腺病毒介导的Wt-p53基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨野生型p53（wtp53）基因对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）增殖的影响。方法 通过腺病毒载体将wt-p53基因转染至KFB中，用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测转染组与非转染组KFB中wt-p53的mRNA表达；通过间接免疫荧光法检测转染组与非转染组KFB中wt-P53蛋白表达；转染后1～6d用台盼蓝染色法计数活细胞数，并绘制生长曲线；采用流式细胞仪检测两组细胞生长周期各时相分布。结果 两组细胞中wt-p53的mRNA表达相差明显，转染组细胞中wt-P53蛋白表达明显强于非转染组；转染组细胞G0～G1期比例明显高于非转染组（P〈0．05），而G2～M期比例明显低于非转染组（P〈0．05）。结论 wt-p53基因能明显抑制体外培养的KFB增殖。     

雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的通过体外细胞培养实验,观察雷帕霉素对瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响,探讨雷帕霉素用于治疗瘢痕疙瘩的可能性及有效性。方法在无菌条件下切取人瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,分离培养其成纤维细胞;实验分为不同浓度雷帕霉素(2.5、5.0、7.5、10.0μmol/L)处理组和DMSO溶剂对照组。分别采用MTS法、划痕法和Annexin V-PI染色检测不同浓度雷帕霉素对两种成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果雷帕霉素能够抑制两种成纤维细胞的增殖,且对正常皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用更强,其浓度越高抑制效率越高;能够显著抑制两种成纤维细胞的迁移,并明显诱导正常皮肤成纤维细胞的凋亡,且高浓度(10.0μmol/L)雷帕霉素处理组的凋亡率最高,但对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡作用不明显。结论雷帕霉素可以抑制两种成纤维细胞的增殖和迁移,诱导成纤维细胞的凋亡;雷帕霉素对成纤维细胞的影响,可能成为预防瘢痕疙瘩等纤维化疾病的有效药物。     

姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:观察姜黄素对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用MTT比色法和羟脯氨酸比色法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:和对照组相比,姜黄素能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.01)。结论:姜黄素具有体外抗瘢痕疙瘩的作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

五倍子、蜈蚣对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨五倍子、蜈蚣对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及意义.方法用MTT法和3H-脯氨酸掺入法检测不同药物浓度、作用时间的五倍子和蜈蚣对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响;用光镜和电镜观察五倍子、蜈蚣作用后瘢痕成纤维细胞的形态及细胞器超微结构变化.结果五倍子和蜈蚣能抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的合成(P＜0.01),其抑制作用与剂量和时间有关.最佳浓度为10μg/ml,五倍子在作用后72h,蜈蚣在作用后48h,抑制作用最强,抑制率分别为89%和92%.五倍子、蜈蚣能明显影响成纤维细胞形态和超微结构(细胞核、线粒体、粗面内质网等).结论五倍子、蜈蚣能明显抑制瘢痕成纤维细胞增殖和胶原蛋白的合成.为临床应用中草药治疗增生性瘢痕提供了理论依据.     

五倍子、蜈蚣对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的　探讨五倍子、蜈蚣对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及意义。方法　用MTT法和3 H-脯氨酸掺入法检测不同药物浓度、作用时间的五倍子和蜈蚣对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响 ;用光镜和电镜观察五倍子、蜈蚣作用后瘢痕成纤维细胞的形态及细胞器超微结构变化。结果　五倍子和蜈蚣能抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1) ,其抑制作用与剂量和时间有关。最佳浓度为 10μg/ml,五倍子在作用后 72h ,蜈蚣在作用后 4 8h ,抑制作用最强 ,抑制率分别为 89%和 92 %。五倍子、蜈蚣能明显影响成纤维细胞形态和超微结构 (细胞核、线粒体、粗面内质网等 )。结论　五倍子、蜈蚣能明显抑制瘢痕成纤维细胞增殖和胶原蛋白的合成。为临床应用中草药治疗增生性瘢痕提供了理论依据     

瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的研究

目的　探讨瘢痕疙瘩的成纤维细胞的增殖和凋亡状态。方法　采用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术 ,检测 2 4例瘢痕疙瘩和其周围正常皮肤中成纤维细胞的增殖和凋亡状态。以每 10个高倍镜(40 0倍 )视野中成纤维细胞凋亡及PCNA阳性细胞数与总细胞数之比作为凋亡指数和增殖指数 ,利用配对t检验进行统计学处理。结果　 2 4例瘢痕疙瘩成纤维细胞和对照组平均增殖指数、平均凋亡指数、平均凋亡指数 /平均增殖指数 ,经配对t检验具有高度显著性差别。结论　瘢痕疙瘩成纤维细胞的过量增生和凋亡相对减少在瘢痕疙瘩的发生和发展中起着重要作用。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的研究

目的 探讨瘢痕疙瘩的成纤维细胞的增殖和凋亡状态。方法 采用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术，检测24例瘢痕疙瘩和其周围正常皮肤中成纤维细胞的增殖和凋亡状态。以每10个高倍镜（400倍）视野中成纤维细胞凋亡及PCNA阳性细胞数与总细胞数之比作为凋亡指数和增殖指数，利用配对t检验进行统计学处理。结果 24例瘢痕疙瘩成纤维细胞和对照组平均增殖指数、平均凋亡指数、平均凋亡指数／平均增殖指数，经配对t检验具有高度显著性差别。结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞的过量增生和凋亡相对减少在瘢痕疙瘩的发生和发展中起着重要作用。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨瘢痕疙瘩的成纤维细胞的增殖和凋亡状态.方法采用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术,检测24例瘢痕疙瘩和其周围正常皮肤中成纤维细胞的增殖和凋亡状态.以每10个高倍镜(400倍)视野中成纤维细胞凋亡及PCNA阳性细胞数与总细胞数之比作为凋亡指数和增殖指数,利用配对t检验进行统计学处理.结果 24例瘢痕疙瘩成纤维细胞和对照组平均增殖指数、平均凋亡指数、平均凋亡指数/平均增殖指数,经配对t检验具有高度显著性差别.结论瘢痕疙瘩成纤维细胞的过量增生和凋亡相对减少在瘢痕疙瘩的发生和发展中起着重要作用.     

几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用

目的:探讨几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用。方法:用组织块法进行瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的体外培养;MTT比色法和流式细胞仪检测法分别检测不同浓度几丁糖对不同来源成纤维细胞生长增殖和细胞周期的影响。结果:各组成纤维细胞增殖明显受抑制,几丁糖的浓度和细胞OD值改变之间存在剂量-效应关系,各组成纤维细胞G_0 G_1期的细胞百分比增多,S期G_2 M期的细胞百分比减少,减少率各组无显著差异(P>0.05),S期G_2 M期的细胞百分比减少率有显著差异(P<0.05)。结论:几丁糖对正常皮肤及增生性瘢痕和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞的生长增殖均有抑制作用,有望在瘢痕的防治中发挥重要作用。     

消瘢醑对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的探讨复方消瘢醑对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,为中药治疗瘢痕提供实验依据. 方法以氢化可的松为实验对照,在体外培养的6例瘢痕疙瘩和6例正常皮肤成纤维细胞培养液中加入不同剂量的消瘢醑,利用3H-TdR掺入法检测12 h,24 h,48 h瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)增殖活性.结果 10、100、1 000 μg/ml消瘢醑和1×10-7 mol/L氢化可的松在12、24、48 h均可抑制NFB和KFB的增殖,P＜0.05.氢化可的松对KFB的抑制作用与NFB相似.10 μg/ml和100 μg/ml消瘢醑对NFB和KFB增殖的抑制与氢化可的松相似. 结论消瘢醑能抑制成纤维细胞的增殖,可能起到治疗瘢痕过度增生的作用.     

自制中药提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨自制中药提取物对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）增殖的影响。方法：在体外培养的人KFB、正常皮肤成纤维细胞（NFB）培养液中加入不同浓度的自制中药水提物、醇提物,采用倒置显微镜、CCK-8试剂盒及生化分析仪对成纤维细胞的形态、增殖活性、生长状况及乳酸脱氢酶（LDH）活性进行观察与测定。结果：在一定浓度中药提取物的作用下,KFB形态发生改变,增殖活性降低,LDH活性增高;其中醇提物抑制KFB增殖较水提物更有效,KFB对中药的抑制反应比NFB更敏感。结论：自制中药可能通过抑制KFB增殖、细胞毒性作用等而发挥治疗瘢痕疙瘩的作用。     

羧甲基壳多糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 观察羧甲基壳多糖（carboxymethyl-chitosan，CM-CH）对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts，KFB）增殖和胶原合成的作用，探讨其治疗瘢痕疙瘩的机制。方法 采用四噻唑蓝（methylthiazoletrazolium，MTT）测定法和羟脯氨酸比色法（hydroxyproline，HP）测定不同浓度CM-CH作用KFB后对其增殖和上清液中胶原合成的影响。结果 CM-CH在10、50、100、200μg／ml作用KFB48、72h后，对KFB增殖有明显抑制作用（P〈0．05）。200μg／ml作用24、48、72h后，对KFB增殖抑制作用与曲安萘德组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CM-CH在10、50、100、200μg／ml对KFB作用48h后，能显著抑制该细胞胶原的合成（P〈0．01）。100、200μg／ml CM-CH抑制作用与曲安萘德组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 CM-CH对体外培养的KFB增殖和胶原合成有明显抑制作用，从而提示该物质治疗瘢痕疙瘩具有潜在前景。     

重组腺相关病毒介导的IL-32基因抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的机制研究

目的:探讨重组腺相关病毒介导的IL-32基因抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblasts,KFs)增殖的机制。方法:用重组腺相关病毒介导的IL-32(rAAV2IL-32)及腺相关病毒空载体感染人KFs,通过荧光显微镜观察rAAV2IL-32的感染效率,RT-PCR法检测IL-32的转录水平;用MTT法检测KFs增殖的情况;用蛋白质印迹方法检测Bcl-2、BAX、TGF-β1的表达。结果:rAAV2IL-32及腺相关病毒空载体感染KFs 48h后,RT-PCR检测显示rAAV2IL-32组出现高表达电泳条带,而腺相关病毒空载体组则未出现电泳条带;MTT法检测显示r AAV2I L-32组明显抑制了KFs的增殖;蛋白质印迹结果显示rAAV2IL-32组KFs中Bcl-2、TGF-β1表达降低,BAX表达增高。结论:rAAV2IL-32可能是通过减少KFs中Bcl-2和TGF-β1的表达以及增加BAX的表达来抑制瘢痕疙瘩的增殖。     

冬凌草甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨冬凌草甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其诱导凋亡的机制.方法 采用不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的成纤维细胞,在不同的时间用MTT法检测冬凌草甲素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖抑制作用,用Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化,用比色法检测Caspase-3活性变化.结果 浓度为20、40、80 μmol/L冬凌草甲素加入瘢痕疙瘩成纤维细胞中48 h,其抑制率[(20.47±2.29)%、(25.44 d-2.62)%、(44.37±0.59)%]和凋亡率[(10.23±1.83)%、(16.03±2.21)%、(30.83 4-3.43)%]呈明显的浓度依赖性,与空白对照组比较,其差异有统计学意义(P<0.01);而线粒体膜电位的荧光强度(564.43±27.17、421.54±18.94、288.43±15.29)呈明显下降趋势,与空白对照组(757.24±28.86)比较,其差异有统计学意义(P<0.01);Caspase-3活性(33.46±3.97、45.43±10.87、68.44±15.32)呈明显增强趋势,与空白对照组(19.76±2.43)比较,其差异有统计学意义(P<0.01).结论 冬凌草甲素可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并呈明显的时间和浓度依赖性.其机制与降低线粒体膜电位继而诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡有关.     

氧化苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究氧化苦参碱(OMT)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKFB)的影响及其机制.方法 将不同浓度的OMT作用于HKFB,分别培养24、48、72h后采用四唑盐比色法(MTT)检测HKFB增殖活性,末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 当氧OMT浓度大于1.0mg/ml时,体外培养HKFB增殖受到抑制、出现凋亡;当OMT浓度小于1.0mg/ml时,其对HKFB的增殖及凋亡无明显影响.结论 一定浓度的OMT可以抑制HKFB增殖并促进其凋亡,提示OMT具有潜在的治疗瘢痕疙瘩作用.     

水飞蓟宾对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的 研究水飞蓟宾(SB)对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 采用CCK-8法观察不同浓度的SB对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响;用免疫组化、RT-PCR和Western Blot检测SB 干预前后成纤维细胞中mTOR和HIF-1α的表达情况.结果 CCK-8检测体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的吸光度值,随着SB浓度的逐渐增大及干预时间的延长而减小,各组间差异有统计学意义(P<0.05);在浓度为200 μmoL/L的SB作用下,mTOR及HIF-1α基因和蛋白的表达在常氧和缺氧条件均降低,不同组之间比较,其差异有统计学意义(P<0.01).结论 SB通过抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中mTOR和HIF-1α的表达,来抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,从而抑制瘢痕疙瘩的发生.     

雷帕霉素对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的:雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用,深入探讨其作用机制。方法:用雷帕霉素的不同药物浓度干预体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,CCK-8方法检测对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响;免疫组化、RT-PCR和western blot检测干预前后瘢痕疙瘩成纤维细胞中磷酸化的P70s6k、4E-BP1表达情况。结果:CCK-8检测体外培养瘢痕疙瘩成纤维的吸光度,随浓度和时间的增大而减小,各组之间差别具有统计学意义(P0.05);免疫组化(药物浓度取10nmol/L),RT-PCR和western blot对不同药物浓度(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L)干预前后,基因表达和蛋白表达均下降,各组之间差别具有统计学意义(P0.05)。结论:雷帕霉素对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,也抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中磷酸化的P70s6k、4E-BP1表达。     

慢病毒介导的KLF5转染对RKO细胞增殖和侵袭的影响

目的 构建Kruppel-like factor 5(KLF5)慢病毒载体并转染人结肠癌RKO细胞中,观察KLF5对结肠癌细胞RKO生物学行为的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人小肠黏膜中扩增出KLF5基因编码区1374 bp的片段,随后将扩增KLF5片段插入慢病毒转移载体pCDH-CMV-KLF5 -Efl -copGFP,构建KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1-copGFP.在脂质体介导下将构建成功的重组慢病毒转染人胚肾细胞株(293T)包装生产慢病毒,测定病毒滴度,感染结肠癌RKO细胞.RT-PCR和Western blot法分别检测KLF5 mRNA和蛋白的表达.随后将实验分为空白对照组和实验转染组进行实验.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染前后RKO细胞增殖的变化以及Transwell实验检测转染前后细胞增殖和侵袭能力的变化.结果 成功合成KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1 -copGFP并转染入RKO细胞中.RT-PCR以及Western blot结果提示与对照组比较,KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1 -copGFP成功在RKO细胞中得到合成和表达.同时高表达的KLF5可以明显抑制RKO细胞的增殖(P＜0.05).另外KLF5可以明显抑制RKO细胞的迁移能力(50.26±2.17比25.12 ±2.27,t=17.66,P＜0.05)和侵袭能力(45.48±1.53比22.13 ±2.25,t=3.37,P＜0.05).结论 KLF5可以有效抑制结肠癌RKO细胞的增殖、迁移和侵袭.     

复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移侵袭和周期的影响

目的：探讨复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移侵袭和周期的影响。方法：对瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养,使用不同浓度的复方芪参提取物(10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L)处理瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h,将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为对照组与实验组,实验组分为：低浓度组,中浓度组及高浓度组,对照组不用复方芪参提取物处理。通过MTT检测复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响;Transwell检测复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移、侵袭的影响;流式细胞术检测复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期的影响;Western Blot检测复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞VEGF、MMP9、Cyclin D1、p53蛋白表达的影响。结果：复方芪参提取物处理瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h后,随着复方芪参提取物浓度的增加,低、中及高浓度组细胞的增殖抑制率逐渐升高,迁移数及侵袭数逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,低、中及高浓度组在G0/G1及G2/M期的阻滞率明显上升,S期的阻滞率明显下降;且低、中及高浓度组瘢痕疙瘩成纤维细胞VEGF、MMP9、Cyclin ...