前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β、PTEN及Ha-ras基因mRNA检测

目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β(polβ)、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达.方法:应用RT-PCR法检测12例Pca组织及20例BPH组织中polβ、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达状况.结果:与BPH组织比较,Pca组织中polβ、Ha-ras基因mRNA表达增高,PTEN基因mRNA表达降低(P均＜0.01).Pca组织中polβ与Ha-ras基因mRNA的表达呈正相关(r=0.67,P＜0.05),PTEN与polβ、Ha-ras基因mRNA的表达呈负相关,r分别为-0.58、-0.71,P均＜0.05,结果:polβ及Ha-ras的表达上调及PTEN的表达下调是Pca发生中的重要分子事件.     

脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β、Fas、p53基因mRNA的表达

目的:研究脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β(polβ)、Fas、p53基因mRNA的表达。方法:采用RT-PCR扩增及半定量分析方法,对22例脑胶质瘤、7例良性脑肿瘤及其相应瘤旁正常脑组织中DNApolβ、Fas、p53基因mR-NA进行检测。结果:与相应瘤旁正常脑组织相比,脑胶质瘤及良性脑肿瘤组织中DNApolβ、Fas基因mRNA高表达,p53基因mRNA低表达(P均<0.01)。脑肿瘤组织中DNApolβ与Fas基因mRNA的表达呈正相关((r=0.611,P<0.05)),与p53基因mRNA的表达无关;p53与Fas基因mRNA的表达亦无关。结论:p53基因mRNA低表达及DNApolβ和Fas基因mRNA高表达与脑肿瘤的发生发展及恶性程度有关。     

前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的：研究前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况。方法：采用RT—PCR、DNA序列分析技术对12例Pca及20例BPH组织中的polβ进行检测,并利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据。结果：Pca组织中polβ突变率为4／12,BPH组织中polβ突变率为1／20。突变形式如下：①点突变：325位A→G转换(71位Glu→G1)),721位A→G转换(203位Glu→Gly),768位C→T转换(219位Gln→终止码),801位A→G转换(230位Lys→Glu),853位A→G转换(247位Glu→Gly),1071位A→G转换(320位Phe→Leu),177．188位CT→AA(22位Leu→Asn)。②58bp片段缺失(181～238位),导致移码及提前终止。结论：Pca组织中polβ的突变以点突变A→G转换为主要突变形式。181～238位的58bp的大片段缺失系国内外首次发现的突变形式DNA polβ突变可能与Pca的发生、发展密切相关。     

前列腺癌组织中PTEN蛋白的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系

目的:探讨抑癌基因PTEN蛋白在前列腺癌(Pca)组织中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系.方法: 采用免疫组织化学S-P法和DNA原位末端标记TUNEL法分别测定42例Pca及10例正常前列腺组织(NP)中PTEN蛋白的表达和肿瘤细胞凋亡,并分析PTEN基因表达缺失与肿瘤细胞凋亡的关系. 结果: NP组织中PTEN蛋白全部阳性表达;而Pca中PTEN基因表达缺失率达64.3%,且与肿瘤细胞分化程度、临床分期和有否淋巴结转移密切相关;PTEN基因表达缺失与肿瘤细胞凋亡成负相关(r=-0.746, P<0.001). 结论: 前列腺癌组织中PTEN表达缺失率较高;PTEN基因失活在Pca的发生发展中起重要作用,且导致肿瘤细胞凋亡减少;联合检测PTEN蛋白和凋亡指数,有助于对肿瘤细胞的分化程度作出正确评价,以指导临床治疗及估计预后.     

GSK-3β、PTEN 、PLK1在儿童急性髓系白血病中的表达及意义

目的探讨糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、与张力蛋白同源的位于第10号染色体磷酸酶基因(PTEN)、Polo样激酶1(PLK1)在儿童急性髓系白血病(AML)中的表达及意义。方法 RT-PCR方法检测实验组(33例初诊AML患儿的骨髓)和对照组(10例正常骨髓)骨髓单个核细胞(BMMNC)中GSK-3βmRNA、PTEN mRNA、PLK1mRNA的表达,ELISA方法检测GSK-3β蛋白及P-GSK-3β的表达。结果实验组中GSK-3βmRNA、GSK-3β蛋白、PLK1mRNA的表达量高于对照组(P=0.012;P=0.014;P=0.040);PTEN mRNA、P-GSK-3β的表达量低于对照组(P=0.012;P=0.002)。GSK3β蛋白与PTEN mRNA的表达呈负相关(r=-0.415,P=0.016);GSK-3βmRNA、GSK3β蛋白与PLK1mRNA的表达成呈正相关(r=0.388,P=0.026;r=0.427,P=0.013)。外周血白细胞计数增高者GSK-3β蛋白表达增高;临床危险度高者GSK-3βmRNA、GSK-3β蛋白的表达增高,P-GSK-3β的表达降低。结论在儿童AML中,GSK-3β和PLK1可能起癌基因的作用,PTEN可能起抑癌基因的作用。     

食管正常、癌前及癌变组织中DNA聚合酶β mRNA检测

目的观察不同演进过程食管组织中DNA聚合酶β(polβ)mRNA的表达.方法采用含有内对照的半定量RT-PCR方法,检测31例食管浸润癌(鳞癌27例,腺癌4例)、4例原位癌、6例不典型增生以及31例正常食管黏膜组织中polβ mRNA的表达.结果食管浸润癌、原位癌和不典型增生组织中polβ mRNA的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于正常食管黏膜组织中的表达水平(P均＜0.05).食管鳞癌和腺癌组织中polβ mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结果在食管癌组织中存在着polβ的高表达,且发生于癌变早期.     

苯并［a］芘诱导的恶性转化细胞中DNA聚合酶β高表达的机制研究

目的 探讨苯并[a]芘(BaP)诱导的恶性转化细胞中DNA聚合酶β(polβ)表达增加的可能机制.方法 采用RT-PCR-单链构象多态性(RT-PCR-SSCP)分析及基因测序检测BaP诱导的恶性转化细胞(polβ-T细胞)中polβ基因外显子序列;基因测序检测polβ基因启动子序列.采用RT-PCR和Western blot检测polβ-T细胞和未经BaP处理的对照细胞(polβ细胞)中蛋白精氨酸甲基转移酶6(PRMT6) mRNA及蛋白质表达水平.结果 RT-PCR-SSCP和基因测序未发现polβ-T细胞中polβ基因外显子序列改变,但其启动子区域经基因测序证实5′端上游-10位和-61位分别存在插入突变(插入G)和点突变(C→A).此外,polβ-T细胞中PRMT6 mRNA和蛋白表达量均较对照polβ细胞增高(P＜0.05).结论 BaP诱导的恶性转化细胞中polβ基因的高表达不伴随其外显子序列的突变,但与启动子序列遗传学突变密切相关,PRMT6还可能通过表观遗传学途径导致polβ的高表达.     

不同类型的DNA聚合酶β基因对CHO细胞的影响

目的:比较野生型和突变型(58 bp缺失)DNA聚合酶β(polβ)基因对真核细胞生长特性的影响. 方法:将表达人野生型和缺失型DNA polβ的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),用RT-PCR方法鉴定野生型和缺失型DNA polβ mRNA水平的表达,MTT法测生长曲线、流式细胞术测细胞周期. 结果:转染野生型和突变型DNA polβ的CHO细胞株中,都有外源基因mRNA水平的表达;转染突变型(58 bp缺失)polβ基因的细胞增殖速度和S期比例增高均高于未转染组细胞,差异有统计学意义(P<0.05). 而转染野生型polβ基因对细胞增殖速度和细胞周期无明显影响(P>0.05). 结论:高表达外源性野生型和突变型DNA polβ,对CHO细胞生长具有不同的影响.     

双染鸡尾酒抗体在前列腺腺癌和前列腺上皮内瘤中的表达及临床意义

目的 探讨鸡尾酒抗体甲基酰基辅酶A消旋酶(AMACR)、高分子量角蛋白抗体(HMWCK)和p63在前列腺腺癌(Pca)、高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)及良性前列腺增生(BPH)组织中的表达及意义.方法 收集45例Pca、40例HGPIN和45例BPH标本,按常规方法石蜡包埋,制作蜡块,进行苏木素-伊红染色及AMACR、HMWCK和p63鸡尾酒抗体双重免疫组化染色.结果 Pca中AMACR阳性率为84.4%;HGPIN中AMACR阳性率为82.5%,与Pca中比较差异无统计学意义(P＞0.05);BPH中AMACR阳性率为24.4%,与Pca和HGPIN比较差异均有统计学意义(P＜0.05).HMWCK和p63在高分化Pca中均呈阴性,15.6%中分化和低分化Pca的癌巢周围可见,HGPIN和BPH中均呈阳性表达,但其分布方式不同,在HGPIN中呈连续或间断性分布,从HGPIN至癌移行腺体中逐渐减少至消失,在BPH中呈连续性分布.HMWCK和p63在Pca的表达与HGPIN和BPH比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 鸡尾酒抗体AMACR、HMWCK和p63对诊断高分化Pca有较高的特异性和敏感性,同时对高分化Pca和异型病变的鉴别诊断有价值.     

miR-21在大肠癌中的表达及其靶基因探讨

目的:探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-21在大肠癌(colorectal cancer,CRC)组织和细胞中的表达,抑制miRNA-21(miR-21)表达对PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路中各蛋白的影响及miR-21可能调控的靶基因?方法:运用实时荧光定量PCR和免疫组化分别测定CRC组织中的miR-21和PTEN水平?通过反义寡核苷酸技术抑制大肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证?通过蛋白质免疫印迹法检测HCT116细胞中PTEN?PI3K?Akt?MMP-9?mTOR表达的改变?利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,荧光素酶双报告基因实验检测PTEN活性?结果:miR-21在CRC组织中增高(P < 0.05),PTEN在CRC组织中表达减低(P < 0.05)?而且 miR-21与PTEN的表达之间呈负相关(r = -0.396,P < 0.05)?miR-21在HCT116中表达最高,在SW480中表达最低?miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制,并且PTEN蛋白的表达明显上调(P < 0.05),PI3K?Akt?MMP-9?mTOR表达下调(P < 0.05)?筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一?结论:PTEN可作为miR-21的靶基因参与调控CRC过程?miR-21在大肠癌中表达增高,通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移?     

PTEN、P27、TGF-β_1在宫颈腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨抑癌基因PTEN、P27及转化生长因了β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在宫颈腺癌中的表达及三者之间的相关性.方法 采用免疫组化S-P法检测43例官颈腺癌,18例正常宫颈组织石蜡切片中 PTEN、P27及TGF-β1的表达.结果 43例宫颈腺痛组织PTEN、P27阳性表达率分别为62.79%、55.81%,均明显低于止常宫颈组织(P＜0.05).VFEN、P27的阳性表达率在临床分期为Ⅱa及以上官颈腺癌组织中明显降低(P＜0.01),且在高分化腺癌组织中呈高表达.TGF-β1.的阳性表达率在正常官颈组(11.11%)与宫颈腺癌组(5.88%)之间差异无统计学意义(P＞0.05),TGF-β1蛋白表达与官颈腺癌的临床及病理特征无统计学差异(P＞0.05).宫颁腺癌组织中PTEN与P27蛋白表达呈正相关(r8=0.808,P＜0.01),TGF-β1表达与PTEN、P27无关.结论 PTEN、P27对宫颈腺癌预后判断有一定参考价值.官颈腺癌的发生及进展nr能与TGF-β1蛋白表达无关.     

前列腺癌P53和PCNA表达的相关性研究

目的　研究前列腺癌组织中P5 3蛋白和PCNA表达的关系及其临床意义。方法　应用免疫组化LDP法检测47例前列腺癌(Pca)、3 0例良性前列腺增生症(BPH)组织中P5 3蛋白及PCNA的表达。结果　①Pca组与BPH组中P5 3蛋白的阳性表达率分别为3 1.91%和6.66% ,显示Pca组P5 3蛋白阳性率明显高于BPH组(P <0 .0 0 5 ) ,P5 3蛋白在高、中、低分化组中的阳性率分别为17.64 %、2 9.41%和5 3 .85 % ,显示分化程度越低,P5 3阳性表达率越高。②前列腺癌PCNA表达与肿瘤的分级及预后均相关(P <0 .0 0 5 ) ,PCNA高表达组(3、4级)术后生存率明显低于低表达组(1、2级)。③PCNA表达强度受P5 3表达强度的影响。结论　P5 3基因与PCNA可能通过对细胞增殖周期的调控,参与前列腺癌的发生与发展;二者的异常表达对估计Pca的恶性程度、推测预后、术后随访及治疗均有一定的指导意义。     

PTEN基因在喉鳞癌中的表达及意义

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)在喉鳞癌中的表达及其临床意义.方法:应用半定量RTPCR方法检测喉癌组织中PTEN mRNA的表达.结果:淋巴结转移组喉癌较正常喉组织PTEN mRNA表达下降有统计学意义(P＜0.05).病理低分化与高分化相比,PTEN mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PTEN基因表达下降在喉鳞癌演进中起重要作用.     

水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠转化生长因子-β_1 mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1 mRNA表达的影响

目的探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠肾脏病理、肾组织Ⅲ型胶原蛋白及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法 SD大鼠72只随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组24只。行单侧输尿管梗阻(UUO)术诱导肾小管间质纤维化模型。治疗组大鼠给予30 mg.kg-1水飞蓟素,模型组及假手术组给予生理盐水灌胃。分别于UUO术后第7、14、21天各组随机处死8只大鼠,光镜下观察肾组织的病理改变,免疫组织化学法评价肾组织Ⅲ型胶原蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肾组织TGF-β1mRNA及TIMP-1 mRNA的表达水平。结果各时间点肾小管间质损伤和肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量在治疗组和模型组均较假手术组明显增多(P均<0.01),治疗组较模型组则明显减轻(P均<0.05)。各时间点治疗组和模型组肾脏TGF-β1mRNA和TIMP-1 mRNA表达量明显高于假手术组(P均<0.01),治疗组则明显低于模型组(P均<0.05)。UUO大鼠肾间质中TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾小管间质损伤评分均呈正相关(r=0.915、0.838、P均<0.01)。TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量均呈正相关(r=0.833、0.786、P均<0.01)。结论在UUO大鼠模型中,水飞蓟素通过下调TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA的表达,减少Ⅲ型胶原的产生,从而发挥延缓肾间质纤维化的作用。     

PTEN甲基化及其异常表达与膀胱移行细胞癌的关系

目的探讨PTEN基因启动子甲基化及其mRNA异常表达与膀胱移行细胞癌临床及病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态,应用RT-PCR技术检测其mRNA的表达水平。结果膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01);PTEN基因mRNA在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别是56.2%(27/48)和100.0%(15/15),两组间差异有统计学意义(P<0.01);PTEN基因启动子甲基化率与其mRNA表达水平在不同病理分级、临床分期间差异有统计学意义(P<0.05),且PTEN启动子甲基化与其mRNA表达存在明显关联性(χ2=21.372,r=0.555,P<0.01)。结论 PTEN基因启动子甲基化可导致其mRNA表达的缺失,对膀胱移行细胞癌的发生及转移有着极其重要的影响。     

食管癌组织中Slug表达量与癌细胞上皮-间质转化及侵袭特性的相关性

目的:探讨食管癌组织中Slug表达量与癌细胞上皮-间质转化及侵袭特性的相关性。方法:收集在本院接受根治性手术治疗的食管癌患者78例,取术中食管癌组织及癌旁正常组织标本。采用荧光定量PCR法测定标本组织中Slug基因及侵袭基因的mRNA表达量,采用western-blot法测定上皮-间质转化相关指标的蛋白表达量,采用Pearson检验法评估食管癌组织中Slug表达量与癌细胞上皮-间质转化、侵袭活性的相关关系。结果:食管癌组织中Slug mRNA的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。食管癌组织中上皮-间质转化标志物E-cadherin的蛋白表达量低于癌旁组织,Vimentin、N-cadherin的蛋白表达量高于癌旁组织,促侵袭基因Ezrin、FAT10、Survivin、MCP-1、RhoA的mRNA表达量均高于癌旁组织,侵袭抑制基因DEC1、PTEN、p53的mRNA表达量均低于癌旁组织(P均<0.05)。食管癌组织中Slug mRNA的表达量与上皮-间质转化标志物E-cadherin的蛋白表达量呈负相关,与Vimentin、N-cadherin的蛋白表达量呈正相关,与促侵袭基因Ezrin、FAT10、Survivin、MCP-1、RhoA的mRNA表达量呈正相关,与侵袭抑制基因DEC1、PTEN、p53的mRNA表达量呈负相关。结论:食管癌组织中Slug表达量高于癌旁组织,且Slug表达量与癌细胞上皮-间质转化及侵袭活性直接相关。     

卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN基因mRNA及蛋白表达的研究

目的探讨卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN基因mRNA及蛋白的表达及其临床意义.方法应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测卵巢子宫内膜异位症组织和正常卵巢组织中PTEN基因外显子1-9和5-9的mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测其蛋白表达,同时结合病人的临床资料进行分析.结果卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN外显子1-9、5-9 mRNA相对表达水平高于正常卵巢组织,差异有显著性（P〈0.01,P〈0.05）.卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN mRNA表达水平与病人年龄、囊肿大小无关（P〉0.05）.与临床分期有关（P〈0.05）.卵巢子宫内膜异位症组织中Ⅰ～Ⅱ期有2例细胞核PTEN蛋白呈中等染色表达,与正常卵巢组织中PTEN蛋白的表达比较差异无显著性（P〉0.05）.结论 PTEN mRNA及蛋白表达水平的异常可能是卵巢子宫内膜异位症发生的早期事件.     

高表达PTEN抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的 研究PTEN高表达对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化的抑制及其信号传导机制.方法 脂质体介导含人全长PTEN基因或空载体转染人肾小管上皮细胞(HKC细胞)48 h,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;Western blot检测正常组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN蛋白表达;RT-PCR检测3组中PTEN mRNA表达.然后将实验分为正常组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),Western blot检测各组细胞E-cad-herin、α-SMA、Akt、p-Akt表达水平.结果 FTEN基因及空载体转染HKC细胞48 h后可见明显绿色荧光蛋白表达;PTEN转染组PTEN蛋白及PTEN mRNA表达较正常组及空载体转染组细胞均显著上升(均P<0.05).在正常组、TGF-β1刺激组、PTEN+TGF-β1组、空载体+TGF-β1组中,TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组较正常组E-cadherin表达明显下降(均P<0.05),而a-SMA及p-Akt表达显著上升(均P<0.05);PTEN+TGF-β1组较TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组a-SMA及p-Akt表达明显下降(均P<0.05).而E-cadherin表达上升(均P<0.05);各组细胞Akt表达水平差异不明显(P>0.05).结论 PTEN通过阻止PI3K/Akt通路活化而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化.     

AML病人MN1和PTEN基因表达及临床意义

目的探讨脑膜瘤1(MN1)基因和PTEN基因表达与急性髓系白血病(AML)病情发展及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测38例AML病人(初治组16例,缓解组12例,复发组10例)骨髓单个核细胞中MN1和PTEN mRNA的表达水平,另取非恶性血液病病人及正常人骨髓共13例作正常对照组。结果 MN1和PTEN mRNA在AML病人骨髓单个核细胞中阳性表达率分别为76.3%和60.5%。初治组MN1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高,PTEN mRNA表达水平较正常对照组显著下降(F=2.385、2.054,q=2.305、2.867,P<0.01);缓解组MN1 mRNA表达水平下降,PTEN mRNA表达水平上升,与初治组比较差异均有统计学意义(q=2.121、2.756,P<0.05);在复发组中MN1 mRNA的表达水平复又升高,PTEN mRNA的表达水平复又下降,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(q=2.361、2.723,P<0.05)。MN1和PTEN基因在AML中的表达水平呈负相关(r=-0.321,P<0.05)。结论 MN1和PTEN基因的表达与AML发病及预后密切相关,可作为AML发病、复发及预后判断的有意义指标。     

PTEN与MMP-7基因mRNA在胃癌中的表达及其临床意义

目的:探讨PTEN和MMP-7基因mRNA在胃癌中的表达规律及其临床意义。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对15例癌旁组织和46例胃癌组织中PTEN和MMP-7基因mRNA的表达进行分析。结果:胃癌组织中PTEN基因mRNA的表达明显降低,而MMP-7基因mRNA的表达却明显增加,分别为43.5%(20/46)和71.7%(33/46),P<0.01;且其表达与肿瘤的大小、分化程度及Lauren分型无关(P>0.05);而与胃癌的浸润深度(P<0.05)、是否有淋巴结转移(P<0.01)和临床分期(P<0.01)关系密切。PTEN和MMP-7mR-NA表达之间显著负相关(rs=-0.276,P<0.05);结论:PTEN、MMP-7基因参与了胃癌的发展过程,并与胃癌的部分生物学行为有关,可能成为胃癌诊断和判断其生物学特性的重要的分子生物学检测指标。