志贺氏菌属显色培养基在食品检测中的应用研究

〔目的〕考核志贺氏菌属显色培养基对食品中志贺氏菌的检测效果,确认其是否可作为新型快速检测方法。〔方法〕按国标(GB 4789.5-2003)程序比较几种培养基检测食品中志贺氏菌的效果。〔结果〕志贺氏菌属显色培养基与传统平板SS、麦康凯相比对测试菌株有更高的灵敏度和特异性,可提高检出率。〔结论〕用志贺氏菌属显色培养基检测志贺氏菌是一种新的快速途径,可明显提高检测效率。     

多酶恒温核酸快速扩增法检测大肠杆菌O157∶H7

【目的】采用多酶恒温核酸快速扩增(MIRA)荧光法,结合金属有机骨架免疫磁珠富集功能,开发大肠杆菌O157∶H7快速富集和检测方法。【方法】以rfbE基因为靶标,筛选引物、探针及优化反应体系,同时考察该方法的特异性、灵敏度和实际应用情况。【结果】检测大肠杆菌O157∶H7菌体的检测限为1.18×10⁵CFU·m^-1,菌体DNA质量浓度检测限为9 pg·μL^-1,检测过程可在20 min内完成。47株菌(24株目标菌和23株非目标菌)特异性验证结果与实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法一致。【结论】该研究开发了一种基于金属有机骨架免疫磁珠富集结合MIRA的检测方法,该法操作简单、反应迅速,适用于食品中大肠杆菌O157∶H7的快速富集和检测。     

胶体金免疫层析法检测水产品中O1群霍乱弧菌方法的建立与优化

〔目的〕研究了O1群霍乱弧菌免疫层析试纸的制备方法,通过对试纸材料的处理达到优化胶体金免疫层析体系的目的。〔方法〕建立了快速检测食品中O1群霍乱弧菌的胶体金免疫层析方法,并应用该方法对弧菌属、假单胞菌属及其他常见肠道致病菌,共29株进行检测,同时对180份水产品进行了样品添加试验,并用《出口食品中霍乱弧菌检验方法》(SN/T1022-2001)进行确证,全面评估了该方法的灵敏度、特异性、准确性等。〔结果〕该方法检测食品中O1群霍乱弧菌的灵敏度为105cfu/ml,与食品中常见的致病菌无交叉反应。该方法检测水产品中O1群霍乱弧菌的假阳性率为6.25%。〔结论〕该方法操作简便,灵敏度高,特异性强,准确性高,适用于食品的快速检测。     

大肠杆菌O157∶H7双重荧光PCR方法的建立与应用

摘要:目的　建立快速检测食品中大肠杆菌O157︰H7的双重荧光PCR 方法。方法　针对大肠杆菌O157︰H7菌体抗原O和鞭毛抗原H的特异性基因rfbE（O157）和fliC（H7）筛选设计引物和探针,优化反应条件,建立可特异性检测大肠杆菌O157︰H7的双重荧光PCR方法,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行评价,对模拟样品和实际样品进行初步验证。结果　利用建立的方法对2株大肠杆菌O157︰H7及12株非大肠杆菌O157︰H7进行检测,O157︰H7菌株检测结果均为rfbE和fliC阳性,非O157︰H7菌株检测结果均为阴性,rfbE和fliC基因的特异性均为100%;2基因的检测灵敏度可达1.16×102 CFU/ml;批内、批间变异系数均小于3.5％;模拟样品立即检测,2个基因的最低检出限（2.7×102 CFU/ml）和细菌纯培养时接近;实际样品检测结果与我国检验检疫行业标准（SN/T 0973-2010）的检测结果一致。结论　建立的荧光定量PCR 方法特异性及重复性好,灵敏度高,可快速准确鉴定大肠杆菌O157︰H7菌株。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7几种检测方法的比较研究

目的筛选建立一种快速准确检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的方法,初步了解在本地区家禽、家畜养殖场和肉类食品中的带菌状况.方法以自动酶标免疫测试系统(VIDAS)、自动免疫磁珠收集系统(AIMS)与传统常规分离方法进行比较.结果应用自动免疫磁珠收集系统对79份实样的检测,检出率为6.33%,在4天内能做完全鉴定结果.该法能检出＜10 cfu/ml模拟样品中的O157:H7,同时选择使用CHROMagar O157琼脂平板的效果要明显优于山梨醇麦康凯(SMAC)琼脂平板.自动酶标免疫测试系统和传统分离方法未检出.结论以自动免疫磁珠收集系统结合CHROMagar琼脂平板建立的O157:H7分离方法具有特异性好、敏感性高、快速简便的特点,可以用于O157:H7外环境的监测和食品污染源调查.     

大肠杆菌O157胶体金免疫层析快速筛查方法的建立

目的建立一种大肠杆菌O157的胶体金免疫层析快速筛查方法。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析。结果该法能在15分钟内完成检测,检测不同的肠杆菌科细菌(非O157型大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌、沙雷菌、耶尔森菌)、葡萄球菌、李斯特菌、气单胞菌、弧菌等共24种30株常见细菌,未发现有交叉反应,显示该法特异性良好。检测大肠杆菌O157的最低检出浓度为1×105cfu/ml。方法适用于奶粉、面粉、淀粉、咖啡粉、饼干、蛋糕、果冻、燕窝和果汁等食品样品的检测。结论新建立的大肠杆菌O157胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查。     

熔解曲线分析方法甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的:采用熔解曲线分析技术,建立一种快速、简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7方法。方法:选取肠出血性大肠杆菌O157:H7编码脂多糖基因(rfbE)和编码鞭毛抗原基因(fliC)作为检测靶基因,建立荧光PCR反应体系。结果:通过多种标准菌株试验,结果显示所建立的熔解曲线分析法可特异性地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7;纯培养的灵敏度达到2.8×101cfu/ml;检测108例临床样本,其中18例肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性,3例为肠出血性大肠杆菌O157:非H7阳性,与常规培养方法的符合率达到100%。结论:本方法可简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7,结果可靠,通过进一步增加反应体系中引物的数量可同时对肠出血性大肠杆菌其他血清型进行鉴定。     

动物性食品中大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的建立

目的:大肠杆菌O157:H7是近年来引发食物中毒事件的重要病原菌,对其建立灵敏、特异的多重PCR检测方法,是确保饮食安全,预防和控制大肠杆菌O157:H7传播的重要手段。方法:根据大肠杆菌O157:H7rfbE和fliC抗原基因的保守序列设计了2对引物,建立并优化了特异性检测大肠杆菌O157:H7的多重PCR体系,扩增产物分别为678 bp(rfbE)和560 bp(fliC)。结果:建立的多重PCR方法可以快速特异地检测出猪肉、牛肉等动物性食品中的大肠杆菌O157:H7污染,人工污染猪肉检测限达到2.2×102cfu/ml。结论:选择两对特异引物的多重PCR方法可简便、快速、特异地实现对动物性食品中大肠杆菌O157:H7的检测。     

TecraTM大肠杆菌O157酶联免疫快速方法与经典培养方法的比较及其应用评价

目的考察Tecra^TM大肠杆菌O157酶联免疫快速方法的准确度和特异度,与经典培养法进行比较,并针对不同种类的食品样品进行应用评价。方法用不同来源的大肠杆菌O157菌株考察其准确度;用多种标准非大肠杆菌O157菌株考察其特异度;利用加标回收实验结合国标方法测定其检出限;用Tecra^TM大肠杆菌O157酶联免疫快速方法与国标中经典法和免疫磁珠法对不同种类的食品样品进行检测,比较并评价其应用效果。结果该方法准确度为100%;特异度为100%;检出限为1 CFU/25 g;630份实测样品的结果与国标方法对比其灵敏度为100%。结论该方法快速、简便、高效和准确,适宜食源性突发公共卫生事件及大批量样品的大肠杆菌O157快速检测。     

水产品中致病性弧菌PCR快速检测研究

〔目的〕建立一种快速、准确、特异的方法,快速检测和鉴定出食品中的非致病性和致病性霍乱弧菌与副溶血性弧菌。〔方法〕针对霍乱弧菌的种特异性基因ompW、毒力基因tcpA、ctxA和副溶血性弧菌的种特异性基因tl、毒力基因tdh设计引物,建立PCR检测体系。〔结果〕检测结果显示,该方法能够特异性检出副溶血性弧菌或霍乱弧菌,并进一步确定其是否携带tdht、cpA或ctxA毒力基因,检测的灵敏度可达到5×101cfu/ml菌浓度。〔结论〕与传统方法比较,该方法快速、特异、灵敏,能在较短时间内对大量水产品样品进行检测。     

豆类及其制品中大肠杆菌O157和O104的双重real-time PCR检测方法

目的建立一种快速检测豆类及其制品中肠出血性大肠杆菌O157、O104的双重real-time PCR方法。方法分别选取大肠杆菌O157的特异性基因rfbE和大肠杆菌O104的特异性基因wzy作为靶基因,设计相应的特异性引物探针,建立双重real-time PCR反应体系,并对反应体系及引物浓度等反应条件进行优化。结果最终确定反应体系为:以大肠杆菌O157、大肠杆菌O104菌株的DNA按照1∶3比例混合作为模板,模板DNA 2μL,Master Mix 12.5μL,上游引物(10μmol/L)各1μL,下游引物(10μmol/L)各1μL,探针(10μmol/L)各0.5μL,灭菌水补齐至25μL。实现了同一次处理样品在同一反应体系中同时检测肠出血性大肠杆菌的两种血清型,检测灵敏度的下限可达102CFU/m L(g)。结论该方法特异性好,对其他常见病原菌无扩增,灵敏度高、快速、简便,为食源性致病菌的检测提供了理想手段。     

国境口岸猴痘病毒实时荧光PCR检测方法的建立

〔目的〕建立快速、特异的猴痘病毒实时荧光PCR检测方法。〔方法〕制备猴痘病毒阳性样本,设计并合成相应的扩增引物及荧光标记探针,摸索最佳反应条件。〔结果〕本方法对模拟猴痘病毒样本的检测灵敏度达到102拷贝/反应。本方法快速、灵敏,并具有较高的特异性和重复性,可在3h内准确检测出猴痘病毒核酸。〔结论〕本方法适合国境口岸猴痘病毒快速检测,对防止猴痘病毒传入我国,保障我国的国境口岸卫生安全具有重要意义。     

酶联免疫斑点技术在出入境人员结核分枝杆菌快速检测中的应用

〔目的〕寻求一种试验周期短,特异性高的结核病检测方法。〔方法〕采集100份入境人员的外周抗凝全血标本,采用基于酶联免疫斑点试验（ELISPOT）的结核感染检测试剂盒TSPOT-TB,测定结核杆菌特异抗原刺激反应的效应T淋巴细胞数量。〔结果〕TSPOT-TB阳性率试验对象的性别、年龄无相关性,而与标本来源地区呈相关性。〔结论〕TSPOT-TB的敏感性和特异性均较高,可用于口岸出入境人员结核感染的快速检测。     

乙型流行性感冒病毒的基因快速检测

〔目的〕建立乙型流行性感冒病毒的核酸快速诊断技术。〔方法〕采用RT -PCR方法对乙型流感病毒的HA基因进行检测 ,我们对乙型流感病毒的HA基因保守区域设计相关引物 ,进行扩增 ,并作了特异性与灵敏度比较。〔结果〕该引物只能扩增乙型流感病毒的特异性片段 ,而对其它型别的流感病毒以及麻疹、风疹、腮腺炎病毒无交叉反应。检测的灵敏度一次PCR可达 1TCID50 ,二次PCR反应可达 0 .1TCID50 。〔结论〕采用该方法从临床患者含漱液标本中的检出率 ,比采用MDCK细胞分离的阳性率更高 ,可达到迅速、正确地诊断乙型流感的实用目的。     

双重实时荧光PCR快速检测O157大肠杆菌的初步研究

[目的]建立双重实时PCR体系,实现对O157大肠杆菌rfbE和stx2基因的同步检测。[方法]根据GenBank公布的O157大肠杆菌rfbE和stx2基因序列,应用分子生物学软件设计两对引物和TaqMan探针,并对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立实时荧光定量PCR检测O157大肠杆菌的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行了评价。[结果]所有O157大肠杆菌菌株的检测结果均为阳性,而所有其他菌株检测结果均为阴性;该方法对O157大肠杆菌纯培养的检测范围为10^0～10^6cfu/μl,重复性检测的变异系数均小于5%。对模拟污染牛奶样本的检测范围为10^2～10^6cfu/μl。从细菌核酸提取至完成检测约需3h。[结论]基于Taqman探针技术的实时PCR检测体系可同步检测O157大肠杆菌rfbE和stx2基因,具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,可用于O157大肠杆菌食物中毒的快速诊断和食品微生物检测。     

应用免疫层析法检测食品中的沙门菌

〔目的〕建立一种简便快速的胶体金免疫层析法 (GICA)用于检测食品中的沙门菌。〔方法〕抗沙门菌多抗用抗原吸收法封闭与其他肠道杆菌的交叉反应 ,标记胶体金溶胶制成探针 ,采用多膜复合的方法制备免疫层析条。〔结果〕该层析条可检出人工染菌的畜禽肉、牛奶和米饭等食品中的沙门菌 ,灵敏度为 2 .1× 10 6cfu/ml,用常见溶液和自来水处理染菌食品样品 ,检测结果无异。〔结论〕该方法简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,适合现场检测之用。     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌肠毒素基因ctx的应用研究

〔目的〕建立霍乱病原菌快速检测的检验技术。〔方法〕运用单次和巢式聚合酶反应检测霍乱弧菌肠毒素基因ctx。〔结果〕本技术检测霍乱病原菌特异性强 ,检测下限达 4cfu/ml( 10 0 cfu/ml级水平 )。〔结论〕本技术检定霍乱病原菌简便、快速、敏感度高且准确性好。     

福建省食品污染物监测O157∶H7大肠杆菌的调查与分析

目的:对福建省食品中O157∶H7大肠杆菌进行分离调查,并对分离菌株的O157抗原编码基因(rfbO157)和H7抗原编码基因(flicH7)以及毒力基因(志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA)进行检测。方法:按照《全国食品污染物检测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)》的要求,用EC肉汤增菌,快诊金卡筛选,接种CHROM agar O157显色平板,血清和生化系列证实。结果:1 380件食品中分离到O157∶H7大肠杆菌4株,分别为福州的生猪肉和水产品蚶中各1株、尤溪的冻鸡肉2株,检出率0.29%。结论:福建省食品中存在O157∶H7大肠杆菌的污染,虽检出率较低,这可能与福建不是O157∶H7大肠杆菌的流行地区有关,但监测是一项长期的工作,防患于未然,同时福建省也将O157∶H7大肠杆菌列入了食品安全预警系统的一部分。     

多重-巢式PCR检测食品中单增李斯特菌研究

〔目的〕建立多重—巢式PCR联合检测体系快速检测食品中的单增李斯特菌。〔方法〕针对单增李斯特菌中多个稳定的特异性基因(hlyA、plcB、prfAi、ap),设计并筛选出6对引物用于多重PCR、2对引物用于巢式PCR,组成多重—巢式PCR联合检测单增李斯特菌,并对珠海地区6类冷冻冷藏食品中单增李斯特菌的带菌情况进行了初步调查。〔结果〕建立的多重—巢式PCR联合检测体系特异性良好,多重PCR的灵敏度达到1×102cfu/ml,巢式PCR的灵敏度达到1×101cfu/ml。在检测的3439份样品中,单增李斯特菌阳性率达22.39%。〔结论〕该检测体系具有快速可靠、灵敏准确及特异性好的特点,有效缩短了检验周期,从传统的14d缩短到2d。对珠海地区6类冷冻冷藏食品中单增李斯特菌的带菌情况有了一定了解。     

福建省食品污染物监测O157:H7大肠杆菌的调查与分析

目的对福建省食品中O157H7大肠杆菌进行分离调查,并对分离菌株的O157抗原编码基因(rfbnO157)和H7抗原编码基因(flicH7)以及毒力基因(志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA)进行检测.方法按照<全国食品污染物检测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)>的要求,用EC肉汤增菌,快诊金卡筛选,接种CHROMagar O157显色平板,血清和生化系列证实.结果1 380件食品中分离到O157H7大肠杆菌4株,分别为福州的生猪肉和水产品蚶中各1株、尤溪的冻鸡肉2株,检出率0.29%.结论福建省食品中存在O157H7大肠杆菌的污染,虽检出率较低,这可能与福建不是O157H7大肠杆菌的流行地区有关,但监测是一项长期的工作,防患于未然,同时福建省也将O157H7大肠杆菌列入了食品安全预警系统的一部分.