贵州HCV感染株基因分型研究

为了解本地区ＨＣＶ感染株的基因型及现有分型方法的适用性，从贵州２０６例慢性肝炎和血液病患者中筛出３５份抗－ＨＣＶ阳性血清，用逆转录套式聚合酶链反应作ＨＣＶＲＮＡ检测。３０份ＨＣＶＲＮＡ阳性血清用３种分型方法（核心区特异引物ＰＣＲ，非结构５区特异探针核酸杂交，５′末端非编码区限制性长度多态性分析）进行ＨＣＶ基因分型。结果３份血清为ＨＣＶ２ａ感染，２７份为ＨＣＶ１ｂ感染。对８份ＨＣＶ１ｂ、１份ＨＣＶ２ａ血清的ＰＣＲ扩增产物直接测序，核酸序列分型结果与原型别一致。表明ＨＣＶ１ｂ是贵州地区ＨＣＶ感染株的主要基因型，ＨＣＶ２ａ感染并不常见。以ＨＣＶ基因组不同区域为基础的各方法分型结果间有很好的相符性。     

PCR法检测尿毒症病人血清HCV—RNA结果分析

应用ＰＣＲ技术检测尿毒症病人血清ＨＣＶ—ＲＮＡ１６５例，结果显示：ＥＩＡ检测病人血清抗ＨＣＶ阳性率为６３．０％；抗ＨＣＶ阳性病人ＨＣＶ—ＲＮＡＰＣＲ检出阳性率为６５．３％；抗ＨＣＶ阴性病人检出率为９．８％；ＰＣＲ总阳性检出率为７５．１％。提示：ＣＲＦ病人抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率与输血呈正相关。ＣＲＦ病人接受透析与输血次数愈多，感染ＨＣＶ的机会就愈大。在血清中单独出现抗ＨＣＶ或同时检出抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ者，表明与早期输血感染ＨＣＶ者已产生抗ＨＣＶ，ＨＣＶ—ＲＮＡ阳性与近期输血再次感染者关系极为密切。用ＰＣＲ法直接检测病毒毒粒要早于ＥＩＡ检出抗ＨＣＶ的阳性结果，有利于早期诊断。     

丙型肝炎病毒家庭内传播的4年随访和分子流行病学调查

为研究ＨＣＶ感染的家庭内聚集现象，对某自然村ＨＣＶ感染状况进行了４年随访和分子流行病学调查。应用逆转录巢式多聚酶链反应（ＲＴ－ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）、ＯｋａｍｏｔｏＨＣＶ基因分型法及ＳＳＣＰ法分析ＨＣＶ核心区基因变异。结果：抗ＨＣＶ和／或ＨＣＶＲＮＡ阳性率由４年前的２１．３１％增加至４３．１８％。家庭成员有≥２人抗ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性的５２户，也较４年前增加３．４６倍。经用Ｏｋａｍｏｔｏ法基因分型［１］，该村ＨＣＶ基因型主要为１ｂ／Ⅱ型，占９０．６７％，其余为２ａ／Ⅲ型，占１．３３％，两者混合感染占２．００％。进一步用ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）技术对ＨＣＶ基因变异进行研究，发现在同一家庭内的成员间ＨＣＶｃＤＮＡ的单链构象一致，但不同家庭的成员间ＨＣＶｃＤＮＡ的单链构象呈现多态性。表明该村近４年来ＨＣＶ感染明显增高主要由家庭成员传播所致。ＳＳＣＰ分析比基因分型更适用于ＨＣＶ感染的分子流行病学调查。     

丙型肝炎病毒感染成年树的实验研究

目的：探讨成年树（Ｔｕｐａｉａ）感染ＨＣＶ的可能性。方法：用ＨＣＶＲＮＡ阳性人血清接种１０只健康成年Ｔｕｐａｉａ。观察临床表现；定期检测血清ＡＬＴ和ＨＣＶＲＮＡ正、负链；检测肝组织中ＨＣＶ３种抗原和负链ＨＣＶＲＮＡ；行肝组织病理检查。结果：Ｔｕｐａｉａ接种阳性血清后，１０例均出现不同程度的肝炎症状；１０例血清ＡＬＴ升高，其中３例在２８周时仍高于正常；６例肝组织中ＨＣＶ抗原持续阳性，持续时间大于２８周；１０例出现急性肝炎的肝组织病理学变化，其中４例有慢性肝炎病变。检测４只动物血清的系列标本，ＨＣＶＲＮＡ均呈间歇性阳性；检测３只动物肝组织负链ＨＣＶＲＮＡ均为阳性；检测１例动物肝外组织，其中心肌细胞、胰岛细胞和肾小管上皮细胞中有ＨＣＶ３种抗原染色阳性信号。结论：ＨＣＶ能够感染成年Ｔｕｐａｉａ，并可形成慢性病变，感染率约为６０％，慢性病变发生率约为４０％。Ｔｕｐａｉａ可作为研究丙型肝炎的实验动物     

肝癌及癌旁组织中丙型肝炎病毒基因负链的研究

运用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）等方法检测了５例丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶ—ＲＮＡ）阳性患者的肝癌、癌旁组织和周围血清中ＨＣＶ—ＲＮＡ正链和负链，其中男４例，女１例。结果，正链检测：血清及癌旁组织全部阳性，癌组织中３例阳性。负链检测：血清中均阴性，癌组织３例阳性，癌旁组织５例均阳性。本组５例患者肝脏ＨＣＶ—ＲＮＡ负链阳性，推测ＨＣＶ以ＨＣＶ—ＲＮＡ负链作为模板在感染的肝脏组织中复制，ＨＣＶ持续存在于肝脏组织中对肝癌的发生起了一定的作用。     

中国东北地区HCVRNA阳性血清RT－PCR产物的RFLP分型

为了解东北地区ＨＣＶ感染的基因型，对东北地区４５例ＨＣＶＲＮＡ阳性血清的ＰＣＲ产物用ＲＦＬＰ分析进行基因分型，结果：ＨＣＶⅡ型占８２．２％，Ⅲ型占１５．６％，Ⅱ／Ⅲ混合型占２．２％型。与国内其它地区ＨＣＶ基因型构成比无显著性差异。证明东北地区ＨＣＶ感染也以Ⅱ型为主。     

抗-HCV阴性献血员丙肝病毒感染及意义

目的：探讨抗－ＨＣＶ阴性献血员隐匿性ＨＣＶ感染情况。方法：采用逆转录套式ＰＣＲ检测１００例抗ＨＣＶ阴性献血员血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果：血清中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性２例,ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性６例;有１例血清及ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论：抗－ＨＣＶ阴性的献血员中仍有少数存在ＨＣＶ输血传播的可能,对献血员仅筛查抗－ＨＣＶ是不够的,应对血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－     

中国东北地区HCV RNA阳性血清RT—PCR产物的RFLP分型

为了解东北地区ＨＣＶ感染的基因型，对东北地区４５例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性血清的ＰＣＶ产物用ＲＦＬＰ分析进行基因分型，结果：ＨＣＶⅡ型占８２．２％，Ⅲ型占１５．６％，Ⅱ／Ⅲ混合型占２．２％型。与国内其它地区ＨＣＶ基因型构成比无显著性差异。证明东北地区ＨＣＶ感染也以Ⅱ型为主。     

丙型肝炎患者HCV基因的检测,分型及临床分析

运用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测临床肝炎患者血清中ＨＣＶ ＲＮＡ对５４例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用限制性内切酶Ｓａｕ３ＡＩ／ＨａｅⅢ春５’ＮＣ区扩增产物进行酶切。结果显示４种酶切类型：ＨＣＶ Ⅰ型感染３．７％（２／５４），ＨＣＶⅡ型感染７７．８％（４２／５４），ＨＣＶⅢ，Ⅳ型感染１１．１％（６／５４），ＨＣＶⅡ／Ⅲ，Ⅳ型混合感染７．４％（４／５４）；     

静脉吸毒者丙型肝炎病毒感染的研究

目的 进一步研究静脉吸毒者（ＩＶＤＵＳ）＿中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ（）感染的特点。方法 采用ＥＬＩＳＡ法对１１４份ＩＶＤＵＳ,其中包括人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）阳性５０份,ＨＩＶ阴性６４份,以３主１１８份非静脉吸毒者（ＮＩＶＤＵＳ）血清进行抗ＨＣＶ检测;并采用ＲＴ－ＰＣＲ法对其中抗ＨＣＶ阳性者和４０例抗ＨＣＶ阳性的非吸毒者血清用ＨＣＶ２型引物进行ＨＣＶ０ＲＮＡ检测。结果 ＨＩＶ阳性的ＩＶＤＵＳ抗ＨＣ     

丙型肝炎病毒感染成年树Qu的实验研究

探讨成年树Ｑｕ感染ＨＣＶ的可能性。方法用ＨＣＶＲＮＡ阳性人血清接种１０只健康成年Ｔｕｐａｉａ。观察临床表现；定期检测血清ＡＬＴ和ＨＣＶＲＮＡ正，负链；检测肝组织中ＨＣＶ３种抗原和负链ＨＣＶＲＮＡ；行肝组织病理检查。     

热变性法处理HCVRNA模板直接扩增

采用低浓度２－巯基乙醇作为裂解剂，配合高热变性处理血清等标本中丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶＲＮＡ）模板，将裂解上清直接逆转录，使ＨＣＶＲＮＡ转变为ｃＤＮＡ，再行套式多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增．５８份抗－ＨＣＶ阳性血清标本中，可检出３２份（５５．２％）ＨＣＶＲＮＡ，虽与常规的酸胍酚抽提方法所检出相当（即３０份被检出ＨＣＶＲＮＡ阳性，５１．７％），由于这种直接法省去了用酚及氯仿抽提和醇类沉淀等步骤，具有明显的实用价值。     

输血与丙型肝炎关系的前瞻性研究

对５２例输血前无丙型肝炎的受血者及３０例无输血的对照组随访检测ＡＬＴ、抗－ＨＣＶ、ＨＣＶＲＮＡ等项目，进行输血后ＨＣＶ感染的前瞻性研究。结果显示，５２例受血者中有９例符合输血后丙型肝炎的诊断，发生率为１７．３％，而对照组３０例无１例感染丙型肝炎病毒（ＨＣＶ），两组有统计学差异（Ｐ＝０．０２＜０．０５），且趋势检验χ２＝１６．６７，Ｐ＜０．００５，提示输血传播丙型肝炎仍相当常见，本研究还观察到输血量越大感染丙型肝炎的机会越高。９例输血后丙型肝炎中的８例经１年随访，均转为慢性肝炎，反映丙型肝炎慢性化机率高。对导致９例输血后丙肝的献血员血清标本（４５份）用第２代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ，结果１份可疑阳性，４４份阴性。用反转录ＰＣＲ法检测ＨＣＶＲＮＡ，１２份阳性，３３份阴性。表明目前用于筛选献血员的抗－ＨＣＶ方法尚不够灵敏，尚不足以筛去有可能导致ＨＣＶ传播的供血，因此，避免不必要的输血以预防输血后丙型肝炎的发生仍然是应强调的原则。     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔，以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体，建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ，以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示，以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ，批内变异系数为３．４７％，批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中，有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

丙型肝炎阳性血清直接感染HepG2细胞的初步研究

目的：用丙型肝炎（丙肝）阳性血清（抗ＨＣＶ阳性及ＨＣＶＲＮＡ ＲＴ－ＰＣＲ阳性）感染ＨｅｐＧ２细胞,以期建立稳定的ＨＣＶ感染的细胞模型。方法：采用丙肝阳性血清连续感染法感染ＨｅｐＧ２细胞,用逆转录多聚酶链反应检测传代ＨｅｐＧ２细胞内ＨＣＶＲＮＡ正链和负链,电镜观察感染后的细胞内的病毒颗粒,免疫组化方法检测感染后的细胞内丙肝病毒蛋白抗原（ＨＣＶＮＳ５、ＨＣＶ ｃａｐｓｉｄ）的存在。结果：感染后传代的     

60周干扰素治疗慢性丙肝效果好

６０周干扰素治疗慢性丙肝效果好瑞典为评价延长干扰素治疗对慢性丙肝患者的血清转氨酶和ＨＬＶＲＮＡ的作用，Ｒｅｉｃｈａｒｄ等对４０例血清ＡＣＴ升高１年以上，抗ＨＣＶ阳性，组织学也符合慢性丙肝的患者用ＩＦＮ－ｒ２ｂ治疗（３ＭＵ，每周３次，共６０周）的效果进...     

初乳中检测HCV—RNA的意义

目的 探讨丙型肝炎病毒通过母乳传播的可能性。方法对２２例丙肝血清学标志阳性母亲产后１￣３天内的乳汁,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测ＨＣＶ－ＲＮＡ《结果 丙型肝炎血甭学标志阳性组乳汁中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率为１８．２％。结论乳汁ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者具有传染性,通过哺乳有可能导致婴儿感染ＨＣＶ,而不宜哺乳。     

HCV NS-5区分型引物法检测新疆两城市HCV基因型

目的：了解新疆两城市丙型肝炎病毒感染者中存在哪些基因型，以便为今后防治ＨＣＶ感染提供依据。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ技术，选择ＨＣＶＮＳ－５区设计的分型引物（１ａ、１ｂ、２ａ和２ｂ）进行基因分型。结果：我们检测了１２８例（乌鲁木齐市９７例，克拉玛依市３１例）已证实为丙型肝炎病毒感染者的血清，其中基因分型检测出的９８例中可分为１ａ型１４例（１４．３％）、１ｂ型５８例（５９．３％）、２ａ型１１例（１１．８％）、２ｂ型１０例（１０．３％），混合感染５例（５．２％）（１ａ＋１ｂ型４例，１ｂ＋２ａ型１例）。在乌鲁木齐市和克拉玛依市的ＨＣＶ感染者中１ａ型分别为１１／７３例和３／２５例，１ｂ型分别为４６／７３例和１２／２５例。结论：表明新疆至少存在ＨＣＶ１ａ、１ｂ、２ａ和２ｂ基因型，但以１ｂ基因型感染为主。比较乌鲁木齐市和克拉玛依市两城市的ＨＣＶ基因型分布显示１ａ型和１ｂ型分布有明显差别（χ２＝３６，Ｐ＜０．００１）。另３０例用本方法未能检出分型，提示可能还有其它基因型存在     

丙型肝炎病毒感染者血清ALT,抗—HCV及HCV—RNA关系的分析

对８９例丙型肝炎病毒感染者血清ＡＬＴ、抗－ＨＣＶ及ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测分析，结果表明：抗－ＨＣＶ与ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性检测的符合率为４８．３１％，抗－ＨＣＶ与ＨＣＶ－ＲＮＡ虽然有较好的相关性，但二者无平行关系，说明义气风发－ＨＣＶ仅在某些情况下能反映ＨＣＶ的复制状态，但不能代替ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测，２份ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性血清抗－ＨＣＶ阴性，说明ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测早期诊断意义较抗－ＨＣＶ更大。ＡＬ     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体,建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ,以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示,以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ,批内变异系数为３．４７％,批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中,有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。