胰升糖素样肽1逆转细胞因子诱导胰岛β细胞的程序化细胞死亡因子5表达

目的研究胰升糖素样肽1（GLP-1）对促炎性细胞因子诱导小鼠胰岛β细胞程序化细胞死亡因子5（PDCD-5）等凋亡相关分子表达的影响。方法小鼠NIT-1细胞株与细胞因子混合物加或不加GLP-1孵育24h后,采用膜联蛋白V（Annexin V）和碘化丙啶（PI）标记后进行流式细胞仪分析检测细胞凋亡,通过RT-PCR和Western blot检测PDCD-5、Fas、caspase 3等凋亡相关分子的表达。结果30U/ml白细胞介素1β（IL-1β）＋100U/ml干扰素γ＋100U/ml肿瘤坏死因子α使Annexin V单阳性细胞和Annexin V/PI双阳性细胞明显增多;与对照组相比,细胞因子处理组NIT-1细胞的PDCD-5、Fas及caspase 3 mRNA和蛋白的表达水平显著上调;10nmol/LGLP-1可逆转细胞因子的上述效应。结论促炎性细胞因子通过激活PDCD-5等凋亡信号通路导致胰岛β细胞凋亡,GLP-1对细胞因子所致的PD-CD-5表达和细胞凋亡具有抑制效应。     

碘对人甲状腺细胞凋亡的影响

目的：研究碘对人甲状腺细胞亡的影响,探讨其在甲状腺疾病发病机制中的作用和意义。方法：分别以不同浓度Nal刺激单层培养的人正常甲状腺上皮细胞,采用流式细胞术,Western印迹和半定量RT－PCR等方法分别检测刺激前后细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Fas,Bcl-2和Bak以及Fas,可溶性Fas(sFas)mRNA表达的变化。并以ELISA法检测细胞培养液中sFas的含量。结果：（1）低浓度NaI(10^-8mol/L)明显抑制细胞凋亡（P＜0．05）,中,高浓度（10^-6-10^-4mol/L)时显著增加细胞凋亡（P＜0．05）;（2）低浓度NaI显著促进sFas蛋白及mRNA的表达（P＜．05）,不影响Fas蛋白及mRNA的表达;（3）中、高浓度NaI则明显增加Fas蛋白及mRNA表达,但抑制sFas蛋白及mRNA表达（P＜0．05）;（4）在10^-8-10^-4mol/L浓度范围内,NaI剂量依赖性地抑制甲状腺上皮细胞表达Bcl-2蛋白,但显著增加Bak蛋白的表达（P＜0．05）,结论：碘可通过调节Fas,sFas,Bcl-2及Bak的表达,影响甲状腺细胞凋亡的发生,其中低浓度碘可抑制凋亡,而中,高浓度碘则促进细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

目的为维生素E琥珀酸酯（VES）用于前列腺癌的治疗奠定基础。方法将不同浓度的VES培养液作用于体外培养的前列腺癌PC-3细胞。噻唑兰（MTr）比色法检测细胞增殖活性,计算细胞移植率;光镜下观察细胞形态变化,流式细胞术（FCM）分析细胞周期并测定Fas蛋白表达水平;酶联免疫法检测TGF-β表达水平。结果VES作用后细胞抑制率明显增加,且呈浓度及时间依赖性;光镜下PC-3细胞呈典型凋亡的形态学改变;FCM细胞周期分析显示,G2／M期细胞增加而S期细胞明显减少（P〈0．05）。Fas蛋白和TGF—β表达明显上调。结论VES可抑制PC-3细胞生长增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能为上调Fas、TGF-β的表达。     

酪蛋白对高碘小鼠甲状腺细胞凋亡的影响

目的观察酪蛋白（CA）对高碘小鼠甲状腺细胞凋亡的影响。方法将昆明种小鼠随机分为4组：对照（NI）组、高碘（HI）组、高碘＋CA1（HI＋CA1）组、高碘＋CA2（HI＋CA2）组，喂养12个月，ELISA法检测血清白细胞介素1β（IL—1β），RT-PCR法检测甲状腺组织Fas、FasLmRNA表达水平，TUNEL法检测甲状腺细胞凋亡。结果与NI组比较，HI组小鼠血清IL-1β水平和甲状腺组织FasmRNA表达均明显增高（P〈0．05或〈0．01），且甲状腺滤泡上皮凋亡细胞数也明显增多（P〈0．01），而高碘小鼠随着CA摄入量增高，上述改变程度明显降低。结论高碘可通过提高机体IL-1β水平，诱发凋亡调控基因Fas／FasL系统表达改变，促进大鼠甲状腺细胞凋亡。而CA摄入可以部分拮抗高碘引起的上述改变，对滤泡上皮细胞具有一定的保护作用。     

Fas抗体对气道上皮细胞凋亡的影响

目的观察Fas抗体、白介素1β（IL-1β）对体外培养的气道上皮细胞凋亡的影响。方法分离培养兔的气道上皮细胞（AEC）,加入IL-1β与不同浓度的Fas抗体共同孵育,以流式细胞术和TUNEL法检测AEC凋亡的变化。结果以流式细胞术和TUNEL法检测,Fas抗体对AEC凋亡呈剂量、时间-效应依赖性作用;IL-1β对Fas抗体诱导AEC的凋亡没有明显影响。结论Fas抗体能够有效的诱导正常和炎症状态下原代AEC发生凋亡,可能对抑制气道炎症和气道重塑有积极作用。     

CD54、CD80、HLA-DR在Graves病和桥本甲状腺炎甲状腺滤泡上皮中的表达

目的观察正常人、Graves病（GD）、桥本甲状腺炎（HT）、甲状腺组织CD54、CD80、HLA—DR的表达。方法免疫组化SP法测定上述各组甲状腺组织CD54、CD80、HLA—DR的表达水平。结果正常甲状腺组织甲状腺滤泡上皮细胞（TEC）几乎不表达CD54和HLA—DR，而GD组和HT组有较高水平的CD54和HLA-DR表达，以HT表达水平最高，3组间比较差异有统计学意义（均P〈0．01）；HT患者甲状腺CD80表达高于GD组和正常人，差异有统计学意义（均P〈0．01），GD组甲状腺CD80表达很低，与正常人相比差异没有统计学意义。结论CD54和HLA-DR在GD和HT的发病机制中起重要作用，CD80在HT的发病中起重要作用。     

组织金属蛋白酶抑制因子3重组蛋白诱导小鼠成骨细胞MC3T3-E1凋亡

目的 研究组织金属蛋白酶抑制因子3（TIMP-3）重组蛋白对MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响。方法 细胞存活率和凋亡分别用MTT及ELISA检测。Fas，FasL，Bcl-2，Bax，caspase-3，caspase-8，细胞色素c的表达以及JNK，p38，细胞外信号调节激酶（ERK）1／2的磷酸化水平用Western印迹检测。结果 MTT及ELISA检测提示TIMP-3降低MC3T3-E1细胞存活率，诱导MC3T3-E1细胞凋亡。TIMP-1增加Fas、FasL蛋白表达，对Bax、Bcl-2蛋白表达无影响，但可诱导细胞色素c的释放及caspase-8、caspase-3的活化。TIMP-3促进p38和ERK磷酸化，而PD098059（ERK阻断剂）和SB203580（p38阻断剂）消除p38和ERK的促凋亡作用。结论 TIMP-3诱导MC3T3-E1细胞凋亡的信号途径为凋亡受体Fas介导，并有p38、ERK信号转导途径参与。     

感染日本血吸虫小鼠CD4＋和CD8＋T细胞中Fas及Fas的表达研究

目的：探讨在日本血吸虫感染过程中，宿主CD4＋和CD8＋T细胞中死亡受体（Fas) 及死亡配体（Fas ligand,FasL)的表达情况，。方法：利用免疫组化的方法检测在日本血吸虫感染过程中，Fas和FasL在CD4＋和CD8＋T细胞中的表达，结果：在日本血吸虫感染过程中，Fas和FasL在CD4＋和CD8＋T细胞的表达随感染时间的延长而升高，但感染10wk后，FasF 在CD4＋T细胞的表达接近并超过Fas的表达，结论：在日本血吸虫感染过程中，CD4＋ T细胞凋亡比率超过CD8＋T细胞和CD4＋／CD9＋T细胞比值下降与相关蛋白Fas,FasL的表达有关。     

原发性干燥综合征患者唇腺组织中CAD的表达与细胞凋亡的关系

目的 研究原发性干燥综合症（primary Sjgren＇s syndromepss）唇腺组织细胞中Fas介导的细胞凋亡信号转导相关蛋白的表达，探讨导致干燥综合征的细胞信号转导的可能途径。方法 采用Westernblot法检测唇腺组织中Fas、FasL蛋白的表达；RT-PCR半定量检测CAD mRNA表达。结果 与对照组比较pSS患者唇腺组织细胞中Fas介导的细胞凋亡信号转导相关蛋白Fas、FasL的表达及CADmRNA表达都有不同程度增高（P〈0．05）。结论 导致干燥综合征患者唇腺组织凋亡的信号转导途径可能是由Fas介导的。     

食管癌中c-FLIP蛋白的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系

目的探讨细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白（c—FLIP）在食管癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测64份食管癌组织（观察组）和20份正常食管黏膜组织（对照组）中c—FLIP蛋白表达,并采用TNUEL法检测细胞增殖指数（1（I）和凋亡指数（AI）。结果观察组c—FLIP蛋白阳性率明显高于对照组,P〈0．05;c-FLIP蛋白表达与食管癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移密切相关（P〈0．05）;随c-FLIP蛋白表达强度的增加,细胞增殖指数逐渐增强、凋亡指数逐渐降低（P〈0．05）。结论c—FLIP蛋白高表达可促进食管癌的发生、发展。     

β-肾上腺素受体过度激动致大鼠心肌细胞凋亡及Fas、Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的:探讨β肾上腺素受体（βAR）过度激动致大鼠心肌损伤时,心肌细胞凋亡相关蛋白Fas、Bcl2表达改变及心肌细胞凋亡的意义。方法:动物模型仿用异丙肾上腺素皮下注射方法。心肌组织切片分别行免疫组化染色及HE、TUNEL检测。结果:βAR过度激动致大鼠心肌损伤时,Fas、Bcl2蛋白皆上调表达（P<0.01）,Fas蛋白表达上调更为显著（P<0.01）,心肌损伤6h、72h段凋亡指数分别为7.6±1.5、14.8±4.1。结论:βAR过度激动致大鼠心肌损伤时,心肌细胞凋亡是参与损伤的重要病理机制之一,可能是导致心力衰竭的一个关键因素,Fas、Bcl2蛋白的表达在其调控过程中表现出显著的差异。     

淫羊藿总黄酮对去卵巢大鼠骨组织细胞凋亡的影响

目的 观察淫羊藿总黄酮(HEF)对去卵巢大鼠骨组织中细胞凋亡的影响.方法 54只雌性SD大鼠随机分成6组:假手术组,去卵巢组,尼尔雌醇组(0.1 mg·kg-1·d-1)和HEF低、中、高剂量组(40,80和160 mg·kg-1·d-1),治疗12周,测定大鼠令身骨密度及雌二醇水平,采用3'-OH末端DNA原位标记技术和透射电镜检测细胞凋亡,并用免疫组化方法观察骨转化生长因子β1(TGF-β1)、成纤维细胞生长因子(FGF-2)和凋亡相关基因Fas的蛋白表达.结果 HEF增加去卵巢大鼠的全身骨密度,中、高剂量组与去卵巢组差异有统计学意义(均P<0.01),但不增加血清雌二醇水平(P>0.05).去卵巢组骨细胞、成骨细胞凋亡较假手术组明显增高(P<0.01),HEr组明显降低(P<0.01).与去卵巢组相比,HEF组Fas的表达明显降低(P<0.01),TGF-β1、FGF-2表达明显增加,尤以中、高剂量组为显著(P<0.01).结论 HEF对去卵巢大鼠骨丢失具有防治作用,其部分机制可能与促进TGF-β1、FGF-2,抑制Fas蛋白的表达和抑制骨细胞、成骨细胞凋亡有关.     

玉米苞叶对动脉粥样硬化家兔平滑肌细胞凋亡及p53和Fas蛋白表达的影响

目的：探讨玉米苞叶防治动脉粥样硬化（AS）的机制。方法：选用大耳白家兔，复制家兔AS模型，随机分为动脉粥样硬化模型组，玉米苞叶组和正常对照组，成模后给予玉米苞叶煎剂治疗，8w后处死家兔，采用流氏细胞术检测平滑肌细胞的凋亡率以及凋亡相关基因p53和Fas蛋白表达。结果：模型组血管平滑肌细胞的凋亡率明显高于对照组（P＜0．05），p53和Fas蛋白的表达增强（P＜0．05），主动脉壁肉眼观测出现典型斑块。玉米苞叶组平滑肌细胞的凋亡率明显低于模型组（P＜0．05），p53和Fas蛋白表达下调（P＜0．05）；主动脉斑块面积较模型组明显减小，结论：玉米苞叶通过调节p53和Fas蛋白表达而调节AS家兔平滑肌细胞凋亡。     

IL-1β参与调控BCG感染RAW264.7细胞凋亡的研究北大核心CSCD

目的白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)属多肽类生长因子,主要由单核细胞和巨噬细胞分泌。IL-1β可参与细胞分化、增殖等多种细胞的生命活动,并参与调控细胞凋亡过程。本研究旨在探讨IL-1β参与卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡作用及其机制。方法设计并合成IL-1β的小干扰RNA(si-IL-1β),转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后并用BCG感染,采用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,ELISA法检测细胞培养液上清中IL-1β的分泌水平,DCF法检测细胞内ROS水平,AnnexinV-FITC/碘化丙啶(propidine iodide,PI)双荧光染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR和Western blot法检测凋亡相关因子Caspase3、Bad、Bax以及Mcl-1蛋白及其基因(mRNA)的表达。结果 BCG感染巨噬细胞24 h后,IL-1β表达水平极显著上调,并且呈时间梯度依赖性(P<0.01);同时,与对照相比,BCG感染后巨噬细胞存活率下降,约为33%,而凋亡率显著上调到58.56%(P<0.01),并且凋亡关键调控因子Caspase3、Bad、Bax的mRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0.01),而抑凋亡蛋白Mcl-1的表达水平显著下调(P<0.01),细胞内ROS富集(P<0.05),而si-IL-1β处理可显著逆转由BCG诱发的细胞凋亡、ROS含量富集及凋亡相关蛋白表达水平上调等。结论 BCG可诱导细胞内IL-1β的表达;IL-1β通过上调促凋亡蛋白Bad、Bax表达,下调抑凋亡蛋白Mcl-1表达,上调细胞内ROS的表达并参与调控BCG诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡。这为阐明IL-1β在BCG诱导的细胞凋亡中的作用奠定了分子基础。     

锌离子与雷公藤多甙诱导的细胞生物周期变化

目的 探讨锌离子对雷公藤多甙诱导人前骨髓白血病细胞（HL－60）生物周期变化的影响。方法 （1）测定HL－60的细胞表型、细胞膜Fas蛋白的表达;（2）将HL－60与雷公藤多甙共培养,观察细胞形态、生物周期变化和DNA电泳分析以及锌离子对细胞生物周期变化的影响。结果 （1）HL－60细胞表型为CD4^4CD8^-CD19^-IFN- γ^ IL-8^-,细胞膜Fas蛋白表达较弱;（2）与雷公藤多甙共培养后,HL－60发生了与细胞凋亡相关的细胞生物周期变化;此作用主要影响G2／M和S期细胞,并且呈剂量和时间依赖性;（3）锌离子几乎完全阻断雷公藤多甙诱导HL－60细胞生物周期变化的作用。结果 （1）HL－60具有Th1淋巴细胞样细胞特征,Fas膜蛋白表达较弱;（2）雷公藤多甙诱导HL－60发生的细胞周期变化受锌离子影响。推测：在体内,锌离子可能影响雷公藤多甙对多种自身免疫性疾病的临床治疗作用及副作用。     

大鼠心肌缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡与Fas、FasL基因表达的变化

目的：探讨大鼠实验性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡与Fas及Fas蛋白配体（Fas Ligand,FasL）基因表达的变化及与心肌组织损伤的关系。方法：以穿线结扎或松扎左冠状动脉制备大鼠心肌缺血再灌注模型。64只大鼠随机分成假手术组（假手术24h）、缺血再灌注I组（缺血30min、再灌注24h）、缺血再灌注Ⅱ组（缺备30min、再灌注72h）及缺血再灌注Ⅲ组（缺血3h、再灌注24h）。以缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡的变化,S－P免疫组化法分别检测Fas与FasL蛋白水平变化,采用逆转录聚合酶链反应法检测Fas基因mRNA的表达改变,并分析心肌组织病理学损伤程度。结果：心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡指数Fas蛋白阳性染色指数与炎性细胞FasL蛋白阳性染色指数均增加,且均随缺血或再灌注时间延长而进一步增高; Fas基因的mRNA表达也上调,但以再灌注24h时达高峰;心肌缺血再灌注后心肌组织呈大小不一的灶性坏死,坏死周围有爆炸性一细胞浸润。结论：心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡、Fas基因的蛋白与mRNA表达水平及炎性细胞的FasL蛋白表达量均增加,心肌细胞凋亡与Fas/FasL系统参与了心肌缺血再灌注损伤过程。     

猪供心热缺血移植后对细胞凋亡和Bcl-2、Bax、Fas表达的影响

目的:研究供心常温热缺血后细胞凋亡和Bcl2、Bax、Fas蛋白表达的变化。方法:利用猪原位心脏移植实验方法,猪18只随机分为3组,对照组（C,n=6）灌注低温保护液后切取供心,4℃保存4h;热缺血1组（E1,n=6）常温阻断主动脉缺血5min后,灌注低温保护液后切取供心;热缺血2组（E2,n=6）常温阻断主动脉缺血10min后,灌注低温保护液后切取供心。3组低温保存供心4h后分别行原位心脏移植。供心移植2h后取左心室心肌检测心肌细胞凋亡和Bcl2、Bax、Fas蛋白的表达。结果:供心移植2h后,E1、E2组心肌细胞凋亡显著高于C组（P<0.01）,E2组心肌细胞凋亡显著高于E1组（P<0.01）,Bcl2蛋白表达C组高于E1、E2组（P<0.01）,Bax和Fas蛋白表达C组低于E1、E2组（P<0.01）。结论:供心热缺血移植后的心肌细胞凋亡增加,Bcl2、Bax、Fas参与了凋亡发生。     

Graves病患者甲状腺细胞凋亡的初步研究

目的　研究Graves病 (GD)甲状腺细胞凋亡和凋亡相关蛋白Fas、可溶性Fas(sFas)及Fas配基 (Fas L)的表达特征 ,探讨Fas介导的细胞凋亡与GD发病机制之间的内在联系。方法甲状腺组织取自 7例GD手术患者和 3例意外死亡健康个体 ,采用原代甲状腺细胞 (TEC)培养技术、流式细胞术、ELISA及半定量RT PCR法检测TEC凋亡率及Fas、sFas和Fas L的表达情况。结果(1)GDTEC凋亡率为 (3.42± 0 .81) %,明显高于正常对照 (P <0 .0 1)。 (2 )GDTECFas表达率为 (8.3± 1.7) %,与正常对照相比差异无显著性。 (3)GDTEC培养上清液中sFas含量明显高于正常对照(P <0 .0 1)。 (4 )正常及GDTEC均表达Fas及sFasmRNA ,而Fas LmRNA仅在GDTEC表达。与正常对照相比 ,GDTECFasmRNA差异无显著性 ,sFasmRNA含量则明显升高 (P <0 .0 1)。结论GD患者甲状腺细胞存在细胞凋亡和Fas系统的异常表达 ,提示Fas介导的细胞凋亡参与GD的发病过程 ,sFas产生增加可能与甲状腺细胞增殖有关。     

水杨酸钠对白介素1β致体外NIT-1胰岛β细胞损伤的保护作用

目的探讨水杨酸钠对白介素（IL）1β致NIT-1细胞损伤的保护作用以及可能的保护机制。方法采用流式细胞技术检测细胞凋亡，Western Blot方法检测细胞核内NF-KBp65蛋白的表达。结果IL-1β＋水杨酸钠（20mmol／L）组的细胞凋亡率和NF-KBp65蛋白含量较单-IL-1β组明显下降，与未干预组无显著差异。结论水杨酸钠能够显著抑制IL-1β诱导的NIT-1细胞凋亡以及IL-1β诱导的NF-KB的活化。     

原花青素对β-淀粉样肽（25—35）诱导PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素（Procyanidins，PC）对β-淀粉样肽（25-35）（hi325弗）诱导凋亡PCI2细胞bax和bcl-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变，RT—PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量PC预处理PC12细胞1h，可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡，增加细胞存活率，减少Aβ25-35引起的细胞核固缩、核碎裂，降低baxmRNA及Bax蛋白表达，增加bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35诱导的PCI2细胞凋亡，其机制可能与下调凋亡基因bax和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。