骨肉瘤中PTEN的表达及意义

目的:探讨PTEN在人骨肉瘤、骨软骨瘤中表达的生物学意义及其互相关系.方法:选取30例人骨肉瘤标本,以骨软骨瘤为对照,采用免疫组化S-P法,探讨PTEN在人骨肉瘤、骨软骨瘤中的阳性表达及其与肿瘤分组、分级的关系.结果:①骨软骨瘤组PTEN阳性表达率为90.0%(9/10),骨肉瘤组阳性表达率为70.0%(21/30),两者染色阳性率差异无统计学意义(P＞0.05),染色强度比较差异有统计学意义.②骨肉瘤I级组阳性表达率为85.7%(6/7),Ⅱ、Ⅲ级组阳性表达率为65.2%(15/23),Ⅱ、Ⅲ级组与Ⅰ级组染色阳性率和染色强度相比,差异无统计学意义(P＞0.05).③骨肉瘤各型间染色结果比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:骨肉瘤的发生与PTEN异常表达有关;PTEN不可作为骨肉瘤的恶性分级、增殖的指标.     

PTEN、P16、Rhoc基因表达与骨肉瘤的关系

目的:研究PTEN、P16、Rhoc基因表达与骨肉瘤的关系。方法:选取20例骨肉瘤患者和20例骨软骨瘤患者,用免疫组化SP法检测PTEN蛋白的表达;RT-PCR法检测P16、Rhoc mRNA的表达。结果:PTEN蛋白和P16 mRNA在骨软骨瘤中的表达分别为123.00±9.26和0.80±0.02,显著高于骨肉瘤中的57.75±8.30和0.36±0.11(P<0.05);Rhoc mRNA在骨肉瘤中的表达为0.93±0.04,高于骨软骨瘤中的0.54±0.05(P<0.05)。结论:PTEN、P16、Rhoc与骨肉瘤的发生、发展以及侵袭、转移有关,且三者具有相关性。临床上联合检测PTEN、P16、Rhoc的表达对骨肉瘤的早期诊断、预后判断具有指导意义。     

PCNA和Bcl-2在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的:分析PCNA和Bcl-2在骨肉瘤组织中的表达及临床意义。方法:选取64例骨肉瘤标本为实验对象,20例正常骨组织标本作为阴性对照。用S-P免疫组织化学染色检测PCNA和Bcl-2蛋白的表达,并对相关的临床病理参数进行统计分析。结果:PCNA阳性率65.6%(42/64),Bcl-2蛋白阳性表达率为78.1%(50/64)。20例阴性对照标本中未观察到PCNA的阳性表达;Bcl-2阳性表达1例为(+)、1例为(++),阳性率为10.0%(2/20),与骨肉瘤组相比有显著性差异(P<0.05)。PCNA和Bcl-2蛋白的表达均与性别、骨肉瘤分型无关(P>0.05);与分化程度、有无肺转移和生存时间相关(P<0.05)。PCNA和Bcl-2的表达一致性占68.8%,两者表达具显著相关性(P<0.05)。结论:PCNA和Bcl-2蛋白在骨肉瘤中有较高的表达率,并且两者有明显的相关性。分化程度低的骨肉瘤患者PCNA和Bcl-2蛋白的表达强,PCNA和Bcl-2蛋白表达强者,发生肺转移的几率高,同时表达越强,预后越差。     

宫颈癌中PTEN和Bcl-2的表达及意义

目的探讨Bcl-2和PTEN在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和正常宫颈组织中表达情况及意义。方法采用组织芯片技术和免疫组织化学S-P法检测50例宫颈癌、31例CIN和20例正常宫颈组织中PTEN和Bcl-2的表达情况。结果 Bcl-2和PTEN表达定位于细胞浆和细胞核,其在宫颈癌中阳性表达率分别为82%(41/50)和32%(16/50),在CIN中的表达率分别为77%(24/31)和52%(16/31),在正常宫颈组织中表达率分别为0(0/20)和80%(16/20);两者在宫颈癌的表达情况均与淋巴结转移、临床分期及组织学分化程度相关(P均<0.05);在宫颈癌组织中Bcl-2和PTEN表达呈负相关(P<0.05)。结论随着癌前病变的进展及宫颈癌临床分期升高、病理组织学分化程度降低和淋巴结转移,PTEN和Bcl-2表达增强,说明两者与宫颈癌的发生、发展和转移密切相关。     

补肾复方对初老大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2 Bax表达的影响

目的:研究补肾复方对初老雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax表达的影响.方法:采用12月龄的Wistar雌性大鼠,随机分为模型对照组,补肾复方高、中、低剂量组,阳性对照组,另设4月龄青年对照组和18月龄老年对照组.采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)方法研究各组大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2,Bax蛋白表达的影响.结果:与青年组比较,初老组、老年组大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2表达明显降低(P＜0.05),Bax表达明显增高(P＜0.05).Bcl-2/Bax比例降低;经药物干预后,补肾复方高、中、低剂量组及阳性对照组,均能上调Bcl-2表达(P＜0.05),下调Bax表达(P＜0.05).使Bcl-2/Bax比例增高;其中高剂量组的Bcl-2,Bax变化表达明显,达到青年组水平(P＞0.05).结论:上调初老雌性大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2表达,下调Bax表达,可能是补肾复方延缓卵巢衰老的机制之一.     

双氢青蒿素对人结直肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用及机制研究

目的 研究双氢青蒿素( Dihydroartemisinine,DHA)对人结直肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及可能机制.方法将人结直肠癌LoVo细胞接种于Balb/c裸鼠皮下,建立结直肠癌模型.将造模成功裸鼠随机分为5组,即模型对照组,阳性对照组(5-Fu 20 mg/kg),DHA高、中、低剂量组(120,60,30 mg/kg).观察各组动物肿瘤的重量及抑瘤率;采用免疫组化SABC法测定各组裸鼠肿瘤组织B-cell lymphoma-leukemia-2 gene(Bcl-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果5-Fu组及DHA高、中剂量组的抑瘤率显著高于模型组(P＜ 0.01或P＜0.05);5-Fu组和DHA高剂量组Bcl-2的阳性表达率显著低于模型对照组(P＜ 0.01或P＜0.05);5-Fu组VEGF的阳性表达率显著低于模型对照组(P＜0.05).结论双氢青蒿素具有较强的抗结直肠癌活性,其作用机制可能是抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,从而刺激结直肠癌细胞凋亡.     

抑癌基因PTEN在宫颈癌中的表达及意义

目的探讨一种新的抑癌基因PTEN在人宫颈癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法,检测48例宫颈癌及癌旁正常组织石蜡切片中PTEN蛋白表达情况。经计算机图像分析,计算阳性细胞数,比较PTEN蛋白表达与临床病理特征的关系。结果PTEN蛋白表达于细胞浆。48例宫颈癌中PTEN蛋白阳性表达率40%(19/48),而癌旁正常组织阳性表达率96%(46/48),两者有显著性差异(P<0.05)。在淋巴结转移组织中PTEN蛋白阳性表达率(24%)明显低于未转移组织(52%,P<0.01),另外,PTEN蛋白表达与临床分期呈负相关趋势,而与病理分级、浆膜浸润无相关性(P均>0.05)。结论PTEN异常表达可能与部分宫颈癌发生、发展及预后有关。     

参龙汤对脑缺血大鼠学习记忆能力及海马Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察参龙汤对脑缺血大鼠学习记忆能力及大脑海马区Bcl-2和 Bax 表达的影响。方法利用双侧颈总动脉结扎的方法制备慢性脑缺血大鼠模型,50只大鼠随机分为对照组、模型组、脑复康组及参龙汤大、小剂量组。造模后药物处理4周,采用 Morris 水迷宫实验观察大鼠逃避潜伏期的时间及跨越平台的次数,采用免疫组化方法观察大鼠海马Bcl-2和 Bax 表达的变化。结果模型组大鼠逃避潜伏期时间较对照组明显延长,跨越平台次数较对照组明显减少(P＜0.01)。参龙汤大剂量组大鼠的逃避潜伏期时间较模型组明显缩短(P＜0.05),跨越平台次数明显增加(P＜0.05);参龙汤大剂量组大鼠海马 Bax 蛋白阳性表达显著低于模型组(P＜0.05),Bcl-2蛋白阳性表达则显著高于模型组(P＜0.01)。结论参龙汤可以改善脑缺血大鼠学习记忆能力,其作用机理可能与增加脑缺血大鼠海马Bcl-2蛋白阳性表达、减少Bax蛋白阳性表达有关。     

芹菜素对大鼠骨肉瘤细胞凋亡及相关蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的影响

目的:探讨芹菜素对大鼠骨肉瘤细胞凋亡及相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9及细胞色素C的影响。方法:SD大鼠50只,建立大鼠骨肉瘤模型,随机分为模型组,顺氯氨铂组(10 mg·kg-1),芹菜素低、中、高剂量组(1,2,4 mg·kg-1),每组10只,ig给药,连续给药30 d。模型组ig给等体积的生理盐水。末次给药24 h后,切取骨肉瘤组织,称质量。TUNEL法原位标记凋亡的骨肉瘤细胞;免疫组化法检测骨肉瘤组织中Bax,Bcl-2的蛋白表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测骨肉瘤组织中Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的蛋白含量。结果:与模型组比较,芹菜素低、中、高剂量组的骨肉瘤的质量降低,细胞凋亡数量明显增加,明显上调Bax,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:芹菜素可通过上调Bax,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡,从而对骨肉瘤产生治疗和抑制作用。     

子宫内膜癌中PTEN蛋白、HER-2蛋白的表达及意义

目的检测子宫内膜癌组织中PTEN蛋白及HER-2蛋白表达并探讨其意义。方法采用免疫组织化学法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中PTEN蛋白及HER-2的表达。结果子宫内膜癌组织中PTEN蛋白为缺失表达,高于正常子宫内膜组织(P<0.05),而且PTEN表达在G1级肿瘤高于G2、G3级(P均<0.05),PTEN蛋白缺失率与肿瘤组织类型有关(P<0.05),与肌层浸润、淋巴结转移及病理分期无明显关系(P均>0.05)。子宫内膜癌组织中HER-2蛋白表达为高表达,HER-2的表达与肿瘤组织学分级、病理学分期以及肿瘤浸润子宫肌层深度均显著相关(P均<0.05),其表达与组织学类型、有无淋巴结转移均无关(P均>0.05)。HER-2与PTEN的表达呈明显负相关。结论 PTEN表达缺失与临床病理参数无关,蛋白表达缺失常发生于细胞分化较差的子宫内膜癌。PTEN蛋白表达缺失与HER-2表达水平有关。     

益气活血方对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡影响的研究

目的观察益气活血方对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-Associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase 3,C-caspase 3)表达情况的影响,探讨益气活血方影响心肌细胞凋亡的作用机制。方法结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死大鼠模型,并随机分为模型组、益气活血组、培哚普利组,假手术组(即对照组,只穿线不结扎),每组大鼠10只。术后第二天开始灌胃给药,以28天作为观察时间点。小动物超声检测各组大鼠心脏结构和功能的变化,HE染色观察心肌组织病理形态变化,TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡指数,Western blot技术检测心肌梗死边缘区Bax、Bcl-2、C-caspase 3蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(left venteicular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular shortening fraction,LVFS)均显著降低(P<0.01),左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic dimension,LVESD)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)均升高(P<0.01);两用药组LVEF、LVFS相较于模型组均显著升高(P<0.01),LVESD、LVEDD均降低(P<0.01)。与假手术组相比,模型组心肌细胞凋亡指数明显上升(P<0.01);与模型组比较,益气活血组与培哚普利组大鼠心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.01)。Western blot结果显示,模型组大鼠Bax、C-caspase 3表达与假手术组相比均有明显升高(P<0.01),Bcl-2表达及Bcl-2/Bax相较于假手术组有所降低(P<0.01)。与模型组比较,益气活血组大鼠Bax蛋白表达有所下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达与Bcl-2/Bax显著升高(P<0.05,P<0.01),C-caspase 3蛋白表达有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05);相较于模型组,培哚普利组大鼠Bax表达降低(P<0.01),Bcl-2/Bax比值上升(P<0.05),Bcl-2呈升高趋势,C-caspase 3有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气活血方能够提高心肌梗死大鼠心功能,下调促凋亡蛋白Bax的表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值,从而减轻心肌凋亡损伤以保护心脏。     

当归贝母苦参丸含药血清对胃癌细胞SGC-7901抑制作用机制的研究

目的:研究不同浓度当归贝母苦参丸含药血清抑制胃癌细胞SGC-7901的机制。方法:将120只Wistar大鼠分为当归贝母苦参丸高、中、低剂量组(0.3,0.2,0.1 g·kg~(-1))和正常组,每组30只,ig 2次/d,连续给药7 d,制备含药血清,以空白血清处理胃癌细胞SGC-7901为空白组,实验组以当归贝母苦参丸含药血清高、中、低剂量组处理SGC-7901细胞后用RTq PCR技术检测环氧合酶-2(COX-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达水平、用免疫细胞化学技术检测COX-2,BAX,PTEN蛋白表达情况。结果:与正常组比较,高剂量组使SGC-7901细胞COX-2 mRNA的表达量下降68%,BAX和PTEN mRNA的表达量分别升高99.7%和85.6%(P0.05),含药血清可以降低SGC-7901细胞COX-2的阳性表达率,升高其平均灰度值,升高BAX和PTEN的阳性表达率,减低其平均灰度值(P0.05)。结论:当归贝母苦参丸含药血清能抑制胃癌细胞SGC-7901,BAX,PTEN,COX-2 mRNA和蛋白的表达。     

PTEN和MMP-2在膀胱移行细胞癌中的表达和相互关系

目的探讨PTEN和MMP-2在膀胱移行细胞癌中的表达和相互关系。方法应用SP免疫组织化学染色法检测52例膀胱移行细胞癌中PTEN和MMP-2的表达。结果PTEN和MMP-2在膀胱移行细胞癌中的阳性率分别为44%(23/52)和52%(27/52)。随着病理分级、临床分期的增高,PTEN的阳性率逐渐降低(P<0.01),MMP-2的阳性率逐渐增高(P<0.05)。在初发肿瘤和复发肿瘤中,PTEN的阳性率分别为56%(20/36)和19%(3/16)(P均<0.05),MMP-2的阳性率分别为47%(17/36)和63%(10/16)(P均>0.05)。在膀胱移行细胞癌中,PTEN和MMP-2的表达呈明显负相关(r=-0.39,P<0.01)。结论PTEN和MMP-2的阳性表达与膀胱移行细胞癌的分级、分期有关,PTEN的表达缺失和MMP-2的过表达在膀胱癌的发生、发展中起重要作用,并有助于判断预后。     

健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制

目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:10%,15%,20%健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P0.05)。与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P0.05)。结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖。     

基于益肾填精法的茸菖胶囊对无镁诱导癫痫模型自噬相关蛋白影响的研究

[目的]探讨中药茸菖胶囊抗癫痫和神经保护作用的自噬调控机制,为临床应用提供实验依据。[方法]将无镁诱导的新生SD大鼠海马神经元放电模型分为模型组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、5%茸菖胶囊组、10%茸菖胶囊组、20%茸菖胶囊组,另设正常组,给予相应处理6、12、24、72 h后,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬活性相关蛋白Beclin-1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的表达。[结果]1)Beclin-1蛋白:4个时间点模型组较正常组无显著变化(P0.05),6 h 20%茸菖胶囊组及72 h 5%茸菖胶囊组较同时点模型组显著升高(P0.05)。2)Bcl-2蛋白:6 h模型组较正常组显著降低(P0.05);12、24 h 20%茸菖胶囊组,72 h 5%、10%及20%茸菖胶囊组较模型组显著增强(P0.05或P0.01),20%茸菖胶囊组较5%及10%茸菖胶囊组增强(P0.05)。[结论]基于益肾填精法的茸菖胶囊对无镁诱导的癫痫模型神经元抗癫痫及神经元保护作用的机制可能与影响Beclin-1蛋白的表达干预自噬过程,促进Bcl-2蛋白的表达抑制细胞自噬有关。     

活血定眩丸对CSA大鼠血液流变学及小脑Bcl-2、Bax表达的影响

目的：探讨活血定眩丸对椎动脉型颈椎病大鼠血液流变学及小脑Bcl-2、Bax表达的影响。方法：SPF级大鼠75只,随机分为空白组、模型组、低剂量组、高剂量组、对照组,除正常组外,其余均采用复合法制造椎动脉型颈椎病动物模型。用药14d后,观察血液流变学指标及小脑组织Bcl-2、Bax表达。结果：与空白组比较,模型组全血粘度增高（P〈0.05）,Bax染色阳性细胞表达增加（P〈0.05）,Bcl-2未见明显表达（P〉0.05）;对照组、低剂量组、高剂量组比模型组全血粘度降低（P〈0.05）、Bax表达减少（P〈0.05）,Bcl-2有少量阳性表达（P〉0.05）。结论：活血定眩丸能能有效改善椎动脉型颈椎病模型大鼠血液流变学指标,明显抑制Bax阳性细胞的表达,上调Bcl-2/Bax的比率,在一定程度上减缓椎动脉型颈椎病小脑细胞的凋亡。     

全天麻胶囊治疗血管性痴呆大鼠的实验研究

目的观察全天麻胶囊对血管性痴呆大鼠认知能力及额叶Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨全天麻胶囊的神经保护作用。方法采用双侧颈总动脉永久结扎法制备血管性痴呆动物模型,全天麻胶囊高低剂量组分别给予灌服全天麻胶囊混悬液10 g(kg.d)及5g/(kg.d),对照组均给予等量生理盐水灌胃。以Morris水迷宫方法检测大鼠认知能力;以免疫组化方法检测大鼠额叶Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组认知能力明显下降(P<0.05),Bcl-2、Bax蛋白表达增加(P<0.05);与模型组相比,全天麻高低剂量组认知能力明显改善(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.05),Bax蛋白表达明显减少(P<0.05),其中高剂量组较低剂量组效果更明显(P<0.05)。结论血管性痴呆大鼠给予全天麻胶囊后,可以通过调节额叶Bcl-2及Bax蛋白的表达,抑制神经细胞凋亡,促进脑功能的恢复,从而改善大鼠学习记忆能力。     

茶多酚对小鼠高脂血症与脂肪肝的预防作用

目的:观察茶多酚对小鼠高脂血症和脂肪肝的预防作用。方法:实验小鼠分为正常组、高脂组、脂必妥组和茶多酚组。喂养6周后,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇脂(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇脂(HDL-c)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活力,测定肝脏匀浆液的丙二醛(MDA)含量并观察肝脏冰冻切片脂肪染色。结果:茶多酚对高脂血症小鼠血清TC,TG,LDL-c,ALT和AST值均有显著降低,HDL-C有明显升高,肝脏组织中MDA含量也有所降低,肝脏冰冻切片的脂肪染色显示茶多酚明显减少肝脏中脂肪含量。结论:茶多酚对高脂血症和脂肪肝的形成有明显的预防作用。