化。（爹全部患者动员后采集细胞悬液的情况：37例患者于动员第5天进行采集，单个核细胞数值和CD34^＋百分数分别为（432．68&;#177;89．36）&;#215;10^9L^-1和（0．87&;#177;0．38）％；其余89例均于第6天进行采集，单个核细胞数值和CD34^＋百分数分别为（463．71&;#177;58．33）&;#215;10^9L^-1和（0．90&;#177;0.35）％，两者基本相近（P〉0．05）。③性别、年龄和体质量对单个核细胞数值和CD34^＋细胞百分数的影响：男性患者采集的单个核细胞数值高于女性患者（P〈0．05）．而单位体质量的CD34^＋细胞数值男女基本相近；以年龄55岁为界，大于55岁和小于55岁的患者差异显著（P〈0．05）；高体质量患者采集的单个核细胞数值高于低体质量患者（P〈0．05），而单位体质量的CD34^＋细胞数值基本相似。④不良事件和副反应：主要的不良反应有骨痛、周身肌肉酸痛、乏力、头痛、失眠、食欲下降、恶心呕吐、低热。采集过程中可能出现口周、面部或四肢麻木，一般停药2～4d症状即可消失。 结论：缺血性下肢血管病患者进行自体外周血干细胞移植时。粒细胞集落刺激因子作为有效动员剂，可有效动员单个核细胞和CD34^＋细胞。绝大部分患者能够耐受．但廊任用一定剂量的抗凝剂预防不良反席的发毕．     

夜来香根茎提取物镇痛作用的实验观察

目的：探讨夜来香根茎提取物对小鼠的镇痛作用及其机制，为临床（骨科）疼痛治疗寻找新药。方法：实验于2005—03／04在赣南医学院科研中心实验室完成。①小鼠（n=40），随机分为4组，每组10只，分别腹腔注射0．02mL／g生理盐水，夜来香根茎提取物0．1mg／g，0．2mg／g，0．1mg／g氨基比林，15min后腹腔注射6g／L冰醋酸0．01mL／g，观察记录给药后15min内小鼠扭体次数。②雌性小鼠（n=40），随机分为4组，每组10只。分别腹腔注射0．02mL／g生理盐水，0．1，0．2mg／g夜来香根茎提取物，0．01mg／g吗啡，用热板法测定小鼠15，30，60min痛觉反应。③雌性小鼠（n=30），随机分为3组，每组10只，分别腹腔注射0．02mL／g生理盐水，0．004mg／g纳洛酮＋0．01mg／g吗啡，0．004mg／g纳洛酮＋0．1mg／g夜来香根茎提取物，用热板法测定小鼠15，30，60min痛觉反应。④小鼠（n=40），随机分为4组，每组10只，分别给予夜来香根茎提取物0．1mg／g，0．2mg／g及1g／L的吗啡和生理盐水于20，35，50，70min重复电刺激，用电刺激法测定痛觉反应。结果：各实验组小鼠无脱失情况。在热板法致痛作用实验中如有小鼠跳出给予排除。①小鼠扭体反应次数：0．1mg／g，0．2mg／g夜来香根茎提取物及0．1mg／g氨基比林对醋酸诱发小鼠扭体反应有非常显著的镇痛作用，给药后扭体反应次数均少于生理盐水组（20．2&;#177;10．8，14．5&;#177;7．6，7．6&;#177;4．5，50．6&;#177;15．5，P〈0．01），且夜来香根茎提取物的镇痛效果呈剂量依赖性。②热板法致小鼠痛觉反应的时间：0．1mg／g，0．2mg／g夜来香根茎提取物对热板致痛有显著的镇痛作用，给药后15，30，60min痛觉反应的时间均长于生理盐水组[（22．1&;#177;6．2），（24．6&;#177;8．8），（22．9&;#177;8．6）s；（26．2&;#177;8．0），（31．1&;#177;10．3），（294&;#177;8．7）S；（12．1&;#177;3．1），（11．9&;#177;2．8），（12．8&;#177;3．0）S，P〈0．05～0．01]，且呈剂量依赖性。纳洛酮0．004mg／g＋夜来香根茎提取物0．1mg／g组给药后各时间点痛觉反应的时间均长于生理盐水组[（28．31&;#177;6．9），（22．4&;#177;5．8），（20．1&;#177;5．5）s；（12．5&;#177;3．1），（12．8&;#177;2．8），（12．1&;#177;3．0）S，P〈0．05～0．01]。纳洛酮0．004mg／g＋吗啡0．01mg以组给药后各时间点痛觉反应的时间[（13．1&;#177;3．3），（12．9&;#177;3．1），（13．2&;#177;2．8）s]与生理盐水组相比接近。③电刺激法致小鼠镇痛率：0．1mg／g，0．2mg／g夜来香根茎提取物及吗啡组给药后20，35，50，70min镇痛率均高于生理盐水对照组[（45&;#177;5）％，（40&;#177;10）％，（35&;#177;5）％，（20&;#177;5）％；（85&;#177;15）％，（80&;#177;5）％，（60&;#177;10）％，（30&;#177;5）％；（90&;#177;10）％，（85&;#177;10）％，（75&;#177;15）％，（45&;#177;15）％；0，P〈0．01]。结论：夜来香根茎提取物具有明显的镇痛作用，其镇痛强度与氨基比林相当，且呈剂量依赖性。阿片受体拮抗剂纳洛酮可拮抗吗啡的镇痛作用，但阿片受体拮抗剂纳洛酮不能拮抗夜来香根茎提取物对热板致痛法小鼠的镇痛作用，表明夜来香根茎提取物的镇痛作用机制并非激动阿片受体而镇痛的。     

可溶性肿瘤坏死因子受体对炎性牙周膜细胞的作用

目的：分析可溶性肿瘤坏死因子受体及T淋巴细胞对炎性牙周膜细胞的作用。 方法：实验于2005-03／09在解放军第四军医大学口腔医学院口内实验室完成。免疫磁珠分离CD3^＋T淋巴细胞于解放军第四军医大学唐都医院骨科实验室完成。CD3^＋T淋巴细胞取自正常人的外周血，牙周膜成纤维细胞和淋巴细胞培养液均购自美国Gbieo公司。大肠杆菌内毒素购自Sigma公司，质粒引物合成及目的基因检测均于Takara公司完成。正常牙周膜成纤维细胞与CD3^＋T淋巴细胞共培养，加入大肠杆菌内毒素，实验组用PcDNA3．1（＋）-可溶性肿瘤坏死因子受体转染细胞的培养液培养，对照组用转染空质粒的细胞培养液培养。空白组为正常牙周膜成纤维细胞加CD3^＋T淋巴细胞、正常牙周膜成纤维细胞加内毒素、正常牙周膜成纤维细胞。噻唑蓝法检测各组细胞24h和48h的活力变化；PeDNA3．1（＋）-可溶性肿瘤坏死因子受体转染细胞后，免疫组化染色强阳性表达，转染培养液培养实验组细胞24h和48h后，噻唑蓝法检测实验组牙周膜细胞的活力变化。 结果：①正常牙周膜成纤维细胞与CD3^＋T淋巴细胞共培养，内毒素刺激正常牙周膜成纤维细胞后，细胞活性降低；培养24h和48h后。噻唑蓝法检测各组的A值：正常牙周膜成纤维细胞和CD3^＋T淋巴细胞共培养组，加入内毒素刺激，24h为4．6&;#177;0．2，48h为3．7&;#177;0．1；用PcDNA3．1（＋）-可溶性肿瘤坏死因子受体转染细胞的培养液培养，24h为7．8&;#177;0．3，48h为6．9&;#177;0．5；正常牙周膜成纤维细胞用内毒素刺激，24h为9．0&;#177;0．4；48h为8．7&;#177;0．3；单纯正常牙周膜成纤维细胞与CD3^＋T细胞共培养，24h为10．1&;#177;0．2，48h为9．8&;#177;0．5；单纯培养牙周膜成纤维细胞，24h为10．0&;#177;0．5，48h为9．2&;#177;0．1。②转染空质粒PcDNA3．1（&;#177;）的牙周膜成纤维细胞其可溶性肿瘤坏死因子受体表达不明显，而转染质粒PcDNA3．1（＋）-可溶性肿瘤坏死因子受体的牙周膜成纤维细胞其可溶性肿瘤坏死因子受体表达增强。 结论：内毒素与T淋巴细胞刺激正常牙周膜成纤维细胞可以引起肿瘤坏死因子α水平升高；可溶性肿瘤坏死因子受体对于炎症牙周膜成纤维细胞有抑制肿瘤坏死因子α作用的功能。     

夏枯草提取物对小鼠T淋巴肿瘤细胞EL-4原位凋亡的干预作用

目的：观察夏枯草提取物体内抗肿瘤的活性，初步分析其抑瘤的作用途径。方法：实验于2005—04／11在郑州大学肿瘤研究中心实验室完成。选择BALB／C小鼠50只，建立小鼠T淋巴瘤细胞EL4肿瘤模型。按随机数字表法随机分为5组，每组10只，腹腔注射给药。①夏枯草400，200，100mg／（kg&;#183;d）组小鼠分别注射夏枯草提取物400，200，100mg／（1（kg&;#183;d），连续给药8d。②环磷酰胺组小鼠注射环磷酰胺100mg／（kg&;#183;d），仅第1天给药。⑧阴性对照组小鼠注射等容量无菌生理盐水，连续注射8d。观察夏枯草提取物对荷瘤小鼠的抑瘤率以及对平均生存时间的影响。肿瘤组织病理学切片苏木精-伊红染色后进行形态学观察；应用DNA琼脂糖凝胶电泳法和原位末端标记法检测肿瘤细胞的凋亡情况，计数1000个癌细胞中的表达阳性数作为凋亡指数。结果：50只小鼠全部进入结果分析。①各组小鼠的抑瘤率比较：夏枯草100，200，400mg／（kg&;#183;d）组及环磷酰胺组的抑瘤率均显著高于阴性对照组[22．70%，67．75％，28．44%，91．09％，0（P〈0．05）1，夏枯草200mg／（kg&;#183;d）组抑瘤率最大，400mg／（kg&;#183;d）组反而降低。②各组小鼠的生存期比较：环磷酰胺及夏枯草10,0，200，400mg／（kg&;#183;d）组荷瘤小鼠的生存期均显著长于阴性对照组[（53．6&;#177;4．9，27．8&;#177;3．9，34．1&;#177;3．5，28．4&;#177;4．4，23．1&;#177;3．5）d（P〈0.05）]。夏枯草400me,／（kg&;#183;d）组对荷瘤小鼠生存期的延长作用最为明显。③各组小鼠肿瘤EL-4细胞的凋亡指数比较：夏枯草200mg／（kg&;#183;d）组小鼠肿瘤细胞凋亡指数显著高于阴性对照组[10．86&;#177;1．73，2．31&;#177;0．94（P〈0．05）]。结论：夏枯草提取物具有较强的体内抗肿瘤作用，促进肿瘤细胞凋亡可能是其作用途径。但其作用并不呈剂量依赖性，夏枯草200mg／（kg&;#183;d）组疗效最为显著，而400mg／（kg&;#183;d）剂量组可能打破了肿瘤细胞与小鼠机体之间的免疫平衡，反而造成疗效下降。     

蛇床子素对成骨样细胞UMR106增殖和分化的影响

目的：以在某种程度上可反映成骨细胞增殖的成骨样细胞UMR106为靶细胞，考察蛇床子素对其细胞形态、增殖率和分化程度的影响。方法：实验于2003-03／2004—03，在中国人民武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行。以大鼠成骨肉瘤细胞系UMR106为靶细胞，以雌二醇1&;#215;10^-8mol／L为阳性对照，同时设空白对照组，蛇床子素干预组分为1&;#215;10^-8mol／L，1&;#215;10^-7mol／L，1&;#215;10^-6mol／L3个浓度组。①调整细胞浓度为4&;#215;10^-7L^-1，接种于12孔培养板上。48h后，倒置显微镜下观察细胞形态变化。②调整细胞浓度为2&;#215;10^7L^-1，接种于96孔培养板，采用四唑盐法测定各孔的吸光度，计算平均增殖率。③调整细胞浓度为2&;#215;10^7L^-1，接种于24孔培养板，磷酸对硝基苯基质动力学法测定细胞内外碱性磷酸酶括性。上述实验每组均设8个复孔。结果：①培养基中加入蛇床子素培养48h后，与对照组相比UMR106细胞数量明显增多，核分裂期多见，1&;#215;10^-6mol／L，1&;#215;10^-7mol／L组可见细胞重叠生长，分泌基质堆积明显。②UMRl06细胞经蛇床子素处理48h后，相对于对照组，1&;#215;10^-6mol／L组增殖率为52％，1&;#215;10^-7mol／L组为37％，1&;#215;10^-8mol／L组为16％。3个给药组与对照组相比差异均有显著性（t=37．36，14．94，6．81，P〈0．01）。③UMR106细胞经蛇床子素1&;#215;10^-6mol／L和经雌二醇1&;#215;10^-8mol／L处理24h和48h后。细胞内碱性磷酸酶活性均显著高于对照组[（825．17&;#177;1234），（775．16&;#177;8．67），（715．14&;#177;14．17）μkat／g；（2415．48&;#177;15．84），（2355．47&;#177;5．67），（2285．49&;#177;7．67）μkat／g；t=16．56，10．22；20．89，34．90，P〈0．01]。④UMR106细胞在浓度为1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-7mol／L的蛇床子素及雌二醇10^-8mol／L培养24h后，细胞外碱性磷酸酶活性显著高于对照组[（781．66&;#177;50），（733．15&;#177;15．34），（728．81&;#177;9．84），（652．80&;#177;11．34）μkat／g；t=22．56，11．9，14.32,P〈0．01]。结论：蛇床子素可剂量依赖地促进UMR106细胞的增殖，刺激UMR106细胞的碱性磷酸酶活性，提示其可能具有直接促进成骨细胞增殖、分化的作用。     

吡拉西坦影响幼年大鼠慢性癫痫与学习记忆复合动物模型脑海马乙酰胆碱含量和胆碱乙酰转移酶活性变化的量效作用

背景：脑内投射至海马结构的胆碱能系统与学习记忆有关。吡拉西坦具有保护和修复大脑神经细胞的作用，可抵抗因物理因素、化学因素所致的脑功能损伤，改善学习记忆能力。目的：制备幼年慢性癫痫与学习记忆复合动物模型，观察大鼠脑海马乙酰胆碱含量、胆碱乙酰转移酶活性变化以及吡拉西坦的干预效应。设计：随机对照实验，非盲法评估。单位：河北医科大学第二医院儿科，河北医科大学中医药研究院。材料：实验于2004—07／12在河北医科大学及河北师范大学生命科学学院完成。选择Wistar幼年大鼠50只，清洁级，雌雄各半。方法：肌注马桑内脂注射液复制大鼠慢性癫痫大发作模型。每间隔3天重复肌注1次，在造模期间连续3次出现后肢站立的全身阵挛性惊厥或站立伴摔倒或全身强直一阵挛性发作的动物改为每隔14天肌注1次。选取10只大鼠为正常对照组，不进行造模，其余40只大鼠造模3个月时随机分为4组：吡拉西坦2．4g／L组、吡拉西坦4．8g／L组、苯妥英钠6g／L＋吡拉西坦4．8g／L组、造模组，每组10只。各组于造模3个月开始连续灌胃给药，1次／d，10mL／kg。吡拉西坦2．4g／L，4．8g／h组分别灌服吡拉西坦混悬液2．4g/L，4．8g/L；苯妥英钠6g／L＋吡拉西坦4．8g／L组灌服苯妥英钠6g／L及吡拉西坦悬浮液4．8g／h。造模组、正常对照组灌服10mL／kg生理盐水。用药1个月后进行相关指标检测。Morris水迷宫测试癫痫大鼠发现平台时间及搜索距离，连续测试3d，2次／d。水迷宫实验结束后，断头取脑，测定双侧海马乙酰胆碱含量，胆碱乙酰转移酶、乙酰胆碱脂酶活性用放射免疫法。主要观察指标：①Morris水迷宫测试各组大鼠发现平台时间及搜索距离。②各组大鼠海马乙酰胆碱含量，胆碱乙酰转移酶、乙酰胆碱脂酶活性。结果：50只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠搜索平台时间比较：造模组各组次相应平均搜索时间比正常对照组有不同程度的增加[（63&;#177;11）s，（40&;#177;8）s；（61&;#177;9）s，（38&;#177;7）s；（57&;#177;8）s，（36&;#177;9）s；（55&;#177;11）s，（33&;#177;10）s；（52&;#177;7）s，（30&;#177;9）s；（49&;#177;9）s，（27&;#177;6）s，P〈0．01]。苯妥英钠6g／L＋吡拉西坦4．8g/L组，吡拉西坦4．8g／L组6次搜索时间均比造模组有不同程度的减少[（4_4&;#177;9）s，（45&;#177;9）s；（43&;#177;9）s，（42&;#177;8）s；（42&;#177;7）s，（42&;#177;7）s；（40&;#177;9）s，（39&;#177;9）s；（38&;#177;7）s，（35&;#177;9）s；（35&;#177;6）s，（34&;#177;8）s,t=2．352～4．029，P〈0．05～0．01]。各给药组内随训练次数增加平均搜索时间逐渐减少。②各组大鼠平均搜索距离比较：造模组各组次相应平均搜索距离较正常对照组明显增加[（793&;#177;74）cm，（420&;#177;81）cm；（763&;#177;89）cm，（418&;#177;57）cm；（690&;#177;67）cm，（382&;#177;69）cm：（623&;#177;81）cm，（356&;#177;71）cm；（592&;#177;98）cm，（330&;#177;69）cm；（550&;#177;54）cm，（301&;#177;97）cm，P〈0．01]。苯妥英钠6g/L＋吡拉西坦4．8g／L组，吡拉西坦4．8g／L组6次平均搜索距离均比造模组有不同程度的减少[（586&;#177;91）cm,（510&;#177;89）cm；（566&;#177;70）cm,（497&;#177;76）cm；（521&;#177;84）cm,（455&;#177;56）cm；（480&;#177;74）cm,（421&;#177;63）cm；（437&;#177;51）cm，（396&;#177;79）cm；（392&;#177;79）cm，（385&;#177;48）cm，t=2．364～4．230，P〈0．05～0．01]。各给药组随训练次数增加平均搜索时间逐渐减少。③各组大鼠脑海马乙酰胆碱含量及胆碱乙酰转移酶和乙酰胆碱脂酶活性：造模组均较正常对照组明显降低[（2．2&;#177;0．7）nmol／g，（3．8&;#177;0．9）nmol／g；（503．3&;#177;103．3）pkat／g，（778．3&;#177;125．0）pkat／g；（190．0&;#177;51．7）μkat／g，（368．3&;#177;86．7）μkat／g,P〈0．01]。苯妥英钠6g／L＋吡拉西坦4．8g／L组，吡拉西坦4．8g／L组脑海马乙酰胆碱含量和乙酰胆碱脂酶活性明显高于造模组[（2．7&;#177;0．6）nmol／g，（2．9&;#177;0．6）nmol／g；（256．7&;#177;58．3）μkat／g，（306．7&;#177;88．3）μkat／g，t=3．445～4．148,P〈0．01]。吡拉西坦4．8g／L组脑海马胆碱乙酰转移酶活性[（668．3&;#177;118．3）pkat/g明显高于造模组（P〈0．01）。吡拉西坦2．4g／L组各指标与造模组基本一致。结论：慢性癫痫大鼠大发作模型具有空间学习、记忆能力下降的特点，同时伴有脑海马乙酰胆碱含量及胆碱乙酰转移酶、乙酰胆碱脂酶活性降低，说明已是学习功能障碍的良好复合模型，应用4．8g／L吡拉西坦后可增加模型大鼠脑海马乙酰胆碱含量及胆碱乙酰转移酶、乙酰胆碱脂酶活性，改善学习和记忆能力，但2．4g／L吡拉西坦效果不明显。     

药物防护电磁脉冲所致海马神经元损伤的可能性

背景：电磁脉冲照射可引起实验大鼠学习记忆能力下降，并可造成离体海马神经元的胞内钙超载，进而发生坏死和凋亡，物理屏蔽可减轻电磁辐射对实验动物的损伤，但缺乏在细胞模型上进行的药物防护研究。 目的：观察药物防护电磁脉冲致离体海马神经元损伤的可能性。 设计：随机对照动物实验。 单位：承德医学院基础部。材料：实验于2004—01／2005-01分别在军事医学科学院和承德医学院完成。实验动物选用Wistar乳鼠若干只。 方法：断头取脑分离海马组织，进行海马神经元原代培养与鉴定，原代培养的海马神经元经MK801（N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂）和尼非地平（L型钙离子通道阻断剂）预处理后进行电磁脉冲照射。电磁脉冲照射条件为6&;#215;10^4V／m，脉冲上升时间20ns，脉宽30μs，频率2．5脉冲／min，作用2min。将培养在特殊培养皿的细胞分为正常对照组、电磁脉冲照射组、MK801 20μmol／L组和MK80 120μmol／L＋尼非地平1μmol／L组。采用MTT法对细胞活力进行测定；FACS法检测细胞凋亡率；Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca^2＋]i。 主要观察指标：各组细胞内钙超载、细胞活力、细胞调亡的情况比较。 结果：①电磁脉冲组在照射后即刻的[Ca^2＋]i荧光强度显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（107．34&;#177;26．14），（54．93&;#177;16．08），P〈0．051；MK80 120μmol／L组比电磁脉冲照射组的[Ca^2＋]i荧光强度有所下降（81．29&;#177;19．96，P〈0．05），而MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol/L组的[Ca^2＋]i荧光强度呈进一步下降趋势（69．82&;#177;25．54，P〈0．05）。但两个给药组的[Ca^2＋]i荧光强度仍高于正常对照（P〈0．05）。②MK801 20μmol／L组和MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol／L组反映细胞增殖活力的吸光度值分别为0．25&;#177;0．06和0．27&;#177;0．07，明显高于电磁脉冲照射组（0．17&;#177;0．08，P〈0．05），但仍低于正常对照组（0．33&;#177;0．08，P〈0．05）。③电磁脉冲照射组在照后即刻的细胞凋亡率显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（68．63&;#177;9．04）％，（20．14&;#177;4．34）％，P〈0．011；MK801 20μmol／L组比电磁脉冲照射组的细胞凋亡率有所下降（62．12&;#177;11．08）％。MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol／L组的细胞凋亡率呈进一步下降趋势[（53．69&;#177;13．60）％，P〈0．05）1，但两个给药组的细胞凋亡率仍高于正常对照组（P〈0．01）。 结论：MK801和尼非地平预处理可部分阻断电磁脉冲所致的海马神经元损伤；细胞内钙超载在电磁脉冲损伤机制中发挥重要作用。     

不同来源人造血干/祖细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢能力的差异

目的 比较不同来源的人造血干／祖细胞在NOD／SCID小鼠体内归巢能力的差异性，并探讨其体内归巢能力与膜表面归巢相关分子CXCR4表达水平的相关性。方法 采用流式细胞术（FACS）检测新鲜脐血、冻存脐血、动员后外周血（mPB）及骨髓来源的CD34^＋细胞表面CXCR4表达水平；将荧光染料CFSE标记的人CD34^＋细胞移植人接受照射的NOD／SCID小鼠，移植后20小时检测已归巢于NOD／SCID小鼠骨髓及脾脏中不同来源的人CD34^＋细胞，计算其相应的骨髓及脾脏归巢效率；并将小鼠股骨制成组织切片，荧光显微镜下观察人CD34^＋细胞在小鼠骨髓腔内的分布。结果 新鲜脐血、冻存脐血、mPB和骨髓CD34^＋细胞膜表面CXCR4表达阳性率分别为（49.52±1．12）％。（46．12±2．29）％，（48．50±2．48）％和（65．39±1．27）％，CD34^＋细胞在NOD／SCID小鼠骨髓的归巢效率分别为（3．00±0．44）％，（2．84±0．46）％，（4．06±0．70）％及（5．76±0．52）％；在脾脏的归巢率分别为（1．88±0．12）％，（1．80±0．15）％，（1．90±0．22）％，（2．16±0．34）％。归巢的CD34^＋细胞主要分布于小鼠股骨的骨内膜区域。结论 脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平低于mPB和骨髓。经冻存复苏后脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平略有下调。脐血CD34^＋细胞在照射NOD／SCID小鼠的骨髓归巢效率低于mPB和骨髓。     

雌激素对MPP诱导的PC12细胞损伤后Bcl-2蛋白含量的影响

目的：观察雌激素在1-甲基-4-苯基-1，2，3．6-四氢吡啶（1-Methyl-4-phenyl-1，2，3,6-tetrahydropyridine，MPP^＋）引起PC12细胞损伤的过程中对凋亡抑制蛋白Bcl-2的影响，从而阐明雌激素对帕金森病的保护作用。 方法：实验于2004—03在华中科技大学同济医学院神经科实验室完成。①细胞分组：对照组；雌激素组；雌激素＋MPP^＋组；MPP^＋组。②帕金森病细胞模型的建立：用250μmol／L的MPP^＋处理细胞，造成细胞凋亡的帕金森模型。（3）应用SABC法检测PC12细胞内的Bcl-2蛋白表达，反转录-聚合酶链反虚检测Bcl-2基因表达产物的mRNA的水平，Westem blot检测Bcl-2蛋白的水平。 结果：①雌激素组Bcl-2阳性PC12细胞平均吸光度（0.438&;#177;0.065）明显高于空白对照组（0．216&;#177;0.067），雌激素＋MPP^＋组（0.283&;#177;0.036），MPP^＋组（0．112&;#177;0．034），SABC显色明显增强（P〈0．05）。②雌激素组Bcl-2基因表达产物的mRNA的水平（1.30&;#177;0．19）明显高于空白对照组（0．70&;#177;0．15），雌激素＋MPP^＋组（0.66&;#177;0.26）。MPP^＋组（0．29&;#177;0.08）（P〈0．05）。③雌激素组Bcl-2蛋白的水平（129&;#177;19）明显高于空白对照组（81&;#177;23），雌激素＋MPP^＋组（72&;#177;12），MPP^＋组（48&;#177;11）；雌激素＋MPP^＋组与空白对照组相比差异无显著性（P〉0．05）。 结论：在MPP^＋对PC12细胞损伤的过程中，雌激素通过促进凋亡抑制蛋白Bcl-2的增高，对神经细胞起保护作用。     

低浓度和高浓度1，6-二磷酸果糖对白细胞介素1β损伤胰岛细胞的影响

背景：一定浓度1，6-二磷酸果糖对白细胞介素1β损伤的胰岛具有保护作用，低浓度和高浓度的1，6-二磷酸果糖对白细胞介素1β损伤的胰岛具有不同的作用。目的：探讨低浓度和高浓度1，6-二磷酸果糖对白细胞介素1β损伤胰岛细胞的影响。设计：分组设计．对照动物实验。单位：川北医学院生理教研室。材料：实验于2004—07／2006—02在川北医学院外科肿瘤实验室和风湿免疫中心完成。选择出生1-3d的Wistar大鼠20只。方法：取鼠的胰腺，收集胰岛细胞，分为正常对照组、白细胞介素1β损伤组、白细胞介素1β＋1，25，50mmol／L 1，6-二磷酸果糖组。应用四唑盐比色法检测细胞活性；放射免疫法检测胰岛素的基础和高糖分泌量；用一氧化氮和一氧化氮合酶试剂盒分别检测各组一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性；采用Fura-2荧光检测技术测定各组[Ca^2＋]i。主要观察指标：检测胰岛细胞活性，胰岛素的基础和高糖分泌量，一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性，[Ca^2＋]浓度。结果：①白细胞介素1β损伤组、白细胞介素1β＋1，25，50mmol／L 1，6-二磷酸果糖组胰岛细胞活性（A值）明显低于正常对照组（分别为0．116&;#177;0．012，0．129&;#177;0．008，0．125&;#177;0．015，0．120&;#177;0．016，0．252&;#177;0．020．P〈0．01）；1，6-二磷酸果糖浓度过低（1mmol／L）或过高（25，50mmol／L）时胰岛细胞活性（A值）与白细胞介素1β损伤组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。②白细胞介素1β损伤组、白细胞介素-β＋1，25，50mmol／L1，6-二磷酸果糖组胰岛细胞基础分泌胰岛素量和葡萄糖刺激分泌量显著低于正常对照组[分别为（237．00&;#177;22．21），（230．83&;#177;11．58），（225．16&;#177;12．46），（220．50&;#177;15．63），（425．67&;#177;16．85）mIU/L；（90．17&;#177;6．11），（96．62&;#177;8．64），（87．66&;#177;8．24），（85．46&;#177;9．59），（204．50&;#177;10．78）mIU／L，P〈0．011，而低．高浓度1，6-二磷酸果糖组与白细胞介素1β损伤组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。③白细胞介素1β损伤组细胞上清液中一氧化氮合酶活性与一氧化氮含量明显高于正常对照组[分别为（332．07&;#177;25．34），（144．86&;#177;12．17）μkat／L；（457．64&;#177;19．29），（84．67&;#177;10．23）μmol／L，P〈0．01]，白细胞介素1β＋1，25，50mmol／L1，6-二磷酸果糖组细胞上清液中一氧化氮合酶活性和一氧化氮含量与白细胞介素1β损伤组比较差异均无显著性意义。④白细胞介素1β损伤组胰岛细胞[Ca^2＋]i浓度明显高于正常对照组[分别为（328．50&;#177;26．28），（73．42&;#177;1．79）nmol／L，P〈0．01]。1，25，50mmol／L1，6-二磷酸果糖组加入白细胞介素1β作用后的胰岛细胞[Ca^2＋]i浓度明显低于白细胞介素1β损伤组[分别为（152．72&;#177;11．86），（216．39&;#177;15．32），（233．61&;#177;21．76），（328．50&;#177;26．28）nmol／L，P〈0．01]。结论：低浓度和高浓度1，6-二磷酸果糖对白细胞介素1β损伤的胰岛细胞不具有保护作用。