基底刚度对人宫颈癌HeLa细胞生长影响的体外研究

目的 探讨基底刚度变化对宫颈癌HeLa细胞生长的影响.方法 将人宫颈癌HeLa细胞株培养于基底刚度为0.5、5.0、25.0 kPa水凝胶培养皿和基底刚度约为1.0×106kPa的普通塑料/玻璃培养皿中.采用倒置显微镜和环境扫描电子显微镜观察细胞的形态、结构,采用单光子激光共聚焦显微镜观察细胞骨架,采用CCK-8法检测细胞增殖活性并绘制生存曲线.结果 随着基底刚度的增加,细胞铺展面积增加,细胞贴壁愈加牢固,细胞形态呈多边形或梭形;不同基底刚度组的最长直径/最短直径、铺展面积比较,差异均有统计学意义(F=15.54、77.21,P﹤0.01);随着基底刚度的增加,细胞伪足逐渐丰富且纤长,细胞骨架应力纤维表达增多;以48 h培养为基础计算细胞倍增时间后显示,0.5、5.0、25.0、1.0×106kPa基底刚度上培养的HeLa细胞的倍增时间分别为60.40、39.43、27.79、26.34 h,细胞倍增时间随着基底刚度的增加而缩短,细胞增殖加快.结论 较大的基底刚度更利于人宫颈癌HeLa细胞铺展、细胞骨架分布和细胞增殖.     

紫杉醇对宫颈癌HeLa细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用

目的研究紫杉醇对人宫颈癌HeLa细胞增殖和对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察紫杉醇对HeLa细胞增殖的抑制作用;并在裸小鼠人宫颈癌模型上观察紫杉醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果紫杉醇对HeLa细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系;荷瘤裸小鼠动物实验表明,紫杉醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,治疗组Ⅰ和治疗组Ⅱ的抑瘤率为分别26.38%和39.04%。结论紫杉醇对HeLa细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。     

华蟾素对宫颈癌细胞增殖的影响

目的:明确华蟾素对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法:用不同浓度(1、10、100、1000μg/ml)华蟾素作用于人宫颈癌HeLa细胞24、48、72h,然后用MTT法检测不同浓度华蟾素对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。用流式细胞术（FCM）检测华蟾素对HeLa细胞周期的影响。划痕实验观察华蟾素对HeLa细胞迁移能力的影响。结果:MTT法结果示华蟾素可显著抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,其抑制率呈时间、浓度依赖性;FCM结果示华蟾素可使宫颈癌HeLa细胞的G0/G1期延长,S期缩短。细胞划痕实验结果示华蟾素可降低宫颈癌HeLa细胞的迁移能力。结论:华蟾素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、阻滞细胞周期、降低迁移能力。     

消癌平联合榄香烯抑制HeLa细胞增殖和对Bcl-2表达的影响

目的:探讨中药消癌平和榄香烯注射液抑制宫颈癌细胞HeLa增殖作用及其作用机制.方法:取对数生长期的HeLa细胞接种于96孔培养板(细胞数为3×104/孔,100μl/孔),加入不同浓度的消癌平、榄香烯注射液及其混合液,收集不同处理组作用72h的HeLa细胞,通过细胞增殖抑制试验测定吸收度A值.结果:消癌平和榄香烯25～400μg/ml作用72h对HeLa细胞体外增殖有显著的抑制作用,呈剂量依赖性.消癌平及榄香烯各100μg/ml联合作用72h对HeLa细胞体外增殖有显著的抑制作用,呈剂量依赖性,且明显高于榄香烯或消癌平单药作用.消癌平和榄香烯在抑制肿瘤细胞增殖时均伴随有Bel-2蛋白水平表达的下调.结论:中药消癌平和榄香烯注射液联合应用抑制HeLa增殖作用优于单药,其机理可能与Bel-2基因下调有关.     

槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的实验研究

目的:探讨中草药槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖作用。方法:运用MTT法检测槲皮素对HeLa细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析槲皮素对HeLa细胞增殖周期的影响。结果:10～160μmol/L浓度槲皮素均能抑制HeLa细胞的生长,且呈明显的时间、剂量依赖性关系。细胞周期分析显示槲皮素组G₁期细胞比例明显增多,呈量效关系。结论:槲皮素抑制HeLa细胞增殖,可能通过使HeLa细胞停滞在G₁期而诱导其调亡。     

土贝母皂苷诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞和细胞凋亡

背景和目的：土贝母皂苷是由传统中药土贝母块茎中分离得到的,由土贝母苷甲（79%）和土贝母苷乙（21%）组成。本研究旨在探讨土贝母皂苷抗肿瘤作用的机制。方法：MTT法检测土贝母皂苷对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA电泳图谱的变化。结果：土贝母皂苷对人宫颈癌HeLa细胞的生长具有强制作用,且这种作用呈时间剂量依赖关系,处理24、48和72h的IC50值分别为20.0、18.8和8.8μmol/L.流式细胞术分析显示,15、30、35μmol/L土贝母皂苷处理5h,HeLa细胞G2/M期细胞数从9.80%分别增加到21.90%、25.92%和27.00%;处理12h,G2/M期细胞数增加更显著,从8.20%分别增加到21.40%、31.15%和34.55%。40μmol/L土贝母皂苷处理一定时间,形态学检查发现细胞核明显皱缩、核染色质凝集边聚等特征,流式细胞术检测发现凋亡峰,DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯形条带。结论：土贝母皂苷使细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡可能在其抗肿瘤作用中具有重要意义。     

Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:分析Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学染色法检测Cav3.1在68例宫颈癌组织和40例非癌宫颈组织中的表达;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、Western blot检测宫颈癌HeLa细胞中Cav3.1的表达;采用siRNA瞬时转染技术靶向下调Cav3.1表达,CCK-8检测下调Cav3.1表达后宫颈癌HeLa细胞增殖情况,流式细胞仪检测下调Cav3.1表达后宫颈癌HeLa细胞凋亡情况;Western blot检测宫颈癌HeLa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3的表达。结果:Cav3.1在宫颈癌组织中的表达显著高于对照组（P＜0.01）。宫颈癌HeLa细胞中Cav3.1的表达水平显著高于HcerEpic 细胞（P＜0.01）。与对照组相比,siRNA-Cav3.1组的Cav3.1相对表达水平显著下降（P＜0.01）。与空白对照组、mock组相比,siRNA-Cav3.1组HeLa细胞的增殖能力减弱,凋亡能力增强,差异有统计学意义（P＜0.01）。Western blot显示siRNA-Cav3.1组Bax、Cleaved-Caspase3的相对表达量比对照组升高,而Bcl-2降低(P＜0.01)。结论:Cav3.1在宫颈癌组织和细胞中高表达。靶向下调Cav3.1可以抑制HeLa细胞的增殖、促进其凋亡。Cav3.1在宫颈癌的生物学行为中可能起着关键的作用,有望成为一种新的有效的宫颈癌治疗靶点及肿瘤检测的分子生物学标志物。     

藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米球的制备及其对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制

目的：制备新型负载藻蓝蛋白（C-phycocyanin,C-PC）的羧甲基壳聚糖（carboxymethyl chitosan,CMC）纳米微球（nanoparticle,NP）,探讨藻蓝蛋白羧甲基壳聚糖纳米微球（C-PC/CMCNP）对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响及其分子机制。 方法： 采用正交分析方法,以CMC和C-PC的质量比、CMC浓度、CaCl2浓度为考察因素,通过检测C-PC/CMCNP的粒径和CMC的包封率,优选制备C-PC/CMCNP的最佳条件,并制备C-PC/CMCNP。CCK-8法检测C-PC、CMC和C-PC/CMCNP对HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测HeLa细胞凋亡情况,Westren blotting检测HeLa细胞中caspase-3蛋白的表达。 结果： CMC与C-PC的质量比为1 ∶2、CMC质量浓度为1 mg/ml,CaCl2质量浓度为1 mg/ml为最佳制备条件,最终制备的C-PC/CMCNP的平均粒径为（118.4±2.07）nm,并具有较高的包封率（63.2%）,其缓释12 h 的累积缓释率超过60%。C-PC、CMC和C-PC/CMCNP均能抑制HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并促进caspase-3蛋白的表达,但C-PC/CMCNP的作用效果最为显著。 结论： 优化制备条件得到具有高效缓释性能的C-PC/CMCNP,其对HeLa细胞显著的抑制作用可能是通过促进caspase-3蛋白的表达进而诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。     

雷帕霉素对人宫颈癌HeLa细胞增殖和HIF-1α及VEGF表达的影响

目的 探讨不同浓度雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用及对HIF-1α、VEGF表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测分别以不同浓度雷帕霉素处理的体外培养人宫颈癌HeLa细胞的抑制率,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测各组细胞HIF-1 α、VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 不同浓度雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性;随雷帕霉素浓度增加细胞内HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表达均呈下调趋势.结论 雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞的生长有抑制作用并呈剂量依赖性,雷帕霉素具有明显下调HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达的作用.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA与紫杉醇联用诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验

目的 探讨组蛋白乙酰化抑制剂SAHA联合紫杉醇体外对宫颈癌HeLa细胞增殖抑制效果及其机制。方法 分别设置空白对照组SAHA（10 μmol/L）组、紫杉醇（10 nmol/L）组、SAHA（10 μmol/L）+紫杉醇（10 nmol/L）联合组,采用MTT法检测各组HeLa细胞的抑制率,采用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡情况和细胞周期。结果 MTT结果显示经SAHA组、紫杉醇组和联合组分别处理24、48 h后,与SAHA和紫杉醇组比较,联合组能够显著抑制HeLa细胞的增殖,差异有统计学意义,且二者具有叠加作用（Q=0.861, Q=1.25）; HeLa细胞的凋亡实验结果显示联合组的凋亡率分别高于紫杉醇组、SAHA组;HeLa细胞周期实验发现：联合组处理后的HeLa细胞主要处于G0/G1期,提示SAHA与紫杉醇联合使用能够抑制HeLa细胞有丝分裂过程中的DNA合成和复制。结论 SAHA与紫衫醇联用能够抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,增强诱导HeLa细胞凋亡的能力,阻滞细胞周期,最终增强抗肿瘤的能力。     

RASSF1A Suppresses Proliferation of Cervical Cancer Cells

Background: This study aimed to explore the effects of ras association domain family 1 A (RASSF1A) onproliferation and apoptosis of human cervical cancer cell line Hela cells. Materials and Methods: RASSF1Awas cloned into the pcDNA3.1(+) vector to generate pcDNA3.1(+)-RASSF1A plasmid for transfection into Helacells. Changes in the proliferation and apoptosis of cultured Hela cells were examined by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium chloride assay and flow cytometry. A protein array was used to analyzethe expression of apoptotic factors. Results: Plasmid pcDNA3.1(+)-RASSF1A was generated and transfectedinto Hela cells to stably express RASSF1A in Hela cells. RASSF1A transfection was effective in inhibiting theproliferation of Hela cells up to 52.4%, as compared to cells transfected with an empty plasmid. RASSF1Aexpression also successfully induced apoptosis in human cervical cells with an apoptosis rate of 20.5%. Moreimportantly, protein array results showed that RASSF1 A transfection induced overexpression of p21 and caspase8, while decreasing the expression of survivin in Hela cells. Conclusions: RASSF1A expression was effective insuppressing the proliferation and increasing apoptosis of Hela cells, and may be a potential therapy for cervicalcancer in clinic.     

茯苓多糖对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、促凋亡的影响及其机制

目的 探讨茯苓多糖（Pachymaran）对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、促凋亡的作用及其相关机制。方法 MTT法检测细胞增殖率并筛选出适宜的茯苓多糖低、中、高浓度用于后续实验；不同浓度的茯苓多糖处理细胞后，倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；Hoechst 33342染色观察细胞核的变化；平板克隆实验检测细胞克隆形成能力；细胞划痕实验检测细胞迁移能力；流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期；Western blot法检测凋亡、迁移及ERK通路相关蛋白的表达。结果 茯苓多糖浓度对HeLa细胞活力的影响实验得出，取30、40、50 mg/ml茯苓多糖作为低、中、高浓度进行后续实验；中、高浓度茯苓多糖处理细胞后，细胞和细胞核发生显著的凋亡形态学变化，低浓度下形态学变化不显著；不同浓度茯苓多糖均能降低细胞克隆形成能力；降低细胞迁移率（P<0.05）；使细胞凋亡率增加（P<0.05）；使S期细胞减少并阻滞于G₂/M期（P<0.05）；Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 8、Cleaved Caspase 9、Bax表达较对照组明显增多，Bcl-2、MMP-9、VEGFA、p-ERK1/2表达明显减少（P<0.05）。ERK1/2表达无明显变化。结论 茯苓多糖能显著抑制HeLa细胞增殖，并诱导其凋亡。其促凋亡机制可能与下调p-ERK1/2表达，抑制ERK信号通路磷酸化有关。同时，茯苓多糖对抑制HeLa细胞的迁移也有一定的作用。     

Beclin1 Overexpression Inhibitis Proliferation,Invasion and Migration of CaSki Cervical Cancer Cells

The influence of the autophagy-related gene Beclin1 on proliferation, invasion and metastasis of the cervicalcancer CaSki cells and its possible mechanism in vitro were here targeted. After the overexpression vectorpcDNA3.1-Beclin1 and RNA interference vector pSUPER-Beclin1 were transfected into CaSki cells in vitro, stableexpression cell lines demonstration Beclin1 expression was upregulated, and VEGF and MMP-9 expression weredecreased, leading to cell arrest in the G0/G1 phase of the cell cycle. MTT assays further revealed proliferationof cells was significantly inhibited in Beclin1-overexpressing transfectant cells, with invasion and metastasisalso being inhibited in Transwell chamber assays. The present results suggest that Beclin1 inhibits invasionand metastasis of cervical cancer CaSki cells in vitro. Mechanisms probably involve Beclin1 inhibition of cellproliferation, and decreased expression of VEGF and MMP-9 proteins.     

溶瘤腺病毒介导RNA干扰人端粒酶逆转录酶抑制HeLa细胞生长

目的观察表达人端粒酶逆转录酶siRNA（hTERT-siRNA）的溶瘤腺病毒ZD55-TERT-siRNA对体外培养人宫颈癌HeLa细胞生长及hTERT基因表达的影响。方法以溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达hTERT-siRNA 的增殖缺陷腺病毒AD-TERT-siRNA和增殖缺陷腺病毒AD-EGFP作为对照组。不同滴度四种病毒分别感染HeLa细胞,结晶紫法检测细胞毒作用,MTT法测定细胞生长抑制率; RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学（ICC）法分别检测hTERT 的mRNA、蛋白质及抗原表达,Western blot和ICC法分别测定腺病毒E1A蛋白及抗原表达。结果对HeLa细胞的生长抑制作用和细胞毒作用ZD55-TERT-siRNA＞AD-TERT-siRNA和ZD55-EGFP＞AD-EGFP;ZD55-TERT-siRNA和ZD55-EGFP感染的HeLa细胞表达E1A;抑制hTERT表达作用依次为ZD55-TERT-siRNA＞AD-TERT-siRNA＞ZD55-EGFP、AD-EGFP。结论溶瘤腺病毒介导RNA干扰hTERT能有效抑制HeLa细胞生长及hTERT基因表达。     

Betaine Effects on Morphology,Proliferation, and p53-induced Apoptosis of HeLa Cervical Carcinoma Cells in Vitro

Objectives: To investigate the effects of betaine on HeLa cell growth and apoptosis and molecular mechanisms.Materials and Methods: Concentrations of 0.1, 1.0, 5.0, 20.0, 100.0 mg/ml of betaine were used to evaluate theanticancer efficacy for HeLa cells respectively, and MCF-10A was also detected as a normal diploid cell control.Results: We found that proliferation of HeLa cells was inhibited significantly upon exposure to increasing betainelevels with the MTT test (p<0.05). The percentage of S phase cells in the low dose groups (< 5mg/ml) were distinctlyhigher than in high dose groups, and the rates of Sub-G1 phase were the opposite (p<0.01); A high concentrationof betaine (>5.0mg/ml) significantly promoted the apoptosis of HeLa cells (p<0.01). SOD activities of the lowdose groups were slightly higher than the control group (p<0.05) and there were obvious synchronicity andcorrelation among the expression of promoting apoptosis genes Bax, P53, Caspase 3 and apoptosis suppressiongene Bcl-2. In response to an apoptosis-inducing stimulus, p53 and cyclin D1 could be activated with blockageof the cell cycle at G1/S or S/G2 checkpoints. Conclusions: Our data showed that betaine could promote HeLacells proliferation in vitro at low concentrations.In contrast, high concentrations could significantly inhibit cellgrowth and migration, and induce apoptosis of HeLa cells through caspase 3 signaling and further promotednecrosis. This might imply that betaine exhibits tumoricidal effects and acts as a biological response modifier incancer treatment by inducing apoptosis and cell cycle arrest in a dose and time-dependent manner.     

Effects of HMGB1 Expression Suppressed by siRNA on Cell Cycle and Proliferation of Human Cervical Cancer Cell Line HeLa

OBJECTIVE In this study, RNA interference was used to evaluate the effects of HMGB1 expression on cell cycle and proliferation of the human cervical cancer cell line HeLa. METHODS We had previously constructed and screened effective eukaryotic expression vectors carrying PGCsi3.0-1/HMGB1 siRNA and PGCsi3.0-3/HMGB1 siRNA, then the vectors were transfected into HeLa cells. The expression of HMGB1 before and after transfection in HeLa cells were detected by RT-PCR and Western blot. The cell viability and proliferating activity was tested by Trypan blue dye test and MTT, and the cell cycle was determined by flow cytometry. RESULTS The introduction of PGCsi3.0-1/HMGB1 siRNA and PGCsi3.0-3/HMGB1 siRNA inhibited the expression of HMGB1 mRNA and protein efficiently and specifically, there was a significant difference between the siRNA groups and the control groups (P < 0.05). The proliferation speed of PGCsi3.0-1 group and PGC si3.0-3 group were obviously slower than those of PGCsi3.0-Neg group and non-transfected group. Flow cytometry showed that the content of DNA in G2 phase in PGCsi3.0-1 group and PGCsi3.0-3 group were obviously more than those in PGCsi3.0-Neg group and non-transfected group, but the content in S phase was less (P < 0.01). The progression of cell cycle was arrested from G2 to S phase. CONCLUSION PGCsi3.0-1/HMGB1 siRNA and PGCsi3.0-3/HMGB1 siRNA could specially suppress the expression of HMGB1 gene, inhibit the proliferation speed of HeLa cells effectively, and arrest the progression of cell cycle from G2 to S phase. RNAi provides a new approach to the bio-therapy of cervical cancer.     

自噬在熊果酸抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖中的作用

[目的]分析自噬在熊果酸抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖中的作用.[方法]体外培养人宫颈癌HeLa细胞,不同浓度(5、10、20μmol/L)的熊果酸处理48h后,采用MTT法检测HeLa细胞增殖抑制率的变化;透射电镜观察细胞自噬超微结构的改变;Western blotting检测自噬相关蛋白p62及Beclin-1的表达情况;微管相关蛋白1轻链3A/B (microtubule-associated protein 1 light chain 3 A/B,LC3A/B)免疫荧光检测熊果酸对HeLa细胞自噬水平的影响;检测自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)抑制自噬前后对熊果酸增殖抑制作用的影响.[结果]不同浓度(5、10、20 μmol/L)的熊果酸处理组对HeLa细胞的抑制率分别为20.1％±1.3％、35.6％±2.6％和49.0％±1.0％,熊果酸可抑制HeLa细胞增殖并呈剂量依赖性(=446.177,P＜0.001);熊果酸能诱导HeLa细胞发生自噬:透射电镜观察发现经熊果酸处理后HeLa细胞中自噬囊泡明显增加;Western blotting分析表明熊果酸可呈剂量依赖性增加Beclin-1的表达,降低p62的表达;免疫荧光检测显示熊果酸处理后,HeLa细胞的荧光强度与对照组相比明显增强;3-MA与熊果酸联合作用于HeLa细胞时可抑制细胞增殖.[结论]熊果酸抑制HeLa细胞增殖,并诱导其发生自噬,自噬抑制剂3-MA能够增强熊果酸对HeLa细胞的增殖抑制作用.     

miRNA-34 a对人结肠癌细胞 HCT116增殖及侵袭转移的影响

目的：研究微小RNA-34a（microRNA-34a,miR-34a）在人结肠癌细胞株HCT116中的过表达对细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法设计合成并构建携带绿色荧光蛋白（ GFP）的miR-34a真核表达载体,脂质体法稳定转染HCT116细胞。通过Realtime PCR验证转染后miR-34a的表达变化。 MTT法检测转染前后HCT116细胞增殖能力变化, Transwell法检测转染前后HCT116细胞侵袭能力改变,western blot检测目的蛋白的表达。结果 miR-34a转染HCT116细胞后其表达量增加到（7．32±1．34）倍,而HCT116细胞增殖能力也受到显著抑制,下降到（0．49±0．10）;Bcl-2蛋白受到miR-34a表达的抑制,而BAX的表达则受到miR-34a表达的增强;HCT116细胞侵袭能力在miR-34a过表达后显著增强,相应的MMP-2和MMP-9表达也出现显著增强。阴性对照组与空白对照组比较无显著性差异。结论 miR-34a的过表达能够抑制人结肠癌细胞HCT116的增殖及侵袭转移,与调控Bcl-2／BAX和MMP-2和-9蛋白的表达密切相关。