载自杀基因的靶向微泡联合超声抑制视网膜母细胞瘤的实验研究

目的 探讨载自杀基因的靶向微泡联合超声对视网膜母细胞瘤（RB）的抑制作用。方法 制备携带单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶（HSV1-tk）质粒和VEGFR2抗体的靶向微泡,分为空白对照组、细胞+质粒组、细胞+质粒+SonoVue组、细胞+靶向微泡组、细胞+质粒+超声辐照组、细胞+质粒+SonoVue+超声辐照组和细胞+靶向微泡+超声辐照组进行实验。荧光显微镜观察基因转染情况,流式细胞仪检测转染率,加入丙氧鸟苷（GCV）后,检测细胞的抑制率。结果 细胞+靶向微泡+超声辐照组的转染率为（24.78±1.04）%,较细胞+质粒+SonoVue+超声辐照组（14.31±0.69）%高。随着GCV浓度的增加,培养时间的延长,各组的抑制率逐渐升高。当GCV浓度在100 mg/l,培养96h后,细胞+靶向微泡+超声辐照组对RB细胞的抑制率达（92.91±1.71）%。结论 在加入GCV后,携带HSV1–tk的靶向微泡联合超声能有效的抑制RB细胞。     

不同机械指数超声对微泡的作用

目的 体外观察不同机械指数超声对微泡造影剂的作用.方法 设置不同机械指数,采集超声体外辐照纤维素管内微泡的造影图像,观察其中微泡浓度变化,分析不同机械指数条件下微泡的运动趋势;拟合微泡运动速率曲线,分析微泡运动规律.结果 低机械指数对微泡无明显破坏作用,微泡运动速率呈线性变化;随着机械指数增加,微泡运动速率增加;机械指...     

纳米级微泡:一种新的超声造影剂

随着分子生物学技术的发展和延伸,超声分子成像获得了飞速的发展,但由于常规造影剂微泡不能透过血管壁,超声分子成像的研究仅限于血管内的靶分子.最近纳米级微泡超声造影剂的出现为针对肿瘤细胞的超声分子成像带来了希望.本文对纳米级微泡超声造影剂的研究背景、研究现状及下一步的研究与应用进行了综述.     

载紫杉醇靶向超声脂质微泡对于卵巢癌细胞体外存活率的实验研究

目的 制备一种载紫杉醇的靶向相变型纳米级超声造影剂,并评价其一般特性.方法 薄膜水化法、乳化法制备载紫杉醇的非靶向相变型脂质纳米粒(PTX-LNP),通过生物素-亲和素法将生物素化的促黄体生成素释放激素(LHRH)连接于非靶向相变型脂质纳米粒制备载紫杉醇的LHRH靶向相变型脂质纳米粒(PTX-LNP-LHRH),于观察...     

靶向和非靶向微泡联合尿激酶超声溶栓的电镜表现

目的 比较靶向和非靶向微泡联合尿激酶超声溶栓的电镜表现。方法 将精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸片段（RGDS）与尿激酶（UK）以及超声微泡（SonoVue）通过机械振荡法,制备成靶向微泡。于30只新西兰大白兔单侧股动脉制备在体混合性血栓,并分为单纯超声辐照组（US组）、超声辐照+非靶向微泡造影剂+UK组（US+M+UK组）、超声辐照+靶向微泡造影剂+UK组（US+RGDS+UK组）。通过超声及多普勒血流仪观察溶栓效果,然后对股动脉离体标本行HE染色,并观察电镜表现。结果 溶栓20 min后,与US组和US+M+UK组比较,US+RGDS+UK组血流量明显恢复（P均<0.05）,US组与US+M+UK组比较差异无统计学意义（P均>0.05）。US+M+UK组HE染色显示管腔内充满血栓,血小板梁呈颗粒状、不致密,扫描电镜示粗大束状的胶原纤维上疏松附着少量细小纤维蛋白丝,大部分断裂;透射电镜示血栓大部分溶解为空泡状,可见白细胞或血小板降解的碎片。US+RGDS+UK组HE染色显示血栓完全溶解;扫描电镜示血栓的纤维网状结构被破坏,纤维蛋白完全的溶解;透射电镜示血栓降解为高电子密度的颗粒。结论 血栓结构的空泡化、纤维蛋白网架结构完全崩解和纤维蛋白的完全溶解是靶向微泡和UK联合溶栓的主要电镜改变。     

超声微泡靶向转染MicroRNA-21对猪冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的冠状动脉微栓塞（coronary microembolization,CME）后导致的心肌凋亡是引起心功能损伤的主要原因之一,第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten,PTEN）在CME后心肌凋亡中起到重要的作用,MicroRNA-21对心肌有保护作用,主要是通过调控其靶基因PTEN实现,因此本研究探讨超声微泡靶向转染MicroRNA-21对CME小猪心肌细胞凋亡的影响及意义。方法20头巴马小猪随机（随机数字法）分为假手术组、微栓塞组（CME组）、CME＋单纯基因组、CME＋超声介导基因组,每组小猪均为5只。经微导管左前降支注入微栓塞球构建CME模型组,注射等量生理盐水构建假手术组。CME＋超声介导基因组于CME前4天经耳缘静脉注入质粒一微泡混合液,同时予超声基因转染治疗仪经猪胸壁辐照心肌。CME＋单纯基因组于CME前4天经耳缘静脉注入质粒礅泡混合液,不予超声辐照。应用心脏超声检测心功能指标;组织病理切片HE及HBFP染色进行梗死区域测量;冰冻切片荧光显微镜评估绿色荧光蛋白（GFP）标记基因表达量;切口末端标记法检测心肌细胞凋亡;荧光定量PCR检测心肌组织PTENmRNA表达;Westernblot检测心肌组织PTEN与Caspase-3蛋白表达。结果（1）与单纯基因组比较,超声介导基因组可使心肌内外源基因表达水平提高8倍以上（P〈0．05）。（2）超声心动图参数显示,与假手术组[（67．87±2．36）％]比较,CME组[（50．94±3．52）％]和CME＋单纯基因组[（52．47±3．71）％]的左室射血分数（LVEF）显著降低（P〈0．05）;与CME组比较,CME＋超声介导基因组[（64．79±2．95）％]可改善CME导致的心功能损伤（P〈0．05）。（3）与假手术组比较,CME组PTEN的mRNA和蛋白表达量均显著增加,Caspase-3的蛋白表达量增加（均P〈0．05）;与CME组比较,CME＋超声介导基因组中PTEN的mRNA和蛋白表达量明显较低,Caspase-3的蛋白表达量较低（均P〈0．05）。结论超声微泡靶向转染MicmRNA-21可以有效地改善CME致心功能损伤,其可能机制是通过下调其靶基因PTEN在心肌细胞的表达,进而减少心肌细胞凋亡起效。     

利用载舒尼替尼的多聚体微泡实现超声介导的靶向药物运输:实验研究

目的探索载舒尼替尼的新型多聚体型微泡抑制人肾癌GRC-1细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法体外培养人肾癌GRC-1细胞,将其分为空白对照组、舒尼替尼组、新型多聚体型微泡联合超声组(pMB+US组)、载舒尼替尼的新型多聚体型微泡不联合超声组(pMBS-US组)、载舒尼替尼的新型多聚体型微泡联合超声组(pMBS+US组)。舒尼替尼组、pMBS-US组、pMBS+US组分别以0.01、0.10、1.00μg/ml舒尼替尼给予处理,于不同时间以MTT法观察不同处理组细胞生存率,检测细胞凋亡,并用HE染色法及DAPI荧光染色法观察凋亡细胞形态学改变。结果 pMBS+US组较之其余各组对肿瘤细胞有更为明显的抑制增殖及诱导凋亡效应(P<0.01)。结论载舒尼替尼的新型多聚体型微泡在超声作用下能显著促进药物与肿瘤细胞的作用,为靶向持续药物运输提供了可能。     

L-S靶向超声造影微泡淋巴结造影的实验研究

目的 探讨自制L-S (lymph-selectin)靶向微泡用于淋巴结造影的效果.方法 雌性兔5只外阴埋置VX2鳞癌组织块制作兔外阴鳞癌及腹股沟转移淋巴结动物模型.A组先经兔耳缘静脉注入L-S靶向微泡(0.3 ml/kg),1h后再注入普通脂质微泡(0.3ml/kg);B组相反.以低机械指数超声检测两组中L-S靶向微泡和普通脂质微泡对腹股沟转移淋巴结的造影效果并进行对比分析.结果 L-S靶向微泡淋巴结造影表现为淋巴结整体回声明显增强,其灰阶值在A、B两组分别为:(97.18±8.38) dB和(92.36±9.45) dB;普通脂质微泡淋巴造影主要表现为淋巴结边缘部位回声增强,其灰阶值在A、B两组分别为:(83.12±2.81) dB和(80.27±3.56) dB.两组中,L-S靶向微泡与普通脂质微泡淋巴结造影的灰阶值比较,差异具有显著性(P＜0.05).结论 L-S靶向微泡具有明显增强淋巴结显影的作用.     

载诺帝脂质微泡的制备及特性的实验研究

目的 制备载诺帝(去甲二氢愈创木酸)脂质微泡并测定其包封率、载药量及观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡法制备载诺帝脂质微泡,测定其粒径大小、分布和Zeta电位、包封率、载药量;超声造影观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(2.53±0.52)×109个/ml,粒径为(2.61±0.32)μm,Zeta电位为+(17.52±2.04)mV;脂质微泡诺帝的包封率(27.1±2.01)%,载药量为(10.9±0.90)%;微泡经外周静脉注射后,兔肝可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法可以成功制备携带诺帝的脂质微泡,微泡可以通过肺血管床,符合静脉注射要求,在家兔体内获得了良好的显像效果.     

超声微泡造影剂实现肿瘤靶向性治疗研究进展

低功率超声辐照微泡栓塞肿瘤血管是治疗肿瘤的一种新方法,特异性抗体偶联微泡介导的药物或基因靶向运输在肿瘤治疗方面也显示出巨大潜力,具有广阔的应用前景。现对超声微泡造影剂介导肿瘤靶向性治疗的研究进展做一综述。     

静电吸附法与生物素-亲和素桥联法制备PSMA抗体靶向纳米微泡的对比实验研究

目的比较静电吸附法和生物素-亲和素桥联法制备前列腺特异性膜抗原（PSMA）抗体靶向纳米微泡的物理特性和靶向黏附率。方法分别应用静电吸附法和生物素一亲和素桥联法制备PSMA抗体靶向的纳米微泡,检测其物理性状;光镜下观察两种微泡与前列腺癌细胞LNCaP和c4—2的靶向能力,并与胃癌细胞MKN45对照;对比分析两种靶向纳米微泡的粒径、浓度及与前列腺癌细胞结合能力。结果两种靶向纳米微泡均呈圆形,表面光滑,大小均匀,分散度好,无聚集,粒径均〈1000nm。静电吸附法制备的靶向纳米微泡平均粒径为（702．96±66．65）nm,平均浓度为（3．46±0．30）×10^8／ml,与前列腺癌细胞LNCaP黏附率（77．2±3．19）％,与C4-2细胞黏附率（61．00±4．47）％;生物素-亲和素桥联法制备的靶向纳米微泡平均粒径为（609．90±37．40）nm,平均浓度约（4．52±0．19）×10^8／ml,与前列腺癌细胞LNCaP黏附率（96．60±1．14）％,与C4-2细胞黏附率（94．00±1．58）％。两种靶向纳米微泡的粒径、浓度及与前列腺癌细胞黏附率比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）;与胃癌细胞MKN45均无黏附。结论生物素-亲和素桥联法是一种高效、灵敏、稳定、特异性强的PSMA抗体靶向微泡制备方法,较静电吸附法具有更大的优势。     

超声靶向微泡破坏实现肿瘤递药研究进展

超声微泡（MB）是诊断成像及药物递送的重要载体。超声靶向微泡破坏（UTMD）技术具有安全、无创、高效且可控等优点。以低强度聚焦超声（LIFU）触发UTMD可将载药MB准确送达肿瘤组织,是极具前景的靶向递药方式。本文就UTMD作用机制及其用于肿瘤递药研究进展进行综述。     

超声微泡介导微RNA治疗肝细胞癌的研究进展

基因治疗正逐渐成为肝细胞癌(HCC)、尤其晚期HCC的治疗方案.足够剂量的特定微RNA(miRNA)可抑制HCC细胞生长,超声微泡介导基因和药物递送治疗策略可促使miRNA于肿瘤区域靶向释放,从而达到治疗效果.本文对超声微泡介导miRNA治疗HCC研究进展进行综述.     

Imaging of focal liver lesions: low-mechanical-index real-time ultrasonography with SonoVue.

OBJECTIVE: The purpose of this study was to evaluate the usefulness of a contrast-enhanced contrast-specific ultrasonographic technique with a low mechanical index for characterization of focal liver lesions. METHODS: Contrast-specific ultrasonography was used to assess 144 patients with 147 focal liver lesions: 87 primary liver carcinomas, 27 hemangiomas, 16 focal nodular hyperplasias, 5 hepatic abscesses, 3 inflammatory pseudotumors of the liver, and 9 metastases. A sulfur hexafluoride gas-based contrast agent was used with a mechanical index of 0.08 to 0.11. RESULTS: On contrast-enhanced ultrasonography, the typical hemodynamic pattern of primary liver carcinoma was the whole-lesion enhancement or mosaic enhancement in the arterial phase with an enhancement defect in the late phase (sensitivity, 92.0%; specificity, 86.7%). The most common enhancement pattern of hemangioma was that enhancement appeared in the periphery first and progressively filled into the lesion center (sensitivity, 96.3%; specificity, 97.5%). The enhancement pattern of focal nodular hyperplasia was that the whole lesion enhanced early and rapidly in the arterial phase with a centrifugal radiating configuration and appeared isoechoic or hyperechoic until the late phase (sensitivity, 87.6%; specificity, 94.5%). The central scar was detected in 31.3% of cases in the late phase. The specific enhancement of a hepatic abscess was the honeycomblike enhancement in all phases (sensitivity, 80.0%; specificity, 100%). No enhancement of a lesion in all phases was specific for an inflammatory pseudotumor of the liver. CONCLUSIONS: Contrast-enhanced real-time ultrasonography is a promising approach in the noninvasive characterization of focal liver lesions and can be useful as a first-line imaging technique clinically when a focal liver lesion is detectable on ultrasonography.     

超声波与微泡声学造影剂增强基因定位转染动物实验研究

目的观察经静脉注射基因与微泡声学造影剂,同时经皮超声辐照肝脏方式能否增强小鼠肝脏基因定位转染及其转染效率.方法昆明种小白鼠24只,随机分为4组,每组6只.第1组为单纯质粒转染组:经尾静脉快速注入2 ml含20 μg乙型肝炎核心抗原(pcDNA3.1/HBV)质粒的生理盐水溶液.第2组为单纯微泡转染组:经尾静脉快速注入2 ml含20 μg质粒的微泡声学造影剂.第3组为单纯超声转染组:经尾静脉快速注入2 ml含20 μg质粒的生理盐水溶液,同时采用频率为1 MHz、声强为0.5 W/cm2的超声波经小白鼠体表肝区辐照1 min.第4组为超声与微泡转染组:经尾静脉快速注入2 ml含20 μg质粒的微泡声学造影剂,同时经小白鼠体表肝区局部采用相同剂量超声辐照1 min.7天后处死小鼠,分别取肝、肾、肺、心、脾、骨骼肌组织进行pcDNA3.1/HBV免疫组化检测,记录不同组织每高倍视野(×400)pcDNA3.1/HBV表达阳性细胞数.结果第1、2组肝、肾组织内偶见pcDNA3.1/HBV表达弱阳性细胞,肺、心、脾、骨骼肌组织未见表达阳性细胞.第3组肝组织内可见少量pcDNA3.1/HBV阳性细胞,每高倍视野表达阳性细胞(26.5±3.9)个.肾、肺、心、脾、骨骼肌组织未见表达.第4组肝组织内pcDNA3.1/HBV表达最强,每高倍视野表达阳性细胞(84.2±4.4)个,为第3组的约3.2倍.肾、肺、心、脾、骨骼肌组织未见表达.结论静脉注射黏附质粒的微泡声学造影剂同时经体表给予一定强度的超声辐照,能显著增强辐照部位局部组织的基因转染与表达,有望成为一种安全、高效的体内基因定位转染新技术.     

Diagnosis of focal liver masses on ultrasonography: comparison of unenhanced and contrast-enhanced scans.

OBJECTIVE: The purpose of this study was to compare the diagnostic accuracy, confidence level, and recommended management of focal liver masses after contrast-enhanced ultrasonography (CEUS) compared with unenhanced ultrasonography alone. METHODS: One hundred sixty-seven patients were referred for CEUS to characterize a focal liver mass. A 2-person blind read determined benignancy or malignancy, comparative diagnosis, and accuracy on both ultrasonography and CEUS. Results were compared with the final diagnoses. RESULTS: The 2 readers could not determine benignancy or malignancy in 77 (46.1%) and 46 (27.5%) of 167 unenhanced scans compared with 2 (1.2%) and 1 (0.6%) of 167 CEUS scans. The confidence level increased from 0 responses in the 2 highest grades (4 and 5) on the unenhanced scans to 135 (81.8%) and 132 (79.5%) of 167 at level 5 for CEUS. Regarding the diagnosis, the confidence level was lowest (grade 1) on the unenhanced scans in 128 (82.1%) and 79 (65.3%) of 167 for the 2 readers and improved to the highest (grade 5) in 110 (65.9%) and 113 (68.1%) of 167. Regarding diagnostic accuracy, the unenhanced scans agreed with the correct diagnosis in 85 (50.9%) and 63 (37.7%) of 167, and CEUS agreed with the correct diagnosis in 133 (79.6%) and 142 (85%) of 167 for readers 1 and 2, respectively. Recommendations for further imaging decreased from 166 (99.4%) and 147 (88%) of 167 on the unenhanced scans to 30 (18%) and 5 (3%) of 167 on CEUS for readers 1 and 2. CONCLUSIONS: Contrast-enhanced ultrasonography improves the accuracy and confidence of diagnosis of focal liver lesions and reduces recommendations for further investigations.     

一次性微创胸腔穿刺包的动物实验研究

目的通过动物实验评价一次性微创胸腔穿刺包对胸腔积液进行穿刺引流的治疗效果。方法选用健康实验用猪16只,建立胸腔积液模型,随机分为两组,实验组（n=8）：采用一次性微创胸腔穿刺包进行胸腔穿刺引流;对照组（n=8）：采用普通胸腔穿刺包进行胸腔穿刺引流。对两组实验动物的胸腔穿刺引流量进行比较分析。结果对照组胸腔穿刺引流过程中出现1例气胸,实验组无一例并发症发生;实验组的胸腔穿刺引流量明显高于对照组（P〈0．05）。结论采用一次性微创胸腔穿刺包进行胸腔穿刺引流是安全有效的。     

动物颅骨对超声波的吸收率

目的:通过测定活体动物颅骨对不同剂量超声波的吸收情况,探讨超声波治疗颅脑疾病的安全性及有效剂量。方法:选用不同强度的超声波作用于家犬、家兔颅骨外,测定颅内接收声头的剂量,数字经统计学处理。结果:不同剂量的超声波通过家犬、家兔颅骨后平均吸收率脉冲波分别为76.1％与79.0％;连续波分别为75.9％与77.7％,两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。治疗量率平均为22.8％。结论:不同剂量的脉冲与连续超声波通过动物颅骨后吸收近似线性变化,无增减效应,作用于颅内的治疗剂量基本稳定。