阻断OX40和CD40协同共刺激信号延长小鼠胰岛移植物存活时间

目的 研究阻断OX40/OX40L和CD40/CD154L协同共刺激通路对小鼠胰岛移植物存活的影响及其机制.方法 以DBA/2小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,制作胰岛移植模型.受鼠分为4组.(1)对照组,注射IgG; (2)抗OX40组,注射抗OX40L单克隆抗体;(3)抗CD154组,注射抗CD154单克隆抗体;(4)联合治疗组,注射抗OX40L单克隆抗体和抗CD1 54单克隆抗体.记录各组胰岛移植物平均存活时间(MST).将CD154敲除小鼠处死,取其脾脏T淋巴细胞,体外检测活化T淋巴细胞表面OX40的表达;在活化T淋巴细胞中加入不同浓度的抗OX40L单克隆抗体,体外检测T淋巴细胞增殖情况.结果 对照组胰岛移植物MST为19 d,抗CD154组胰岛移植物MST为48 d(P＜0.05);抗OX40组胰岛移植物MST为22 d,与前两组相比较,差异无统计学意义(P＞0.05);联合治疗组胰岛移植物MST＞ 150 d,高于另外3组(P＜0.05).66％的胞表达OX40,较初始T淋巴细胞的表达率高(2％,P＜0.05);加入抗OX40L单克隆抗体后,T淋巴细胞增殖受抑制且呈剂量依赖性.结论 阻断OX40/OX40L和CD40/CD154L双通路可诱导小鼠胰岛移植物长期存活, 其发挥作用的关键机制是抑制了T淋巴细胞的增殖.     

供者骨髓细胞骨髓腔内输注联合低剂量照射延长大鼠复合组织移植物存活时间

目的探讨供者骨髓细胞骨髓腔内输注联合低剂量照射对大鼠复合组织移植物的影响。方法以SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,实验分4组进行:A组仅进行肢体移植;B组在肢体移植前1d,受者接受亚致死量60Co照射(4.5Gy/次,共2次,间隔4h),同时腹腔内注射氟达拉滨(50mg/kg);C组于肢体移植当天受者骨髓腔内输注供者骨髓细胞;D组在B组的基础上,受者于肢体移植当天骨髓腔内输注供者的骨髓细胞。所有受者术后均不用免疫抑制剂。术后观察移植物的存活情况及排斥反应征象,对D组存活超过120d的受鼠进行单向混合淋巴细胞反应以及SD大鼠、DA大鼠皮肤移植,同时通过组织学检查,了解受鼠的移植物抗宿主病(GVHD)情况。结果与其它实验组相比,D组移植物的存活时间显著延长(P<0.01),达(284.2±11.8)d,未见排斥反应征象,也未观察到GVHD,其它组均于术后近期发生排斥反应(<20d);D组大鼠对供者的淋巴细胞呈现低反应性,移植的供者同系大鼠的皮肤得以长期存活,而对第三方DA大鼠的淋巴细胞和皮肤呈现强烈的免疫反应。结论供者骨髓细胞骨髓腔内输注联合低剂量照射和短期氟达拉滨应用,在不用免疫抑制剂的情况下,能显著延长移植复合组织的存活时间。     

骨髓输注联合免疫抑制剂诱导移植物长期存活

排斥反应至今仍是困扰器官移植的难题。近年来，骨髓联合输注成为移植免疫耐受研究的新方向，其疗效已得到了初步肯定；骨髓输注与免疫抑制剂联合应用，有可能会成功诱导移植物免疫耐受。     

环孢素A联合供者骨髓细胞输注延长大鼠移植心脏存活时间

目的：探讨环孢素A（CsA）联合供者骨髓细胞（DBMC）输注对同种大鼠移植心脏存活时间的影响。方法：制作Lewis大鼠到BN大鼠的异位（腹部）心脏移植模型，并按对受者处理的不同分为四组，对照组不进行特别处理，CsA组术后连续7d给予CsA5mg·kg^-1·d^-1，联合处理组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC，术后连续7d给予CsA5nag·kg^-1·d^-1，DBMC组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC；另设BN大鼠间的心脏移植作为对照（BN对照组）。观察移植心脏的存活时间，观测术后第6天血清白细胞介素2（IL-2）、移植心脏组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）mRNA表达以及组织学改变，流式细胞仪检测术后第6、12、18天时受者外周血有核细胞中的供者来源细胞、CD3^＋ CD25^＋细胞、CD4^＋ CD25^＋细胞的百分比以及共刺激分子CD86表达、CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-等。结果：联合处理组移植心脏存活时间为（21．6±3．2）d，明显长于对照组和DBMC组（P〈0．05），其血清IL广2为（313±95）pg／ml，心肌组织中TNF-α mRNA的表达量为0．12±0．10，均明显低于对照组和DBMC组（P〈0．05），排斥反应程度轻于其它3个移植组。联合处理组大鼠外周血有核细胞上CD86表达受到明显抑制；术后6、12d，联合处理组的CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-比值低于对照组和DBMC组，CD3^＋ CD25^＋细胞百分比也低于对照组和DBMC组；接受DBMC输注者外周血中供者来源的有核细胞明显多于未接受DBMC者。结论：短疗程CsA联合DBMC输注能减轻大鼠心脏移植急性排斥反应程度，延长移植心脏存活时间。     

小鼠自体肝脏星状细胞联合同种异体胰岛细胞移植延长移植物存活时间的研究

目的 研究小鼠自体肝脏星状细胞联合同种异体胰岛细胞移植的新方法对胰岛移植物存活时间的作用.方法 选择雄性BALB/c小鼠为胰岛移植模型的供者,雄性C57BL/6糖尿病小鼠为受者.随机将受者分为A、B两组.A组:仅采用供者的胰岛细胞移植;B组:采用受者的肝脏星状细胞(HSCs)与供者胰岛细胞混合后共同移植.术后定期测定受者尾静脉血的血糖含量.结果 B组受者胰岛移植物的存活时间明显延长,血糖含量维持正常的中位时间为66 d(30～180 d),而A组血糖含量维持正常的中位时间为11 d(9～15 d),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 受者肝脏星状细胞能延长共同移植的同种异体胰岛移植物存活时间.     

体内注射白细胞介素10和转化生长因子质粒延长小鼠移植皮肤存活时间

目的 探讨体内注射白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)质粒对小鼠移植皮肤存活时间的影响.方法 构建含IL-10和TGF-β1基因的质粒,以Balb/c小鼠为受者、Balb/c小鼠与C57BL/6小鼠杂交的F1代小鼠为供者,行皮片移植.移植当天,经尾静脉分别给受者快速注射不含基因的空白质粒(空白组)、含IL-10基因质粒(IL-10组)、含TGF-β1基因质粒(TGF-β1组)以及含IL-10和TGF-β1双基因的质粒(联合组),以后每2天注射1次,20 μg/次,共注射6次,观察移植皮肤存活时间.另取Balb/c小鼠,在输注C57BL/6小鼠脾细胞后,按前述分组及方法接受质粒快速注射,注射5次后,分离其脾细胞,以流式细胞仪检测脾细胞中CD4+ CD25+ T淋巴细胞含量.结果 移植皮片存活时间,空白组为(13.50±1.04)d,IL-10组为(13.83±1.16)d,TGF-β1组为(15.33±1.50)d,联合组为(21.33±3.20)d,联合组移植皮片存活时间明显长于其他3组(P<0.01).脾细胞中CD4+ CD25+ T淋巴细胞的含量,空白组为(6.58±1.86)%,IL-10组为(10.52±1.13)%,TGF-β1组为(14.44±0.42)%,联合组为(14.25±1.24)%,TGF-β1组和联合组的CD4+ CD25+ T淋巴细胞含量明显高于空白组和IL-10组(P<0.01).结论 体内注射IL-10和TGF-β1质粒可延长小鼠移植皮肤存活时间,并能提高CD4+ CD25+ T淋巴细胞含量.     

供体特异性T细胞疫苗延长协调性异种移植物存活时间的作用探讨

目的探讨T细胞疫苗(TCV)延长异种移植胎肠存活时间的作用及其机制.方法将大鼠→小鼠游离胎肠移植模型分为供体特异性TCV(WTCV)免疫组、无关异种抗原TCV(LTCV)免疫组和单纯移植组.观察移植物各时相点的存活率,并用原位杂交法检测移植物内细胞因子mRNA表达,及用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定单向混合淋巴细胞反应.结果WTCV和LTCV免疫组移植物各时相点的存活率均显著高于单纯移植组,WTCV免疫组又高于LTCV免疫组(P<0.01).WTCV组对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制率高于LTCV组(P<0.01).WTCV免疫后,异种移植物内各细胞因子mRNA的表达均显著下调,其中以白介素-4(IL-4)mRNA表达下降最为显著(P<0.01).结论(1)供体特异性TCV能延长异种移植物存活时间,其作用具有抗原特异和非特异的双重性;(2)WTCV延长异种移植物存活时间的作用可能与诱导移植物免疫耐受以及移植物内Th2细胞功能下调有关.     

烙铁头血小板活化素延长豚鼠到大鼠的异种移植心脏存活时间

目的 研究烙铁头血小板活化素（TMVA）对大鼠血小板聚集的抑制作用以及对豚鼠到大鼠的异种移植心存活时间的影响。方法 （1）TMVA对血小板聚集率的影响：将Wistar大鼠随机分为3组，每组5只，各组经阴茎背静脉注射不同剂量（20、50或100μg／kg）的TMVA，于注射前以及注射后0．5h和24h时抽血，测定血小板聚集率。（2）TMVA对豚鼠到大鼠的异种移植心存活时间的影响：以豚鼠为供者，Wistar大鼠为受者，制作颈部异位心脏移植模型，实验组于移植心恢复血液循环前0．5h经静脉给予TMVA50μg／kg，另设不使用TMVA的对照组。观察移植心的存活时间，停跳后的移植心组织行病理学检查，并用放射免疫法检测心肌组织内6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）及血栓素B2（TXB2）的含量。结果（1）静脉给予50或100μg／kg的TMVA后0．5h即能完全抑制血小板聚集。（2）实验组移植心的存活时间为10～135min，中位数为42min；对照组为4～16min，中位数为5min，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。两组移植心心肌组织均有明显的间质水肿、出血等超急性排斥反应的表现，但实验组心肌组织中未见血小板微血栓，而对照组可见血小板微血栓。两个组6-keto-PGF1α。与TXB2的差异无统计学意义，但实验组6-keto-PGF1α。与TXB2的比值明显高于对照组（P〈0．05）。结论 TMVA在体内能抑制血小板聚集及异种移植物排斥过程中血小板微血栓形成，能显著延缓豚鼠到大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的发生。     

CTLA4Ig和西罗莫司短期联合使用延长异种胰岛移植物的存活

目的 观察细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig)与西罗莫司(SRL)联用阻断共刺激通路对异种胰岛移植物存活的影响.方法 取C57BL/6小鼠,腹腔注射链佐星,制成糖尿病模型.采用随机单位组设计分组法将糖尿病小鼠分为7组,各组均于小鼠左肾包膜下移植SD大鼠胰岛300胰岛当量.CTLA4Ig组分别于移植当天及移植后第2、4、6天腹腔注射CTLA4Ig 0.5 mg/d;SRL组分别于移植当天及移植后第1、2天给予SRL灌胃,0.2 mg·kg-1·d-1,其后隔天用药1次,共用2周;MRI组分别于移植当天及移植后第2、4天腹腔注射仓鼠抗小鼠CD154单克隆抗体(MR1)0.5 mg/d;CTLA4Ig和SRL联用组(SRL联用组)、CTLA4Ig和MRl联用组(MR1联用组)以及CTLA4Ig、MR1和SRL联用组(三药联用组)各药物的剂量与用法同上述各组;对照组仅行胰岛移植,不予以药物.观察至移植后200 d,通过监测受者血糖水平来判断排斥反应的发生情况.记录各组移植物的存活(即无排斥反应)时间.发生排斥反应者,或未发生排斥反应、移植物存活时间＞200 d者,取移植胰岛,行HE染色及免疫荧光染色,进行组织学观察.结果 对照组移植物存活时间中位数为17 d,该组最终均发生排斥反应.SRL组、MRl组和CTLA4Ig组移植物存活时间中位数分别为34 d、98 d和77 d.均明显长于对照组(P＜0.05),三组中分别有90%(9/10)、62.5%(5/8)和83.3%(5/6)的小鼠发生排斥反应.SRL联用组移植物存活时间中位数为130 d,明显长于上述4组(P＜0.01),有50%(3/6)的小鼠发生排斥反应.MR1联用组以及三药联用组移植物存活时间中位数均＞200 d,分别有42.9%(3/7)和25%(2/8)的小鼠发生排斥反应.组织学检查结果显示,对照组发生排斥反应时,其移植胰岛破坏严重,可见大量CD4+和CD8+淋巴细胞及巨噬细胞浸润,并可见IgG、IgM和补体C3沉积.其它组发生排斥反应者的组织学改变与对照组相似.SRL联用组存活200 d的小鼠,其移植胰岛组织中未见或仅有少量炎症细胞浸润,胰岛素和胰高血糖素染色阳性,未见IgG、IgM和补体C3沉积.结论 短期联合使用CTLA4Ig和SRL能显著延长小鼠体内大鼠来源的胰岛的存活时间.     

供者特异性抗原静脉输注联合抗γ链单克隆抗体诱导小鼠皮肤移植物免疫耐受

目的　探讨静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体(IL 2R)γ链单克隆抗体诱导移植免疫耐受的可行性。方法　在C57BL/6小鼠建立H Y皮肤移植模型,术前7 d给予5×106个供者脾细胞静脉输注,并分别于术前6 d和4 d给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体(4G3、3E12及TUGm2各0.5 mg)和抗IL 2Rβ单克隆抗体(TM β1,0.5 mg)混合液2.0 mg腹腔注射,以单纯行H Y皮肤移植模型和静脉输注供者特异性抗原的H Y皮肤移植模型为对照,观察皮肤移植物的存活时间。结果　联合给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体和供者特异性抗原输注组的皮肤移植物存活时间均超过100 d,显著长于单纯H Y皮肤移植组的33.42 d(P<0.01)及仅输注供者特异性抗原H Y皮肤移植组的14.71 d(P<0.01)。结论　在H Y皮肤移植模型中,静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体可以成功地诱导受者对皮肤移植物的免疫耐受。     

Primed allospecific T cells prevent the effects of costimulatory blockade on prolonged cardiac allograft survival in mice.

Costimulatory blockade can induce long‐term allograft survival in naïve animals, but may not be as effective in animals with previously primed immune repertoires. We attempted to induce long‐term graft survival in B10.D2 recipients of B10.A cardiac allografts using donor‐specific transfusion (DST) plus anti‐CD40 ligand antibody (αCD40L). Recipients were either naïve mice, or mice previously primed to B10.A or third party alloantigens through engraftment and rejection of skin transplants. Untreated naïve mice rejected cardiac transplants by day 15 and contained a high frequency of primed, donor‐reactive T cells. Donor‐specific transfusion/αCD40L treatment of naïve animals induced long‐term graft survival associated with low frequencies of donor‐reactive T cells. Previous priming of donor‐specific T cells through rejection of B10.A, but not third party, skin grafts prevented the effects of DST/αCD40L on prolonging survival of B10.A hearts. Moreover, adoptive transfer of CD3+, CD4+ or CD8+ T cells from B10.A skin‐graft‐primed animals prevented the effects of DST/αCD40L. The data demonstrate that animals with immune repertoires containing previously primed, donor‐reactive T cells are resistant to the effects of costimulatory blockade. The findings have important implications for ongoing, costimulatory blockade‐based trials in humans, whose T‐cell repertoires are known to contain memory alloreactive T cells.     

ICOS-ICOSL和CD28-B7共刺激信号对大鼠角膜移植排斥反应调控效应的比较

目的 观察阻断可诱导性共刺激分子及其配体(ICOS-ICOSL)或CD28-B7共刺激信号对大鼠角膜移植排斥反应的影响,并比较其差异.方法 制备腺病毒载体介导的诱导性共刺激分子融合蛋白(AdICOSIg)和腺病毒介导的细胞毒T淋巴细胞抗原4融合蛋白(AdCTLA4Ig).以DA大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,进行角膜移植:受者分别接受经Adβ-Gal、AdICOSIg和AdCTLA4Ig转染的角膜移植,分别为局部Adβ-Gal组、局部AdICOSIg组和局部AdCTLA4Ig组;受者分别接受未经处理的角膜移植,并于移植前24 h腹腔注射Adβ-Gal、移植后48 h腹腔注射AdICOSIg或移植前24 h腹腔注射AdCTLA4Ig,分别为全身Adβ-Gal组、全身AdICOSIg组和全身AdCTLA4Ig组;以接受未经处理的角膜移植者为空白对照.术后每日于手术显微镜下观察移植角膜的透明度,以判断排斥反应的发生情况.基因转染后7 d,检测受者血清ICOSIg和CTLA4Ig的浓度以及抗腺病毒抗体水平.结果 空白对照组移植角膜存活时间为(13.1±0.3)d,局部AdICOSIg组、局部AdCTLA4Ig组和全身AdCTLA4Ig组移植角膜的存活时间长于空白对照组,分别为(14.2±0.8)d(P<0.05)、(15.8±0.6)d(P<0.01)和(22.7±4.3)d(P<0.01),局部AdCTLA4Ig组和全身AdCTLA4Ig组各有1例未发生排斥反应.全身AdCTLA4Ig组受者的血清CTLA4Ig浓度较高,其抗腺病毒载体抗体水平则较低.结论 CD28-B7与ICOS-ICOSL共刺激信号在免疫调节效应上存在差异,阻断CD28-B7信号所获得的延长移植角膜存活时间的效果优于阻断ICOS-ICOSL者.     

注射供者的肝匀浆提取液延长大鼠异位心脏移植存活时间

目的探讨注射供者的肝匀浆提取液对大鼠淋巴细胞功能及大鼠异位移植心的影响。方法以Wistar大鼠为供者,SD大鼠为受者。制作Wistar大鼠的肝匀浆提取液；建立大鼠同种异体异位心脏移植模型。(1)经受者阴茎静脉注射肝匀浆提取液0．3 ml,14d后取供、受者的血液,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别测定受者对同一供者和无关供者的单向混合淋巴细胞反应(MLR)。(2)心脏移植术前2h经受者阴茎静脉注射肝匀浆提取液0．3 ml。心脏移植术后分别观察受者注射同一供者和无关供者的肝匀浆提取液后移植心脏的存活时间；心脏停跳后取移植心做病理检查及免疫组织化学检测。结果受者对同一供者和无关供者的单向MLR比较,前者明显减轻,吸光度A值分别为：0．434±0．034和0．522±0．015,两组比较,差异有统计学意义(P＜0．01)。心脏移植术前,受者接受同一供者和无关供者的肝匀浆提取液后,前者移植心脏存活时间延长,分别为(38．05±17．07)d和(9．86±2．67)d,两组比较,差异有统计学意义(P＜0．01)；且前者心肌出血、坏死程度更轻,心肌组织内IgM和IgG沉积更少。结论注射同一供者的肝匀浆提取液能特异性抑制相应个体抗原引起的淋巴细胞增殖反应,减轻大鼠移植心脏的排斥反应,明显延长其存活时间。     

骨髓间充质干细胞输注治疗大鼠小体积肝移植术后肝衰竭

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞输注治疗大鼠小体积肝移植术后肝衰竭的可行性.方法 体外分离、培养、鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,采用细胞膜染料PKH26对骨髓间充质干细胞进行标记.将雄性SD大鼠随机分为对照组和治疗组.对照组于小体积(30 %)肝移植术中,在移植肝血供恢复时自尾静脉注入磷酸盐缓冲液(PBS) 0.5 ml,治...     

Oral delivery of xeno-antigen combined with non-depleting anti-CD4 monoclonal antibody induces significantly prolonged survival of concordant skin xenograft

Abstract: Oral administration can induce unresponsiveness to protein antigens. Therefore, we examined whether oral administration of xeno-antigen could induce the prolonged survival of xenogeneic skin grafts. CBA mice were given 1 × 10⁷ SD rat splenocytes orally, 7 days before transplantation of a SD rat skin in the presence or absence of a non-depleting anti-CD4 monoclonal antibody (mAb) (YTS177, 200 µg/dose, −8 and −7 days relative to transplantation). All skin grafts survived with a median survival time (MST) of 62 days when xeno-antigens were administered orally in combination with anti-CD4 mAb. Mice treated with anti-CD4 mAb alone or oral administration of xeno-antigen alone induced modest prolonged survival of rat skin grafts (MST = 18 and 19 days, respectively) while naive mice rejected rat skin acutely (MST = 12 days). Oral administration alone or combined with anti-CD4 mAb reduced the level of xeno-antibody production compared with that in untreated mice after transplantation. Xenogeneic mixed leukocyte response was reduced when splenocytes from mice pre-treated with oral administration of xenogeneic cells were used as the responder compared with that in untreated mice. Oral delivery of xeno-antigen plus non-depleting anti-CD4 mAb can induce prolongation of concordant xenogeneic skin grafts.     

Effects of chimerism on the mice heart transplanted survival with the bone marrow infusion

Aims

To evaluate the effects of chimerism on the mice heart transplanted survival with the bone marrow infusion.

Methods

Bone marrow cells (BMCs) were obtained from BALB/c mice. These BMCs were injected into the irradiated (2Gy-Co60) C57BL/6 mice through femoral vein. Then Group A mice were treated with Cyclosporine (1 mg/kg) for 21 days and Group B were not treated with Cyclosporine. Group C were treated as the control group without BMCs infusion. Group D were treated with Cyclosporine (1 mg/kg) for 21 days pre-hearttransplantation without BMCs infusion. After 21 days, the C57BL/6 mice received heart allografts from BALB/c. To determine the degree of chimerism in BMCs infusion recipients, peripheral blood were isolated on day 7, 14, 21. Allografts were harvested 10 days after heart transplantation for the histological analysis.

Results

(1) Chimerism detected in the peripheral blood of Group A mice on day 7 after BMCs infusion was 6.1 ± 2.5%, on day 14 was 15.4 ± 2.9% and on day 21 was 10.7 ± 2.6%. For the Group B mice on day 7 after BMCs infusion, the chimerism was 2.8 ± 1.1%, on day 14 was 11.2 ± 4.8% and on day 21 was 7.4 ± 3.7%. For the Groups C and D mice, no chimerism was observed. Group A mice had the tendency toward improved level of chimerism than Group B mice. (2) The survival time of Group A (n = 6) was 13.0 ± 1.4 days which was significantly longer than Group B (n = 6) with the survival time was 8.5 ± 1.3 days (p < 0.001), also longer than the mice in Groups C and D, the survival time of which were 10.0 ± 1.3 days (p = 0.008) and 9.4 ± 1.1 days (p = 0.004). There is no significant difference among Groups B, C, and D. (3) The HE staining showed the much more seriously heart rejection in Groups B, C and D than Group A.

Conclusions

The chimerism was found in the BMCs infusion groups. Without the CsA treatment combined with chimerism could not protect the transplanted heart. There was no obvious evidence showed that the chimerism alone could improve the survival time of cardiac allografts in mice.