胰岛移植临床技术操作规范(2019版)

为了进一步规范胰岛移植的临床技术操作,中华医学会器官移植学分会组织器官移植学专家从胰岛移植的适应证和禁忌证、供者胰岛制备及移植前处理、胰岛移植受者的术前检查和准备、胰岛移植植入术的技术操作规范、胰岛移植的术后处理、胰岛移植的免疫抑制方案、胰岛移植的并发症、胰岛移植的术后随访、自体胰岛移植等方面,制订本规范。     

临床胰岛移植研究进展(文献综述)

近年来临床胰岛移植取得了长足的进步 ,但器官获取和胰岛分离方法缺陷、移植后早期胰岛丧失及移植排斥和自身免疫仍是影响临床移植成功的重要因素。本文就临床胰岛移植的现状和在上述方面的进展作一综述     

临床胰岛移植研究进展（文献综述）

近年来临床胰岛移植取得了长足的进步，但器官获取和胰岛分离方法缺陷、移植后早期胰岛丧失及移植排斥和自身免疫仍是影响临床移植成功的重要因素。本文就临床胰岛移植的现状和在上述方面的进展作一综述。     

脂肪间充质干细胞与胰岛联合移植对术后免疫状态及移植效果的影响

目的研究同系脂肪间充质干细胞(AMSC)与同种异体胰岛联合移植对胰岛移植术后免疫状态及移植效果的影响。 方法选择Lewis大鼠建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型作为胰岛移植受体,AMSC＋胰岛移植组经左肾包膜下联合移植Lewis大鼠AMSC及Wistar大鼠胰岛,单纯胰岛移植组经左肾包膜下单独移植Wistar大鼠胰岛,单纯AMSC移植组经左肾包膜下单独移植Lewis大鼠AMSC,阳性对照组为未进行移植的Lewis糖尿病大鼠,阴性对照组为正常Lewis大鼠。ELISA法检测血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度,流式细胞技术检测外周血CD4^＋、CD8^＋ T细胞比例,HE染色观察移植胰岛淋巴细胞浸润情况,观察血糖、胰岛素水平及胰岛移植物存活时间。采用单因素方差分析比较5组大鼠外周血淋巴细胞亚群比例和血清细胞因子水平,采用LSD法进行组间两两比较;血糖及血清胰岛素变化采用重复测量资料方差分析;采用独立样本t检验比较AMSC＋胰岛移植组与单纯胰岛移植组胰岛移植物淋巴细胞计数。采用Kaplan-Meier法绘制AMSC＋胰岛移植组与单纯胰岛移植组胰岛移植物生存曲线,并采用log-rank检验进行比较。P<0.05为差异有统计学意义。 结果AMSC＋胰岛移植组胰岛移植物平均生存时间为(26.8±3.0) d,长于单纯胰岛移植组的(19.0±1.3) d,两组大鼠胰岛移植物生存曲线差异有统计学意义(χ²＝4.494,P<0.05)。胰岛移植后各时间点,AMSC＋胰岛移植组大鼠移植后血糖和胰岛素水平均优于单纯胰岛移植组(P均<0.05)。胰岛移植前,5组大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋ T细胞比例以及细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10差异均无统计学意义(F＝0.425、0.476、0.256、0.418、0.281和0.313,P均>0.05)。胰岛移植后第7、14、28天,AMSC＋胰岛移植组大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞比例均低于单纯胰岛移植组(P均<0.05),血清IFN-γ和IL-2浓度均低于单纯胰岛移植组(P均<0.05),IL-4和IL-10浓度均高于单纯胰岛移植组(P均<0.05)。胰岛移植第7天,AMSC＋胰岛移植组胰岛移植物平均淋巴细胞计数为(142±21)个/mm²,低于单纯胰岛移植组的(311±36)个/mm²(t＝8.245,P<0.05)。 结论与胰岛联合移植的AMSC能够提高胰岛移植的效果,可调节糖尿病大鼠体内IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10表达及抑制同种异体胰岛刺激的T细胞增殖,减轻胰岛移植物的免疫损伤。     

骨髓间充质干细胞移植可促进移植胰岛周围新生血管形成

目的  探讨胰岛移植联合骨髓间充质干细胞（MSC）移植能否促进移植胰岛周围新生血管形成。方法  以非肥胖糖尿病（NOD）小鼠作为受体,将NOD小鼠随机分为4组,联合移植组（6只）、单独胰岛移植组（6只）、单独MSC移植组（6只）、假性移植组（3只）。观察各组NOD小鼠移植后血糖和存活率的变化;采用5-乙炔基-2’脱氧尿苷（EdU）及dUTP缺口末端标记（TUNEL）方法,在胰岛移植后1、2、4周检测单独胰岛移植组和联合移植组移植胰岛的增殖与凋亡情况;采用光学显微镜（光镜）直接观察、组织化学及免疫组化的方法观察并定量分析,移植术后2、4、8周单独胰岛移植组和联合移植组移植胰岛的周围新生血管密度。结果  MSC联合移植与胰岛单独移植均能明显改善移植后小鼠的血糖水平,提高NOD小鼠的存活率。MSC联合移植可促进胰岛细胞再生,减少细胞凋亡。联合移植组移植胰岛周围血管密度明显大于单独胰岛移植组。结论  MSC可以促进移植胰岛周围新生血管生成,增加移植胰岛的血供,保护移植胰岛的功能与活性。     

微囊化胰岛移植优化策略研究进展

胰岛移植是治疗糖尿病的有效方案之一,但目前仍存在供者短缺以及长期应用免疫抑制剂所致的不良反应等问题,导致移植后胰岛存活受限。微囊化胰岛移植技术可在一定程度上克服这些困难,但微囊内免疫隔离微环境破坏、氧气和营养物质供应不足等多种因素限制了微囊化胰岛移植的临床应用。近年来,关于提高微囊化胰岛移植效果的研究逐渐增多,干细胞在微囊化胰岛移植中的应用也逐步成为研究热点。因此,本文围绕微囊化胰岛移植的优化策略及干细胞在微囊化胰岛移植中的应用进行综述,探讨微囊化胰岛移植潜在的改进方法,旨在为微囊化技术在胰岛移植中的进一步临床应用研究提供参考。     

胰岛移植治疗1型糖尿病的现状和未来

1型糖尿病是一种全球性的慢性自身免疫疾病,会造成机体一系列代谢紊乱综合征,严重危害人类健康。胰岛移植可以通过增加1型糖尿病患者体内胰岛细胞的数量,减少患者对外源性胰岛素的依赖、有效控制血糖以及防治长期并发症,是一种安全可靠的治疗方法,这都是外源性胰岛素治疗和移植风险极高的全胰腺移植无法实现的。本文就胰岛移植供受体选择、胰岛细胞的分离纯化及胰岛移植、胰岛移植后的免疫抑制治疗、胰岛移植后的监测指标、胰岛移植临床应用的现状以及面临的挑战做一综述。     

胎肝胰岛细胞联合移植治疗糖尿病大鼠

目的探讨胎肝胰岛细胞联合移植治疗糖尿病大鼠的效果,以及胎肝细胞移植诱导糖尿病受者鼠免疫耐受的可行性.方法建立SD大鼠糖尿病模型,将实验动物随机分为正常对照组、糖尿病对照组、胰岛细胞组及肝细胞胰岛细胞联合移植组.将SD胎鼠的胰岛细胞移植于受者浆膜下,观察受者鼠的糖尿病病情变化及免疫状态.结果移植后58.8%(20/34)动物糖尿病得到缓解.联合移植组移植胰岛细胞存活期较胰岛细胞组明显延长(P<0.01);移植后1周,联合移植组血清胰岛细胞肽水平明显高于胰岛细胞组和糖尿病对照组(P＜0.01);脾细胞产生白细胞介素2(IL-2)的活性联合移植组显著低于胰岛细胞组(P＜0.001).结论胃浆膜下是大鼠胰岛移植较理想的移植部位;肝细胞移植可以明显延长移植胰岛细胞的功能存活期,并诱导受者产生特异性免疫耐受和非特异性免疫抑制.     

胰岛保护和功能维护的研究进展

胰岛移植在糖尿病及其并发症的治疗中有很广阔的前景,但移植后功能不良、排斥反应和供体不足等是胰岛移植领域的瓶颈。优化胰腺保存方法对获取有效胰岛的数量及功能的维护有积极意义;在培养期间对胰岛进行抗排斥反应和抗凋亡处理,包括间充质干细胞（MSC）、MSC来源的外泌体、抗凋亡药物和基因修饰等可能成为临床胰岛移植胰岛保护与功能维护的重要方法;胰岛移植后抗立即经血液介导的炎症反应（IBMIR）药物的使用对于胰岛功能的保护也具有重要作用。本文围绕从胰岛制备到胰岛移植的全过程,探讨胰岛保护和功能维护相关策略,旨在为提升供体质量以弥补供体绝对数量的不足,提升胰岛移植效率提供参考。     

胰岛移植研究新进展

本文叙述了胰岛移植中的最近进展，诸如供胰的选择，获取及保存，胰岛的分离及纯化、胰岛的培养和冻存，移植的部位和数量，以及有关问题作了介绍。     

胰岛移植的新进展

胰岛移植具有创伤小、风险低、可阻止或延缓慢性并发症、有望根治糖尿病等优点,但是胰岛的分离、纯化及移植技术含量高,导致胰岛的回收率仍然较低;另外,供体短缺、移植后移植物及其功能的维持、免疫排斥反应等限制了胰岛移植在临床的广泛应用.     

胰岛细胞移植的研究进展

糖尿病是一种严重危害人类身体健康和生活质量的全球性常见病,针对1型和部分2型糖尿病患者,胰岛移植将是比较彻底的治疗方法.本研究对包括胰岛细胞移植的分类,胰岛移植物的制备、保存及鉴定,移植部位的选择,免疫排斥机制,基因技术的应用及临床病例治疗技术等方面详细阐述了胰岛细胞移植目前的研究现状.随着分子生物学技术和相关学科迅速发展,细胞混合培养,转基因技术,β细胞株的建立,异源性胰岛细胞移植等一系列方法兴起,胰岛移植必将给彻底治愈1型糖尿病带来新的前景.     

异种胰岛细胞移植的研究进展

随着对糖尿病治疗方法的研究进展,异种胰岛移植已被重新认识。笔者综述异种胰岛移植的发展简史、异种胰岛来源、胰岛移植物的制备及鉴定、主要的免疫排斥反应及其防治措施以及展望异种胰岛移植的前景。     

2000年以后胰岛移植的快速发展

胰岛移植对于1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus, T1DM)及合并低血糖感知障碍、严重低血糖发作的糖尿病患者是一种安全有效的治疗方法。本综述通过回顾2000年"Edmonton方案"提出后国内外胰岛移植的迅速发展, 详细地总结描述了胰岛移植领域的临床研究, 包括临床疗效、术后并发症、预后效果及研究热点, 为研究者提供参考, 帮助基础和临床研究者进一步探究和评价胰岛移植。     

裸鼠糖尿病模型的建立及皮下异种胰岛移植研究

目的 探讨链脲左菌素（STZ）建立BALB/c nu/nu裸鼠Ⅰ型糖尿病模型的方法,及将大鼠胰岛分离纯化后移植至糖尿病裸鼠皮下,对移植后裸鼠进行疗效评价。方法 选用Balb/c裸鼠分为三组：糖尿病且胰岛移植组、糖尿病胰岛未移植组和正常组;用STZ对裸鼠进行糖尿病建模,大鼠胰岛分离、纯化后移植至糖尿病裸鼠背部皮下,进行血糖、体重和HE染色考察,以糖尿病未移植组和正常组作对照。结果 STZ浓度175 mg/kg时,腹腔注射裸鼠糖尿病造模成功率高,纯化的大鼠胰岛活性较好,但移植后疗效平均维持时间约5 d,移植第5 d的OGTT结果显示胰岛皮下移植组和糖尿病组血糖均较正常组高,移植3 d时HE染色显示胰岛在皮下存活,但胰岛中心部位细胞有坏死。结论 本研究建立了一种免疫排斥缺陷宿主异种胰岛皮下移植治疗糖尿病的方法,为进一步探索改进胰岛移植研究提供参考。     

一种小鼠胰岛经门静脉肝内移植方法及疗效评价

目的 介绍一种糖尿病小鼠经门静脉到肝内胰岛移植的方法并进行移植前后的血糖、口服糖耐量、免疫组化等评价。方法 采用Balb/c小鼠,将分离纯化的小鼠胰岛培养6 h后,用自制的移植工具进行糖尿病模型小鼠的肝门静脉插管和输注胰岛,移植胰岛量为（320±30）IEQ,对移植前后的小鼠血糖进行测定,在移植后第10天进行糖耐量试验,并取受体小鼠肝脏,进行HE染色和免疫组化分析,观察胰岛细胞团在肝内的存活情况。结果受体小鼠胰岛移植后血糖均能长期维持正常,糖耐量试验结果显示与正常小鼠无统计学差异（P =0.81）,组织学结果显示胰岛细胞在小鼠肝内存活良好。结论 采用本方法可建立小鼠胰岛经门静脉移植到肝内的模型,为下一步进行胰岛移植相关药物筛选及免疫学等方面研究奠定了基础。     

胰岛细胞与骨髓间充质干细胞联合移植治疗糖尿病的进展

目的总结胰岛细胞与骨髓间充质干细胞联合移植治疗糖尿病的可行性与安全性。方法收集国内外有关胰岛细胞与骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病的文献并作综述。结果目前糖尿病的治疗方法主要为胰腺移植和胰岛细胞移植,其中胰腺移植的手术创伤大、死亡率高;胰岛细胞移植虽安全性较高,但排斥反应强,胰岛细胞在体内的长期存活时间不理想,严重影响其远期疗效。骨髓间充质干细胞与胰岛细胞联合移植能缓解排斥反应,延长胰岛细胞的存活时间,可以更有效地治疗糖尿病。结论胰岛细胞与骨髓间充质干细胞联合移植具有降低排斥反应、减轻炎症反应、延长胰岛细胞的存活时间及延长降血糖时间的效果,可能是新的治疗糖尿病的手段。     

异种胰岛移植

胰岛移植可以使糖尿病患者血糖稳定并能预防严重并发症,由于人类同种胰岛移植存在着供体不足,大量糖尿病患者因此得不到及时治疗。在实验研究基础上,国内外均进行了异种胰岛移植的临床研究,证实了胰岛移植在血糖控制及延缓并发症的发生发展是有效的,但是异种移植的排斥、长期应用免疫抑制剂的安全性、仍是干扰此项研究的障碍。尽管异种移植面临众多困难,但对供体器官和组织的极大需求促使克服种间移植的组织特异性不断取得进展。     

微囊化新生猪胰岛异种移植治疗糖尿病大鼠的实验研究

目的 观察微囊化新生猪胰岛异种移植对糖尿病大鼠的治疗效果及其对糖尿病并发症的预防作用。方法 糖尿病大鼠随机分为3组：①海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊包膜胰岛移植组；②未微囊包膜胰岛移植组，两组均接受胰岛腹腔移植；③未移植组。定期监测移植后血糖，白内障发生情况。并进行肾脏组织病理学检查，比较各组结果。结果 微囊化胰岛移植逆转了糖尿病大鼠的高血糖状态，最长达235天，明显长于未微囊胰岛移植组。有效的早期微囊胰岛移植的大鼠未出现糖尿病性白内障及肾小球基底膜改变，而未移植组及未微囊化胰岛移植组大鼠2～3个月后均出现白内障及肾小球基底膜改变。结论 APA微囊能有效保护移植物的体内存活，微囊化新生猪胰岛移植对大鼠糖尿病及其并发症有较好的治疗及顶防作用。     

Fas配体表达对同种胰岛移植的影响

目的探究睾丸细胞FasL表达能否对共移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用以及胰岛细胞FasL基因转染对同种胰岛移植的影响.方法将同种大鼠胰岛及睾丸细胞同时移植于糖尿病受体,重组腺病毒AdV-FasL感染胰岛细胞后移植,观察移植物存活情况、胰岛功能,并检测移植物内浸润淋巴细胞以及基因转染胰岛细胞凋亡情况.结果单纯移植胰岛组平均存活期为(6.3±0.56)?d.与胰岛细胞同时移植的睾丸细胞数增加至1×107时,存活期大于50?d(P＜0.05).表达FasL的睾丸细胞在移植物内诱导浸润淋巴细胞凋亡.FasL基因转染组出现排斥加速,存活期缩短至(3.4±0.24)?d.FasL转染的胰岛细胞在移植后24h见FasL表达,48h表达增强,移植后FasL转染胰岛细胞凋亡.结论表达FasL的睾丸细胞与胰岛同时移植可诱导活化的淋巴细胞凋亡,使胰岛移植物获得免疫豁免、存活期延长,但通过FasL基因转染使胰岛细胞直接表达FasL引起胰岛细胞凋亡和粒细胞浸润,导致排斥加速.