人参皂苷Rh2通过GATA-1诱导K562细胞红系分化作用的研究

目的 了解人参皂苷Rh2是否通过GATA-1蛋白诱导白血病细胞株K562的分化作用.方法 利用凝胶集落生成实验检测不同浓度人参皂苷Rh2对白血病细胞株K562的增殖抑制作用;采用免疫细胞化学法和Western-blot法检测不同浓度人参皂苷Rh2处理前后K562细胞株中GATA-1蛋白表达情况.结果 凝胶集落生成实验结果显示人参皂苷Rh2对K562细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性;免疫细胞化学法和Western-blot法提示人参皂苷Rh2可诱导K562细胞内GATA-1表达,且呈剂量依赖性.结论 人参皂苷Rh2可显著抑制白血病细胞株K562的生长,其作用呈浓度依赖性;人参皂苷Rh2在体外可通过上调GATA-1蛋白表达诱导K562向红系细胞方向分化.     

青蒿琥酯对U937细胞凋亡的诱导作用及其对Bcl-2、Bax、ICAD和Caspase-8表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法：采用MTT比色法检测青蒿琥酯对U937细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测U937细胞的凋亡;Western-blot法检测U937细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对U937细胞的生长有明显抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0.01）,呈浓度依赖性,48小时IC50值为24.48μg/ml;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导U937细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导U937细胞凋亡。     

白头翁总皂苷碱水解产物的抗胶质瘤作用及机制研究

目的 探讨白头翁总皂苷碱水解产物（PAHS）的抗胶质瘤作用及机制。方法 采用MTT法、集落形成实验分别检测细胞存活率和集落形成率,同时采用Giemsa染色观察PAHS对肿瘤细胞形态学变化;采用hoechest33342染色观察人脑胶质母细胞瘤细胞株U251凋亡细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞的凋亡;用Western Blot法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果 PAHS可以剂量依赖性的抑制U251细胞的增殖,抑制U251细胞集落的形成;PAHS（6.25,9.375,12.5 μg·mL-1）可以诱导U251细胞凋亡,抑制率分别为（6.00±2.05） %、（46.19±0.24） %、（78.26±2.10） %。PAHS可以上调Caspase-3、Bcl-2等蛋白的表达。结论 PAHS具有良好的抗胶质瘤作用,其机制可能与调节Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达有关。     

人参皂甙诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：观察人参皂甙（GS）是否具有诱导髓性白血病HL－60细胞株的凋亡作用。方法：取不同浓度的GS处理HL－60细胞，观察GS所致的细胞形态学的变化；流式细胞术分析细胞DNH含量的改变，并进行DNA片段分析（DNA Ladder);用Annexin V-FITC试验法分析细胞凋亡百分率。结果：人参皂甙能够抑制HL－60细胞生长，在一定剂量和时间范围内可引起细胞凋亡。结论：提示人参皂甙能特异性地诱导HL－60细胞凋亡，可为临床应用人参皂甙作为化疗药物的辅助剂治疗白血病提供实验依据。     

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠T-bet/GATA3的影响＊

目的 观察甲炎康泰（JYKT）复方颗粒对自身免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroiditis，AIT）大鼠Th1/Th2细胞转录因子T-bet/GATA3的影响。方法 50只Lewis大鼠，雌性，每组10只随机分为正常对照组、模型组、JYKT低、中、高剂量组。模型组与给药组大鼠皮下多点注射猪甲状腺球蛋白和弗化剂的方法建立自身免疫性甲状腺炎大鼠（AIT大鼠），大鼠造模6周后，正常、模型组大鼠每日予以0.9 mL/100 g双蒸水，中药组大鼠予以同体积药物混悬液连续8周。给药结束后RT-PCR检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3 mRNA的表达情况；Western Blot检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3的蛋白表达情况；免疫组化法测定大鼠甲状腺组织T-bet、GATA3蛋白的表达情况。结果 与正常组比较，模型组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白表达均显著上升（P < 0.01）；与模型组比较，甲炎康泰低、中、高剂量组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白均下降（P < 0.05，P < 0.01）。结论 T-bet/GATA3是影响Th1/Th2平衡的关键转录因子，甲炎康泰可调控T-bet/GATA3表达，从而影响了自身免疫性甲状腺炎的发生与发展。     

基于火毒病机研究急性脑梗死重症大鼠皮层的核转录因子KB、c-fOs蛋白表达及中药干预效应

目的基于“火毒”病机观察急性脑梗死重症大鼠皮层的核转录因子KB（NF-KB）、c-fns蛋白表达及中药干预效应。方法以Longa的方法略作改良制作鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注模型,选择Bederson评分〉2分的重症急性脑梗死大鼠,对照单纯扶正方药及单纯解毒方药,观察扶正解毒方药对急性脑梗死重症大鼠的宏观表征、NF-KB、c-fos蛋白表达的影响。结果（1）假手术组脑组织细胞核明显呈淡淡的浅棕黄色,模型各组细胞核着色呈现明显的棕黄色,以缺血24小时-48小时为主要变化,给予扶正药、解毒药和扶正解毒药后,神经核着色较浅,其中以扶正解毒药改善效果较为明显,各药物组着色仍比假手术组明显。脑组织细胞浆呈现相同趋势;（2）缺血各模型组大鼠,缺血侧c-fos和NF-KB蛋白表达明显高于假手术组（P〈0．01）,扶正药和解毒药治疗组c-fos和NF-KB在缺血24小时-48小时时蛋白表达明显低于模型组（P〈0．05～0．01）,扶正解毒药治疗组在缺血各时间点c-fbs和NF-KB的蛋白表达均明显降低（P〈0．01）。结论重症急性脑梗死大鼠的NF-KB、c-fos蛋白明显升高;扶正解毒中药治疗重症脑梗死大鼠可能与调节NF-KB、c-fos蛋白表达水平有关。     

血小板激活因子受体拮抗剂SY0916抑制巨噬细胞血管生成作用的研究

 目的 考察血小板激活因子（platelet activating factor,PAF受体拮抗剂SY0916对巨噬细胞释放血管内皮生成相关因子的影响,探讨SY0916抗血管生成的相关分子机制。方法 采用Boyden Chamber法检测小鼠腹腔巨噬细胞的趋化反应;放射性免疫分析法检测巨噬细胞U937上清中白细胞介素（IL-1β含量;L929生物测定法分析肿瘤坏死因子（TNF-α分泌;ELISA法测定血管内皮细胞生长因子（VEGF含量;明胶酶谱法检测间质金属蛋白酶（MMP-9活性;Western Blot法检测MMP-9蛋白表达;RT-PCR法观察IL-1β、TNF-α、VEGF mRNA的表达;凝胶电泳迁移率变更法（EMSA分析核转录因子（NF-κB活性。结果 SY0916对PAF诱导的小鼠腹腔巨噬细胞趋化反应具有显著的抑制作用;SY0916可呈剂量依赖性地抑制PMA刺激人U937巨噬细胞引起的IL-1β、TNF-α、VEGF的生成以及IL-1β、TNF-α、VEGF的mRNA表达;SY0916能显著抑制U937细胞MMP-9的活性及蛋白表达;SY0916明显抑制NF-κB的活化。结论 PAF受体拮抗剂SY0916可能通过抑制巨噬细胞NF-κB的活性而下调促血管生成因子和MMP的表达发挥抗血管生成的作用。     

藤黄酸对急性白血病细胞U937增殖和凋亡的影响及对核孔蛋白Nup88的调控作用

目的 观察藤黄酸对白血病细胞株U937增殖和凋亡的影响及其对核孔蛋白Nup88的调控作用,研究藤黄酸诱导凋亡作用与其调节Nup88的相互关系.方法 采用MTT比色法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI双标法及Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,流式细胞术分析细胞周期和细胞内核孔蛋白Nup88的改变,RT-PCR检测藤黄酸对白血病细胞内Nupp88基因表达的调控作用;共聚焦显微镜观察Nup88蛋白的细胞分布情况.结果 藤黄酸能明显抑制U937细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其24 h的IC50为(1.019±0.134)mg/L;此外,藤黄酸还具有诱导U937细胞凋亡和G0/G1期阻滞的作用.核孔蛋白Nup88弥漫分布于白血病细胞的核浆之间,以细胞浆和核膜为主,经藤黄酸干预后,Nup88的蛋白和mRNA表达水平明显下降,主要集中于核膜的胞浆面,偶见胞浆中表达.结论 藤黄酸能明显抑制U937白血病细胞的增殖,并诱导其凋亡.而藤黄酸诱导的核孔蛋白Nup88的重新分布以及表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.     

当归多糖对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：探讨中药当归的主要有效成分当归多糖（APS）在白血病分化疗法中的应用价值。方法：应用细胞计数、流式细胞术、形态学、细胞化学、细胞分化免疫表型等现代实验血液学检测技术，研究APS对人红白血病细胞株K562细胞的增殖与分化的作用。结果：APS对K562细胞有明显的增殖抑制作用（P＜0．05）；经APS诱导后K562细胞向红系、粒单系细胞方向分化增加，联苯胺染色、糖原染色和过氧化物酶染色阳性率、细胞表面分化抗原CD15表达明显增强（P＜0．05）；APS诱导后K562细胞表达C－MYC明显降低（P＜0．05）。结论：APS体外可抑制K562细胞增殖，并诱导其向红系、粒系细胞方向分化，是较有开发和应用前景的天然诱导剂。     

人参总皂甙增加白血病细胞对化疗药物的敏感性

目的：探讨人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）化疗药物敏感性的作用。方法：采用白血病祖细胞集落形成（ＣＦＵ－ＡＭＬ）药敏试验法。选用４种化疗药物：高三尖杉酯碱（ＨＨｒ）、阿糖胞苷（Ａｒａ）、阿霉素（Ａｄｒ）和足叶乙甙（Ｖｐ－１６）。结果：ＴＳＰＧ刺激ＣＦＵ－ＡＭＬ在体外增殖，集落数提高３７．９８％，使化疗药物对ＣＦＵ－ＡＭＬ的抑制率从原先的３０．４％￣４７．４％分别提高到５１．２％￣     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞凋亡过程中端粒酶活性的改变

目的观察丹参酮Ⅱ_A(TanⅡ_A)对HL60,K562细胞端粒酶活性的抑制作用和对凋亡相关基因的影响,探讨丹参酮Ⅱ_A对造血细胞的作用机理。方法以HL60,K562为靶细胞,应用细胞培养技术,流式细胞术,透射电镜观察TanⅡ_A对HL60,K562细胞的作用,利用PCRTRAP方法检测TanⅡ_A处理前后HL60,K562细胞端粒酶活性的改变。结果经05μg·mL^-1TanⅡ_A作用6d后,HL60,K562细胞生长明显受到抑制,生长抑制率分别为756%和563%。经丹参酮诱导后,HL60,K562细胞发生凋亡,出现亚二倍体峰;同时显著下调HL60及K562细胞的cmyc,bcl2基因表达,上调cfos基因表达。HL60,K562细胞在TanⅡ_A作用后,端粒酶活性受到抑制,端粒酶活性抑制率分别为308%,508%。结论TanⅡ_A可明显抑制HL60和K562细胞的增殖和细胞端粒酶活性,并诱导细胞凋亡。     

续断皂苷抗白血病作用的机制探讨

目的探讨续断皂苷(akebia saponinD,ASD)抗白血病细胞及其作用机制。方法用不同剂量(10、30、50、100μg/mL)皂苷处理人急性白血病细胞株U937细胞和人早幼粒白血病细胞株HL-60细胞,采用MTT比色法观察ASD对白血病细胞的作用。以Annexin-Ⅴ染色法检测细胞凋亡并以PCR法检测凋亡相关基因的表达。采用Westernblot法检测P53蛋白的变化。采用Griess分光光度法检测样品中一氧化氮(NO)的代谢产物亚硝酸盐的含量。结果与未处理组相比,50μg/mLASD能明显抑制U937细胞和HL-60细胞的生长并呈剂量依赖性,同时伴随bcl-2mRNA表达的明显下调。Western blot检测结果显示,P53蛋白的表达水平随ASD作用而升高。另外,ASD可以促使U937细胞和HL-60细胞中NO的含量显著提高(P<0.05)。结论 ASD对U937细胞和HL-60细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与bcl-2基因的下调,p53蛋白上调,以及促进白血病细胞内NO含量提高相关。     

Anti-leukemic activity of Wattakaka volubilis leaf extract against human myeloid leukemia cell lines

Ethnopharmacological relevance

Wattakaka volubilis has been traditionally used in Ayurvedic medicine in India for treatment of several ailments such as bronchial asthma, inflammations, tumors, piles, leucoderma, application to boils, rat bite etc.

Aim of the study

The present study was designed to investigate anti-leukemic activity of the crude aqueous methanolic extract and to identify active compounds from the leaves of Wattakaka volubilis.

Materials and methods

The leaves of Wattakaka volubilis were extracted with aqueous methanol. Liquid–liquid fractionation of the crude methanolic extract with different organic solvents was done and the fractions were screened for in vitro anti-leukemic activity using different leukemic cell lines. The active fractions were then subjected to chromatographic separation for isolation of bioactive compounds. Structure of isolated compound was elucidated by spectroscopic methods. The in vitro anti-leukemic activities of different extracts of the leaves and isolated compound WVP were studied in U-937, HL-60 and K-562 cell-lines by using cell count, MTT [(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide] and DNA laddering assays, flow-cytometric and confocal microscopic techniques.

Results

Kaempferol-3-O-[α-l-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-α-l-rhamnopyranosyl-(1→6)-O]-β-d-glucopyranoside (WVP) was isolated from crude leaves extract of Wattakaka volubilis. Both the n-butanolic extract (WVB) of Wattakaka volubilis and its isolate WVP were found to be responsible for in vitro anti-leukemic activity. The IC₅₀ values of WVB were found be 120, 100 and 50 (μg/ml) in U937, K562, and HL-60 cell lines, respectively. Whereas, the pure isolate WVP exhibited anti-leukemic activity with IC₅₀ values of 13.5, 10.8, and 13.2 (μg/ml) in U937, K562, and HL-60 cell lines, respectively. The flow-cytometric analysis confirms that the cell cycle arrest occurs at G1 phase in case of U937 and K562 cell lines and G2/M phase in case of HL60 cell lines. Similarly both confocal microsocopic analysis and DNA laddering assay confirm the apoptosis and cell cycle arrests of leukemic cells.

Conclusion

The overall results provide evidence for the ethnopharmacological relevance for use of the plant Wattakaka volubilis in developing novel agents for the treatment of leukemia.     

Antimutagenic and antiproliferative effects of roasted and defatted peanut dregs on human leukemic U937 and HL-60 cells

The antimutagenic effects on Salmonella typhimurium TA98 and TA100 strains and antiproliferative effects on leukemia cell lines (U937 and HL-60) of peanut protein isolate (PPI), peanut protein isolate enzyme hydrolysate (PPIEH), roasted and defatted peanut dregs (RDPD), and roasted and defatted peanut dregs enzyme hydrolysate (RDPDEH) were investigated. The antimutagenic effects on B(a)P and 4-NQO toward the TA98 and TA100 strains were found to follow a diminishing order: RDPD > RDPDEH > PPI = PPIEH with dose-dependency. Antiproliferative effects on leukemia cells U937 and HL-60 were also detected. RDPD was found to be the most effective of all the peanut preparations. At 100 microg/mL concentration, RDPD inhibited the proliferation of U937 and HL-60 cells by 56% and 52%, respectively. We propose to consider RDPD and RDPDEH in the development of natural chemotherapeutic or chemopreventive dietary supplements against leukemia and to upgrade the utilization of these by-products in peanut oil production.     

苦参碱通过MAPK信号转导通路促进U937细胞凋亡

目的:探讨苦参碱(mattine,Mat)对人淋巴瘤细胞株(U937)的抗癌作用及其分子机制.方法:用0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 g·L~(-1)Mat处理U937细胞后,分别采用倒置显微镜和电子显微镜观察细胞形态学变化;台盼蓝拒染法及MTT实验检测细胞增殖抑制作用;Westem blot方法检测细胞MAPK的磷酸化活性.结果:0.2 g·L~(-1) Mat对人组织淋巴瘤U937细胞的增殖有抑制作用;0.2 g·L~(-1) Mat作用U937细胞48 h后,倒置显微镜下可见细胞数目减少,有些细胞变小、变圆,随着Mat作用浓度的增加,U937细胞逐步出现增多的凋亡细胞;Mat可以抑制U937细胞中ERK的活性,并在一定程度上提高p38和JNK的活性.结论:Mat可以在体外抑制人淋巴瘤细胞U937的增殖作用,诱导其凋亡,并且Mat可能通过抑制U937细胞中ERK的活性,提高p38和JNK的活性发挥其诱导凋亡作用.     

甘草次酸对白血病细胞侵袭力及明胶酶活性的影响

目的 研究甘草次酸（glycyrrhetinic acid，GA）对白血病细胞侵袭能力及明胶酶表达的影响。 方法 对体外培养的白血病细胞系K562、HL-60，用MTT法检测不同浓度GA对细胞增殖的影响；采用Transwell小室基质胶侵袭实验观察GA对K562、HL-60细胞株侵袭能力的影响；明胶酶谱法检测GA对细胞明胶酶活性的影响。 结果 GA对K562、HL-60细胞有明显的增殖抑制作用；能够以浓度依赖性的方式抑制K562、HL-60细胞的侵袭能力；GA能够显著下调K562、HL-60细胞明胶酶的A、B活性。 结论 GA能够抑制白血病细胞K562、HL-60明胶酶活性，从而抑制K562、HL 60细胞的侵袭能力，为白血病细胞髓外浸润的预防提供实验依据。     

千金子提取物抗肿瘤作用的实验研究

目的探索千金子的抗肿瘤作用。方法采用极性梯次提取与硅胶柱层析分离,并对其不同极性段的提取物和分离物进行了体内(小鼠移植性肿瘤)、外(噻唑蓝染色法)抗肿瘤活性研究。结果千金子的氯仿、丙酮段提取物对 K562,HepG_2和 U937细胞株具有抑瘤作用,对在体的 EAC、S180呈现出明显疗效;其石油醚、甲醇、水段提取物则基本上未显示有明显抗癌活性;该有效提取物的硅胶柱层析的多组分离物对K562,HL-60、Hela 细胞呈现出较强的细胞毒作用。结论除已知的千金子因子5外,千金子中还存在有多种细胞毒物质,其物质有抗肿瘤作用。     

三七总皂苷诱导造血细胞基因表达谱的体外实验研究

目的采用cDNA芯片技术分析三七总皂苷（PNS）诱导造血细胞的基因表达谱,探讨上调基因与细胞增殖、分化的相关性。方法选择增殖、分化相关重要的功能基因480个,制备cDNA膜芯片。人造血细胞巨核系CHRF-288、粒系HL-60和红系K562细胞经PNS处理后,分别提取mRNA,经逆转录后用[a-^33P]dATP标记,与芯片的cDNA杂交。结果PNS诱导表达上调3倍以上的基因按功能分11类,包括甲基和乙酰化转移酶、诱导分化、抑制凋亡、转录调控蛋白、周期蛋白、信号传递介导蛋白和激酶、受体、DNA和RNA聚合酶,以及大鼠肉瘤（RAS）基因家族等。PNS诱导CHRF-288、HL-60和K562细胞后,mRNA表达水平上调3倍以上的基因分别为78条、89条和59条,占检测基因总数的16．3％、18．5％和12．3％。结论PNS诱导上调的基因均与细胞增殖和分化相关,与我们报道的血液病动物模型、造血干／祖细胞、基因转录调控和蛋白激酶等研究结果相符,为PNS的作用提供了基因表达谱方面的有力证据。     

雄黄对NB4和MR2细胞组织因子表达的影响

目的 :探讨雄黄对NB4细胞 (维甲酸敏感的急性早幼粒细胞白血病细胞株 )和MR2 细胞 (维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞株 )促凝活性 (PCA)和组织因子 (TF)表达的影响。方法 :用 300μg·L^-1雄黄与NB₄和MR₂ 细胞共同孵育 ,分别用复钙时间、ELISA方法、半定量RT PCR检测未处理及雄黄处理6 ,12 ,24 ,48,72h后NB₄和MR₂ 细胞的促凝活性、TF抗原表达及TFmRNA转录的变化。同时检测未处理的HL 6 0 ,K562细胞的PCA ,TF抗原表达作为对照。结果 :NB₄和MR₂细胞的PCA和TF抗原水平明显高于HL 60和K562细胞。雄黄呈时间依赖方式下调NB₄和MR₂ 细胞的促凝活性 ,TF抗原的表达及TFmRNA的转录。结论 :下调NB₄和MR₂ 细胞TF的表达并降低其PCA可能是雄黄改善APL患者弥散性血管内凝血 (DIC)早期出血症状的主要机制之一。