癫痫持续状态大鼠模型海马区miR-181b表达的变化及意义

目的：探讨癫痫持续状态（status epilepticus,SE）大鼠模型海马区miR-181b表达的变化及意义。方法随机将30只SD（Sprague-Dawley）大鼠分为实验组和对照组,各15只,实验组建立氯化锂-匹罗卡品致SE大鼠模型,对照组以生理盐水代替氯化锂-匹罗卡品,提取两组大鼠右侧海马区脑组织总miRNA和左侧海马组织总蛋白,采用Real-Time RT-PCR检测miR-181b表达及采用Western Blot方法检测caspase-3蛋白的表达变化。结果 SE组大鼠海马区脑组织miR-181b表达较对照组有明显下降（P〈0.05）, caspase-3蛋白表达明显上升（P〈0.05）。结论 miR-181b可能通过调控caspase-3蛋白的表达抑制SE后海马区神经元凋亡过程。     

两种不同给药途径诱发大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas、Bax、Caspase-3表达

背景:癫痫持续状态可导致神经元损伤。目的:观察两种不同给药途径诱发大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构损伤及Fas、Bax、Caspase-3的表达变化,为减轻癫痫后神经元损伤提供理论依据。设计:随机对照动物实验。单位:山东大学齐鲁医院神经内科和麻醉科。材料:实验于2005-03/2005-07在山东省医学科学院病理实验室完成。选择成年雄性SD大鼠150只,体质量260～300g(由山东大学实验动物中心提供(SCXK20030004),室温,自由进水、进食。方法:选择成年雄性SD大鼠150只,随机数字表法分为海人酸腹腔注射组和尾静脉注射组。分别采用海人酸腹腔注射和尾静脉注射诱发不同潜伏期的大鼠癫痫持续状态。每组再分5个亚组,分别为癫痫持续状态后3,6,24,48及72h组。每小组取12只诱发成功的大鼠,于癫痫持续状态终止后不同时点取海马。2只用于电镜检查,5只用于Fas和Bax的RT-PCR检测,5只用于Caspase-3的免疫组化。另取12只鼠作为正常对照,不做任何处理。对照组大鼠于相应癫痫持续状态后24h点取材,具体分配同各亚组。电镜观察线粒体的超微结构,半定量RT-PCR检测Fas、Bax的mRNA水平,免疫组化检测Caspase-3蛋白的表达。主要观察指标:①超薄切片透射电镜观察结果。②RT-PCR检测结果。③免疫组化检测结果。结果:132只SD大鼠进入结果分析。①电镜观察线粒体的超微结构:海人酸腹腔注射组线粒体肿胀,神经元呈凋亡征;尾静脉注射组线粒体肿胀且伴膜的崩解,神经元呈坏死表现。②对照组及尾静脉注射组未检测到Fas及BaxmRNA;海人酸腹腔注射组Fas及Bax的mRNA表达均于癫痫持续状态后6h出现,24h增加,48h达高峰,并持续至72h。③两组大鼠均在癫痫持续状态后6h出现Caspase-3表达增高(10.27±0.34,15.21±0.34;P<0.001),24h达顶峰(25.36±0.47,28.23±0.47;P<0.001);海人酸腹腔注射组高表达持续至72h,尾静脉注射组在48h点急剧降低。结论:两种不同的诱发方式导致了大鼠不同程度的线粒体损伤和Fas、Bax及Caspase-3在不同水平的表达,进而决定了神经元死亡的分子机制。     

抑制p38/p53信号通路对癫痫大鼠神经元损伤的保护作用

目的 探讨p38/p53信号通路在癫痫持续状态大鼠海马神经元的活化规律,及对癫痫后神经元损伤的保护作用.方法 40只大鼠随机分为正常对照组、癫痫组、抑制剂组、二甲亚枫溶剂对照组,建立氯化锂?匹鲁卡品癫痫大鼠模型,HE染色观察大鼠海马CA1区的神经元病理改变,免疫组化染色观察p38/p?p38、p53/p?p53阳性细胞...     

丹参多酚酸盐对匹鲁卡品致痫大鼠BDNF表达的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对匹鲁卡品致痫大鼠脑内神经元的损伤及BDNF表达的影响,探讨其抗痫的可能机制。方法采用匹鲁卡品诱发癫痫状态模型,随机分为丹参多酚酸盐干预组、盐水干预组和对照组,观察各组大鼠的行为学改变,用免疫组织化学法标记显示各组大鼠脑内海马BDNF的表达变化。结果在海马CA1区有BDNF阳性细胞表达,各组比较行t检验,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论丹参多酚酸盐可以明显降低急性癫痫痉挛性大鼠的发作等级和发作时间,可能通过BDNF的表达增高来发挥作用。     

姜黄素对癫痫持续状态致大鼠海马神经元程序化死亡的影响

目的：探讨姜黄素对大鼠癫痫持续状态（SE）后海马神经元程序化死亡的影响。方法：SD大鼠90只随机均分人癫痫组、姜黄素治疗组和对照组。建立氯化锂-匹罗卡品大鼠SE模型。应用DNA片段原位末端标记技术（TUNEL）观察SE后2h、4h、6h、24h、72h海马CA1区和CA3区TUNEL阳性细胞数的动态变化。结果：对照组未见TUNEL阳性细胞。TUNEL阳性细胞主要分布在CA1区和CA3区。SE组TUNEL阳性细胞数在SE后6h开始增加（P〈0．01），24h达高峰，72h较24h下降，姜黄素治疗组与SE组TUNEL阳性细胞数的动态变化趋势类似，但姜黄素治疗组SE后6h、24h、72h的阳性细胞数显著减少（P〈0．01）。结论：姜黄素能防治SE后海马神经元程序化死亡。     

两种不同给药途径诱发大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas、Bax、Caspase-3表达

背景：癫痫持续状态可导致神经元损伤。 目的：观察两种不同给药途径诱发大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构损伤及Fas、Bax、Caspase-3的表达变化，为减轻癫痫后神经元损伤提供理论依据。 设计：随机对照动物实验。 单位：山东大学齐鲁医院神经内科和麻醉科。 材料：实验于2005-03／2005-07在山东省医学科学院病理实验室完成。选择成年雄性SD大鼠150只，体质量260—300g（由山东大学实验动物中心提供（SCXK20030004），室温，自由进水、进食。 方法：选择成年雄性SD大鼠150只，随机数字表法分为海人酸腹腔注射组和尾静脉注射组。分别采用海人酸腹腔注射和尾静脉注射诱发不同潜伏期的大鼠癫痫持续状态。每组再分5个亚组，分别为癫痫持续状态后3，6，24，48及72h组。每小组取12只诱发成功的大鼠，于癫痫持续状态终止后不同时点取海马。2只用于电镜检查，5只用于Fas和Bax的RT—PCR检测，5只用于Caspase-3的免疫组化。另取12只鼠作为正常对照，不做任何处理。对照组大鼠于相应癫痫持续状态后24h点取材，具体分配同各亚组。电镜观察线粒体的超微结构，半定量RT—PCR检测Fas、Bax的mRNA水平，免疫组化检测Caspase-3蛋白的表达。 主要观察指标：①超薄切片透射电镜观察结果。②RT—PCR检测结果。③免疫组化检测结果。 结果：132只SD大鼠进入结果分析。①电镜观察线粒体的超微结构：海人酸腹腔注射组线粒体肿胀，神经元呈凋亡征；尾静脉注射组线粒体肿胀且伴膜的崩解，神经元呈坏死表现。②对照组及尾静脉注射组未检测到Fas及BaxmRNA；海人酸腹腔注射组Fas及Bax的mRNA表达均于癫痫持续状态后6h出现，24h增加，48h达高峰，并持续至72h。③两组大鼠均在癫痫持续状态后6h出现CaspaseⅫ3表达增高（10．27&;#177;0，34，15，21&;#177;0，34，〈0．001），24h达顶峰（25，36&;#177;0．47,28.23&;#177;0，47；P〈0．001）：海人酸腹腔注射组高表达持续至72h，尾静脉注射组在48h点急剧降低。 结论：两种不同的诱发方式导致了大鼠不同程度的线粒体损伤和Fas、Bax及Caspase-3在不同水平的表达，进而决定了神经元死亡的分子机制。     

脓毒症对大鼠海马区caspase-3表达的影响

目的 探讨脓毒症对大鼠海马区神经元的凋亡蛋白酶caspase-3表达的影响。 方法 80只30日龄健康雄性Wistar大鼠,随机分为盲肠结扎穿孔术（CLP） 组（n=50）和对照组（n=30）。CLP组采用CLP建立脓毒症模型,对照组行假手术不造成脓毒症模型。于手术后6、12、24 h,CLP组和对照组分别取10只大鼠,5只做神经行为学评分,另外5只处死取脑,采用蛋白免疫印迹法观察caspase-3的表达,术后24 h,两组各取3只大鼠,采用免疫荧光检测caspase-3的表达。 结果 对照组大鼠大脑海马区仅微量表达caspase-3,神经行为学评分较高。CLP组大鼠caspase-3的表达量于CLP后6 h就开始升高,24 h达高峰,均明显高于对照组（P＜0.05）,大鼠的神经行为学评分在CLP后6 h开始降低,并随着时间逐渐下降,均明显低于对照组（P＜0.05）。 结论 脓毒症脑损伤时大鼠的神经行为学评分降低,海马区神经元caspase-3表达上调,并随时间变化而波动。     

全身热疗对大鼠海马神经元凋亡蛋白表达的影响

目的观察用丙泊酚和水合氯醛全身麻醉建立全身高温模型的大鼠海马神经元凋亡蛋白的表达,探讨全身热疗诱导大鼠海马神经元凋亡的信号途径。 方法63只健康雄性Wister大鼠随机分为空白对照组(A组)、丙泊酚麻醉热疗组(B组)、水合氯醛麻醉热疗组(C组),每组21只。B、C两组热疗后24 h,A、B、C 3组大鼠同时断头取脑,采用TUNEL法检测海马神经元凋亡百分比,免疫组化法检测Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的表达,透射电镜观察神经元超微结构的变化。 结果B、C两组与A组比较,大鼠海马神经元超微结构发生改变,B组神经元超微结构损害较C组轻;B组和C组的海马神经元凋亡百分比和Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白表达均高于A组(P<0.05),C组Bax、caspase-3阳性评分高于B组(P<0.05)、Bcl-2阳性评分低于B组(P<0.05)。 结论全身热疗通过上调Bax、caspase-3表达和下调Bcl-2表达诱导大鼠海马神经元凋亡。     

老龄大鼠脑缺血再灌注海马神经元线粒体形态计量分析

目的:探讨老龄大鼠脑缺血再灌注后海马神经元超微结构变化,以及线粒体形态改变程度及性质。方法:建立老年大鼠脑缺血动物模型,正常对照组(A组)、缺血30min再灌注6h(B组)、12h(C组)、24h(D组)、48h(E组)和7d组(F组),用透射电镜观察海马神经元的超微结构变化,通过计算机图像分析系统对线粒体形态计量分析。结果:B组海马神经元超微结构与A组相同,E组和F组海马神经元损伤较重;E组和F组线粒体体密度、数密度、比表面和嵴膜密度较A组明显减少(P<0.05),线粒体平均体积和平均截面积较A组明显增大(P<0.05)。结论:老龄大鼠脑缺血后产生延迟性神经元死亡,其线粒体的形态结构也发生明显变化,这些变化直接与脑缺血再灌注时程相关。     

GIRK通道在匹罗卡品癫痫模型中的表达改变

目的：研究匹罗卡品诱导癫痫发作后不同时期G蛋白耦联内向整流钾通道（GIRK通道）在海马神经元细胞膜表面表达变化情况，并探索可能的调控机制。 方法：将成年雄性SD大鼠随机分为对照组和匹罗卡品造模组，利用致痫剂匹罗卡品诱导癫痫持续状态（Status epilepticus，SE）后，分别在急性期（24h）和慢性期（30d）取海马组织提取膜蛋白，利用Western Blot方法检测海马膜蛋白GIRK通道亚基蛋白GIRK1、GIRK2的表达改变，并同时检测海马组织PI3K/Akt通路激活情况。建立细胞癫痫模型，观察PI3K抑制剂渥曼青霉素和LY294002对海马神经元内向整流钾通道（Kir）电流的影响。 结果：匹罗卡品诱导大鼠SE发作后急性期细胞膜上GIRK1和GIRK2蛋白的表达较对照组相比显著下调（P<0.05）。海马膜蛋白中GIRK1的表达在大鼠SE发作后慢性期较对照组下降（P<0.05），而GIRK2蛋白表达量没有显著改变（P>0.05）。p-Akt（308）、Akt蛋白表达量的比值在匹罗卡品诱导大鼠SE发作后急性期与对照组相比显著上升（P<0.05），而在SE发作后慢性期无显著差异（P>0.05）。在细胞癫痫模型中，PI3K抑制剂渥曼青霉素和LY294002对痫样放电神经元的Kir电流未发现显著影响。 结论：在大鼠匹罗卡品诱导SE发作后急性期，海马中GIRK通道蛋白表达量下调， PI3K/Akt通路存在明显激活。癫痫急性期GIRK通道表达的调控机制尚需进一步研究。     

Neuroprotective properties of topiramate in the lithium-pilocarpine model of epilepsy

The lithium-pilocarpine model reproduces the main characteristics of human temporal lobe epilepsy. After status epilepticus (SE), rats exhibit a latent seizure-free phase characterized by development of extensive damage in limbic areas and occurrence of spontaneous recurrent seizures. Neuroprotective and antiepileptogenic effects of topiramate were investigated in this model. SE was induced in adult male rats by LiCl (3 mEq/kg) followed 20 h later by pilocarpine (25 mg/kg). Topiramate (10, 30, or 60 mg/kg) was injected at 1 and 10 h of SE. Injections were repeated twice a day for six additional days. Another group received two injections of diazepam on the day of SE and of vehicle for 6 days. Neuronal damage was assessed at 14 days after SE by cell counting on thionin-stained sections. Occurrence of spontaneous recurrent seizures (SRS) was videorecorded for 10 h per day in other groups of rats. In diazepam-treated rats, the number of neurons was dramatically reduced after SE in all subregions of hippocampus and layers II-IV of ventral cortices. At all doses, topiramate induced a 24 to 30% neuroprotection in layer CA1 of hippocampus (p < 0.05). In CA3b, the 30-mg/kg dose prevented neuronal death. All rats subjected to SE became epileptic. The latency (14-17 days) to and frequency of SRS were similar in topiramate- and diazepam-treated rats. The high mortality in the 30 mg/kg topiramate group (84%) was possibly the result of interaction between lithium and topiramate. In conclusion, topiramate displayed neuroprotective properties only in CA1 and CA3 that were not sufficient to prevent epileptogenesis.     

小脑电刺激对大鼠脑缺血早期神经元线粒体的影响

目的　观察小脑顶核电刺激预处理对大鼠脑缺血早期神经元线粒体的影响。方法　 40只Wistar大鼠随机分为 5组 ,FNS预置组分别给予小脑顶核刺激 (FNS)预处理 1h ,1d及 7d后通过线栓法建立大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,3h后取缺血侧大脑组织测定含水量 ,并通过电镜观察缺血区神经元线粒体 ,分析其体密度 (Vv)、面密度 (Sv)及比表面 (Ss) ,结果与假FNS组比较。同时设立正常对照组。其他大鼠则应用鹅膏氨酸 (IBO)预先毁损小脑顶核 (FN) ,5d后再予FNS ,1d后行MCAO。结果　与正常对照组比较 ,假FNS组MCAO后 3h ,缺血侧脑含水量增加 ,神经功能评分降低 ,神经元线粒体Vv及Sv增加 ,而Ss降低 ,两组差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;与假FNS组比较 ,缺血前 1d或 7d给予FNS预置 ,脑含水量下降 ,神经功能评分增加 ,线粒体Vv及Sv降低 ,而Ss增高 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。预先使用IBO损毁顶核者 ,FNS的预置保护效应则被消除。结论　预先小脑顶核刺激 ,可抑制大鼠脑缺血早期神经元线粒体的肿胀 ,改善缺血区组织水肿 ,从而减轻神经功能缺损。     

ATP敏感性钾通道开放剂对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及信号转导机制研究

目的 观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤后神经元凋亡的保护作用及其信号转导机制。方法 将200只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（A组）、缺血组（B组）、KATP开放剂治疗组（C组）及KATP开放剂和阻断剂联合治疗组（D组）。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，各组于缺血后2h进行再灌注。各组于再灌注6、12、24、48和72h分别取5只大鼠脑组织标本，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡，用免疫组化法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9的蛋白表达；各组其余5只大鼠用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果 B、C、D组再灌注后各时间点凋亡神经元数以及caspase-3、caspase-9的蛋白和mRNA表达均显著高于A组（P〈0．05或P〈0．01），C组各指标均显著低于B组和D组（P〈0．05或P〈0．01），而B组与D组各指标间比较差异均无显著性（P均〉0．05）。结论 KATP开放剂能显著减少脑I／R损伤后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达，提示KATP开放剂可能通过抑制线粒体通路减少脑I／R损伤后的神经元凋亡。     

银杏内酯B对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑神经元凋亡及P-AKT（ser473）表达的影响

目的 观察银杏内酯B（GB）对缺血缺氧性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑皮质神经元凋亡及P-AKT（ser473）蛋白表达的影响。 方法 采用随机数字表法将90只SPF级新生7日龄SD大鼠分为假手术组、缺血缺氧（HI）组及GB组,每组30只。采用经典Rice法建立HIBD动物模型,其中GB组分别于术后0h、24h按每千克体重10mg经腹腔注射GB。各组均于术后不同时间点（包括术后6h、12h、24h及48h）随机处死6只大鼠,采用荧光定量PCR技术检测凋亡关键执行分子Caspase-3 mRNA表达水平,发现GB抑制凋亡最显著的时间点为缺血缺氧后24h;然后增加大鼠并纳入GB+LY294002组,于制模后给予GB及PI3K-AKT通路抑制剂LY294002预干预,进一步探讨缺血缺氧后24h时PI3K-AKT通路在GB抗凋亡中的作用。采用HE染色法观察各组大鼠脑皮质结构变化,采用TUNEL法检测脑皮质神经元凋亡情况,采用免疫组化法检测P-AKT（ser473）蛋白表达情况。 结果 HI组和GB组Caspase-3 mRNA表达于缺血缺氧后6h开始增高,于缺血缺氧后12h进一步上升,于缺血缺氧后24h时达到峰值,随后开始下降;与假手术组比较,HI组和GB组Caspase-3 mRNA表达于缺血缺氧后6h、12h、24h、48h均明显增高,另外GB组Caspase-3 mRNA表达均明显低于HI组,组间差异具有统计学意义（P<0.05）。与假手术组比较,缺血缺氧后24h时HI组、GB组及GB+LY294002组脑皮质神经元Caspase-3表达增强、凋亡阳性细胞增多、P-AKT(ser473)表达减弱,其中HI组和GB+LY294002组Caspase-3表达及凋亡细胞数量均明显超过GB组,P-AKT(ser473)蛋白表达则明显弱于GB组,组间差异均具有统计学意义（P<0.01）。 结论 银杏内酯B具有明显抗神经元凋亡作用,且以缺血缺氧后24h时对神经细胞凋亡的抑制作用最强;此外PI3K-AKT信号通路在GB抗缺血缺氧诱导脑神经元凋亡中发挥重要作用。     

大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达及意义继发性脊髓损伤适宜干预时间窗的选择

背景半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族被认为是细胞凋亡的执行因子,脊髓损伤后可发生神经细胞凋亡.目的观察大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达变化,探讨其与神经细胞凋亡发生的关系,为判定减轻继发性脊髓损伤的适宜干预时间窗提供依据.设计自身对照、相互对照动物实验.单位华中科技大学同济医学院附属同济医院创伤外科、骨科.材料实验于2001-09/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成.54只SD大鼠,雌雄不限,体质量220～250g,由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供.方法①动物模型建立及分组将大鼠分为对照组和损伤组,对照组仅做Ts,T9椎板切除术,损伤组于4、8 h和1,2,3,7,14和21 d取材共9组,每组6只.以30 g/L戊巴比妥钠腹腔麻醉后,按Nystrom法暴露T8,T9节段胸髓,将50 g重物通过2.2 mm×5.0 mm弧型光滑金属垫片压迫该段脊髓后正中部5 min,损伤后每天1000,1600和2200 3次人工膀胱排尿,直至建立反射性膀胱排空.②取材及切片准备在脊髓损伤后各时间点完整取出脊髓全长,将每组4只损伤段脊髓组织块,长约8 mm,石蜡包埋,连续切片,分别行苏木素伊红染色、免疫组化及原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick endlabeling,TUNEL)标记;每组2只在冰上处死,将损伤脊髓中心组织置入液氮罐中保存备用.③检测指标以免疫组化法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达,以逆转录-聚合酶链反应半定量测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA的表达变化,以TUNEL法检测神经细胞的凋亡水平,并以直线相关分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达和神经细胞凋亡的相关性.主要观察指标①光镜下各组大鼠脊髓损伤观察.②免疫组化结果.③各组大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达变化.④各组大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡情况及与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达的相关性.结果纳入结果分析的各组动物数均为6只.①光镜下各组大鼠脊髓损伤观察结果损伤段1 h有广泛出血;4～8 h脊髓结构开始破坏,大量的神经元死亡;24 h脊髓破坏严重;7～21 d损伤范围确定,脊髓内有空洞形成.②免疫组化检测的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果正常大鼠脊髓神经细胞中很少有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达(2.1±0.5);脊髓损伤后8 h,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达阳性的神经细胞明显增加(89.2±10.5),3 d达到高峰(189.6±12.7);半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的阳性细胞与凋亡细胞出现的时限相似,呈正相关(r=0.941).③逆转录-聚合酶链反应检测的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA 4 h开始增高(0.442±0.024),48 h达到高峰(0.634±0.028),7 d后恢复正常(0.351±0.013),早于凋亡出现的时期,与神经细胞凋亡水平呈正相关(~0.622).4④rUNEL标记及计数的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果对照组及4 h组仅见偶染细胞,8 h后开始出现阳性细胞,主要位于灰质中;此后阳性细胞逐渐增多,3 d达到高峰,7 d灰质中凋亡染色的阳性细胞逐渐减少,主要在周围白质中,14和21 d可见少量的阳性细胞.结论在正常的脊髓组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3是以活性很低的酶原形式存在;大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达增强,8 h开始大量表达,24～48 h达到高峰,与TUNEL所检测的阳性凋亡细胞在时间上相重叠,从半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞先后出现的区域上看,与脊髓损伤阳性凋亡细胞一致,可见半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节.从本实验可以看出,从脊髓损伤后到半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活化这段时间是脊髓损伤干预细胞凋亡、减轻继发性脊髓损伤治疗时间窗,应用基因干预或特异性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂宜在48 h内应用.     

幼鼠致痫后海马区神经元损伤及苔藓纤维发芽的实验研究

背景成鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE)后出现海马CA1区、CA3区及齿状回广泛的神经元脱失和苔藓纤维发芽已成为大量实验的共识,但有关幼鼠该方面研究得出的结论不一.目的观察幼鼠致痫后海马区神经元的组织病理学改变.设计随机对照实验研究.地点和对象实验地点北京大学人民医院实验动物中心进行.健康生后15～20 d Wistar幼鼠54只.随机分成3组,每组18只.生理盐水对照组,地西泮干预组,实验组.每组中用于光镜检查、电镜检查和Timm染色各6只.干预实验组幼鼠采用氯化锂-毛果芸香碱腹腔注射制成幼鼠癫痫持续状态模型,生理盐水对照组以相同液体量的生理盐水取代毛果芸香碱.地西泮干预组在给予毛果芸香碱30 min前给予地西泮腹腔注射.在光镜下观察海马结构的形态学改变.透射电镜下进行超微结构观察.Timm法观察苔藓纤维发芽情况.主要观察指标①各组大鼠海马区的神经元形态学改变.②各组大鼠超微结构改变.③各组大鼠苔藓纤维发芽情况.结果实验组CA1区和CA3区及齿状回可见许多神经元发生变性和固缩性坏死.CA2区未见明显改变.电镜下海马区神经元胞体浓缩变性,粗面内质网增生,内质网的核糖体脱落,胶质细胞可见有空泡变性.生理盐水对照组和地西泮干预组无明显的超微结构改变.Timm染色见齿状回内分子层和CA3区下锥体层苔藓纤维发芽增加[生理盐水对照组为(1.83±0.39)分,地西泮干预组为(0.42±0.52)分,实验组(0.42±0.52)分,生理盐水对照组与实验组比较,差异有显著性意义(q=8.00,P＜0.01).结论成鼠癫痫持续状态后可导致海马区神经元损伤,幼鼠癫痫持续状态后也同样能造成海马区苔藓纤维发芽的增加.     

颅脑外伤后细胞凋亡与Fas抗原的表达

目的探讨颅脑外伤后细胞凋亡与Fas抗原表达的变化，为阐明损伤后神经元丢失的多种途径提供实验依据。方法建立大鼠自由落体脑创伤模型，采用免疫组化技术及细胞透射电镜观察形态学的方法，对伤后挫伤灶旁局部脑组织细胞凋亡和Fas抗原表达进行观察。结果在挫伤灶旁观察到细胞凋亡的发生，神经细胞呈现较为典型的凋亡超微结构变化，Fas蛋白表达在24h达到高峰，随后呈下降趋势。结论颅脑外伤后在局部组织可见细胞凋亡的发生，Fas蛋白表达参与了外伤后神经细胞凋亡的过程。