脂肪间充质干细胞上清液对小鼠皮肤创伤的作用及可能机制

目的观察小鼠脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)上清液经尾静脉注射治疗小鼠皮肤创伤的效果并探讨其作用机制。方法无菌条件下分离培养正常小鼠的ADSCs取3-5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标记物CD34、CD45、CD90、CD105的表达。建立小鼠全皮层皮肤创伤模型并随机分为2组,注射生理盐水的对照组和注射上清液的实验组,分别于伤后7天,14天观察创面愈合情况。分离小鼠成纤维细胞(Fibroblast,Fb),将小鼠ADSCs上清液作用于Fb不同时间后,应用WST法和Transwell迁移实验检测Fb细胞增殖和迁移情况,应用real-time PCR和Western blot检测Fb中碱性成纤维细胞生长因子(basci fibroblast growth factor,b FGF)在转录和蛋白水平的表达。结果小鼠ADSCs表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45。ADSCs上清液注射组于创伤后第7天,14天的伤口愈合率分别为(65%±3.4%),(95.6%±5.2%),均显著高于7天、14天生理盐水对照组的(55%±4.4%),(77.1%±3.1%)。ADSCs上清液作用于Fb后,能促进Fb的增殖和迁移以及上调生长因子b FGF在转录和蛋白水平的表达。结论小鼠ADSCs上清液促进小鼠皮肤创面愈合可能与上调b FGF表达相关。     

LED红光对糖尿病大鼠创面愈合的影响

目的探讨LED红光照射对糖尿病大鼠创面愈合的作用及相关机制。 方法将30只4周龄雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常创面组、糖尿病创面组、红光治疗糖尿病创面组,每组10只。红光治疗糖尿病创面组及糖尿病创面组大鼠高脂饮食4周,正常创面组大鼠正常饮食。饲养4周后对红光治疗糖尿病创面组及糖尿病创面组大鼠按50 mg/kg的量腹腔注射10 mg/mL的链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,2组大鼠均造模成功。造模成功后在3组大鼠的背部两侧各制造2个1.5 cm×1.5 cm的全层皮肤缺损创面,每2 d对大鼠创面进行酒精消毒1次,红光治疗糖尿病创面组大鼠每次消毒后对创面进行LED红光照射5 min,能量密度为20 J/cm²,另外2组大鼠不进行LED红光照射。在观察第7、10、14、21天,观察红光治疗糖尿病创面组大鼠创面有无出现皮疹、红肿、水疱、烫伤等光照不良反应;肉眼观察3组大鼠创面愈合情况;统计3组大鼠创面愈合率。观察第10天从各组随机取2只大鼠,处死后取背部创面组织,固定后,进行苏木精-伊红染色观察创面新生血管情况及肉芽组织生长情况;采用免疫荧光法检测各组大鼠创面组织中CD34、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达情况。数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。 结果观察第7、10、14、21天,红光治疗糖尿病创面组大鼠经LED红光照射后皮肤未见皮疹、红肿、水疱、烫伤等光照不良反应。在各个观察时间点,肉眼观察正常创面组及红光治疗糖尿病创面组创面愈合情况均优于糖尿病创面组,且正常创面组创面愈合情况略优于红光治疗糖尿病创面组;观察第7、10、14、21天,正常创面组的创面愈合率分别为(34.62±2.116)%、(53.83±7.92)%、(70.20±5.41)%、(95.65±2.58)%,红光治疗糖尿病创面组创面愈合率分别为(31.76±2.44)%、(50.48±4.54)%、(66.26±11.35)%、(93.96±2.80)%,糖尿病创面组创面愈合率分别为(23.67±4.18)%、(42.71±3.40)%、(53.77±7.74)%、(84.07±4.43)%,3组比较差异均有统计学意义(F＝34.69、10.35、10.32、34.40,P<0.05);观察第7、10、14、21天,正常创面组及红光治疗糖尿病创面组创面愈合率始终高于糖尿病创面组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察第7、10天,正常创面组创面愈合率高于红光治疗糖尿病创面组,差异均有统计学意义(t＝2.80、3.26,P<0.05),观察第14、21天,正常创面组创面愈合率仍高于红光治疗糖尿病创面组,但差异均无统计学意义(t＝1.16、1.40,P>0.05)。观察第10天,创面组织苏木精-伊红染色显示,正常创面组内含大量新生毛细血管,肉芽组织内胶原及细胞排列紧密有序;红光治疗糖尿病创面组见较多新生毛细血管,肉芽组织内胶原及细胞较多,但少于正常创面组;而糖尿病创面组新生血管最少,肉芽组织内细胞及胶原稀疏。免疫荧光法检测创面组织中CD34、VEGF表达情况可见,正常创面组CD34、VEGF表达高于红光治疗糖尿病创面组,而红光治疗糖尿病创面组表达高于糖尿病创面组。 结论LED红光可促进糖尿病大鼠创面组织中CD34、VEGF表达,促进血管新生,进而促进创面愈合。     

肝素化羊脱细胞真皮基质对深Ⅱ度烧伤创面组织中血管内皮生长因子和层粘连蛋白的影响

目的研究肝素化羊脱细胞真皮基质(ADM)促进深Ⅱ度烧伤创面愈合的作用机制。 方法制作大鼠深Ⅱ度烧伤模型,随机分为碘伏纱布组、猪ADM组、羊ADM组和肝素化羊ADM组,每组40只。在伤后不同时间段,观察各组创面愈合率,同时在各个时间段处死大鼠8只,取创面组织标本做RT-qPCR和蛋白质印迹法检测各组创面组织中血管内皮生长因子(VEGF)和层粘连蛋白(LN)的mRNA与蛋白表达情况。对数据行单因素方差分析和t检验。 结果肝素化羊ADM组深Ⅱ度创面的愈合率优于碘伏纱布组。RT-qPCR检测发现,VEGF的mRNA在各组伤后3 d的创面组织中表达较对照组高,各组间的比较发现,伤后7 d,肝素化羊ADM组的VEGF的mRNA表达量明显高于碘伏纱布组(t＝80.83,P<0.05),羊ADM组和猪ADM组在伤后7 d也较碘伏纱布组的表达量高(t＝60.80、53.42,P值均小于0.05);蛋白质印迹法检测肝素化羊ADM组伤后3 d时VEGF蛋白表达量较多,随后便逐渐减少,伤后21 d时蛋白表达较少。伤后3 d,碘伏纱布组LN在创面的表达明显下降,在之后的治疗过程中,LN的表达逐渐恢复,伤后14 d的表达量明显高于伤后3 d(t＝19.5,P<0.001),伤后21、28 d的表达量与伤后14 d相差不明显。蛋白质印迹法检测发现肝素化羊ADM组LN在伤后3 d便开始出现表达量逐渐增多,伤后21 d时出现蛋白表达较多。 结论肝素化羊ADM能够保护创面及促进创面组织中VEGF和LN的表达,进而促进创面愈合。     

基质细胞衍生因子-1α联合自体富血小板血浆修复小鼠皮肤损伤实验研究

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)联合自体富血小板血浆(PRP)在小鼠皮肤损伤修复过程中的作用效果,并分析其作用机制。方法选取6～8周龄健康C57小鼠24只,对24只小鼠分别抽取颈动脉血制备PRP;分别在每只小鼠脊柱2侧对称部位作直径为1.0 cm的圆形全层皮肤损伤创面,共建立48个创面,小鼠按随机数字表法分为观察组和对照组;每组各12只小鼠24个创面。48个创面均予PRP覆盖,观察组经皮下创面内予SDF-1α溶液(100μg SDF-1α+100μL 0.9%氯化钠溶液)从正常皮肤处经皮下注射至创面内,对照组同时采取同样方法注射200μL 0.9%氯化钠溶液,均连续注射7 d, 2次/d, 12 h/次。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测对比造模后第7、14、21天2组创面血小板内皮细胞生长因子(VEGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达量,采用蛋白质免疫印迹法对比造模后第7、14天2组创面VEGF蛋白和Samd1蛋白表达量,对比2组造模后第7、14、21天创面收缩情况及创面愈合时间。数据进行t检验。结果造模后第7、14天,观察组组织中VEGF含量分别为(0.66±0.07)、(0.49±0.07) pg/mL,均高于对照组[(0.45±0.05)、(0.45±0.06) pg/mL],差异均有统计学意义(t=10.83、2.25,P0.05);造模后第21天,观察组组织中VEGF含量[(0.44±0.06) pg/mL]和对照组[(0.43±0.06) pg/mL]相比,差异无统计学意义(t=0.30,P0.05)。造模后第7、14天,观察组组织中TGF-β1含量分别为(0.54±0.05)、(0.38±0.04) pg/mL,均高于对照组[(0.34±0.04、0.35±0.05) pg/mL],差异均有统计学意义(t=13.76、2.52,P0.05);造模后第21天,观察组组织中TGF-β1含量[(0.33±0.04) pg/mL]和对照组[(0.35±0.04) pg/mL]相比,差异无统计学意义(t=-1.66,P0.05)。造模后第7、14天,观察组VEGF蛋白均高于对照组,差异有统计学意义(t=7.31、4.29,P0.05),观察组Samd1蛋白均高于对照组,差异有统计学意义(t=2.74、11.13,P0.05)。造模后第7、14天,观察组的创面愈合收缩率为(41.98±6.94)%、(75.23±10.41)%,与对照组[(36.93±7.59)%、(64.56±5.96)%]比较,差异均有统计学意义(t=2.40、4.35,P0.05);造模后第21天,观察组创面愈合收缩率[(100.00±0.00)%]与对照组[(99.84±0.74)%]比较,差异无统计学意义(t=1.00,P0.05)。观察组创面愈合时间为(15.91±1.21) d,短于对照组[(18.95±1.33) d],差异有统计学意义(t=-8.26,P0.05)。结论SDF-1α联合PRP可以促进生长因子表达、调控TGF-β1-Samd信号通路促进创面愈合。     

脂肪间充质干细胞移植提升脊髓损伤小鼠血小板反应蛋白4表达促进运动功能恢复

目的:评估脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)移植对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)小鼠血小板反应蛋白4(thrombospondin-4,Thbs-4)表达水平的影响,及ADSCs修复SCI的作用。方法:制备小鼠T10 SCI模型,随机分为假手术组、模型组、ADSCs移植组,每组30只。取同种系转绿色荧光基因小鼠皮下脂肪组织,分离培养ADSCs。损伤后即刻移植106个细胞至ADSCs移植组小鼠脊髓内,模型组注射同等剂量PBS。术前及术后每周进行运动功能BBB评分;采用免疫荧光法检测移植细胞存活、炎症反应情况;采用Western Blot法检测移植术后第7 d各组动物脊髓组织Thbs-4蛋白表达水平;采用ELISA法检测术后第3、14 d各组动物脊髓组织TNF-α浓度。结果:ADSCs移植后可在宿主体内存活至少2周。移植术后第7 d,Thbs-4在假手术组表达水平最低,模型组次之,在ADSCs移植组表达水平最高(P0.05);ADSCs移植下调SCI后TNF-α浓度;移植术后第14 d,ADSCs移植组ED-1+炎症细胞数量显著少于模型组(P0.05);运动功能评分结果显示从第2周起,ADSCs移植组小鼠显著优于模型组(P0.05)。结论:ADSCs移植促进SCI小鼠运动功能恢复,其机制与提升Thbs-4蛋白表达水平,减轻受损脊髓组织炎症反应增生有关。     

晚期糖基化终产物对人脂肪间充质干细胞功能影响的体外研究*

 目的：探讨晚期糖基化终产物（AGEs）对人脂肪来源的间充质干细胞（hADSCs）促进创伤修复功能的影响。方法：体外培养hADSCs,实验分为牛血清白蛋白（BSA）对照组、低浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白（AGE-BSA）效应组和高浓度AGE-BSA效应组。采用WST法和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖和迁移情况。应用实时定量PCR和ELISA检测各组细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）和胰岛素样生长因子1（IGF-1）的表达。结果：与对照组相比, AGE-BSA组增殖能力和迁移能力明显下降（P<0.05）,VEGF、HGF和IGF-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论：AGEs能损伤hADSCs的促进创伤修复功能,因而能够影响hADSCs治疗糖尿病皮肤溃疡病的治疗效果。     

肿瘤外泌体促进高糖难愈创面的愈合

目的:评价小鼠乳腺癌4T1细胞分泌的外泌体(即肿瘤来源的细胞外囊泡,tumor-derived extracellular vesicles,tEVs)促进糖尿病小鼠创面愈合的效果,并探讨其作用机制。方法:差速离心法提取tEVs,透射电镜观察其形态,Western blot检测外泌体特异性蛋白TSG101和CD9的表达;用tEVs处理体外培养的小鼠成纤维细胞系L929和人脐静脉内皮细胞,探讨其对成纤维细胞活力和迁移,以及血管内皮细胞成管能力的影响。取20只6周龄C57BL/6雄性小鼠,腹腔注射链脲佐菌素诱导形成高血糖小鼠后,在其背部建立直径约0.7 cm的高血糖创面模型,之后将小鼠分为实验组和对照组(n=10),于第0、3和6天在创面四周的真皮层注射0.2 mL tEVs(含50μg)和等体积PBS。第1、7、18和25天观察并记录创面愈合情况;第7和14天,取创面皮肤组织常规石蜡切片,HE染色,评价创面愈合效果;免疫荧光检测血管标志物CD31的表达,探讨创面愈合过程中血管生成的变化。结果:tEVs呈圆形或杯状且比较均一,粒径大小约为40～150 nm,外泌体特异性蛋白TSG101和CD9均为阳性。体外细胞实验表明,tEVs能够促进L929细胞的生长和迁移,且可以促进人脐静脉内皮细胞的成管能力。动物体内实验表明,tEVs可以促进高血糖小鼠难愈创面愈合,且愈合效果良好。同时tEVs组可见创面新生组织中CD31的表达升高。结论:tEVs可以促进糖尿病小鼠创面的愈合,该过程可能与其参与增强成纤维细胞的活力和迁移能力以及促进血管生成有关。     

P物质对成纤维细胞Rac-1/JNK通路及糖尿病创面愈合的影响

目的 研究外源性P物质(SP)对成纤维细胞迁移的影响及糖尿病小鼠创面愈合的作用.方法 利用Transwell细胞迁移试验、划痕试验检测SP对小鼠成纤维细胞迁移能力的影响.筛选建模成功的糖尿病小鼠20只,随机分为对照组和SP组.分别于皮肤损伤后4、8、12、16、20d,观察创面愈合情况并计算创面愈合率,并于7、14、2...     

脂肪干细胞来源的外泌体对2型糖尿病肾病大鼠的保护作用

目的探究脂肪干细胞(ADSCs)来源的外泌体对2型糖尿病肾病大鼠模型肾脏的作用以及机制。方法以SD大鼠为实验对象,无菌条件下抽提大鼠腹股沟处脂肪组织,进行ADSCs的原代培养,采用油红O染色和流式细胞仪方法对ADSCs进行鉴定。利用超速离心法进行收集外泌体,采用透射电子显微镜和Western blot法对外泌体进行鉴定。构建2型糖尿病肾病大鼠模型,根据实验目的分成3组,即空白对照组,糖尿病肾病组和外泌体治疗组。处理12周后无痛苦处死大鼠,无菌条件下摘取肾脏,利用HE染色和透射电镜法观察肾脏的形态,利用RT-PCR和Western blot法检测肾脏组织中凋亡相关蛋白Bcl-2,Bad和Bax的表达。结果原代ADSCs细胞呈多角型,贴壁生长,油红O染色阳性,ADSCs细胞表面蛋白CD90和CD105的表达分别为86.7%和91.4%;CD31和CD45的表达分别为0.4%和1.2%。外泌体为直径50～150nm的双层膜囊泡状结构,外泌体的分子标志物CD81和CD63表达阳性。外泌体治疗组大鼠肾脏肾小球较为规则,系膜未见明显增生。大鼠肾脏组织抗凋亡因子Bcl-2的相对表达量对照组明显高于糖尿病肾病组,外泌体治疗组明显高于糖尿病肾病组。大鼠肾脏组织凋亡相关因子Bad和Bax的相对表达量对照组明显低于糖尿病肾病组,外泌体治疗组明显低于糖尿病肾病组。结论ADSCs来源的外泌体通过抑制细胞凋亡和系膜组织增生起到保护肾功能的作用。     

Activin B联合BMSCs不同移植方式对大鼠皮肤创伤愈合的治疗

目的　探讨BMSCs联合生长因子对治疗皮肤创伤最为有效的移植途径。 方法　分离并鉴定BMSCs,移植后活体成像仪及冰冻切片观察CFSE标记的BMSCs,统计创面愈合率,并进行HE染色观察伤口愈合。 结果　细胞表面标记物CD90表达呈阳性,CD80表达呈阴性。活体成像仪3、7d观察实验组大鼠皮肤创面均有荧光显示,而对照组无。术后各时间点BMSCs移植组创面愈合率均高于对照组（P＜0.05）,而不同移植方式相比差异无统计学意义。 结论　Activin B联合BMSCs经表皮移植和尾静脉移植均可以迁移至皮肤创伤部位并参与皮肤创伤的修复,相对于尾静脉移植组,表皮移植组在创伤修复中更简便易行。     

Study of platelet-rich fibrin promoting endothelial cell differentiation and angiogenesis induced by transplantation of adipose-derived stem cells

Diabetic patients are characterized by long wound healing time, and adipose stem cells (ADSCs) can secrete growth factors to promote angiogenesis and improve diabetic wound healing. In this research, we attempted to interrogate the impact of platelet-rich fibrin (PRF) on ADSCs in diabetic wound healing. ADSCs were harvested from human adipose tissues and identified through flow cytometry. After pretreatment with cultured medium supplemented with different concentrations of PRF (2.5%, 5%, and 7.5%), proliferation and differentiation capacity of ADSCs were assessed by CCK-8 assay, qRT-PCR and immunofluorescence (IF), respectively. Tube formation assay measured angiogenesis. Western blot analysis analyzed expression of endothelial markers and the extracellular signal-regulated kinase (ERK) and serine/threonine kinase (Akt) pathways in PRF-induced ADSCs. The CCK-8 experiment indicated that PRF enhanced proliferation of ADSCs in dose-dependent manner, relative to normal control group. The expression of endothelial markers and the capacity of tube formation were significantly promoted by 7.5% PRF. The release of growth factors containing vascular endothelial grow factor (VEGF) and insulin-like growth factor-1 (IGF-1) from PRF was increased with the extension of detection time. When the receptors of VEGF or/and IGF-1 were neutralized, ADSCs differentiation into endothelial cells were obviously inhibited. Additionally, PRF stimulated ERK and Akt pathways, and the inhibitors of ERK and Akt attenuated PRF-induced differentiation of ADSCs into endothelial cells. In conclusion, PRF promoted endothelial cell differentiation and angiogenesis induced by ADSCs in diabetic wound healing, which appears to give guidance for treating patients.     

局部应用胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面愈合的影响

目的研究局部应用胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面愈合的作用,初步探索相关机制。方法 60只Wistar大鼠经高脂饮食喂养和小剂量脲佐菌素（STZ）多次注射诱导糖尿病,5周后,造成背部皮肤20%TBSA深Ⅱ度烫伤。随机分为胰岛素治疗组和对照组（每组30只大鼠）,分别于创面下浸润注射0.2 U中性胰岛素和等体积0.9%氯化钠溶液。观察创面愈合速度及伤后第1、4和12天两组创面表皮角质形成细胞迁移、炎症细胞浸润以及胶原沉积情况。酶联免疫吸附测定法检测创面活化素A（Activin A）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和血小板衍生因子A（PDGF-A）水平。结果胰岛素治疗组创面愈合时间明显缩短,血糖无明显变化。和对照组相比,胰岛素治疗组伤后第4天创面表皮迁移舌长度明显延长;伤后第12天创面胶原沉积增加;创面巨噬细胞浸润和消退的时间提前,巨噬细胞在创面表达特征与创面MCP-1表达趋势一致。伤后第1、4天胰岛素治疗组创面Activin A的表达分别（142.52±15.26）pg/mL和（271.46±49.73）pg/mL,较对照组创面的（52.36±33.18）pg/mL和（46.08±8.92）pg/mL明显增加（P=0.0057,0.0001）,PDGF-A于伤后第1、4天的表达分别为（52.12±9.00）pg/mL和（74.75±7.00）pg/mL较对照组的（47.35±8.21）pg/mL和（34.07±5.05）pg/mL也有明显增加（P=0.4080,0.0001）。结论局部应用胰岛素促进创面巨噬细胞的浸润和提早消退、促进表皮细胞的迁移和血管生成相关细胞因子表达和胶原组织沉积,从而促进糖尿病大鼠烫伤创面的愈合。     

糖尿病模型大鼠烫伤创面皮肤组织P物质和Bcl-2表达与龙血竭的干预*

背景：研究证明龙血竭有促进创伤愈合、抗血小板聚集、抗炎镇痛、抗菌抗氧化等生物活性。 目的：验证龙血竭在糖尿病大鼠烫伤皮肤组织愈合过程中对P物质和Bcl-2表达的影响。 方法：Wistar大鼠112只,随机分为4组。龙血竭组、磺胺嘧啶银(SD-Ag)组、糖尿病对照组和正常对照组。其中前3组为糖尿病深Ⅱ度烫伤模型,正常对照组为正常深Ⅱ度烫伤模型。 结果与结论：烫伤后第7天开始创面愈合率龙血竭组、正常对照组高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P < 0.05),第21天龙血竭组创面愈合率明显高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P < 0.05),正常对照组最高。烫伤后第15天正常对照组P物质阳性表达水平最高,峰值显著高于其他3组,以后逐步减弱。龙血竭组、SD-Ag组和糖尿病对照组于烫伤后第21天阳性表达最强,且龙血竭组表达明显高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P < 0.05)。烫伤后第3天开始正常对照组Bcl-2阳性表达水平明显高于其他3组;于第15天各组阳性表达水平皆达到峰值,龙血竭组最高,明显高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P < 0.05),与正常对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。说明龙血竭能通过参与调控P物质和Bcl-2的表达,有效地促进糖尿病烫伤创面的愈合。     

局部应用胰岛素对小鼠创面髓过氧化物酶及丙二醛的影响

目的观察小鼠创面局部应用小剂量胰岛素对创面髓过氧化物酶、丙二醛的影响,从对炎症调控角度探索胰岛素促进创面愈合的机制。方法48只C57BL／6J小鼠背部两侧对称部位造成两个全层皮肤缺损创面。按自身对照方法,每只小鼠背部两个创面随机分为胰岛素组和对照组。伤后即刻及伤后每24h,胰岛素组创面局部应用0．03U胰岛素（20μl生理盐水配置）,对照组应用20山生理盐水。随机选取12只小鼠用药至创面愈合,观察愈合时间和速率。余36只小鼠于伤后1、2、3d分别处死12只后取创面及创周5mm组织,免疫印记化学发光法检测创面髓过氧化物酶（MPO）、生化方法检测丙二醛（MDA）含量。结果胰岛素组创面愈合时间显著短于对照组（P〈0．05）;伤后第5、7天胰岛素组的创面愈合百分率显著高于对照组（P〈0．05）。伤后第2、3天胰岛素组和对照组创面MPO含量分别为1．52±0．37、1．95±0．53和1．2±049、1．25±0．39,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。胰岛素组与对照组创面MDA含量在伤后1、2、3d比较,差异均无统计学意义。结论胰岛素在增强创面杀菌功能的同时减轻细胞损伤,可能是胰岛素促进创面愈合的机制之一。     

α7nAChR的激活通过抑制TNF-α表达促进糖尿病小鼠伤口愈合

 目的：观察糖尿病小鼠伤口愈合期间巨噬细胞浸润及肿瘤坏死因子 α（TNF-α）表达特征,探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）特异性激动剂PNU-282987是否可通过抑制TNF-α表达促进糖尿病小鼠伤口的愈合。方法：(1) 制作糖尿病小鼠切创模型（糖尿病组）,正常小鼠在相同部位制作相同大小创口作为对照（对照组）,分别于切创后1 d、3 d、5 d、10 d、14 d和21 d（每个时间段5只）提取创口样本。免疫组化观察创口中巨噬细胞和成纤维细胞数量,Western blotting检测TNF-α表达水平,Masson染色观察胶原沉积情况。 (2) 在糖尿病小鼠切创后,选择合适的干预时间窗进行PNU-282987干预,然后观察上述指标变化。结果：(1) 与对照组相比,糖尿病组创口愈合明显延迟,在切创初期的伤口中巨噬细胞数量和TNF-α表达水平较低（P<0.05）,而切创5 d后的伤口巨噬细胞数量和TNF-α表达水平显著增加（P<0.05）,成纤维细胞数量和胶原含量减少（P<0.05）。 (2) 在切创5 d后对糖尿病小鼠腹腔注射PNU-282987,可显著减少伤口中TNF-α表达,提高成纤维细胞数量和胶原含量,促进伤口愈合。结论：糖尿病伤口愈合具有炎症反应发生迟但不易消退的特征。在炎症反应明显期激活α7nAChR可抑制TNF-α表达,促进糖尿病小鼠的伤口愈合。     

微孔化羊ADM复合hUCMSC促进创面修复的机制研究

目的 探讨微孔化羊脱细胞真皮基质(ADM)复合人脐带间充质干细胞(hUCMSC)促进全层损伤皮肤创面愈合的治疗机制.方法 将hUCMSC种植于微孔化羊ADM上共培养,形成复合生物敷料.选用72只裸鼠制作成皮肤全层损伤模型,按随机数字表法分为3组,每组24只,hUCMSC种植于微孔化羊ADM上治疗全层损伤创面组(hUCM...     

特异性整合素连接激酶抑制剂QLT0267对大鼠烧伤创面愈合影响的初步研究

目的 观察局部注射特异性整合素连接激酶（ILK）抑制剂QLT0267对SD大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合影响,初步探讨ILK在创面愈合过程中的作用及机制.方法 选取45只雄性SD大鼠,采用恒温恒压烫伤仪在其背部皮肤制备深Ⅱ度烧伤创面,并随机分成实验组、对照组及二甲基亚砜（DMSO）组,每组15只.实验组创面每天注射浓度100 μM QLT0267液100 μL;对照组创面每天注射0.9％氯化钠溶液100 μL;DMSO组创面每天注射0.3％ DMSO液100 μL.测量各组大鼠创面愈合时间和愈合率;伤后14 d取材,各组随机选择5只大鼠,用SP法检测ILK、AKT、PAKT、α-SMA在创面组织中的表达,Western Blot检测各组ILK、AKT、PAKT蛋白含量;用Masson改良法检测创面胶原.结果 实验组大鼠创面平均愈合时间为（21.1±0.6）d,比对照组（17.1±0.6）d和DMSO组（17.7 ±0.6）d长;实验组创面愈合率也低于对照组和DMSO组,比较差异有统计学意义（P＜0.05）.Western Blot检测结果显示：各组ILK、AKT蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）,实验组PAKT蛋白显著低于对照组和DMSO组.SP法结果各组ILK、AKT表达差异无统计学意义（P＞0.05）,实验组ILK活性被抑制,PAKT（0.406±0.008）表达较对照组（0.901 ±0.013）、DMSO组（0.966±0.011）降低,比较差异有统计学意义（F=11.27,P=0.04）;实验组α-SMA表达（0.201±0.003）较对照组（0.339 ±0.006）、DMSO组（0.351 ±0.005）也降低,比较差异有统计学意义（F=52.86,P=0.001）;实验组细胞外基质胶原排列较对照组、DMSO组明显稀疏、紊乱.结论 ILK活性被抑制时延迟大鼠皮肤创面愈合.ILK特异性抑制剂QLT0267通过抑制ILK活性PAKT合成减少,可能影响其下游信号的传导,导致肌成纤维细胞生成减少、胶原合成减少,影响创面愈合.     

骨髓间充质干细胞-透明质酸复合物对放射性溃疡创面愈合的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）．透明质酸（HA）复合物对大鼠放射性溃疡创面的影响及其可能的作用机制。方法分离培养SD大鼠MSCs,以HA为载体构建复合物,观察复合物中MSCs的分化特性。选取30只SD大鼠以Sr－90皮肤敷贴器制作皮肤放射性溃疡模型,臀部对称制作2个直径1cm全层皮肤缺损创面。将大鼠随机分为3组,每组10只。MSCs－HA组：创面涂布200μlMSCs—HA;HA组：创面涂布200μlHA;对照组：创面涂布200μlDMEM培养基。比较各组制创术后第1、2、3、4周的创面愈合率,Ⅷ因子免疫组化微血管计数,创面组织羟脯氨酸含量。苏木精－伊红染色进行组织学观察。结果所有大鼠MSCs与HA共培养后生长良好,复合物中的MSCs可保持其特性：向脂肪细胞分化。制创术后第1周,MSCs．HA组、HA组的创面愈合率分别为（42．20±1．34）％、（34．20±2．06）％,均高于对照组的（23．45±1．66）％（P〈0．05）,制创术后第2、3周NMSCs—HA组高于HA组及对照组（P〈0．05）,制创术后第4周MSCs—HA组、HA组创面完全愈合,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。制创术后第2周,MSCs—HA组、HA组的微血管计数分别为（24．27±2．84）％、（20．54±2．55）％,均高于对照组的（16．11±2．30）％（P〈0．05）,制创术后第3、4周MSCs．HA组微血管计数高于HA组及对照组（P〈0．05）。制创术后第2周,MSCs—HA组、HA组的羟脯氨酸含量分别为（24．52±0．60）％、（19．41±0．58）％,均高于对照组的（14．19±0．65）％（P〈0．05）,制创术后第3、4NMSCs—HA组羟脯氨酸含量高于HA组及对照组（P〈0．05）。组织学观察显示,制创术后第4周MSCs—HA组表皮层厚度（6～7层）大于HA组（4—5层）及对照组（2～3层）。结论HA与MSCs可促进创面微血管及胶原的增生,MSCs—HA复合物可促进大鼠放射性?     

神经生长因子在糖尿病足创面组织中的表达

目的研究神经生长因子(NGF)及其高亲和性的酪氨酸激酶-A受体(TrkA)在糖尿病足创面组织中的表达。方法 收集糖尿病足创面组织标本作为对照组,正常人皮肤及皮下软组织标本作为正常组,采用免疫组化的方法观察神经生长因子(NGF)及其高亲和性的TrkA受体的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定NGF的含量。结果 对照组NGF含量为(66.299±10.204)pg/ml,与正常组NGF含量(35.015±4.671)pg/ml相比,差异有统计学意义(P=0.010)。结论 NGF及其高亲和性的TrkA受体在糖尿病足创面组织中表达的变化可能参与了创面的发生发展,是糖尿病足创面修复的影响因素之一。