放疗对卵巢癌顺铂耐药细胞的影响

目的 探究放疗对卵巢癌顺铂(cisplatin, CDDP)耐药细胞耐药性的影响,并探讨相关机制。方法 取对数期卵巢癌SKOV3细胞株、SKOV3/CDDP耐药细胞株,二甲基噻唑(dimethythiazole, MTT)法检测SKOV3、SKOV3/CDDP对CDDP敏感性,以及放疗对SKOV3/CDDP的杀伤作用;取对数期SKOV3/CDDP耐药细胞株,采用0.5 Gy×4次低剂量分割放疗干预,设为低剂量分割放疗组,取不处理SKOV3/CDDP耐药细胞株为空白组,平板克隆实验测定2组的克隆形成能力;流式细胞术测定凋亡率;碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色测定细胞周期;Western blot检测细胞周期蛋白-D1(cyclin-D1)、骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oucogene, c-myc)、β-链蛋白(β-catenin)、p-β-catenin蛋白表达。结果 CDDP对SKOV3、SKOV3/CDDP细胞的半数抑制剂量(half inhibitory concentration, IC_...     

DNA甲基转移酶3b对乳腺癌细胞微小RNA表达的影响

目的 通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与siRNA干扰改变乳腺癌细胞MCF-7中DNA甲基化水平,探讨DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)表达对乳腺癌细胞相关mRNA、微小RNA(miRNA)的影响.方法 通过5-Aza-CdR抑制乳腺癌细胞整体甲基化水平,免疫荧光染色检测其抑制...     

miR-130a在卵巢癌顺铂耐药细胞株中的表达及其意义

目的分析miR-130a在卵巢癌顺铂耐药细胞株中的表达,探讨miR-130a与卵巢癌对顺铂耐药的关系。方法以浓度梯度递增法构建卵巢癌耐顺铂细胞株,MTT法对耐药细胞株进行鉴定并测定耐药指数,应用荧光实时定量PCR检测并分析各细胞株中miR-130a的表达。结果成功构建卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/CIS1、A2780/CIS2和SKOV3/CIS(P<0.05),其耐药指数分别为30.2、5.3和24.5。荧光实时定量PCR结果显示miR-130a在卵巢癌耐药细胞株中存在稳定的异常高表达(P<0.05),A2780/CIS1、A2780/CIS2以及SKOV3/CIS中miR-130a表达分别较亲本细胞平均上调30.51倍、4.87倍和24.43倍。各耐药细胞中miR-130a表达上调倍数接近于各自的顺铂耐药指数。结论 miR-130a表达的上调可能与卵巢癌细胞株对顺铂的耐药性密切相关。推测抑制miR-130a的表达有助于逆转卵巢癌顺铂耐药性,miR-130a有望成为逆转卵巢癌顺铂耐药性的潜在基因治疗靶点。     

miR-181a在卵巢癌细胞中对顺铂的耐药作用

目的探讨miR-181a在卵巢癌化疗抵抗方面的影响及其机制。方法 qRT-PCR检测卵巢癌细胞A2780及A2780/DDP中miR-181a的表达;对A2780及A2780/DDP细胞分别进行miR-181a mimics和inhibitors的转染,并利用qRT-PCR技术验证;MTT法检测转染前后细胞对顺铂的敏感性,利用TargetScan、miRDB与miRwalk 3个MicroRNA靶基因数据库预测miR-181a下游靶点,并通过Western blot技术分析预测基因的表达。结果与A2780细胞相比,miR-181a在A2780/DDP细胞中的表达明显减弱(P <0.05)。干扰miR-181a表达后,A2780细胞对顺铂的抵抗作用减弱(P <0.05),而上调miR-181a表达,A2780/DDP细胞对顺铂的抵抗作用增强(P <0.05)。通过TargetScan、miRDB、miRwalk三个数据库预测到PRKCD可作为miR-181a下游靶基因,下调miR-181a表达可使PRKCD蛋白表达明显增强(P <0.05);反之,上调miR-18...     

miR-130a对卵巢癌A2780细胞顺铂耐药性的影响及其机制的研究

目的 探讨miR-130a表达的改变对卵巢癌A2780细胞（包括顺铂敏感细胞株A2780s和耐药株A2780/DDP）顺铂耐药性的影响及其机制。方法 将A2780s、A2780/DDP细胞各分为4组,分别予以单纯脂质体处理、转染阴性对照小RNA、miR-130a模拟物(可使miR-130a表达增加)、miR-130a抑制物(降低miR-130a表达)处理,MTS法检测各组细胞增殖情况和对顺铂的耐药性,RT-PCR、Western blot 法检测未处理和处理后细胞多耐药基因1（MDR1）、抑癌基因（PTEN） mRNA和蛋白的表达。结果 A2780/DDP细胞MDR1 mRNA和MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp）的表达高于A2780s细胞（PMDR1 mRNA和P-gp表达水平;下调miR-130a的表达,同样不影响细胞的增殖, 但增强其对顺铂的敏感性, 并可降低MDR1 mRNA和P-gp的表达,提高PTEN蛋白的表达。结论 miR-130a抑制物通过上调PTEN蛋白和下调P-gp的表达来逆转卵巢癌A2780细胞系对顺铂的耐药性。miR-130a有望成为耐药性卵巢癌基因治疗的新靶点。     

内质网应激反应与人卵巢癌细胞顺铂耐药性关系的实验研究

目的:探讨顺铂敏感的人卵巢癌SKOV3细胞与顺铂耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞之间内质网应激的差异及其与顺铂敏感性的关系。方法:采用人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞,给予顺铂进行体外实验。Hochest33342染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态。免疫荧光结合免疫印迹技术检测内质网应激标志蛋白Grp78和PDI的表达。用钙离子敏感的荧光探针Flour-4/AM和Rhod-2/AM分别检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞浆和线粒体钙离子含量变化。结果:MTT法检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞生存率,两种细胞对顺铂的敏感性存在明显差异,SKOV3细胞对顺铂敏感性显著高于SKOV3/DDP细胞;Hochest33342染色结果显示顺铂(6μg/ml)作用24h,可以引起SKOV3细胞发生明显的凋亡,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用SKOV3细胞,导致Grp78和PDI的表达明显增加,内质网应激介导的凋亡信号分子CHOP、Caspase-4表达增加,线粒体Cyt C的释放以及Caspase-3的活化增加,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用于SKOV3细胞,引起胞浆和线粒体钙离子含量的显著增加,而SKOV3/DDP细胞无显著变化。结论:顺铂敏感性不同的人卵巢癌细胞,其在顺铂作用下的内质网应激反应存在显著差异,顺铂敏感的细胞其内质网应激强度高,并且其在顺铂作用后的胞浆和线粒体钙离子明显升高,内质网应激途径和线粒体途径凋亡被激活,这些结果表明卵巢癌顺铂耐药可能与内质网应激耐受有关。     

miR-135a/b逆转肺癌A549/CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究

目的:研究miR-135a/b对肺癌耐顺铂细胞株A549/CDDP顺铂耐药的影响?方法:运用实时荧光定量PCR检测miR-135a/b在A549和A549/CDDP 细胞株中的差异表达;MTT法检测转染后A549及A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性;构建MCL1-3′-UTR荧光素酶报告质粒验证miR-135a/b的靶基因;Western blot检测转染前后细胞MCL1蛋白的表达差异;流式细胞术检测转染后耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响?结果:miR-135a/b在A549/CDDP细胞中表达量降低;在耐药株中上调miR-135a/b后显著增加细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶实验证实MCL1是miR-135a/b的靶基因;抗凋亡蛋白MCL1在A549/CDDP细胞中呈高表达,上调miR-135a/b明显抑制耐药细胞中MCL1蛋白的表达;miR-135a/b显著增加A549/CDDP细胞对顺铂诱导的凋亡?结论:miR-135a/b通过靶向调控MCL1蛋白表达增加NSCLC细胞对顺铂的敏感性和凋亡?     

顺铂耐药卵巢癌细胞化疗敏感性实验

【目的】研究顺铂（DDP）、洛铂（LBP）、紫杉醇（PTX）、吉西他滨（GEM）对卵巢癌SKOV3细胞及顺铂耐药SKOV3/DDP细胞增殖的影响。【方法】培养基中不含药物的处理组为对照组,加入不同浓度化疗药物的处理组为实验组。在相差显微镜下观察细胞形态变化;用MTT法测定单药应用、双药联合使用对两种细胞生长的影响;流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率的变化。【结果】SKOV3∕DDP细胞耐药指数为7.10&#177;2.19。紫杉醇、洛铂、吉西他滨对两种细胞的抑制率无明显差别。洛铂、紫杉醇、吉西他滨两药联合组与相应单一用药组相比,能显著抑制肿瘤细胞的生长,其中吉西他滨＋洛铂及紫杉醇＋洛铂组抑制率明显增高。相同浓度顺铂作用48h后,SKOV3/DDP细胞的凋亡率低于SKOV3细胞。洛铂、紫杉醇、吉西他滨作用两种细胞48h后,细胞凋亡率差异无统计学意义。顺铂、洛铂与紫杉醇、吉西他滨主要作用于不同的细胞周期。【结论】SKOV3/DDP细胞对紫杉醇、洛铂、吉西他滨无交叉耐药。联合用药有高效协同抑制细胞生长作用,临床治疗卵巢癌顺铂耐药患者可考虑选择吉西他滨＋洛铂、紫杉醇＋洛铂联合化疗。     

miR-106b对HeLa细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的:探讨miR-106b对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法:采用实时定量PCR检测转染miR-106b抑制剂和类似物后HeLa细胞中miR-106b的表达,MTT法及流式细胞仪检测转染后HeLa细胞对顺铂的敏感性和凋亡,Western blot检测细胞中Twist1、PTEN、p-AKT(Ser473)蛋白的表达。结果:miR-106b抑制剂可减少HeLa细胞中miR-106b的表达;而miR-106b类似物可增加HeLa细胞中miR-106b的表达。转染miR-106b抑制剂后,细胞对顺铂的敏感性增强、凋亡及PTEN蛋白表达增加,Twist1、p-AKT表达降低(P<0.05);转染miR-106b类似物后,细胞对顺铂的敏感性减弱,凋亡及PTEN蛋白表达降低,Twist1、p-AKT表达增加(P<0.05)。结论:miR-106b可能通过调节Twist1、PTEN和p-AKT的表达影响HeLa细胞对顺铂耐药。     

miR-181a/b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达对肺癌细胞顺铂耐药的影响

目的:研究miR-181a/b在肺癌细胞顺铂耐药形成中的作用?方法:运用miRNA实时定量PCR方法检测miR-181a/b在肺癌顺铂耐药细胞A549/CDDP与母代A549细胞中的表达差异,运用Western blot检测A549/CDDP细胞与母代细胞抗凋亡蛋白BCL2?MCL1和XIAP的表达差异,分别构建BCL2?MCL1和XIAP的3′UTR荧光素酶报告质粒验证miR-181a/b的靶基因,在耐药细胞中瞬时转染miR-181a/b模拟物以检测上调miR-181a/b对A549/CDDP细胞中BCL2?MCL1和XIAP蛋白表达及耐药性的影响,并运用流式细胞术检测转染后耐药细胞对CDDP(Cisplatin,顺铂)诱导凋亡的影响?结果:在A549/CDDP细胞中miR-181a/b均呈低表达,而抗凋亡蛋白BCL2?MCL1和XIAP则呈高表达,荧光素酶报告实验证实BCL2?MCL1和XIAP是直接受miR-181a/b调控的靶基因,在耐药细胞中上调miR-181a/b显著抑制BCL2?MCL1和XIAP蛋白表达水平,显著增加耐药细胞对顺铂的敏感性,并显著增加耐药细胞对顺铂诱导的凋亡?结论:miR-181a/b靶向抑制多种抗凋亡蛋白表达可显著增加A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性?     

miR-125b confers resistance of ovarian cancer cells to cisplatin by targeting pro-apoptotic Bcl-2 antagonist killer 1

Chemotherapy is the preferred therapeutic approach for advanced ovarian cancer,but a successful long-term treatment is prevented by the development of drug resistance.Recent works have underlined the involvement of non-coding RNAs,microRNAs(miRNAs) in cancer development,with several conjectures regarding their possible involvement in the evolution of drug resistance.This study is to investigate the promoting effects and mechanism of miR-125b involved in the development of chemoresistance in ovarian cancer.The different expression of miR-125b in cisplatin-sensitive ovarian cancer cell line(OV2008) and its resistant variant(C13*) was identified by real-time PCR.An in vitro cytotoxicity assay and apoptosis assay using CCK-8 assay and flow cytometry,were carried out to detect the effect of miR-125b and Bak1 on cisplatin resistance of cells.Real-time PCR,Western blotting and luciferase reporter assay were used to detect whether Bak1 is a target of miR-125b.As compared with OV2008 cells,the expression levels of miR-125b in C13* cells were increased.It was found that the up-regulation of microRNA-125b caused a marked inhibition of cisplatin-induced cytotoxicity and apoptosis and a subsequent increase in the resistance to cisplatin in OV2008 and C13* cells.Moreover,Bak1 was a direct target of miR-125b,and down-regulation of Bak1 suppressed cisplatin-induced apoptosis and led to an increased resistance to cisplatin.Our study indicates that miR-125b has a significantly promoting effect on chemoresistance of C13* cells and up-regulation of miR-125b expression contributes to cisplatin resistance through suppression of Bak1 expression.This finding has important implications in the development of targeted therapeutics for overcoming cisplatin resistance in ovarian cancer.     

MiR-200c和miR-141在膀胱移行细胞癌中的表达研究

目的:探讨microRNA 200c(miR-200c)和microRNA 141(miR-141)在膀胱移行细胞癌中的表达及意义?方法:MicroRNA芯片筛选膀胱癌和癌旁组织差异表达的microRNA,实时定量 RT-PCR法验证miR-200c和miR-141在膀胱癌组织和膀胱癌细胞系中的表达?结果:MiR-200c和miR-141的表达强度在膀胱肿瘤组织高于癌旁正常膀胱黏膜,在表浅性膀胱肿瘤高于肌层浸润性膀胱肿瘤,在高级别组膀胱肿瘤高于低级别组,在分化较好?恶性度较低的5637细胞系中表达较高,在分化较差?恶性度较高的T24?J82?EJ细胞系中表达均较低?结论:MiR-200c和miR-141可能参与膀胱癌的进展?     

miR-200c启动子区甲基化与肺癌细胞对EGFR-TKI耐药相关

目的:初步探讨miR-200c启动子区甲基化与非小细胞肺癌细胞株对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)敏感性变化的关系。方法:选用表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)19外显子区缺失突变(E746-A750)的细胞株(H1650、HCC827)及EGFR野生型细胞株(H358、H1299),应用MSP法检测各细胞株miR-200c启动子区的甲基化状态,CCK-8法检测各细胞株对EGFR-TKI吉非替尼的药物敏感性,荧光定量PCR法检测各细胞株miR-200c的相对表达量;去甲基化药物5-aza-CdR处理各细胞株后,观察其对吉非替尼敏感性及miR-200c表达量的变化。结果:吉非替尼敏感细胞株HCC827及H358高表达miR-200c,其启动子区为非甲基化状态;吉非替尼耐药细胞株H1650及H1299的miR-200c表达较低,其启动子区为甲基化状态;经5-aza-CdR处理后,吉非替尼耐药细胞株H1650及H1299的miR-200c及对吉非替尼的敏感性较前显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而吉非替尼敏感株HCC827及H358的miR-200c及对吉非替尼的敏感性未见有明显改变(P>0.05)。结论:miR-200c启动子区的甲基化抑制了miR-200c的表达,从而使H1650及H1299细胞对吉非替尼耐药。     

miR-200c inhibits metastasis of breast cancer cells by targeting HMGB1

miR-200c has been shown to regulate the epithelial-mesenchymal transition （EMT） by inhibiting ZEB1 and ZEB2 expression in breast cancer cells. This study further examined the role of miR-200c in the invasion and metastasis of breast cancer that goes beyond the regulation on ZEB1 and ZEB2 expression. In this study, the bioinformatics software （miRanda） was used to predict the target gene of miR-200c and Renilla luciferase assay to verify the result. The metastatic breast cancer cells MDA-MB-231 were cultured and transfected with the miR-200c mimic or inhibitor. The expressions of miR-200c and HMGB 1 were detected by RT-PCR and Western blotting, respectively. Transwell assay and wound healing assay were employed to examine the invasive and migrating ability of transfected cells. Target prediction and Renilla luciferase analysis revealed that HMGB1 was a putative target gene of＇miR-200c. After transfection of MDA-MB-231 cells with the miR-200c mimic or inhibitor, the expression of miR-200c was significantly increased or decreased when compared with cells transfected with the miR-200c mimic NC or inhibitor NC. Moreover, the expression of HMGB1 was reversely correlated with that of miR-200c in transfected cells. Tranwell assay showed that the number of invasive cells was significantly reduced in miR-200c mimic group when compared with miR-200c inhibitor group. It was also found that the migrating ability of cells transfected with miR-200c mimics was much lower than that of cells transfected with miR-200c inhibitors. It was suggested that miR-200c can suppress the invasion and migration of breast cancer cells by regulating the expression of HMGB1. miR-200c and HMGB1 may become useful biomarkers for progression of breast cancer and targets of gene therapy.     

腹腔热灌注化疗对卵巢癌患者血清miR-200a的影响

目的：探讨腹腔热灌注化疗对卵巢癌患者血清miR-200a的影响。方法：将82例手术治疗后的卵巢癌患者随机分为两组,观察组与对照组各41例。观察组采用全身静脉化疗联合腹腔热灌注化疗,对照组采用全身静脉化疗联合普通腹腔灌注化疗。治疗3个疗程后观察疗效,并且测定患者血清miR-200a。结果：观察组总有效率为87．8％,对照组总有效率为73．2％,两组差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗后两组患者血清miR-200a均有明显降低,观察组降低更加明显（P〈0．05）。结论：腹腔热灌注化疗对卵巢癌的效果更明显,可能与减少miR-200a的表达有关系。     

MicroRNA-218、microRNA-193b在宫颈癌组织中的表达及与化疗耐药性的关系

目的 探讨microRNA-218(miR-218)、microRNA-193b(miR-193b)在宫颈癌组织中的表达及其与化疗耐药性的关系。方法 选取2018年1月—2023年1月成都医学院第一附属医院收治的101例行手术治疗的宫颈癌患者。患者均行紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂药物敏感性试验,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-218、miR-193b表达情况。比较癌组织、癌旁组织中miR-218、miR-193b表达情况,统计化疗药物耐药情况,分析宫颈癌组织中miR-218、miR-193b的表达与化疗耐药性的关系。结果 癌组织中miR-218相对表达量低于癌旁组织（P <0.05）,miR-193b相对表达量高于癌旁组织（P <0.05）。宫颈癌患者行体外化疗药物紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂的耐药率分别为38.61%、46.53%、48.51%、26.73%和40.59%。宫颈鳞癌与宫颈腺癌患者对体外化疗药物紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂耐药率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。耐药患者癌组织中miR-218相对表达量...     

长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞的侵袭转移

目的 探讨长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞侵袭转移的作用及其机制.方法 qPCR检测不同乳腺癌细胞株中ATB和miR-200c的表达情况;双荧光素酶报告基因检测ATB与miR-200c的相互作用;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测沉抑制ATB后乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的变化;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制ATB后沉默miR-200c对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的逆转作用;Western blot检测抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白的表达.结果 与其他乳腺癌细胞相比,SKBr-3细胞株ATB表达水平最低,miR-200c的表达水平最高;ATB能与miR-200c的位点特异性结合,调控其表达活性;抑制ATB后可以增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,而沉默miR-200c后可以在一定程度上逆转ATB对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白表达水平得到一定的恢复.结论 ATB在乳腺癌发生、发展过程中起重要作用,ATB可以靶向调节miR-200c调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力.     

miR-200c对舌癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨 miR-200c 对人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法将 miR-200c 的模拟物通过脂质体转染到人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞内,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率、Western blot 检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和 Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组相比,miR-200c 模拟物20、40、80 nmol／L 组的 Tca8113细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义（P ＜0．05）,miR-200c 模拟物的浓度越大,作用时间越长,抑制效果越明显（P ＜0．05）;转染 miR-200c 模拟物48 h 后,Tca8113细胞停滞于 G0／G1期,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P ＜0．05）;Western blot 证明20、40、80 nmol／L 组 Bcl-2蛋白表达量明显低于对照组,而 Caspase-3蛋白表达量明显高于对照组（P ＜0．05）。结论miR-200c 过表达可抑制舌癌 Tca8113细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

抑制miR-23a表达增强卵巢癌顺铂敏感性的分子机制

目的分析抑制miR-23a表达后,耐药卵巢癌A2780细胞对化疗药物顺铂的敏感性变化及其分子机制。方法选择顺铂耐
药卵巢癌A2780细胞株为研究样本,并分为两组,其中对照组仅加入顺铂,实验组加入顺铂及antagomir-23a。应用MTT法检测
antagomir-23a抑制miR-23a并经顺铂处理后细胞增殖抑制率;应用流式细胞仪分析细胞周期分布情况;应用Hoechst33258染色
分析细胞凋亡形态学变化;应用Western blot法分析耐药糖蛋白P-gp的表达变化。结果抑制miR-23a并经顺铂处理后,细胞增
殖抑制率显著上升（P<0.01）,顺铂中效浓度（IC50）为17.89 μmol/L,比对照组IC50 110.18 μmol/L降低了83.76%（P<0.01）,细胞被
阻滞于G0/G1期且凋亡率增加（P<0.01）;Hoechst33258染色见细胞核浓缩、染色增强。Western blot检测提示细胞P-gp蛋白表
达随着顺铂浓度加大而逐渐减低（P<0.01）。结论抑制耐药卵巢癌A2780细胞内miR-23a表达后,细胞对顺铂的敏感性显著增
加,这可能miR-23a靶基因负性调控因素得以缓解,并由此引发P-gp蛋白表达受抑有关。