抗血管内皮细胞单克隆抗体的制备及免疫组化鉴定

本文报道用临康手术切除的肝癌标本制备细胞悬液直接免疫BALB／c小鼠与Sp2／0骨髓瘤细胞融合，在筛选过程中获得一袜抗血管内皮细胞的单克隆抗体。该细胞林稳定地在体外连续培养四个月。抗体能直接用于常规福尔马林固定的石蜡包埋的幻片染色，不需胰酶消化。经A．B．C法免疫蛆化染色证明，对奎身各脏器血管内皮细胞定位取厦30例各种娄型血管瘤的内皮细胞染色均呈阳性反应。对起源于内皮细胞的5例血管内皮细胞肉瘤定位4例阳性，1例为阴性。而对血管外皮细胞肉瘤却大部份呈阴性反应。与内皮细胞以外的组织无交叉反应。提示此抗体能识剐的抗原可能是Ⅷ因子相关抗原，它对起源于血管的软组织肿瘤的鉴别诊断厦免疫组化定位有一定的应用价值。     

抗血管内皮细胞单克隆抗体的制备及免疫组化鉴定

本文报道用临床手术切除的肝癌标本制备细胞悬液直接免疫BALB/c小鼠与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,在筛选过程中获得一株抗血管内皮细胞的单克隆抗体。杂交瘤细胞株已体外连续培养四个月,至今分泌抗体稳定。抗体能直接用于常规福尔马林固定的石蜡包埋的切片染色,不需胰酶消化。此抗体经A.B.C法免疫组化染色鉴定证明,对全身各脏器血管内皮细胞定位     

一株抗人血管内皮细胞单克隆抗体的制备与鉴定

一株抗人血管内皮细胞单克隆抗体的制备与鉴定赵永革高旭陈辉树刘会齐钱冠清（中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所，天津３０００２０）血管内皮细胞具有多种生理功能，参与机体的凝血、免疫、物质转运和生物学活性物质的释放等重要生命活动［１］。因为血管内...     

抗重组人血管生长素单克隆抗体的制备及鉴定

制备不同类型抗重组人血管生长素的单克隆抗体,为进一步研究抗ｒｈＡＮＧ抗体对ＡＮＧ的中和作用以及对ＡＮＧ依赖型肿瘤的抑瘤实验打下基础。方法：利用杂交瘤技术以ｒｈＡＮＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,制备二株,能够稳定分泌抗ｒｈＡＮＧ抗体的杂交,并对上清进行、双扩散,免疫印迹等鉴定。     

抗血管紧张素Ⅱ单克隆抗体制备及初步鉴定

目的 运用杂交瘤技术制备血管紧张素Ⅱ单克隆抗体,并对其进行初步鉴定.方法 制备血管紧张素Ⅱ免疫原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过筛选克隆后获得细胞株并制备血管紧张素Ⅱ单克隆抗体,对抗体的亚型、效价、亲和常数、交叉反应率进行测定并评估其用于化学发光免疫分析的性能.结果 共制备出6株单克隆...     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗Periostin单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗Periostin单克隆抗体并鉴定其免疫学性能,为后期临床应用奠定基础。方法:表达并纯化Periostin的GST融合蛋白,经过免疫小鼠、细胞融合及亚克隆筛选,制备效价良好的高亲和力单克隆抗体,并用免疫组化实验鉴定其免疫学性能。结果:获得6株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高亲和力抗体,经酶联免疫吸附测定、Western blot和免疫组化实验证实均能特异性识别人的Periostin,显微镜下观察发现Periostin在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤患者的组织切片中表达水平显著高于健康人。结论:成功制备了高亲和力、特异性强的抗人Periostin单克隆抗体,为小分子抗体以及抗体人源化制备奠定了基础,进而为治疗人体内组织器官纤维化提供理论依据。     

抗人血管内皮细胞单克隆抗体的制备及其在血管内皮细胞分型上的可能应用

目前国外已有制备抗人血管内皮细胞(VEC)单克隆抗体(McAb)成功的报道。但国内尚无这方面的报导。国外一些实验室所制得的抗人VEC的McAb,有的与单核细胞或(和)淋巴细胞具有交叉反应,有的作用于细胞质抗原而非膜抗原。Cerilli认为,VEC具有独特的非HLA抗原,而外周血单核细胞也具有这种VEC抗原系统。迄今尚未有人尝试     

鼠抗人血管抑素单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人血管抑素(angiostatin)的单克隆抗体,为进一步研究血管抑素的抗肿瘤作用和临床应用打下基础。方法:利用杂交瘤技术以血管抑素免疫BALB/C小鼠制备3株能够稳定分泌抗血管抑素抗体的杂交瘤,并对上清进行ELISA、双向免疫扩散等鉴定。结果:该抗体的类别为IgG₁,并能特异性识别血管抑素,与细胞因子rhIL-2、rhTNF-α、rhIFN-α及血清蛋白无交叉反应。结论:经初步鉴定获得3株分泌特异性抗血管抑素抗体的杂交瘤。     

抗TG单克隆抗体的制备及初步鉴定

抗ＴＧ单克隆抗体的制备及初步鉴定徐荣佳，刘军权，方蕾，姚仁南，陈晓英，徐广奎，陈复兴（解放军第９７医院检验科解放军第９７医院病理科，徐州２２１００４）甲状腺球蛋白是一种分子量为６６０ｋＤａ的四聚体的糖蛋白，它对合成甲状腺素有密切关系。在甲状腺自身免疫...     

抗人DAF单克隆抗体的制备及鉴定

以初步纯化的人红细胞膜ＤＡＦ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,成功地获得３株（ＤＧ３、ＤＧ９和ＤＡ１１）抗人ＤＡＦ单克隆抗体。经间接ＥＬＩＳＡ测定,３株杂交瘤细胞培养上清及腹水的抗体效价分别为１０－３～１０－４及１０－６～１０－７;３株单抗的重链为小鼠ＩｇＧ１亚类,轻链为κ型。结合还原条件下的免疫印迹实验及３株单抗对ＤＡＦ促衰变活性的抑制作用,推测ＤＧ９识别的抗原表位为ＳＣＲ１,而ＤＧ３和ＤＡ１１为ＳＣＲ２至ＳＣＲ４。     

抗HBeAg单克隆抗体的制备及初步鉴定

为获得能替代抗ＨＢｅＡｇ多克隆酶标记抗体做ＥＬＩＳＡ，我们用纯化的ＨＢｅＡｇ阳性血清，免疫Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术，获得８株能稳定分泌小鼠抗ＨＢｅＡｇｍＡｂ的杂交瘤细胞。对其特性进行了初步鉴定，并就这些单克隆抗体（ｍＡｂ）在ＥＬＩＳＡ反应中的特性进行了分析。１　材料和方法１－１　材料　ｅ抗原阳性的人血清经亲和层析纯化的ＨＢｅＡｇ，由本室收集并纯化。Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠，购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞，由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。１－２　杂交瘤细胞株的…     

抗人IgG单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备高效价的抗人IgG单克隆抗体(mAb),并用于肾脏免疫性疾病的免疫荧光诊断。方法:以人IgG全长分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,经筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗IgGmAb的杂交瘤细胞株。用ELISA及Westernblot鉴定mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)。以纯化的mAb建立免疫荧光染色法,并用于肾小球肾炎的诊断。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人IgGmAb的细胞株,腹水效价为1×10-6,Ig亚类为IgG2a(κ),相对亲和力达到1×10-5,Westernblot显示在相对分子质量(Mr)为53×103处出现特异性的条带,说明mAb能与IgG的γ链特异性结合。免疫荧光染色的结果显示,IgG分子在肾小球肾炎的活检组织中表达。结论:获得1株能特异性识别人IgG的mAb,可用于肾脏免疫性疾病的病理诊断。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

利用细胞融合技术建立了５株分泌抗人甲胎蛋白（ＡＦＰ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，快速酶联免疫分析法测得其亲和常数为５×１０７～２×１０９Ｍ－１之间；单抗的Ｉｇ亚类１Ｄ６和１Ｅ６为鼠ＩｇＧ２ａ（κ），３Ａ８、５Ａ７和７Ｈ１１为ＩｇＧ１（κ）。免疫组化中５株单抗均在肝癌细胞的胞浆显色，３Ａ８和１Ｄ６还能结合在肝癌细胞膜上。应用方阵配对实验初步证实，５株单抗至少针对ＡＦＰ分子上３个不同表位，并分析了单抗在ＥＬＩＳＡ反应中的特性。     

抗BrdU单克隆抗体的制备及初步鉴定

溴脱氧尿嘧啶核苷（Ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ　ＢｒｄＵ）是ＤＮＡ前体胸腺嘧啶核苷的类似物。通过检测ＢｒｄＵ掺入Ｓ期细胞ＤＮＡ的基因片段,可避免用同位素标记所产生的放射性污染等副作用。本文在过碘酸氧化法偶联抗原的基础上,已制备出具有均一分泌活性...     

抗人骨桥蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗人骨桥蛋白(hOPN)的单克隆抗体(mAb),用于其功能研究.方法:构建OPN的原核表达载体pTriEx-1-hONP载体,转化Tuner(DE3)placI感受态大肠杆菌,用IPTG进行诱导表达.利用镍柱亲和层析纯化OPN蛋白,纯化蛋白经超滤浓缩洗涤后即为免疫原.以重组纯化的OPN蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/O进行常规融合,通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得分泌鼠抗人OPN蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法检测其特异性,并用免疫组化方法检测了正常月经周期子宫内膜OPN的表达.结果:pTriEx-1-hONP表达的OPN蛋白主要为可溶性形式,经镍柱纯化后,蛋白纯度可达85%以上.纯化的OPN重组蛋白免疫小鼠后经融合筛选,得到2株稳定分泌抗人OPN的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为1E7和587,两株mAb的免疫球蛋白亚类分别IgG1和IgG2a.通过ELISA和Western blot等方法鉴定,抗OPN的mAb能与OPN蛋白特异性结合.通过免疫组织化学方法对不同时期的正常子宫内膜的OPN的检测表明,子宫内膜腺上皮在增生期、分泌早期,OPN呈弱阳性表达;分泌中、晚期OPN呈强阳性表达.结论:以纯化的重组hOPN为免疫原成功制备了鼠抗hOPN的mAb,并初步进行了应用,为研究hOPN的功能打下了良好基础.     

抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

抗CD59单克隆抗体的制备及鉴定

本实验应用杂交瘤技术，首次在国内建立了两株抗人补体终末阶段同源限制因子的杂交瘤细胞系。经抗原特异性及功能分析提示它们所针对的抗体分子具有相似的功能，但抗原性和分子量不同：２Ａ７－Ａｇ为１８－２２ＫＤａ，１Ｆ１０－Ａｇ为６５ＫＤａ。进一步应用免疫荧光流式细胞分析、促同源补体溶血试验、中和实验、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，ＰＩ－ＰＬＣ处理等实验手段系统地鉴定了２Ａ７抗原的细胞分布、抗原特异性、分子     

抗人RKIP单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗人RKIP（hRKIP）的单克隆抗体（mAb）并进行特性鉴定。方法：自行构建表达人RKIP重组蛋白（reRKIP）,纯化的reRKIP免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用免疫荧光和Western blot鉴定mAb的特异性。结果：成功构建RKIP原核表达载体,转化BL21后可高效表达reRKIP,成功地获得4株（EC1,ED2,ED5和8B3）分泌抗人reRKIP mAb的杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在免疫荧光和Westernblot试验中均可与细胞中RKIP蛋白反应。结论：成功地制备了4株抗hRKIP mAb,为进一步研究RKIP生物学功能奠定了基础。