As2O3处理前后K562细胞基因表达变化的基因芯片检测

目的 应用基因芯片研究三氧化二砷（As2O3)处理前后K562细胞基因表达的变化。方法 提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA，纯化为mRNA后再反转录为cDNA。cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后，cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记，与自制的包含348个基因片段的胎盘库芯片杂交。结果 杂交结果经扫描和软件分析。发现了11个差异表达的基因片段，其中有3个基因片段与细胞凋亡密切相关。结论 我们构建的胎盘库基因芯片可以成功地用于研究药物作用前后基因表达的变化。     

基因芯片研究苦参碱诱导K562细胞基因表达谱变化

0 引言苦参碱可影响白血病K562细胞增殖周期达到抑制肿瘤细胞增殖的作用[1],但具体机制不详. 我们拟用cDNA表达点阵研究苦参碱作用下的K562细胞周期基因表达变化情况,明确苦参碱导致K562细胞增殖周期变化的内部机制.     

As2O3对胃癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对SGC－7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响及其机制。方法 细胞凋亡、细胞周期分布及相关蛋白的表达采用流式细胞术;端粒酶活性的检测采用端粒末端重复序列扩增－ELISA法（TRAP－ELISA）,端粒酶亚单位mRNA及c-myc mRNA的表达采用RT－PCR技术。结果 As2O3可明显抑制SGC-7901细胞的生长,细胞凋亡率明显增加,C0/G1期细胞减少,S和G2／M期细胞增加,Bcl-2、c-myc、PCNA蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,端粒酶活性明显下降;端粒酶亚单位hTR是TP1 mRNA无明显变化,hTRT mRNA表达减少,同时,c-myc mRNA的表达亦减少。结论 As2O3对SGC－7901细胞的抑制作用可能是通过二条途径实现：一个是诱导细胞凋亡,另一个是通过下调hTRT mRNA的表达来下调端粒酶活性,其机制有可能与c-myc和Bcl-2基因的减少以及Bax基因的增加有关。     

端粒在As2O3致L02和HepG2细胞凋亡及染色体畸变中的作用

目的 探索端粒、端粒酶活性及端粒逆转录酶基因表达在As2O3诱导L02和HepG2细胞凋亡及染色体畸变过程中的作用.方法 12μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞24、48、72 h,以处理0h作为对照组,流式细胞仪检测细胞凋亡;应用以PCR为基础的端粒重复序列扩增(TRAP-PCR)银染法检测端粒酶活性;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测端粒逆转录酶(hTERT)mRNA表达;0.625 μmol/LAs2O3处理L02和HepG2细胞2、4、6周,以处理0周作为对照组,染色体核型分析检测细胞染色体畸变;检测端粒酶活性及端粒逆转录(hTERT)mRNA表达.结果 12 μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞凋亡率较对照组增加(P＜0.05);端粒酶活性及hTERTmRNA的表达较对照组均明显下降(P＜0.05).0.625 μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞,染色体端-端融合及双微体的畸变率较对照组增加(P＜0.05);端粒酶活性及hTERTmRNA的表达增加(P＜0.05).结论 高浓度As2O3短期处理L02和HepG2细胞可诱导其凋亡.而低浓度As2O3长期处理L02和HepG2细胞可导致染色体畸变,畸变可使基因组不稳定是细胞癌变的基础.端粒、端粒活性及hTERTmRNA表达在此过程中的不同变化也许可部分解释As2O3抗癌和致癌的矛盾作用.     

As2O3联用华蟾素对K562细胞Bcr-Abl磷酸化的影响

目的 研究As2O3联用华蟾素对K562细胞Bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响,探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和华蟾素联合应用治疗CML提供理论依据。方法 采用细胞增殖实验检测细胞生长;采用Annexin-V/PI双染实验、DNA PI染色及DNA电泳等方法测定细胞凋亡;运用Western blot检测K562细胞Bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果 在As2O3和华蟾素作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,1.0μmol/L As2O3、0.125μg/mL华蟾素、0.25μg/mL华蟾素、1.0μmol/L As2O3+0.125μg/mL华蟾素、1.0μmol/L As2O3+0.25μg/mL华蟾素作用K562细胞24h和48h后,增殖抑制率分别为(24±1.3)％、(21±1.5)％、(38±3.1)％、(57±2.7)％、(66±3.3)％及(49±2.9)％、(48±2.7)％、(61±2.1)％、(77±3.8)％、(82±4.2)％,细胞凋亡率分别为(4.8±0.5)％、(5.6±0.7)％、(9.8±0.6)％、(11.9±1.2)％和(15.2±1.5)％及(11.0±0.9)％、(12.9±1.1)％、(18.4±1.5)％、(21.0±2.0)％、(28.0±1.9)％,凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系;DNA电泳出现“梯”状条带;Bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调。结论 As2O3和华蟾素能诱导K562细胞凋亡和抑制其增殖,两药联用具有协同作用,机制与下调K562细胞Bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化有关。     

应用基因表达谱芯片研究硫化砷作用后K562细胞基因表达的变化

目的：利用基因表达谱芯片检测K562细胞在硫化砷作用前后基因表达的差异性进行比较研究。方法：研究对象为人慢性粒细胞白血病细胞株K562,用cy3和cy5两种不同的荧光染料通过逆转录反应将K562经硫化砷作用前后的mRNA分别标记成两种探针,并与载有一组靶的基因表达谱芯片进行杂交,通过计算机扫描分析得到这些基因在经硫化处理前后的表达差异,结果：筛选出包括与DNA结合,转录和转录因子,蛋白翻译,细胞周期等相关表达差异的基因共11条,其中7条表达上调,4条表达下调,结论：周期素E2,周期素G2可能参与硫化砷诱导K562细胞凋亡发生机制。     

亚砷酸和STI571单用及联用对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的研究亚砷酸(As2O3)、STI571单用及联用对K562细胞增殖和凋亡的影响,为As2O3和STI571联合应用于临床提供理论依据.方法细胞增殖采用细胞生长及活力测定;细胞凋亡采用细胞形态、Annexin-V/PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法测定.结果在As2O3和(或)STI571作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,流式细胞仪检测出凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系,基因组DNA电泳出现““梯““状条带.结论 As2O3和STI571均有抑制K562细胞增殖和诱导该细胞凋亡的作用,两药联用效果更佳.     

As2O3联用华蟾素对K562细胞Bcr-Abl磷酸化的影响

目的 研究As2O3联用华蟾素对K562细胞Bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响,探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和华蟾素联合应用治疗慢性粒细胞白血病提供理论依据.方法 采用细胞增殖实验检测细胞生长;采用Annexin-V/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法测定细胞凋亡;运用Western blot检测K562细胞Bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平.结果 在As2O3和华蟾素作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,1.0μmol/L As2O3、0.125mg/L华蟾素、0.25mg/L华蟾素、1.0μmol/L As2O3+0.125mg/L华蟾素、1.0μmol/L As2O3+0.25mg/L华蟾素作用K562细胞24h和48h后,增殖抑制率分别为(24±1.3)%、(21±1.5)%、(38±3.1)%、(57±2.7)%、(66±3.3)%及(49±2.9)%、(48±2.7)%、(61±2.1)%、(77±3.8)%、(82±4.2)%,细胞凋亡率分别为(4.8±0.5)%、(5.6±0.7)%、(9.8±0.6)%、(11.9±1.2)%和(15.2±1.5)%及(11.0±0.9)%、(12.9±1.1)%、(18.4±1.5)%、(21.0±2.0)%、(28.0±1.9)%,凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系;DNA电泳出现"梯"状条带;Bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调.结论 As2O3和华蟾素能诱导K562细胞凋亡和抑制其增殖,两药联用具有协同作用,机制与下调K562细胞Bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化有关.     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的初步研究

目的：探讨三氧化二砷治疗慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）的机制。方法：以ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２为模型，通过细胞增殖、活力检测，形态学观察，肿瘤集落形成的琼脂糖凝胶电泳等检验。结果：经≥２．５μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３处理的Ｋ５６２细胞可出现增殖受抑和凋亡的形态学改变及ＤＮＡ片段化。结论：Ａｓ２Ｏ３能有效地诱导Ｋ５６２细胞凋亡。     

As2O3对消化道细胞凋亡作用的研究

目的 研究Ａｓ２Ｏ３对１０种消化道肿瘤细胞株的致凋亡作用。 方法 采用形态学观察、流式细胞仪检测及ＤＮＡ电泳分析。 结果 发现两株细胞经Ａｓ２Ｏ３作用后有明显凋亡,三株细胞无凋亡,其余有少量凋亡。 结论 Ａｓ２Ｏ３对不同的消化道肿瘤细胞有不同的作用,提示Ａｓ２Ｏ３对不同细胞的致凋亡作用可能存在不同的机理。     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的初步研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３） 治疗慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ） 的机制。方法：以ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２ 为模型,通过细胞增殖、活力检测、形态学观察、肿瘤集落形成的琼脂糖凝胶电泳等检验。结果：经≥２．５μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３ 处理的Ｋ５６２ 细胞可出现增殖受抑和凋亡的形态学改变及ＤＮＡ片段化。结论：Ａｓ２Ｏ３ 能有效地诱导Ｋ５６２ 细胞凋亡。     

硫化砷诱导K562细胞凋亡

研究硫化砷（Ａｓ２Ｓ２）对Ｋ５６２细胞凋亡的诱导作用。采用Ｋ５６２细胞体外培养，应用流式细胞仪（ＦＣＭ）分析细胞周期，鉴定凋亡细胞，检测线粒体膜蛋白Ａｐｏ２．７的表达。结果显示：Ａｓ２Ｓ２能够诱导Ｋ５６２细胞凋亡，使细胞周期中的Ｓ期细胞减少，Ｇ２／Ｍ期细胞升高，提示：Ａｓ２Ｓ２具有促凋亡效应。     

槲皮素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的:研究槲皮素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用. 方法:四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果:槲皮素在(1～8)×10-5 mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,8×10-5 mol/L槲皮素作用72 h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经槲皮素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期. 结论:槲皮素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

未知基因KH与公共生物信息资源的比较与分析

目的 快速分析K562细胞中未知基因KH的结构与功能。方法 以mRNA差异显示技术筛选的K562细胞在0．2mg／ml苦参碱诱导前、后3小时的差异基因为研究对象，采用基因片段的碱基序列与Internet网上多种公共生物信息数据库进行比较，分析未知基因KH的结构与功能。结果 对其中的4个片段进行序列分析和同源性比较，有3个基因片段与已知蛋白或蛋白酶的碱基序列完全或高度同源；有1个基因片段除与16号染色体高度同源外，与其它数据库均无显著同源性，暂命名KH基因。结论 KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的候选新基因。     

三氧化二砷诱导人髓样甲状腺癌TT细胞凋亡

目的观察三氧化二砷（As2O3）对人髓样甲状腺癌TT细胞体外生长的影响。方法选用不同剂量As2O3处理人髓样甲状腺癌TT细胞后，通过倒置相差显微镜、电子显微镜、MTT法、AO／EB荧光染色法和流式细胞术研究As2O3对人髓样甲状腺癌TT细胞生长的影响。结果As2O3具有抑制人髓样甲状腺癌TT细胞生长和促进其凋亡的作用，这种作用主要在中浓度（2．0～5．0μmol／L）产生，而在高浓度（10．0μmol／L）则可引起细胞死亡。结论As2O3明显抑制人髓样甲状腺癌TT细胞生长，并诱导细胞凋亡，在甲状腺癌的辅助治疗上具有很好的应用前景。     

维生素K2对K562细胞生长抑制作用的实验研究

目的:研究维生素K2(VK2)对慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562细胞的生长抑制作用及其机制。方法:采用形态学检测VK2作用后的细胞形态改变,MTT方法检测VK2对K562细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡,PI染色分析细胞周期变化,RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、促凋亡基因bax的表达。结果:经VK2作用后细胞出现明显的形态学改变:细胞变小,核固缩,核染色质聚集边挤于核膜内侧呈新月形以及典型凋亡小体形成等;MTT结果显示VK2对K562细胞有明显的抑制作用,作用72 h半数抑制浓度为25.1μmol.L-1;流式细胞仪检测结果显示随着VK2浓度的增加凋亡率逐渐增高(P<0.05),随着作用时间的延长凋亡率也逐渐增高(P<0.05);VK2作用72 h,S期细胞逐渐减少(r=-0.99,P<0.05),G0/G1期细胞逐渐增加(r=1.00),细胞被阻滞在G0/G1期;随着VK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异。结论:VK2通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,并呈浓度和时间依赖性;抗凋亡基因bcl-2下调可能是VK2诱导K562细胞发生凋亡的机制之一。     

三氧化二砷诱导肺癌细胞凋亡及对细胞周期的影响

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人肺癌细胞株 (Spc- A1)诱导凋亡的机制 ,为抗肿瘤药物的筛选和用药方式提供理论依据。方法 :体外培养 Spc- A1细胞株与不同浓度的 As2 O3 进行作用 ,应用 MTT比色法、流式细胞仪技术、电子显微镜技术观察细胞增殖率、细胞周期率、细胞凋亡率及亚细胞水平变化。结果 :As2 O3 能够抑制 Spc- A1细胞的增殖 ,且呈时间剂量依赖性 ,Spc- A1细胞凋亡率与药物浓度和时间呈依赖关系。电镜观察细胞线粒体肿胀、空泡 ,染色质浓缩、核碎裂。结论 :As2 O3 可诱导 Spc- A1细胞凋亡 ,细胞周期延长 ,线粒体变性。