吗啡依赖大鼠脑内环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的磷酸化

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)有两种形式:具有转录活性的二聚体和无转录活性的单体.CREB133位的丝氨酸残基(Ser133)可被PKA、PKC或Ca2+/CaM等磷酸化,磷酸化后的CREB(pCREB)形成同源二聚体或与CREB/ATF1(激活转录因子1)家族的其他成员形成异二聚体.     

慢性间歇低氧对大鼠认知功能及大脑环磷酸腺苷反应单元结合蛋白表达的影响

目的:探讨慢性间歇低氧对大鼠认知功能及大脑环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(CREB)表达的影响.方法:通过常压低氧仓建立间歇低氧大鼠模型,即对成年大鼠每90 s交替给予10%氧和21%氧.每天8 h,连续处理14 d后,以Morris水迷宫观察大鼠空间学习记忆的变化,并采用RT-PCR法观察大鼠皮层区及海马氏环磷酸腺苷反应...     

捕食应激对大鼠海马环一磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的 探讨严重心理应激所致情感行为异常与认知功能受损的神经生物学机制.方法 在大鼠捕食应激模型基础上,通过免疫组织化学与蛋白质免疫印迹检测,观测应激大鼠神经细胞核转录因子环一磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(pCREB)与CREB结合蛋白(CBP)表达的分布特点与动态变化规律.结果 免疫组化研究显示,捕食应激后12 h应激大鼠脑组织CREB阳性免疫反应信号明显弱于对照组(对照组海马与额叶皮质分别为1.78±0.40和1.18±0.26,应激大鼠分别为0.55±0.13和0.88±0.20,P＜0.01),且以海马结构的改变更明显(与额叶皮质相比,P＜0.01);pCREB与CBP阳性免疫反应信号则明显高于对照组(P＜0.01),而pCREB表达亦以海马细胞增强得更明显(与额叶皮质相比,P＜0.05).海马组织免疫印迹检测进一步揭示捕食应激后1 h应激大鼠海马CREB即较对照组明显下调(应激大鼠为2.82±0.65,对照组为11.86±2.47,P＜0.01),24 h仍显著低于对照组(应激大鼠为5.12±1.13,对照组为10.56±2.38,P＜0.01);CBP表达则同步明显增多(1、24 h应激大鼠分别为1.77±0.39和2.44±0.55,对照组分别为1.06±0.24和0.86±0.20,P＜0.01);而pCREB表达仅于1、12 h显著增高(1、12 h应激大鼠分别为2.56±0.59和1.93±0.41,对照组分别为1.04±0.22和0.96±0.21,P＜0.01).结论 捕食应激后中枢神经系统,特别是选择性海马结构的CREB转录途径的改变,在短暂严重心理应激所致长时程情感行为异常与空间学习和记忆等认知功能受损中可能有重要意义.     

基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能改善机制

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能的改善机制。方法:采用改良线栓法缺血2 h,再灌注24 h建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和丙泊酚低(1 mg/ml)、中(2.5 mg/ml)、高剂量(5 mg/ml)组,各12只,另设含有12只大鼠的假手术组。分组后即开始给药,1次/d,共4周,末次给药12 h后,采用改良神经功能评分(mNSS)法进行神经缺损评分;采用TTC染色法检测脑梗死面积;HE、Nissl染色进行神经元细胞及尼氏小体形态学观察;Tunel法进行神经元细胞凋亡检测;Elisa法检测脑组织cAMP、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)含量;免疫荧光法检测脑组织环磷酸腺苷(cAMP)、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数;Western blot法检测脑组织PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量。结果:模型组大鼠比较假手术组大鼠的mNSS评分、脑梗死面积百分比显著增加(均P<0.05...     

电磁辐射对大鼠海马神经元钙调蛋白激酶Ⅱ和环磷腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的探讨2000μW／cm2电磁辐射后钙调蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和环磷腺苷反应元件结合蛋白（CREB）在元代培养海马神经元中表达的变化和意义。方法体外培养新生大鼠大脑海马神经元,实验分为空白对照组,假辐射组和1h／d、2h／d、3h／d辐射组。辐射组接受功率密度为2000μW／cm。的近场辐射,连续辐射5d。采用Western—Blot法检测海马神经元CaMKII和CREB蛋白的表达,RT—PCR法检测CaMKII和CREBmRNA表达的变化。结果电磁辐射后,1h／d、2h／d、3h／d辐射组大鼠海马神经元CaMKⅡ蛋白[分别为（0．59±0．05）、（0．44±0．08）、（0．18±0．04）]及其mRNA[分别为（0．41±0．08）、（0．34±0．04）、（0．24±0．02）]表达水平较空白对照组[（0．78±0．07）、（0．62±0．12）]明显降低（P〈0．05）;CREB蛋白[分别为（0．49±0．05）、（0．40±0．04）、（0．17±0．03）]及其mRNA[分别为（0．68±0．11）、（0．53±0．08）、（0．30±0．03）]表达水平较空白对照组[（0．69±0．10）、（0．80±0．12）]明显降低（P〈0．05）。结论海马神经元CaMKⅡ和CREB的表达变化可能参与了电磁辐射致大鼠学习记忆功能改变的病理生理过程。     

大鼠脑创伤对学习记忆及海马环磷腺苷反应元件结合蛋白的影响

目的 观察脑创伤早期的脑含水量、环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化水平,探讨脑创伤和磷酸化CREB(p-CREB)水平的改变对学习记忆的影响.方法 将54只成年雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为正常组、对照组、创伤性脑损伤(TBI)组,每组18只.采用改良的Feeney法和前期实验参数建立TBI大鼠模型,Western blot观察创伤后12h脑海马组织CREB和p-CREB表达、干湿质量法测定脑组织含水量和Morris水迷宫实验.结果 大鼠TBI后12 h脑组织含水量,与正常组和对照组相比,TBI组升高明显(P＜0.01).与正常组和对照组比较,TBI组大鼠TBI后12h海马CREB和p-CREB蛋白的表达量降低明显;潜伏期增加,2 min内寻求正确次数减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TBI后脑水肿明显,CREB和p-CREB水平降低,可能是使认知和学习记忆功能受损的原因之一.     

百合知母汤对抑郁症大鼠环磷酸腺苷信号通路的影响

目的:观测百合知母汤对抑郁症大鼠学习记忆功能的影响,探讨其环磷酸腺苷信号转导机制。方法:将50只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、氟西汀组、百合知母汤高、中剂量组5组;除正常组外,其余4组采用慢性温和不可预见刺激结合孤养制造抑郁症模型,共49d;于第22天各组动物分别灌胃生理盐水、氟西汀及百合知母汤高、中剂量,共计28d;于第50天采用Morris水迷宫法分别进行定位航行及空间探索实验,分别测定大鼠逃避潜伏期、穿越第4象限时间、路程、第一次穿越时间、穿越次数等;ELISA法、Western-blot、qPCR法分别测定大鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的含量。结果:与模型组比较,百合知母汤高、中剂量组大鼠逃避潜伏期、穿越第4象限时间路程、第一次穿越时间均降低,穿越次数升高(P<0.05,0.01);海马cAMP、PKA、CREB的含量提高(P<0.05,0.01)。结论:百合知母汤能改善抑郁症大鼠学习记忆功能,其机制可能与激活cAMP-PKA-CREB信号转导通路有关。     

马桑内脂致小鼠癫痫脑内环磷酸腺苷的改变

To study the relationship between cAMP and epilepsy, we investigated the effects of coriaria lactone (CL) on the levels of cAMP in cerebral cortex and hippocampus. Fifty normal WC1 mice were divided into 5 groups. All groups were injected with CL (2.5 mg/kg, i.m.), except the control group which was injected with NS. The concentrations of cAMP were measured after the animals had been immersed in liquid nitrogen to die at different phases of seizure development induced by CL (before seizures, in mild seizures, during severe seizures, and after severe seizures). The results indicated that the levels of cAMP in both cerebral cortex and hippocampus were significantly increased (1.73-fold and 1.33-fold) in severe seizure, and they continuously increased (1.85-fold and 1.45-fold) after severe seizures. On the other hand, no changes of cAMP were observed in mild seizures and before seizures. These data suggested that accumulation of cAMP is probably the result of seizure activity rather than the cause of seizure.     

戊四氮诱发慢性癫痫大鼠学习记忆改变及海马环磷腺苷反应单元结合蛋白的表达

目的探讨戊四氮(PTZ)诱发慢性癫痫大鼠学习记忆能力改变及环磷腺苷反应单元结合蛋白(CREB)表达的变化。方法将20只大鼠随机分为正常对照组和观察组,每组10只,观察组按3.5 m L·kg-1连续腹腔注射10 g·L-1的PTZ 30 d建立慢性癫痫模型,以出现全身强直-阵挛性发作为模型制备成功;正常对照组每日腹腔注射生理盐水3.5 m L·kg-1,连续30 d。2组大鼠进行Y迷宫实验,记录错误反应次数(EN)、全天总反应时间(TRT),观察各组大鼠学习记忆能力;Western blot方法测定大鼠海马组织内磷酸化CREB(P-CREB)133位的丝氨酸残基(Ser133)蛋白表达水平。结果观察组大鼠的EN显著高于正常对照组,观察组大鼠的TRT显著长于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组大鼠海马组织中P-CREB(Ser133)蛋白表达水平较正常对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论海马组织内CREB表达水平降低可能是癫痫大鼠学习记忆等认知功能障碍发生的分子机制之一。     

马桑内酯致小鼠癫痫脑内环磷酸腺苷的改变

作者给小鼠肌肉注射马桑内酯2.5mg/kg,引起重型癫痫发作,测定小鼠皮层和海马的环磷酸腺苷(cAMP)水平。结果表明:在癫痫发作之前和轻型发作时,小鼠皮层和海马的cAMP含量无明显改变;重型发作和发作结束后,小鼠皮层和海马的cAMP水平显著增加。此结果提示癫痫发作时脑内cAMP水平增加,很可能是发作的结果而不是引起发作的原因。     

锌对神经病理性疼痛模型小鼠脊髓磷酸化 cAMP 反应元件结合蛋白表达的影响

目的研究锌对神经病理性疼痛（neuropathic pain,NPP）模型小鼠脊髓磷酸化（phosphoryhion,p）的cAMP反应元件结合赁自（camp response—element binding protein,CREB）表达的影响。方法72只C57／BL6小鼠随机分为4组,正常喂养的NPP组锌饲料30mg／（kg·d）喂养2周,低锌喂养的NPP组锌饲料0．85mg／（kg·d）喂养2周,高锌喂养的NPP组用硫酸锌水溶液227mg／（L·d）喂养2周。采用足底注射辣椒素（0．5％5μl）制备NPP模型：对照组锌饲料30mg／（kg·d）喂养2周后足底注射溶剂。应用原子吸收光谱、免疫组织化学、免疫印迹和图像分析技术检测术后7d锌对脊髓pCREB表达的影响。结果高锌喂养能显著增加血清和脊髓中锌的含量,脊髓pCREB表达下调（P〈0．01）;而低锌喂养加重血清和脊髓的缺锌状况,脊髓pCREB表达上调（P〈0．01）。结论锌能抑制NPP模型小鼠脊髓pCREB的表达。     

肾环磷酸腺苷含量下降与实验性肾病大鼠水潴留有关

目的确定血管升压素(DDAVP)及其信使环磷酸腺苷(cAMP)在实验性肾病大鼠水潴留中的作用.方法将42只大鼠分为两大组共6个小组,每组7只.第一大组为对照组,包括正常对照组(组1)、DDAVP组(组2)、DDAVP拮抗剂组(组3).第二大组为肾病组,包括阿霉素(ADR)组(组4)、ADR+DDAVP组(组5)、ADR+DDAVP拮抗剂组(组6).测定肾髓质的cAMP含量、尿渗透压和血渗透压等的改变.结果在给予DDAVP或DDAVP拮抗剂以后,第1～6组大鼠的尿渗透压分别为(1771.5±879.4)、(2145.0±936.2)、(1763.6±497.5)、(1049.6±272.3)、(1144.8±242.8)和(992.7±195.7)mmol/L,ADR肾病大鼠尿渗透压显著下降,其一级处理因素ADR的F值(下同)为113.069,P=0.000443;血渗透压分别为(302.2±8.7)、(296.4±9.5)、(307.9±6.4)、(286.2±5.3)、(288.5±6.2)和(290.2±6.5)mmol/L(F=17.3022,P=0.0142);无溶质水清除率(CH20)分别为(-0.84±0.44)、(-1.37±0.74)、(-1.06±0.58)、(-1.03±0.38)、(-1.02±0.6)和(-0.85±0.49)ml/h(F=0.0241,P=0.8843).肾髓质的cAMP含量分别为(652.22±151.97)、(709.07±84.46)、(566.62±38.51)、(77.11±16.02)、(83.01±20.59)和(84.03±25.72)pg/mg蛋白质(F=177.033,P=0.000184).结论肾髓质环磷酸腺苷含量的减少与阿霉素肾病大鼠水潴留有关,由于血管升压素并不能增加本模型大鼠肾髓质组织cAMP的含量,故它在本模型水潴留的机制中并不发挥显著作用.     

糖尿病大鼠脑组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白及β-淀粉样蛋白的表达及意义

目的:分析糖尿病大鼠认知行为学改变与脑组织β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(phosphorylated CREB,pCREB)表达变化的相关性,为探讨糖尿病糖代谢异常在阿尔茨海默病发病中的作用机制奠定基础。方法:腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱发糖尿病大鼠动物模型,随机分为4周模型组(M4组)、6周模型组(M6组)、8周模型组(M8组),以同批未制模大鼠作为正常对照(N组)。穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,刚果红染色检测大鼠脑内淀粉样物质沉着,Western印迹法、酶联免疫吸附法和RT-PCR检测大鼠脑组织CREB与pCREB的表达,酶联免疫吸附法检测脑组织Aβ表达。结果:行为学检测显示模型组大鼠有显著的认知功能障碍,模型组与正常对照组比较有明显差异(P<0.01);模型组Aβ表达明显增高(P<0.01),模型组CREB与pCREB表达明显降低(P<0.01),而3个模型组比较无统计学差异;Aβ表达水平与CREB、pCREB表达水平负相关,Aβ与学习、记忆损伤正相关,CREB、pCREB与学习、记忆损伤负相关。结论:糖尿病糖代谢异常可能通过下调脑组织CREB、pCREB表达及增强Aβ表达诱发脑损伤,导致认知行为改变。     

吗啡耐受大鼠海马结构M1受体、c-fos和CREB表达改变

目的观察大鼠海马结构在吗啡耐受中的作用。方法 SD大鼠20只随机分为两组:①对照组:背部皮下注射与耐受组等量的生理盐水;②耐受组:背部皮下一日三次逐日递增的注射盐酸吗啡,连续6天后,停止注射,处死全部大鼠,用免疫组化染色方法观察各组海马结构内的M1受体、环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)和c-fos蛋白表达。结果①在光镜下,HE染色显示吗啡耐受组与对照组相比未发现海马结构形态学有异常改变。②耐受组与对照组相比,组织化学染色发现M1受体表达减少,而c-fos和p-CREB的蛋白表达增加。结论海马结构可能参与了吗啡耐受,这可能与海马结构的M1受体表达减少有关,也与转录因子c-fos和p-CREB激活表达有关。     

外源性硫化氢改善癫痫大鼠脑认知功能障碍

目的探讨外源性硫化氢对癫痫(epilepsy,EP)所致大鼠脑认知功能障碍的保护作用及机制。方法利用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射复制雄性SD大鼠96只,6周龄,体质量180～220 g。癫痫模型,大鼠分为正常对照组(NC组)、癫痫模型组(EP组)、癫痫+硫氢化钠组(NaHS组);采用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力;实时荧光定量PCR检测海马中的胱硫醚-β-合酶(CBS)mRNA和CREB mRNA表达变化。结果 EP组的空间辨别学习记忆能力与NC组比较明显减退:Morris水迷宫定位航行实验中逃避潜伏期明显延长(P<0.01),第3象限探索有效时间显著缩短(P<0.05)、第3象限游泳距离占总距离的百分比以及穿越平台次数明显减少(P<0.01);NaHS可提高癫痫大鼠的学习记忆能力,与EP组比较,空间学习记忆能力各项检测指标均有显著差异(P<0.05,P<0.01)。7、30 d时EP组大鼠海马CBSmRNA表达水平明显低于NC组(P<0.05),而NaHS组CBS mRNA表达水平明显高于EP组(P<0.05);EP组海马CREBmRNA表达在7、30 d时均明显低于NC组(P<0.05),而NaHS组CREB mRNA在24 h、7、30 d时表达显著高于EP组(P<0.05),与NC组相比,7、30 d时均无差异(P>0.05)。结论外源性H2S可能通过上调癫痫大鼠其海马CBS、CREBmRNA表达来改善癫痫大鼠的学习记忆能力。     

CDK5在吗啡依赖诱导神经细丝蛋白过度磷酸化中的作用

【目的】 探讨吗啡依赖小鼠大脑皮质细胞周期依赖性蛋白激酶-5(CDK5)与蛋白磷酯酶-2A(PP-2A)变化及其对神经细丝蛋白磷酸化的作用&#65377;【方法】 雄性昆明小鼠28只,随机等分为对照组&#65380;吗啡依赖组&#65380;roscovitine(CDK5选择性拮抗剂)预处理组和脑室注射对照组;除对照组外所有小鼠皮下注射吗啡5 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1,连续6 d;roscovitine预处理组于每次皮下注射吗啡30 min前予roscovitine预处理&#65377;免疫印迹法检测神经细丝蛋白磷酸化水平&#65380;p-CDK5 (Ser159)和PP-2A表达水平&#65377;【结果】 在吗啡依赖小鼠前额叶皮质,p-CDK5 (Ser159)表达增加,神经细丝蛋白过度磷酸化;应用CDK5的选择性抑制剂roscovitine预处理后,p-CDK5(Ser159)表达减少,神经细丝蛋白磷酸化水平降低;各组间PP-2A表达水平差异无统计学意义&#65377;【结论】 CDK5活性失调可能诱导吗啡依赖小鼠神经细丝蛋白过度磷酸化&#65377;     

银杏叶片对衰老大鼠大脑皮层环腺苷酸反应元件结合蛋白表达的影响

目的 研究银杏叶片对衰老大鼠皮层核转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(pCREB)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠分为青年对照组、老年对照组和银杏叶组.银杏叶组大鼠每日灌胃银杏叶片,其余两组动物灌胃等量蒸馏水,共8周.Morris水迷宫实验观察大鼠空间记忆变化,western blot检测皮层CREB、pCREB表达.结果 (1)与青年对照组(9.6±2.88,41.55±6.30)比较,老年大鼠逃避潜伏期延长,穿越平台次数(6.8±2.49)、平台象限停留时间(34.92±4.56)减少(P＜0.05);与老年对照组比较,EGb组大鼠逃避潜伏期缩短,穿越平台次数和平台象限停留时间(9.4±2.63,41.0±6.68)延长(P＜0.05).(2)老年对照组大鼠皮层CREB、pCREB表达水平分别为(0.70±0.21,0.13±0.05),低于青年对照组(1.07 ±0.33,0.26±0.04),差异具有显著性(P＜0.05);与老年对照组比较,银杏叶组大鼠皮层CREB、pCREB表达升高(1.02±0.18,0.18±0.02) (P＜O.05).结论 银杏叶片可能通过上调老年大鼠大脑皮层CREB、pCREB表达改善空间学习和记忆功能.     

沙土鼠急性脑缺血／再灌注期间脑内环磷酸腺苷含量的变化

本文利用结扎沙土鼠双侧颈总动脉模型，观察了急性脑缺血／再灌注期间脑内环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）含量的变化，结果表明，缺血４０分钟时脑内ｃＡＭＰ含量已明显降低；再灌注１小时后其含量进一步下降。实验结果揭示脑缺血／再灌注损伤与环核苷酸代谢紊乱密切相关。