急性脑出血患者血肿周围组织IL-17与NF-κB p65的表达

目的分析急性脑出血患者血肿周围组织中IL-17和NF-κB p65表达水平,探讨IL-17/NF-κB信号通路的生物学意义。方法将赤壁市人民医院2014-03—2015-09收治的48例急性脑出血患者依照手术取材时间不同分为4组(6h组,6~24h组,24~72h组,72h组),6例远离血肿病灶区的脑组织作对照组;检测IL-17mRNA及NF-κB p65核蛋白水平。结果对照组与6h组IL-17mRNA表达水平比较无明显差异(P0.05),其余三实验组IL-17 mRNA表达水平显著高于对照组(P0.05);24~72h组血肿周围组织中IL-17 mRNA水平最高,差异均有统计学意义(P0.05);实验组血肿周围组织中NF-κB p65水平均显著高于对照组(P0.05);24~72h组血肿周围组织中NF-κB p65水平最高(P0.05)。结论急性脑出血患者血肿周围组织通过上调IL-17及NF-κB p65的表达加重炎性反应,诱发细胞损伤,造成病情恶化。     

人脑胶质瘤耐药基因MGMT和NF-κB的表达及意义

目的探讨人脑胶质瘤耐药基因MGMT和核转录因子NF-κB的表达及在临床化疗中的意义。方法用免疫组化SP法检测49例人脑胶质瘤和9例正常脑组织标本中MGMT蛋白和NF-κB p65蛋白的表达。结果MGMT蛋白在9例正常脑组织的阳性表达率为66.67%,49例低、高级别胶质瘤标本的阳性表达率分别为72.7%和44.4%,MGMT随胶质瘤恶性程度增高,表达减弱(P<0.05)。NF-κB p65在正常脑组织中未见表达,在低、高级别胶质瘤标本的阳性表达率分别为50.0%和85.2%,3组之间的表达水平差异有统计学意义(P<0.01)。49例胶质瘤标本中,MGMT蛋白表达与NF-κB p65表达呈明显正相关(rs=0.320,P<0.05)。结论MGMT的表达减弱和NF-κB表达增强与脑胶质瘤的病理分级有关,MGMT表达和NF-κB之间有内在联系,共同参与DNA损伤的修复,对烷化剂类抗癌药形成耐药。     

异氟烷预处理对偏头痛大鼠行为学症状及三叉神经节相关蛋白表达的影响

目的探讨异氟烷(ISO)对硝酸甘油所致偏头痛大鼠行为学症状及三叉神经节内相关蛋白表达的影响。方法采用随机数字表法将SD大鼠分为对照组(S组)、模型组(M组)、ISO预处理组(包括低剂量和高剂量组,即L组和H组),每组10只,并采用皮下注射硝酸甘油法制备偏头痛模型。L组和H组于造模前30 min分别给予1%和2%ISO吸入麻醉30 min。观察并比较各组大鼠造模后耳红出现和消失的时间及每30 min时间(T_(1-7))段内的挠头、爬笼次数。采用Western blot测定三叉神经节内白介素-1β(IL-1β)、环氧合酶-2(COX2)、降钙素基因相关肽(CGRP)及核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达水平。结果与S组相比,M组和ISO预处理组大鼠造模后均出现双耳发红及挠头、爬笼次数均增多等现象,三叉神经节内IL-1β、COX-2、CGRP及胞核NF-κB p65蛋白表达水平明显升高,胞浆NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P 0. 05);与M组相比,ISO预处理组大鼠耳红消失的时间明显缩短,T_(2-7)时挠头次数均明显减少,T_(2-6)时爬笼次数均明显减少,三叉神经节内IL-1β、COX-2、CGRP及胞核NF-κB p65蛋白表达水平明显降低,胞浆NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P 0. 05),且H组较L组更明显(除胞浆NF-κB p65蛋白外)。结论异氟烷能改善偏头痛大鼠的行为学症状,其机制可能与下调三叉神经节内IL-1β、COX-2、CGRP蛋白的表达水平及抑制NF-κB的激活有关。     

小檗碱对癫痫大鼠脑组织P-糖蛋白表达的影响

目的 探讨小檗碱(BBR)对癫痫大鼠脑组织P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法 将44只SD大鼠随机分为假手术组(9只)、癫痫组(9只)和BBR 10 mg/kg(9只)、20 mg/kg(9只)、40 mg/kg组(9只).采用大鼠海马注射海人酸方法制作癫痫模型,各BBR干预组分别于术前48 h、术前24h和术后6h腹腔注射相应剂量BBR.观察各组大鼠癫痫发作潜伏期及发作严重程度.造模24 h后,采用免疫组化方法检测并比较各组大鼠海马CA3区P-gp和核因子-κB(NF-κB) p65的表达水平.结果 BBR 20 mg/kg组[(66.11±5.90) min,(26.67±6.67) min]和40 mg/kg组[(76.33±9.11) min,(42.00±7.73) min]大鼠癫痫发作潜伏期及初次至第6次≥Ⅳ级痫样发作间隔时间均明显长于癫痫组[(41.78±10.45) min,(9.44±4.25)min](均P＜0.05).各组大鼠海马CA3区NF-κB p65和P-gp表达的差异均有统计学意义(H=16.024,H=21.830;均P＜0.01).癫痫组海马CA3区NF-κB p65和P-gp表达显著高于假手术组(均P＜0.05);BBR 20mg/kg和40 mg/kg组表达显著低于癫痫组(均P＜0.05).结论 BBR能够延长癫痫发作潜伏期、降低其严重程度,并抑制癫痫大鼠脑组织NF-κB和P-gp的表达.     

Necrostatin-1对TLR4/NF-κB途径的调控在大鼠脑缺血再灌注后小胶质细胞活化中的意义

目的本研究拟通过观察Necrostatin-1(Nec-1)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)后离子型钙接头蛋白-1(iba-1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB/p)、和白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,探讨Nec-1对大鼠I/R后小胶质细胞活化中的意义和可能的脑保护机制。方法 (1)取成年雄性SD大鼠48只,体重(250±10) g,随机分为假手术组(Sham)、手术组(MCAO)、DMSO溶剂对照组(DMSO)、Nec-1干预组(Nec-1),每组再分两个亚组,分别为再灌注6 h、24 h,每组6只。Nec-1干预组于缺血前30 min按640 nmol/kg侧脑室注射Nec-1溶液,DMSO对照组于缺血前30 min侧脑室注射等量10%DMSO溶液。线栓法制备大脑中动脉阻塞缺血再灌注模型,于缺血2 h再灌注6 h和24 h,免疫组织化学染色(IHC)观察小胶质细胞活化标志iba-1的表达和TLR4、NF-κB/p65的定位和表达。(2)另取SD大鼠48只,方法同上,免疫印迹法(WB)检测TLR4、NF-κB/p65、IL-6蛋白的定位和表达。结果 (1)与假手术组相比,手术组TLR4、NF-κB/p65、iba-1的免疫阳性细胞增多,而Nec-1干预组TLR4、NF-κB/p65、iba-1的免疫阳性细胞明显减少;(2)与假手术组相比,WB显示手术组TLR4、NF-κB/p65核转位、IL-6蛋白表达明显增多,Nec-1干预组TLR4、IL-6的蛋白表达明显降低,NF-κB/p65核转位减轻,差异均有统计学意义(P 0. 05);手术组和对照组各指标差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 Nec-1可能通过抑制TLR4/NF-κB途径抑制小胶质细胞的活化,从而减轻炎症反应对脑组织起保护作用。     

桂皮醛对脑缺血小鼠的脑保护作用及对Toll样受体6/核因子-κB信号通路的影响

目的探讨桂皮醛对局灶性脑缺血小鼠的脑保护作用及机制。方法雄性CD-1小鼠通过腹腔注射的方法给予桂皮醛干预,应用改良线栓法建立小鼠右侧永久性大脑中动脉闭塞模型,将成年健康雄性CD-1小鼠随机分为大脑中动脉闭塞(MCAO)组及桂皮醛(CA)低、中、高剂量干预组,即CA25组、CA50组和CA75组(在MCAO小鼠模型基础上腹腔给予25 mg/kg、50 mg/kg及75 mg/kg桂皮醛)。术后24 h通过测定小鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑组织含水量来评价桂皮醛的脑保护作用。通过Western blot法和实时荧光定量PCR法测定Toll样受体6(TLR6)、肿瘤坏死因子受体相关分子6(TRAF6)和核因子-κB(NF-κB)在脑组织中的表达。结果与MCAO组相比,CA50组神经功能评分显著改善(中位数2.0 vs.3.5),病变侧脑组织含水量降低[(83.72±0.73)%vs.(85.09±0.95)%],脑梗死体积缩小(0.45±0.06 vs.0.54±0.02),均P0.05。同样与MCAO组相比,CA50组TLR6、TRAF6及NF-κB基因表达明显下调(TLR6:3.26±0.03 vs.6.32±0.07;TRAF6:1.88±0.21 vs.3.33±0.48;NF-κB:1.47±0.33 vs 4.21±0.57,均P0.05)。TLR6、TRAF6及胞核NF-κB蛋白表达明显下降(TLR6:0.12±0.01 vs.0.19±0.03;TRAF6:0.45±0.09 vs.0.67±0.07;胞核NF-κB:0.32±0.06 vs.0.46±0.06,均P0.05)。结论桂皮醛可能通过抑制TLR6/TRAF6/NF-κB通路对局灶性脑缺血小鼠发挥脑保护作用。     

NF-κB1通过促进BCL2表达抑制胶质瘤细胞的早期凋亡

目的探讨核转录因子-κB1(NF-κB1)在人脑胶质瘤和胶质瘤细胞株U87、SHG44的表达及其与凋亡的相关性;以及NF-κB1对脑胶质瘤的作用机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测NF-κB1在非瘤脑组织和不同级别人脑胶质瘤组织中的表达水平。采用脂质体法将化学合成NF-κB1过表达/沉默表达质粒(NF-κB1 shRNA),以及BCL2沉默表达质粒(BCL2 shRNA)转染上述细胞系。通过流式细胞术检测NF-κB1对胶质瘤细胞株U87、SHG44凋亡的影响,并采用Western blotting分别检测NF-κB1、BCL2蛋白的表达水平。结果 qRT-PCR显示,NF-κB1在人脑胶质瘤中表达明显高于非瘤脑组织,并且表达水平随着肿瘤恶性程度的增高而逐渐升高(均P0.05)。在同一人脑胶质瘤标本中BCL2的表达水平与NF-κB1的表达趋势相同。流式细胞术检测结果显示,抑制NF-κB1表达明显促进人脑胶质瘤细胞U87、SHG44的凋亡(均P0.05)。Western blot检测证实,抑制NF-κB1蛋白表达后BCL2蛋白的表达水平也随之降低。结论 NF-κB1通过促进BCL2的表达而抑制胶质瘤细胞的早期凋亡。     

脑出血与TLR4/NF-κB介导小胶质细胞自噬的相关性研究

目的 探讨TLR4介导小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应中的作用及机制。方法 A组(空白对照组):野生型C57BL/6小鼠; B组(自噬抑制剂对照组):野生型C57BL/6小鼠+自噬抑制剂(3-MA); C组(假手术组1):野生型C57BL/6小鼠+假手术+自噬抑制剂(3-MA); D组(造模组1):野生型C57BL/6小鼠+造模+自噬抑制剂(3-MA); E组(假手术组2):野生型C57BL/6小鼠+假手术+TLR4腺病毒抑制+自噬抑制剂(3-MA); F组(造模组2):野生型C57BL/6小鼠+造模+TLR4腺病毒抑制+自噬抑制剂(3-MA); 进行脑组织含水量(BWC)和神经功能障碍评分(NDS); Western Blot检测LC3-II/I比值,TLR4,MyD88和NF-κB蛋白表达水平; ELISA检测细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6水平。结果 与C组比较,E组BWC和NDS下降(P<0.05); 与D组比较,F组BWC和NDS下降(P<0.05); A,B,C和D组TLR4,MyD88和NF-κB p65蛋白水平无明显变化(P>0.05); 与C组比较,E组TLR4,MyD88,NF-κB p65水平,LC3-II/I比值下降(P<0.05); 与D组比较,F组TLR4,MyD88,NF-κB p65水平,LC3-II/I比值下降(P<0.05); 与A组比较,B,C和D组LC3-II/I比值下降(P<0.05); 与A组比较,B,C和D组TNF-α,IL-1β,IL-6水平下降(P<0.05); 与C组比较,E组TNF-α,IL-1β,IL-6水平下降(P<0.05); 与D组比较,F组TNF-α,IL-1β,IL-6水平下降(P<0.05)。结论 抑制C57BL/6小鼠的TLR4及自噬可减轻自噬引起的脑出血炎症损伤。     

IL-10对脊髓损伤后NF-κB表达影响的研究

目的研究IL-10对脊髓损伤后核因子NF-κB表达的影响。方法50只雌性SD大鼠随机分成实验组和对照组,在手术显微镜下完成脊髓半切损伤模型;每一小组在伤后半小时分别给予腹腔注射,在不同时间点快速取出伤段脊髓液氮冻存;常规方法提取脊髓组织核蛋白完成核蛋白定量;通过Trans AMTMNF-κBP65试剂盒检测NF-κВP65的表达。结果实验组和对照组各组脊髓组织中均存在NF-κBP65表达且表达差异具有统计学意义（P〈0.01）。实验组各小组NF-κBP65的活性较对照组均不同程度受到抑制;IL-10对各时间点（1,4,6,12,24h）半切损伤后脊髓组织中NF-κBp65表达的抑制率分别是12.0%,28.4%,23.8%,15.2%,17.4%。结论IL-10对脊髓损伤后炎症介质核因子NF-κB表达有抑制作用。     

沉默信息调节因子1抑制核因子κB通路调控癫痫大鼠小胶质细胞活化的机制研究

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在癫痫中对小胶质细胞及炎症因子的影响及作用机制.方法建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠模型,免疫组化观察各组(对照组和癫痫组)大鼠脑组织内小胶质细胞活化;采用脂多糖(LPS)建立小胶质细胞活化模型,构建pcDNA-SIRT1和si-SIRT1载体,转染至大鼠小胶质细胞中.定量即时聚合酶链反应(qRT-PCR)测定大鼠海马组织及小胶质细胞中SIRT1表达,Western blot检测小胶质细胞的活化标志物Iba1和核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白(p65和IκBα)的蛋白表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测促炎因子[白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)]的表达水平.结果与Control组比较,癫痫大鼠海马组织中SIRT1 mRNA表达量显著降低(P<0.05),Iba1蛋白表达量显著增加(P<0.05),且对照组CA1、CA2区Iba1阳性细胞数分别为(180±21)、(190±18)/mm2,癫痫组CA1、CA2区Iba1阳性细胞数分别为(412±35)、(470±37)/mm2,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05).同样,与Mock组比较,LPS活化小胶质细胞中SIRT1表达水平显著降低,Iba1蛋白表达水平显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).转染pcDNA-SIRT1及si-SIRT1至LPS活化的小胶质细胞中,LPS+pcDNA-SIRT1组IL-1β[(50.0±3.3)ng/L]、IL-6[(55.0±3.2)ng/L]和TNF-α[(56.1±3.0)ng/L]表达水平显著低于LPS组和LPS+pcDNA-NC组(均P<0.05);LPS+si-SIRT1组中IL-1β[(98.2±4.3)ng/L]、IL-6[(108.1±4.5)ng/L]和TNF-α[(124.5±4.1)ng/L]表达水平显著高于LPS组和LPS+si-NC组(均P<0.05);同时LPS+pcDNA-SIRT1组NF-κB p65的表达水平显著低于LPS组和LPS+pcDNA-NC组(均P<0.05),IκBα的表达水平显著高于LPS组和LPS+pcDNA-NC组(均P<0.05);而LPS+si-SIRT1组NF-κB p65的蛋白表达水平显著高于LPS组和LPS+si-NC组(均P<0.05),IκBα的表达水平显著低于LPS组和LPS+si-NC组(均P<0.05).加入NF-κB通路激活剂Aconine后,与LPS+pcDNA-SIRT1组比较,LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine组大鼠中Iba1表达水平显著升高(P<0.05);LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine组大鼠中IL-1β[(72.2±4.3)ng/L]、IL-6[(80.1±4.0)ng/L]和TNF-α[(87.2±4.5)ng/L]表达水平显著高于LPS+pcDNA-SIRT1组的[(50.1±2.3)]ng/L、[(55.0±3.4)]ng/L和[(56.3±4.9)ng/L](均P<0.05).结论SIRT1可能通过抑制NF-κB通路活性来抑制癫痫大鼠小胶质细胞的作用.     

创伤性颅脑损伤后脑组织中TLR4表达的实验研究

目的 研究创伤性脑损伤(TBI)后损伤灶周围脑组织Toll样受体4(TLR4)的表达,探讨TLR4/NF-κB信号通路在TBI中的作用机制.方法 SD大鼠36只按随机数字表法分为对照组(n=12)、TBI后1d组(n=6)、TBI后3d组(n=12)和TBI后7d组(n=6),后3组采用Feeney自由落体撞击法制作TBI模型,对照组仅行右侧顶部开窗而无TBI.应用RT-PCR、凝胶电泳迁移率实验(EMSA)、ELISA分别检测4组大鼠挫伤脑组织TLR4 mRNA、NF-κB活性、TNF-α和IL-6浓度的变化;免疫组化染色检测对照组和TBI后3d组大鼠挫伤脑组织TLR4的表达.结果 与对照组比较,TBI后1d、3d、7d组TLR4 mRNA表达、NF-κB活性、TNF-α和IL-6浓度均增加,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组脑组织TLR4表达较少,TBI后3d组创伤灶周围可见大量TLR4阳性细胞,主要表达在皮层胶质细胞、神经元中;NF-κB活性与TLR4 mRNA的表达呈正相关关系(r=0.786,P=-0.000).TNF-α、IL-6与TLR4的表达也呈正相关关系(r=0.517,P=0.010;r=0.503,P=0.012).结论 TBI可引起损伤区脑组织TLR4的表达和下游NF-κB、促炎症因子水平的增加,TLR4/NF-κB信号通路可能在脑组织的继发性损害中起重要作用.     

核转录因子κB涉及水通道蛋白-4抗体阳性血清对星形胶质细胞的毒性作用

目的探讨核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)抗体诱导的星形胶质细胞损伤中的作用。方法纯化培养新生SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,按随机数字表法分为对照组、吡咯醛二硫氨基甲酸(PDTC)组、AQP4抗体阳性血清组(AQP4抗体组)和AQP4抗体+PDTC组,其中对照组加入10%(体积分数)健康人血清,PDTC组给予10μmol/L PDTC预处理1h后加入等量健康人血清;抗体组加入AQP4抗体阳性血清;AQP4抗体+PDTC组先用PDTC预处理1h后再加入AQP4抗体阳性血清。细胞培养12h后采用免疫细胞化学荧光法观察各组NF-κB p65入核情况,MTS比色法检测细胞存活度,免疫印迹法检测细胞内p65蛋白、磷酸化p65(p-p65)蛋白的表达。结果 AQP4抗体组可见明显NF-κB p65入核,其余三组均未见明显入核;AQP4抗体+PDTC组细胞存活度高于AQP4抗体组(吸光度值分别为0.4380±0.005、0.3897±0.045,F=133.355,P0.05);各组间NF-κB p65蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P0.05);AQP4抗体+PDTC组p-p65蛋白表达水平较AQP4抗体组明显减少(分别为0.7027±0.020,0.8197±0.027,F=10.794,P0.05)。结论 AQP4抗体阳性血清可能通过激活NF-κB途径促进星形胶质细胞损伤,抑制NF-κB活性对星形胶质细胞具有保护作用。     

首发精神分裂症NF-κB活性与细胞因子mRNA表达及蛋白水平的关系

目的探讨精神分裂症中核转录因子-κB(NF-κB)活性与白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达及其血清蛋白水平的关系。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定83例首发精神分裂症患者和65名健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中NF-κB的活性,同时采用ELISA和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测血清细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白水平和PBMC中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达。结果患者组的NF-κB活性及血清IL-1β、IL-6、TNF-α的水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者组PBMC中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者组中NF-κB的活性与血清IL-1β、TNF-α水平及二者的mRNA表达水平均呈正相关(r分别为0.578、0.532、0.536、0.454,P均小于0.05),而对照组中NF-κB的活性与血清IL-1β、TNF-α水平及二者的mRNA表达水平均呈正相关(r分别为0.456、0.549、0.519、0.513,P均小于0.05)。两组中NF-κB的活性与血清IL-6及其mRNA均无明显相关(P均大于0.05)。结论精神分裂症患者存在免疫激活,激活状态的PBMC是细胞因子的主要来源之一;精神分裂症中活化的NF-κB对IL-1β、TNF-α的基因转录起了重要的调控作用。     

乙酰唑胺对慢性癫痫大鼠海马NF-κB p65、IL-1β、IL-6及TNF-α表达的影响

目的观察戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)致慢性癫痫大鼠发作以及应用AQP4抑制剂乙酰唑胺(Acetazolamide,AZA)干预后对海马核因子-κB p65(NF-κB p65)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达影响,探讨AQP4与炎症因子表达间的关系及乙酰唑胺抑制癫痫发作的可能机制。方法将50只健康成年SD大鼠随机分为对照组(每日腹腔注射生理盐水)、致痫组(每日腹腔注射亚惊厥剂量PTZ35 mg/(kg·d)建立慢性癫痫大鼠模型)、乙酰唑胺干预组[每日先腹腔注射AZA35 mg/(kg·d)预处理,30 min后再腹腔注射亚惊厥剂量PTZ]。连续注射28 d,每天记录大鼠的发作级别。最后一次给药1 d后处死所有大鼠以备实验,RT-q PCR和ELISA检测大鼠海马中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达;Western blot检测海马内NF-κB p65表达。结果对照组无明显癫痫发作,RT-q PCR和ELISA检测结果显示致痫组IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.001);乙酰唑胺干预组的三者水平明显低于致痫组(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05);Western blot结果显示致痫组海马组织NF-κB p65的表达与对照组相比显著升高(P<0.01),而乙酰唑胺干预组表达量与致痫组相比明显下降(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论乙酰唑胺抑制癫痫的发作的作用机制可能与乙酰唑胺抑制星形胶质细胞膜上AQP4的表达、改善星形胶质细胞水肿损伤状况、下调炎性因子表达有关。     

实验性脑出血后脑组织核因子-κB表达和含水量的变化及其相关性

目的 研究实验性脑出血(ICH)后血肿周围脑组织核因子-κB(NF-κB)表达和脑组织含水量的改变及其相关性.方法 采用自体不凝血注人大鼠尾状核制备ICH模型;用免疫组化法检测血肿周围脑组织NF-κB表达;用干湿重法测脑组织含水量.结果 与对照组相比,ICH 6h组血肿周围脑组织NF-κB表达开始明显增加,ICH 48h组达高峰,并持续到ICH 1周(P＜0.01～0.05);脑组织含水量ICH 12h组开始增多,24h组显著增高,72h组达高峰;NF-κB表达和脑组织含水量ICH 24h～1周组与假手术组之间差异有统计学意义(均P＜0.01);ICH后NF-κB阳性细胞数与脑组织含水量呈正相关(r=0.644,P＜0.01),NF-κB表达从开始到高峰均早于脑组织含水量的变化.结论 ICH后脑组织NF-κB表达增加,NF-κB可能通过炎性机制参与了ICH后继发脑水肿的形成.     

血管紧张素-(1-7)对大鼠脑缺血再灌注损伤后核因子-κB及下游炎症因子的调控作用

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对大鼠脑缺血再灌注损伤后核因子-κB(NF-κB)及其下游炎症因子的调控作用. 方法 将42只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、缺血组及Ang-(1-7)治疗组,每组各14只.缺血组及Ang-(1-7)治疗组均行大脑中动脉栓塞术(MCAO).用微型渗透泵分别给予假手术组及缺血组人工脑脊液(aCSF)0.5 μL/h治疗,给予Ang-(1-7)治疗组Ang-(1-7)(100 pmol/L,0.5 μL/h)治疗.脑缺血再灌注损伤后24 h用Western blotting法检测各组大鼠缺血侧皮层细胞核内NF-κB p65蛋白的表达,免疫组化染色检测NF-κB p65的空间分布以及阳性细胞数,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量. 结果 Ang-(1-7)治疗组缺血侧顶叶皮层细胞核内NF-κB p65蛋白较缺血组降低约46％,差异有统计学意义(P＜0.05).Ang-(1-7)治疗组缺血侧皮层细胞NF-κB p65由胞浆向胞核的移位被显著抑制,NF-κB p65阳性表达率较缺血组降低约29％,差异有统计学意义(P＜0.05).Ang-(1-7)治疗组缺血侧皮层炎症因子TNF-α、IL-1β的表达[(71.603±18.539) pg/mL、(44.648±10.387) pg/mL]较缺血组[(104.763±24.412) pg/mL、(64.787±14.441) pg/mL]均有所降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Ang-(1-7)能显著减轻脑缺血再灌注损伤中的炎症反应,其可能通过作用于Mas受体或拮抗血管紧张素Ⅱ的促炎作用,进而减轻氧化应激反应而实现.     

Sev对低氧缺糖诱导的脑神经元细胞损伤的影响

目的 研究七氟醚(Sev)调控Toll样受体4 (TLR4)/核转录因子κB (NF-κB)信号通路抑制低氧缺糖对脑神经元细胞损伤的保护作用。方法 将大鼠皮质神经元细胞分为对照组、模型组、1.0MAC和2.0 MAC七氟醚组;细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-8 (IL-8)水平;蛋白印迹法(Western blot)检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)、TLR4、磷酸化核因子κB抑制蛋白α (p-IκBα)和核因子κB抑制蛋白α (IκBα)蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组细胞存活率、SOD、CAT活性降低(^均P<0.05),凋亡率、MDA含量、TNF-α、IL-6、IL-8水平升高(P<0.05),TLR4、p-IκBα蛋白表达升高;与模型组比较,Sev显著升高细胞存活率、SOD、CAT活...     

PDTC对慢性致痫大鼠海马NF-κB及IL-10表达的影响

目的研究NF-κB信号传导通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对慢性致痫大鼠海马组织中核转录因子κB(NF-κB)和白细胞介素-10(IL-10)表达的影响。方法通过腹腔注射亚惊厥量的戊四氮(PTZ)来建立慢性癫痫大鼠模型,并将大鼠分为PTZ模型组、PTZ+PDTC干预组和生理盐水对照组。实验14d、21d、28d和35d分别取大鼠海马组织检测,用实时荧光定量PCR检测癫痫大鼠海马组织中NF-κB/P65和IL-10mRNA的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测海马组织中IL-10蛋白的表达。结果 PTZ模型组海马组织中NF-κB p65 mRNA的表达于14d开始增高,持续至28d,35d后恢复至14d水平,与对照组之间比较差异具有统计学意义(P<0.01);经PDTC干预后,NF-κB p65 mRNA的表达明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.001)。海马组织中IL-10经过PDTC干预后,IL-10 mRNA的表达也明显低于模型组(P相似文献   

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织中NF-κB p65,TNF-α表达及雷公藤多甙的干预研究

目的 观察Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脑组织中核转录因子-κBp65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)的表达情况,用雷公藤多甙(TWP)进行干预,探讨TWP对EAE的防治效果及作用机制.方法 建立Wistar大鼠EAE模型,并选用TWP、泼尼松(PRD)干预治疗.65只Wistar大鼠随机分成5组:对照组5只,EAE组、TWPⅠ组(EAE+TWP 10 mg·kg-1·d-1)、TWPⅡ组(EAE+TWP 30mg·kg-1·d-1)和PRD组(EAE+PRD 5 mg·kg-1·d-1)各15只.观察各组大鼠发病情况并进行神经功能评分.大鼠脑和脊髓腰膨大段组织切片:苏木素-伊红(HE)染色+罗克沙尔坚牢蓝(LFB)髓鞘染色,光镜下进行炎性病灶计数,并免疫组化方法检测大鼠脑组织内NF-κB p65、TNF-α的表达.结果 EAE组及干预组大鼠脑组织内NF-κB p65、TNF-α表达水平随病情加重而升高,随病情缓解而降低.与EAE组比较,干预组大鼠发病率减低,潜伏期延长,神经功能评分及体重损失明显降低,脑组织炎性病灶数明显减少;同时脑组织NF-κB p65和TNF-α阳性细胞数量明显减少.TWP大剂量组与PRD治疗效果相当,且优于TWP小剂量组.结论 NF-κB p65、TNF-α过表达可能参与EAE发生及进展;TWP有明显防治大鼠EAE作用,在一定程度上呈剂量相关性,其机制可能与下调NF-κB p65、TNF-α表达有关.     

RhoE表达上调对U87细胞NF-κB活性的影响

目的探讨RhoE对转录因子NF-κB活性水平的影响。方法将包含RhoE基因的质粒转染胶质瘤U87细胞;免疫印迹实验分析NF-κB亚单位p65在胞浆和胞核中的蛋白表达水平;细胞免疫化学实验检测p65在细胞中的蛋白表达水平和亚细胞定位;免疫印迹实验检测Ikkβ和IκBα蛋白表达水平。结果将pC MVFlA G-RhoE质粒成功转染U87细胞后,免疫印迹实验显示,胞浆和胞核中p65的蛋白表达水平均较对照组下降;细胞免疫化学结果亦表明,p65在细胞核中的定位量明显减少。免疫印迹实验进一步分析显示,NF-κB上游调控分子IκBα表达增加,而Ikkβ表达减少。结论上调RhoE表达水平能够抑制U87细胞转录因子NF-κB活性水平。NF-κB活性的降低可能与RhoE调控Ikk/IκBα机制相关。