百草枯对胚胎神经干细胞分化过程中Notch信号通路分子表达的影响

目的 观察百草枯(paraquat,PQ)对人胚胎神经干细胞(hNSCs)分化过程中Notch信号通路中参与中枢神经系统发育的关键受体Notch1、配体Jaggedl和下游分子DTX1的mRNA表达的变化.方法 以0.10、1.00、10.00 mol/L PQ对hNSCs进行染毒,分别在分化染毒的第2、4、8、12天用噻唑蓝(MTT)法观察细胞活力,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time PCR)技术检测Notch信号通路关键受体Notch1、配体Jagged1和下游分子DTX1 mRNA的表达情况.结果 与对照组比较,在细胞分化的第4、8及12天10.00 mol/L PQ染毒组的细胞活力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 0.10 mol/LPQ染毒组Notch1 、Jagged1 mRNA的表达水平在第2、4、8天明显低于对照组,第12天明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).0.10 mol/L染毒组DTX1 mRNA的表达水平在第2、8天明显低于对照组,第4天明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).10.00 mol/L PQ染毒组对Notchl 、Jagged1和DTX1mRNA的表达水平在第2、8、12天均明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).PQ在分化初期(2 d)可以下调Notch1、Jagged1和DTX1的表达,分化中期(4d)会上调Notch1的表达,但在分化晚期(8 d)至结束阶段(12d),PQ对Notch1 、Jagged1和DTX1的表达呈抑制状态.结论 PQ影响了神经干细胞分化过程中的Notch信号通路分子的表达.     

TNFα通过非神经钙调蛋白途径介导皮层神经细胞损伤

目的：探讨在TNFa诱导的脑皮层神经细胞损伤机制中神经钙调蛋白的作用。方法：用TNFn诱导原代培养的胎鼠皮层神经细胞损伤;通过MTT法、LDH释放率测定观察细胞生存力和损伤程度;通过膜联蛋白（Annexinv）和碘化丙啶（PI）免疫荧光法观察细胞凋亡或坏死程度。结果：MTT和LDH释放率测定结果表明．TNFa可引起神经细胞的生存力明显下降,并呈量艘、时效依赖关系。TNFd与CsA联合应用组,皮层神经元的生存力则提高不明显,无统计学意义。AnnexinV和PI免疫荧光检测表明,CsA不能减轻TNFa诱导的神经细胞的凋亡和坏死。结论：神经钙调蛋白途径在TNFa引起皮质神经元损伤并不起主要作用。说明TNFa可通过非神经钙调蛋白途径引起神经元损伤。     

血管紧张素Ⅱ对前脂肪细胞分化相关转录因子表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1表达的调节从而研究AngⅡ调节前脂肪细胞分化可能的分子机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞体外传代培养及诱导分化,用RT-PCR技术检测诱导分化过程中不同浓度AngⅡ处理6d对前脂肪细胞分化相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA表达水平的影响。结果 RT-PCR结果显示,100 nmol/L的AngⅡ处理细胞6 d后,PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的相对表达量与对照组(AngⅡ添加浓度为0 nmol/L)有显著性差异(P<0.05),比对照组相应的转录因子分别增加了48%、50%、43%。结论前脂肪细胞分化过程中AngII能够上调PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的表达量,AngⅡ可能通过影响PPARγ、C/EBPα和SREBP1-c/ADD-1的表达来调节前脂肪细胞的分化过程。     

脂肪细胞分化过程中脂联素受体的时序性表达(英文)

目的探讨SW872前脂肪细胞分化过程中脂联素受体基因表达的时序性变化。方法体外培养,0.6mM油酸诱导SW872前脂肪细胞分化24h,48h,72h,油红0染色观察细胞内脂肪的聚积;RT-PCR方法检测不同分化时间点脂联素受体1及脂联素受体2 mRNA水平。结果0.6mM油酸诱导分化72h,能成功地将SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞。SW872前脂肪细胞表达两种脂联素受体,诱导分化刺激24h,脂联素受体1 mRNA水平是诱导分化前的1.95倍,脂联素受体2 mRNA水平是诱导分化前的1.61倍;诱导分化刺激48h,脂联素受体1 mRNA水平是诱导分化前的2.16倍,脂联素受体2 mRNA水平是诱导分化前的2.34倍;诱导分化72h,脂联素受体1 mRNA水平是诱导分化前的2.54倍,脂联素受体2 mRNA水平是诱导分化前的4.09倍。结论SW872脂肪细胞表达脂联素两种受体增殖,且两种脂联素受体的基因表达呈分化相关性。     

甲状旁腺素、维生素D_3对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的影响

目的探讨甲状旁腺素(PTH)对小肠细胞钙结合蛋白(CaBP)D9k mRNA表达的影响以及探讨PTH是否影响1,25-(OH)2-D3对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的促进作用。方法以人结肠癌上皮细胞株Caco-2细胞作为小肠细胞体外模型,PTH分三个剂量10-8、10-9和10-12mol/L分别干预Caco-2细胞5、10、20、40和80min;10-8mol/L1,25-(OH)2-D3干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h,溶剂对照为0.1%乙醇;10-8mol/L1,25-(OH)2-D3联合以上三剂量PTH干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h,溶剂对照亦为0.1%乙醇。运用RT-PCR方法进行CaBP-D9k mRNA测定,以GAPDH作为内对照。结果10-8mol/LPTH作用20min,10-12mol/L作用10min,CaBP-D9k mRNA表达量高于空白组,其余时间点低于空白组;10-8mol/L1,25-(OH)2-D3干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h,CaBP-D9k mRNA的表达均高于溶剂对照(0.1%乙醇);与10-8mol/L1,25-(OH)2-D3单独作用比较,10-8mol/L1,25-(OH)2-D3联合以上三剂量PTH作用,CaBP-D9k mRNA相对表达量均低于单独作用的表达量。结论10-8mol/L、10-12mol/LPTH可能促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA瞬时(1~20min)合成增加;10-8mol/L1,25-(OH)2-D3可明显诱导Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA的表达;PTH可能抵消或者抑制1,25-(OH)2-D3促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA表达的作用。     

硒对大鼠胚胎神经细胞增殖和分化的影响

为探讨不同浓度硒对神经细胞增殖和分化的影响，将细胞培养物经不同浓度（０．０１～１０ｕｍｏｌ／Ｌ）亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）处理，用ＭＴＴＩ地检测细胞增殖率，并观察细胞形态变化和细胞分化程度，结果：低浓度硒（０．０１～０．１ｕｍｏｌ／Ｌ）能促进神经细胞增殖和分化；较高浓度硒（０．０５～５ｕｍｏｌ／Ｌ）则抑制神经细胞增殖和分化，并均呈剂量－效应关系，高浓度硒（１０ｕｍｏｌ／Ｌ）引起细胞毒性，提示低浓度     

T-box转录因子3和上皮钙黏素在食管鳞状细胞癌组织中的表达

目的 探讨T-box转录因子3(TBX3)和上皮钙黏素(E-cadherin)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及意义.方法 用免疫组化SP法检测126例ESCC和52例正常食管组织中TBX3和E-cadherin的表达,并分析ESCC组织中两者的表达与临床病理特征的关系、关联性及多因素Cox回归分析.结果 TB...     

乳腺癌及淋巴结转移灶中上皮性钙粘素与α和β连接素的表达及意义

目的　探讨上皮性钙粘素 (E -cd)及α -、β -连接素 (cat)在乳腺癌组织及淋巴结转移灶中的表达及意义。 方法　免疫组化S -P法检测 60例乳腺癌 ( 3 1例有淋巴结转移 )及相应淋巴结转移灶中E -cd、α -、β -cat的表达。 结果　 60例乳腺癌组织中E -cd、α -、β -cat异常表达率分别为 5 1 7%、61 7%、70 %,E -cd的表达与乳腺癌淋巴结转移显著相关 ( P <0 0 0 5 ) ,α -、β -cat的表达与淋巴结转移无关。淋巴结转移灶中E -cd表达较相应原发灶明显增强 (P <0 0 0 5 ) ,淋巴结转移灶中α -、β -cat的表达与原发灶无显著差异。结论　原发灶E -cd的下调使癌细胞脱离原发灶 ,而转移灶内E -cd重新表达可能利于癌细胞黏附于远处器官 ,形成转移灶     

胶原钙维素对钴—60照射大鼠血象的影响

胶原钙维素对钴－６０照射大鼠血象的影响郁东阚建军张振玲沈祖期孙顺仙（山东省劳动卫生职业病防治研究所，济南２５００６２）胶原钙维素是一种新型营养保健食品，为了解其营养保健性能，我们观察了其对钴－６０γ射线照射大鼠周围血象的影响。１材料与方法１１材料...     

MAPK信号转导通路及其在脂肪分化中的作用

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路是真核细胞将胞外信号转导至胞内引起细胞反应的一类重要信号系统。此通路通过影响基因的转录和调控,参与调节细胞增殖、分化、转化、凋亡及细胞间的功能同步等一系列生命活动。肥胖已经成为危害人类健康的重要问题,是许多疾病的独立危险因素。探讨脂肪细胞分化及其调控机制对相关疾病的预防和治疗具有十分重要的意义。MAPK信号转导通路在脂肪细胞分化中发挥重要作用。ERK1／2,JNK和p38MAPK三条通路通过独立作用及复杂的协调作用,参与调控脂肪细胞分化过程的各个环节,其调节作用具有多样性。     

百草枯对人胚胎神经干细胞分化过程中Wnt通路分子表达的影响

[目的]通过对神经干细胞Wnt信号通路中关键分子β-catenin/D VL2基因表达的研究,探讨百草枯对分化中的神经干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响. [方法]以人胚胎神经干细胞为研究对象,观察体外诱导分化情况,并采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度百草枯对细胞活力的影响,选取未观察到细胞毒性的浓度为0.10、1.00、10.00 μmol/L的百草枯染毒,在分化2、4、8、12d利用实时荧光定量多链聚合反应技术检测Wnt信号通路关键分子β-catenin和DVL2 mRNA的表达情况. [结果]百草枯在100.00 μmol/L时可明显抑制细胞活力(P＜0.01).百草枯在神经干细胞分化期2、8、12d明显下调β-catenin mRNA的表达,除10.00μmol/L染毒组在分化期8d以外,其余各剂量组与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).百草枯在神经干细胞分化期2、12d DVL2 mRNA的表达明显下调,除0.10μmol/L染毒组在分化期12d该基因mRNA表达升高外,其余各剂量组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.01);在分化期4dDVL2 mRNA的表达明显上升,各剂量组与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01). [结论]百草枯抑制Wnt信号通路中关键分子β-catenin和DVL2基因mRNA的表达,最终可影响神经干细胞的分化过程.     

生长分化因子9、骨形态发生蛋白15信号转导机制研究进展

近年研究发现,卵母细胞来源的生长分化因子9(GDF-9)、骨形态发生蛋白15(BMP-15)是卵泡生长发育和卵巢功能的重要调节因子。两者通过自分泌和旁分泌机制,调节卵巢局部细胞的分化、增殖及其功能,调控优势卵泡的形成以及卵母细胞的成熟。GDF-9和BMP-15的下游信号通路及其调节机制亦成为近年研究的热点。着重就其基因、蛋白特点、信号转导及其调节机制作简要综述。     

硒化合物对大鼠神经干细胞球分化成熟蛋白表达的影响

[目的]观察微量元素硒对神经干细胞分化成熟的影响。[方法]利用新生大鼠神经干细胞体外培养技术、小盖玻片培养法和免疫细胞化学方法，观察了无机硒(亚硒酸钠)和有机硒(硒甲基半胱氨酸)对神经干细胞向神经元分化标记蛋白NSE、星形胶质细胞分化标记蛋白GFAP、少突胶质细胞分化标记蛋白CNPase的表达状况，同时用Westem-blot免疫印迹技术对神经元特异性烯醇化酶(neuron speeific enolase，NSE)、β-微管蛋白(β-tubulin)、星形胶质细胞-醋酸纤维蛋白(glial fibrillary acidhc protein，GFAP)、环核苷酸-3’磷酸水解酶(2’，3’-cyclic nucleotide 3’phosphohydrolase，CNPase)进行了半定量分析。[结果]适量浓度的硒对神经干细胞球的分化发育有良好的促进作用。在含硒的营养液中神经干细胞分化好、形态正常。神经干细胞向神经元、神经胶质细胞方向分化比例较高。其中胶质细胞分化方向GFAP 和CNPase 细胞计数，平均每高倍视野分别为5～6个和7～12个；并且分支多、细长，网络复杂。免疫印记结果发现有机硒能明显促进神经干细胞分化成熟蛋白NSE、β-tubulin、GFAP、CNPase的表达，化学发光显影明显高于对照组。[结论]适量的硒能促进神经干细胞的分化成熟。特别是硒甲基半胱氨酸是一个低毒和高生物效应的硒营养制剂．在神经干细胞球体外分化发育中有着重要的作用。     

Ripe Tomato Saponin Esculeoside A and Sapogenol Esculeogenin A Suppress CD4+ T Lymphocyte Activation by Modulation of Th2/Th1/Treg Differentiation

We report that esculeoside A (EsA), a glycoside and a major component in ripe tomato fruit, ameliorated experimental dermatitis in mice. However, the underlying immunologic molecular mechanisms are unknown. The present study examined its underlying immune nutrition mechanism using concanavalin A (ConA)-blast mouse splenocyte primary culture. We found that EsA and its sapogenol esculeogenin A (Esg-A) concentration-dependently suppressed T-lymphoproliferation using CFSE-labeled flow-cytometry and water-soluble tetrazolium (WST) assay. Using ELISA and q-PCR methods, EsA/Esg-A showed profound decreases in T helper 2 (Th2)-relevant interleukin-4 (IL-4) secretion and mRNA expression, and GATA3 expression. Moreover, EsA/Esg-A suppressed CD4+ T-lymphocyte activation by decreasing IL-2 secretion and mRNA expression and CD25+ cell proportion. Further, EsA/Esg-A alleviated Treg suppressive activity by reducing IL-10 secretion, Foxp3 mRNA expression, and cell numbers. We suggest the immune nutrition function by tomato component, and highlight that EsA/Esg-A are capable of reducing CD4+ T-lymphocyte activation via a reduction in Th2-lymphocyte activity by modulation of Th2/Th1/Treg subunit differentiation.     

益生菌调节湿疹患儿Th1/Th2平衡及对肠道菌群的影响

【目的】研究应用益生菌治疗婴儿湿疹后,其外周血Th1/Th2细胞因子分泌细胞的变化及肠道菌群的改变,探讨益生菌作用的机理。【方法】60例重症湿疹患儿随机分成两组,益生菌组在对症治疗的同时服用双歧杆菌三联活菌,对照组仅对症治疗,不用任何微生态制剂。分别在益生菌治疗前及治疗后1月采指尖血,用ELISpot方法检测IFNγ,IL-4分泌细胞;同时采粪便标本,用荧光定量PCR的方法检测肠道菌群的变化。【结果】湿疹患儿在益生菌治疗30 d后,IL-4分泌细胞明显减少(P<0.05),IFNγ/IL-4比值明显升高(P<0.01),而IFNγ无明显变化。益生菌治疗前后,患儿肠道双歧杆菌,乳酸杆菌明显升高(P<0.01),而对照组无明显变化。【结论】益生菌能通过调节湿疹患儿肠道菌群,影响机体Th1/Th2平衡状态。     

未足月胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎孕妇外周血miR-145表达及与Th1/Th2平衡的关系

目的探讨miR-145在未足月胎膜早破(preterm prelabor rupture of membranes,pPROM)合并绒毛膜羊膜炎(histological chorioamnionitis,HCA)孕妇外周血中表达情况,并分析其与Th1/Th2平衡的关系。方法选取2018年3月至2019年4月河北省儿童医院因胎膜早破入院的pPROM孕妇50例作为研究组,根据是否发生HCA分为HCA组(17例)与无HCA组(33例),另选取正常妊娠孕妇34例作为对照组,采集静脉血,分离血浆及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),通过qRT-PCR法检测外周血血浆中miR-145的表达情况,利用流式细胞术检测PBMC中Th1细胞、Th2细胞占PBMC的比例,采用酶联免疫吸附法检测Th 1细胞分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α以及Th 2细胞分泌的细胞因子IL-4、IL-6水平,Pearson法对miR-145与Th1、Th2细胞以及细胞分泌因子相关性进行分析,并通过ROC曲线分析外周血血浆miR-145对pPROM患者HCA发生的预测价值。结果与对照组、无HCA组相比,HCA组外周血血浆miR-145水平显著降低(P<0.05);与对照组、无HCA组相比,HCA组外周血Th1细胞比例、Th1/Th2比值显著升高(P<0.05),Th2细胞比例显著降低(P<0.05);与对照组、无HCA组相比,HCA组外周血血浆IL-2、IFN-γ、TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-4、IL-6水平显著下降(P<0.05);Pearson分析显示:外周血血浆miR-145表达与Th1细胞比例、Th1/Th2比值、IFN-γ、TNF-α、IL-2水平呈负相关(P<0.05),与Th2细胞比例、IL-4、IL-6水平呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析显示miR-145水平预测pPROM患者HCA发生的截断值为0.56(曲线下面积0.859,敏感度89.3%,特异性68.2%)。结论pPROM合并HCA孕妇外周血血浆miR-145低表达,PBMC呈Th1优势,miR-145可能通过调控Th1/Th2平衡影响HCA的发生。     

卵巢上皮性癌中mTOR信号通路蛋白的表达及其临床意义

目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路蛋白在人卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义。方法:选取武汉同济医院妇产科2005～2008间手术切除并经病理证实的人卵巢上皮性癌63例,其中Ⅰ级12例、Ⅱ级15例、Ⅲ级23例、Ⅳ级13例,应用免疫组织化学法检测卵巢上皮性癌组织中mTOR信号通路关键蛋白pm-TOR、pAKT的表达,分析其与卵巢癌患者临床病理特征的关系。结果:pmTOR在各级卵巢上皮性癌中的阳性率分别为:Ⅰ级41.7%(5/12)、Ⅱ级53.3%(8/15)、Ⅲ级65.2%(15/23)、Ⅳ级69.2%(9/13),pAKT在各级卵巢上皮性癌中的阳性率分别为:Ⅰ级33.3%(5/12)、Ⅱ级40.0%(6/15)、Ⅲ级52.2%(12/23)、Ⅳ级53.8%(7/13);各阳性表达率间无统计学差异(P>0.05),但其表达水平均随着卵巢上皮性癌病理级别的增高而升高,而与病理类型无关。结论:mTOR信号通路蛋白在卵巢上皮性癌的发生发展中起重要的作用,可能是卵巢癌治疗的潜在靶点。     

幽门螺杆菌感染对胃癌组织中Fas基因蛋白表达的影响

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染对胃癌组织细胞凋亡的影响,探讨Hp在胃癌发生、发展中的作用.方法用Warrthin-Starry染色法检测胃癌组织中Hp,以流式细胞学方法测定胃癌组织Fas基因蛋白的表达.结果正常胃组织中Fas表达阳性率为12.05%±3.59%,胃癌组织中Fas表达明显低于正常胃粘膜,Hp阳性癌组织低于阴性癌组织;Fas基因表达不与肿瘤的分化程度有关.结论Hp在胃癌的发生发展过程中对细胞的增殖影响较小,主要通过减弱细胞凋亡而起作用.     

慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞及其相关因子表达的检测

目的研究Th17细胞及其相关细胞因子在慢性乙型肝炎（CHB）发病中的作用。方法流式细胞术检测CHB患者外周血Th17细胞的比例;实时定量RT-PCR检测CHB患者外周血中诱导Th17细胞分化的核转录因子RORγt以及细胞因子白细胞介素17（IL-17）、IL-21、IL-23、IL-6的mRNA表达水平;用酶联免疫吸附试验法检测IL-23、IL-6和IL-17因子分泌水平;全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平,并分析Th17细胞阳性率与ALT水平的相关性。结果 CHB患者外周血中Th17细胞阳性率、RORγt基因表达、相关细胞因子mRNA及蛋白水平均高于正常对照组（P〈0.01）,Th17细胞比例与血清ALT水平呈正相关。结论 CHB患者外周血中Th17细胞比例增高,其相关因子过表达,并与肝细胞炎性损伤程度及疾病进程相关。