小剂量奥沙利铂化疗对小鼠H22肝癌乏氧的影响

目的 观察小剂量奥沙利铂化疗对小鼠H22肝癌乏氧动态变化的影响,并探讨乏氧改变与其抗血管生成效应的关系.方法 建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,将成瘤小鼠随机分成对照组(5%葡萄糖20ml/kg)和治疗组(奥沙利铂1.5mg/kg),分别隔日腹腔给药(设为d0、d2、d4、d6).于d1、d3、d5、d7、行(99m)...     

奥沙利铂治疗原发性肝癌的临床研究进展

原发性肝癌是我国高发的恶性肿瘤,由于起病隐袭,早诊困难,确诊时大多数已达局部晚期或发生远处转移,治疗棘手,预后很差;如果仅仅采取支持治疗,患者的生存时间在亚太国家只有３～４个月,而欧美国家也不过６～９个月。对于晚期肝癌,临床上经常采用系统化疗作为姑息治疗,但是迄今缺乏标准的化疗药物和方案。奥沙利铂（ＯＸＡ）作为第３代铂类药物,治疗多种消化道肿瘤疗效确切。近年来,国内外学者开展了一系列有关ＯＸＡ治疗晚期肝癌的临床研究,有些已有结果且陆续发表,特别是２０１０年ＡＳＣＯ年会上新报告的ＥＡＣＨⅢ期试验结果令人鼓舞。本文拟对有关进展进行全面的综述和讨论,以供同行参考。     

含奥沙利铂化疗方案治疗对索拉非尼耐药的晚期原发性肝癌的临床观察

目的回顾性分析含奥沙利铂（OXA）化疗方案治疗对索拉非尼耐药的晚期原发性肝癌的有效性和安全性。方法 2008年3月至2013年3月16例晚期原发性肝癌患者经索拉非尼一线治疗失败后,接受OXA为主的联合化疗,包括FOLFOX 4方案（OXA 85mg／m2 静滴, d1;亚叶酸钙200mg／m2静滴,d1、d2;氟尿嘧啶400mg／m2 静推,d1、d2;氟尿嘧啶600mg／m2持续静滴,d1、d2, 2周为1周期,每3个周期评价疗效）,或XELOX方案化疗（OXA 130mg／m2静滴,d1;卡培他滨1250mg／m2口服,2次／日,d1～d14,3周为1周期,2个周期评价疗效）。按照RECIST 1.1版标准评价疗效,按照NCI CTC 3.0标准观察毒副反应,动态监测血清甲胎蛋白（AFP）变化,合并慢性乙型肝炎患者密切监测HBV DNA变化。结果16例患者中,化疗后有13例可以评价疗效,获PR 2例,SD 6例,PD 5例;有效率为15.4％（2／13）,疾病控制率为61.5％（8／13）,中位疾病进展期为110 天,中位总生存期为225天,AFP下降者占38.5％（5／13）,2例出现HBV DNA再激活,经抗病毒治疗后恢复正常。主要毒副作用为骨髓抑制,包括血小板、白细胞、中性粒细胞减少,经白介素-11、重组人粒细胞集落刺激因子等治疗恢复正常。恶心、呕吐、腹泻、肝功损害以及外周神经毒性等轻微,经相关处理后好转。结论 对于索拉非尼耐药的晚期原发性肝癌患者,FOLFOX 4或XELOX方案具有一定疗效,毒副反应可以耐受,值得进一步研究。     

奥沙利铂诱导survivin表达改变与宫颈癌细胞化疗敏感性的关系

目的探讨survivin基因在奥沙利铂（OXA）诱导的宫颈瘸细胞凋亡中的作用。方法用宫颈癌Hela细胞株进行培养传代,MTT试验检测OXA不同药物浓度对宫颈癌细胞生长的抑制作用。分别在加药前、加药后24、48、72和96h采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测survivin mRNA的表达。结果OXA对宫颈癌细胞生长均有明显的抑制作用。并有浓度和时间的依赖性。随浓度增加。宫颈癌细胞凋亡率表现先上升,后下降;随时间延长,在高浓度OXA组凋亡率明显增加,在低浓度OXA组凋亡率增加不明显。0．1mg／L和1mg／L OXA处理宫颈癌细胞,survivin mRNA表达随作用时间的延长而增加。结论小剂量OXA处理宫颈瘸细胞,stirvivin mRNA表达随作用时间的延长而增加,这可能是宫颈癌细胞对化疗药物产生耐药性的重要因素之一。     

肝动脉灌注奥沙利铂合并栓塞治疗晚期肝癌的临床观察

目的：观察奥沙利铂（Oxaliplatin，L-OHP）肝动脉灌注栓塞化疗对晚期原发性和继发性肝癌的临床疗效和毒副作用。方法：32例晚期肝癌患者，其中原发性肝癌20例，转移性肝癌12例，经皮股动脉穿刺插管至腹腔动脉，并超选至肝肿瘤的供血血管后灌注药物，L-OHP 130mg／m^2，氟尿嘧啶脱氧核苷（FUDR）500～750mg／m^2，并以丝裂霉素（MMC）6～8mg/m^2＋超液化碘油10～30ml乳化后进行血管栓塞。对于转移性肝癌在介入化疗后第2天起并给予FUDR350～500mg／m^2、四氢叶酸钙（CF）200mg／m^2静脉滴注，连用3天，间隔4～6周重复给药1次。疗效和毒副反应按WHO实体瘤近期疗效和抗癌药毒性评定标准评定。结果：全组32例均可进行评价。CR2例，PR13例，PD1例，SD16例，有效率（CR＋PR）为46．9％，其中原发性肝癌的有效率为40．0％，转移性肝癌的有效率为58．3％。毒副反应主要是恶心、呕吐、白细胞减少及一过性肝功能损害，末梢神经炎的发生率并不高，程度也不重；未见心脏、肾脏损害。结论：采用以奥沙利铂为主的肝介入疗法治疗晚期肝癌疗效肯定，安全性好，患者可以耐受，值得进一步研究。     

奥沙利铂对肝癌HepG2细胞生长及侵袭转移的抑制作用

目的 观察奥沙利铂（L-OHP）对人肝癌HepG2细胞生长、凋亡、黏附及侵袭行为的影响。方法 分别采用MTT法及AnnexinV / PI 双染色流式细胞术检测不同浓度L-OHP对肝癌HepG2细胞生长及凋亡的影响;分别以MTT法及Transwell实验检测L-OHP对HepG2细胞黏附、迁移及侵袭力的影响。结果 在（10.0～40.0）mg/L浓度的L-OHP作用下,HepG2细胞增殖明显降低,抑制作用呈浓度和时间依赖性（P<0.01）;5.0 mg/L以下浓度无明显的细胞毒作用;（2.5～10.0）mg/L的L-OHP可使凋亡细胞明显增多(P<0.05);无毒剂量（2.5 mg/L）的L-OHP作用时,HepG2细胞的黏附力明显下降（P<0.05）,30、60、90 和120 min的黏附抑制率分别为29.2%、27.3%、26.6% 和24.8%;HepG2细胞的迁移及侵袭细胞数明显减少（P<0.01）,迁移、侵袭抑制率分别为53.68% 和54.38%。结论 L-OHP既可通过抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡,又可通过抑制肝癌细胞黏附、迁移、侵袭能力发挥抗转移的作用。     

奥沙利铂对肝癌HepG2细胞生长及侵袭转移的抑制作用

目的 观察奥沙利铂（L-OHP）对人肝癌HepG2细胞生长、凋亡、黏附及侵袭行为的影响。方法 分别采用MTT法及AnnexinV / PI 双染色流式细胞术检测不同浓度L-OHP对肝癌HepG2细胞生长及凋亡的影响;分别以MTT法及Transwell实验检测L-OHP对HepG2细胞黏附、迁移及侵袭力的影响。结果 在（10.0～40.0）mg/L浓度的L-OHP作用下,HepG2细胞增殖明显降低,抑制作用呈浓度和时间依赖性（P<0.01）;5.0 mg/L以下浓度无明显的细胞毒作用;（2.5～10.0）mg/L的L OHP可使凋亡细胞明显增多(P<0.05);无毒剂量（2.5 mg/L）的L-OHP作用时,HepG2细胞的黏附力明显下降（P<0.05）,30、60、90 和120 min的黏附抑制率分别为29.2%、27.3%、26.6% 和24.8%;HepG2细胞的迁移及侵袭细胞数明显减少（P<0.01）,迁移、侵袭抑制率分别为53.68% 和54.38%。结论 L-OHP既可通过抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡,又可通过抑制肝癌细胞黏附、迁移、侵袭能力发挥抗转移的作用。     

吉西他滨联合奥沙利铂治疗晚期原发性肝癌的临床观察

目的 观察吉西他滨联合奥沙利铂( GEMOX)方案治疗晚期原发性肝癌患者的疗效与毒副反应.方法 24例晚期原发性肝癌患者接受GEMOX方案进行治疗,吉西他滨1000 mg·m-2,30 min内静脉滴注,d1,8;奥沙利铂100 mg·m-2,3h静脉滴注,d1,21 d为1周期.以WHO标准评价其疗效和毒副反应.结果 24例患者均可评价客观疗效,其中SD 15例,PD 9例;肿瘤进展时间为4.4～22.6个月,中位肿瘤进展时间为7.4个月.15例患者化疗后临床症状和Karnofsky评分均有一定程度的改善,但影像学表现无明显变化.其中6例患者AFP有不同程度的下降.主要的毒副反应为血液毒性.结论 GEMOX方案治疗晚期原发性肝癌具有较好的临床疗效,毒副反应较轻,患者耐受性较好,可有效改善疾病的相关症状.     

奥沙利铂联合表柔比星经导管动脉栓塞化疗治疗原发性肝癌的临床疗效

目的 探讨奥沙利铂联合表柔比星经导管动脉栓塞化疗治疗原发性肝癌的临床疗效。方法 根据治疗方法的不同将82例行经导管动脉栓塞化疗的原发性肝癌患者分为对照组（n=39,奥沙利铂联合吉西他滨治疗）和观察组（n=43,奥沙利铂联合表柔比星治疗）。比较两组患者的近期疗效、肿瘤标志物[癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）]水平及不良反应发生情况。结果观察组患者的总有效率为83.72%,高于对照组患者的64.10%(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的CEA、AFP水平均低于本组治疗前,且观察组患者的CEA、AFP水平均低于对照组,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。观察组患者的不良反应总发生率为16.28%,低于对照组患者的35.90%(P﹤0.05)。结论 奥沙利铂联合表柔比星经导管动脉栓塞化疗治疗原发性肝癌疗效确切,可有效降低患者的肿瘤标志物水平,且安全性较好,值得临床推广应用。     

康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：探讨康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的作用。为康莱特注射液治疗肝癌提供理论依据。方法：采用免疫组织化学及透射电镜技术观察康莱特注射液对肝癌细胞凋亡的影响。结果：肝癌细胞经康莱特注射液培养24h后,其凋亡的百分率明显高于对照组和空白组,有显著性差异（P＜0．05）,且组织细胞凋亡在50％以上者占44．12％（15／34）,而对照组及空白组无1例凋亡超过50％;电镜相可见较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,凋亡小体形成等。结论：康莱特注射液能诱导肝癌细胞发生凋亡;诱导细胞凋亡可是康莱特注射液治疗作用的重要机制。     

曲古抑菌素A增加人肝癌Bel7402细胞对TRAIL敏感度的实验

目的 探讨曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)联合肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对肝癌细胞Bel7402增殖凋亡的影响及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法分别检测TSA、TRAIL及低浓度TSA联合TRAIL处理Bel7402细胞的生长抑制率;4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色法对药物联合处理后的细胞进行凋亡形态学观察;免疫细胞化学和Western blot技术观察药物联合作用后p65蛋白在细胞中表达和定位的变化.结果 不同浓度TSA作用6、12和24 h对人肝癌Bel7402细胞的增殖没有明显抑制作用,而作用48 h后的细胞增殖抑制率明显升高,和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度TRAIL处理Bel7402细胞存活率没有明显改变;低浓度TSA(20 ng/ml)预处理能够增加Bel7402细胞对TRAIL治疗的敏感度,TSA预处理联合TRAIL(100ng/ml)作用细胞24 h后,细胞生存率为(57.1±5.4)％,和单独药物处理组及对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);DAPI染色显示TSA和TRAIL联合作用后Bel7402细胞有核凋亡出现.荧光显微镜观察证明单独应用TSA(200 ng/ml)或TRAIL(100 ng/ml)处理的细胞p65蛋白有部分核内移位,而两种药物联合应用导致p65蛋白表达量降低,并且发生明显的核内转移和集聚.结论 低浓度TSA能够增加肝癌Bel7402细胞对TRAIL的敏感度;其机制可能是两种药物联合应用降低p65的表达和活性,从而诱导Bel7402细胞凋亡.     

血清PTX3在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨血清PTX3在肝细胞癌患者中的表达及临床意义。方法 选择78例肝癌患者作为肝癌组,同时选择健康体检者78例作为健康对照组,检测并比较两组PTX3水平差异,分析不同病理特征患者PTX3水平差异,并采用ROC曲线分析血清PTX3对肝癌的辅助诊断价值。结果 肝癌组患者血清中PTX3水平高于健康对照组（P<0.05）。肝癌患者Ⅰ期组血清PTX3水平高于Ⅱ期组及Ⅲ期组（P<0.05）。肿瘤直径≥5 cm患者血清中PTX3水平明显低于肿瘤直径<5 cm患者（P<0.05）;此外,合并HBV感染的肝癌患者血清中PTX3水平高于无HBV感染的患者（P<0.05）。血清PTX3水平肝癌诊断的ROC曲线下面积为0.938。结论 肝癌患者血清PTX3表达水平显著升高,对肝癌有一定辅助诊断价值。     

Induction of Apoptosis by IGFBP3 Overexpression in Hepatocellular Carcinoma Cells

Background: The insulin-like growth factor (IGF) system comprises a group of proteins that play key rolesin regulating cell growth, differentiation, and apoptosis in a variety of cellular systems. The aim of this studywas to investigate the role of insulin-like growth factor binding protein 3 (IGFBP3) in hepatocellular carcinoma.Materials and Methods: Expression of IGF2, IGFBP3, and PTEN was analyzed by qRT-PCR. Lentivirus vectorswere used to overexpress IGFBP3 in hepatocellular carcinoma cell (HCC) lines. The effect of IGFBP3 onproliferation was investigated by MTT and colony formation assays. Results: Expression of IGF2, IGFBP3, andPTEN in several HCC cell lines was lower than in normal cell lines. After 5-aza-2’-deoxycytidine/trichostatin Atreatment, significant demethylation of the promoter region of IGFBP3 was observed in HCC cells. Overexpressionof IGFBP3 induced apoptosis and reduced colony formation in HUH7 cells. Conclusions: Expression of IGF2,IGFBP3, and PTEN in several HCC cell lines was lower than in normal cell lines. After 5-aza-2’-deoxycytidine/trichostatin A treatment, significant demethylation of the promoter region of IGFBP3 was observed in HCCcells. Overexpression of IGFBP3 induced apoptosis and reduced colony formation in HUH7 cells.     

靶向CD24分子3E10增强肝癌HuH-7细胞的化疗敏感度

目的 探讨靶向分子CD24单克隆抗体3E10调节肝癌HuH-7细胞对化疗药顺铂敏感度的作用及其分子机制。方法 Western blot和流式细胞术检测抗CD24抗体3E10的特异性;Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡;Real-time PCR和Western blot检测耐药基因和肿瘤干细胞特性基因的表达水平;Western blot检测JAK/STAT3和PI3K/AKT信号通路的活性水平。结果 3E10可有效识别CD24蛋白及HuH-7细胞。3E10显著增强HuH-7细胞对顺铂的敏感度（P<0.05）,抑制率由（10.3±3.0）%提高至（34.4±10.8）%。3E10显著降低HuH-7细胞耐药基因ABCB1、ABCB5、ABCC1和肿瘤干性基因NANOG、CD24的表达水平及干性基因β-catenin的磷酸化水平（P<0.05）。3E10显著降低STAT3和AKT的磷酸化水平（P<0.05）。结论 靶向CD24分子3E10通过降低HuH-7细胞的耐药性、肿瘤干性和JAK/STAT3、PI3K/AKT信号通路活性来增强HuH-7细胞对化疗药顺铂的敏感度。     

肝癌细胞中IL-18表达及其调控机制的研究

目的探讨肝癌细胞调节IL-18生物学功能的主要分子机制。方法体外培养正常人类肝细胞株QSG-7701和原发性肝癌细胞株（MHCC97-L和HCCLM3）,采用RT-PCR法,分别检测这3种细胞株中IL-18及其相关正负调节基因mRNA的表达变化。结果与2种原发性肝癌细胞株比较,正常人类肝细胞株中IL-18及其正调节基因粒细胞蛋白水解酶3（proteinase-3）mRNA表达量较高,但正调节基因caspase-1和负调节基因caspase-3 mRNA表达水平无统计学差异。结论原发性肝癌细胞中IL-18 mRNA表达减弱,可能与proteinase-3表达失衡有关。     

DcR3对乳腺癌细胞凋亡的影响及其在乳腺癌血清中的表达

目的研究诱捕受体3（DcR3）单克隆中和性抗体对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响,以及DcR3在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义。方法将DcR3单克隆中和性抗体作用于体外培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,检测细胞增殖情况及Caspase 3/7活性变化,应用Hoechst 33342及碘化丙啶双重染色荧光显微镜下观察细胞凋亡形态及计算凋亡率。应用ELISA检测乳腺癌患者血清中DcR3的表达。结果DcR3中和性抗体可抑制MCF-7细胞生长并可诱导细胞凋亡（P<0.05）。乳腺癌患者血清DcR3 水平明显高于健康对照组（P<0.01）;DcR3表达水平与肿瘤大小及临床TNM分期有关（P<0.05）。结论DcR3对人乳腺癌细胞增殖具有抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。DcR3与乳腺癌的发生及恶性进展有关,检测DcR3血清表达有助于乳腺癌诊断及预后判断。     

Expression of Fas/FasL in CD8+ T and CD3+ Foxp3+ Treg Cells - Relationship with Apoptosis of Circulating CD8+ T Cells in Hepatocellular Carcinoma Patients

Aims: Dysfunction of the host immune system in cancer patients can be due to a number of factors, includinglymphocyte apoptosis. Several studies showed that Foxp3+T cells take part in inducing this process by expressingFasL in tumor patients. However, the relationship between apoptosis, CD8+T cells and Foxp3+T cells in HCCpatients is still unclear. The present study was designed to investigate the correlation between apoptosis levelsand Fas/FasL expression in CD8+T lymphocytes and Foxp3+T cells in patients with HCC. Methods: CD8+T cellsand CD3+Foxp3+T cells were tested from peripheral blood of HCC patients and normal controls and subjectedto multicolor flow cytometry. The expression of an apoptosis marker (annexin V) and the death receptor Fas inCD8+T cells and FasL in CD3+Foxp3+T cells were evaluated. Serum TGF-β1 levels in patients with HCC weremeasured by enzyme-linked immunosorbent assay. The relationship between apoptosis and Fas expression, aswell as FasL expression in CD3+Foxp3+T cells was then evaluated. Results: The frequency of CD8+T cells bindingannexin V and Fas expression in CD8+T cells, were all higher in HCC patients than normal controls and theproportion of apoptotic CD8+T cells correlated with their Fas expression. Serum TGF-β1 levels correlated inverselywith CD3+Foxp3+T cells. Conclusions: Fas/FasL interactions might lead to excessive turnover of CD8+T cellsand reduce anti-tumor immune responses in patients with HCC. Further investigations of apoptosis inductionin Fas+CD8+T cells in vitro are required.     

RASSF1A基因对肝癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的探讨RASSF1A基因的表达对肝细胞肝癌化疗药物敏感性的影响。方法利用已构建成功的稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的肝癌细胞株QGY-7703,化疗药物Mitomycin、Adriamycin、Etoposide、5-Fluorouracilur、Cisplatin分别作用各细胞株后,比较生长抑制率、细胞周期及P53、P21、Bax、Caspase-3蛋白的表达水平。结果野生型RASSF1A的表达可提高Mitomycin诱导的肝癌细胞生长抑制率、凋亡发生率（P<0.05）和Caspase-3的活性,对P53、P21、Bax基因的蛋白表达水平没有影响。结论野生型RASSF1A基因可提高肝癌细胞对Mitomycin的敏感性。