马桑内酯对大鼠海马神经元钠电流的影响

目的 研究马桑内酯(coriaria lactone,CL)对大鼠海马神经元钠离子通道电流的影响,探讨该影响在CL致痫中的意义.方法 利用全细胞膜片钳技术,在急性分离的大鼠海马神经元上记录钠电流,观察CL对电流幅度的影响.结果 经0.1 mg/mL、0.2 mg/mL的CL作用后,海马神经元钠电流有不同程度的增加[CL 0.1 mg/mL组的最大峰值电流密度为(-90.11±14.02) pA/pF,增幅为17.32%±8.52%;CL 0.2 mg/mL组的最大峰值电流密度为(-111.52±6.65) pA/pF,增幅为37.98%±4.91%];经与对照组相比,CL 0.2 mg/mL组(P＜0.05)的变化较CL 0.1 mg/mL组(P＞0.05)明显.结论 CL使海马神经元电压依赖性钠电流的幅度增大,从而改变细胞的兴奋性,引发异常放电.     

氧化苦参碱对大鼠海马神经元细胞钠通道的影响

目的 研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对培养的新生大鼠海马神经元细胞膜钠电流作用,探讨OMT在离子通道水平的作用机制.方法 采用原代培养新生大鼠海马神经元细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度OMT对培养8～12天的大鼠海马神经元细胞膜钠通道的作用.结果 OMT对海马神经元细胞膜钠电流有明显的抑制作用(n=20,P＜0.05),且这种作用具有浓度依赖性,OMT对钠电流作用的半数抑制浓度为(46.1±1.3)μmol/L.在30μmol/L时,OMT可使钠电流Ⅰ～Ⅴ曲线显著上移,并且改变钠电流的翻转电位,但不影响激活电位和峰电位.通道动力学显示OMT可以促进钠电流复活曲线向右移动,减慢通道由失活状态恢复到激活状态的过程,但对激活曲线和失活曲线则没有明显的作用.结论 OMT呈浓度依赖性和电压依赖性抑制大鼠海马神经元细胞膜钠电流,并且抑制钠通道的复活过程.     

大鼠海马锥体神经元的急性分离方法

目的：建立一种适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法,并对其离子通道进行描述。方法：采用酶加机械分离法制备10~12 d鼠龄的大鼠海马锥体神经元,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性。结果：分离出的神经元形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论：建立一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法。     

大鼠海马神经元急性分离法

作者设计和使用的海马神经元细胞分离法是一种结合酶消化和机械分离的方法，既不损伤神经元的形态，又保留了神经元细胞膜的电学特征。形态上有差异的细胞易于分辨。用内面向外式膜片钳和全细胞膜片钳技术证实，约95％的神经元可观测到电流活动。     

褪黑激素对新生大鼠海马神经元钠通道的影响

褪黑激素是大脑松果体分泌的具有昼夜分泌节律的激素,可通过作用于下丘脑的视交叉前核、边缘系统和垂体等中枢神经系统的受体发挥生理作用.有研究表明离子通道是褪黑激素发挥作用的最终效应器之一.本研究以新生大鼠海马神经元为研究对象,用全细胞膜片钳技术观察褪黑激素对电压门控性钠通道的影响,探讨褪黑激素在中枢神经系统的作用机制.     

马钱子碱对大鼠海马神经元钠通道的影响

目的　研究马钱子碱镇痛作用的机制。方法　用全细胞膜片钳技术 ,首先在大鼠海马CA1锥体神经元记录出钠电流 ,然后观察马钱子碱对钠电流的影响。结果　马钱子碱可以浓度依赖的方式可逆地抑制钠电流。结论　马钱子碱对钠电流的阻断是其镇痛机制之一     

急性分离的大鼠海马及皮层神经元快速失活钾电流特性的比较

目的 探讨海马及皮层神经元细胞膜上快速失活钾通道的特性。方法 急性分离大鼠海马及皮层神经元;利用whole-cell膜片钳技术记录IA电流。结果 海马神经元上的IA通道电流幅度较皮层神经元大、潜伏期短。结论 海马神经元与皮层神经元上的IA电流特征存在差别。     

PTD-BDNF对海马神经元钠、钾、钙离子通道的影响

目的研究PTD-BDNF对大鼠海马神经元细胞钠、钾、钙离子通道的影响。方法全细胞膜片钳技术记录海马神经元细胞电压依赖性钠、钾、钙通道电流,观察并分析PTD-BDNF对离子通道电流的影响。结果与对照组比较,PTD-BDNF、BDNF使海马神经元钠通道电流强度峰值分别增加39.35%和41.99%（n=4,P〈0.01）;使钠通道电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）;使海马神经元钙通道电流强度峰值分别增加39.20%和38.72%（n=4,P〈0.01）;使钙通道电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）;使海马神经元钾通道电流IA、IK在20mv刺激处分别比对照组降低29.03%、28.06%和29.76%、33.38%;使钾电流-电压关系曲线下移（n=4,P〈0.01）。PTD-BDNF与BDNF两者之间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论PTD-BDNF显示了与脑源性神经营养因子相似的电压依赖性离子通道的调节作用,说明PTD-BDNF与脑源性神经营养因子在调节神经元静息膜电位、神经兴奋性方面有相同的分子基础。     

利多卡因对大鼠海马锥体神经元GABAA-Cl-电流的影响

目的 研究利多卡因对大鼠海马锥体神经元全细胞γ-氨基丁酸介导的氯电流(GABA—CI^-电流)的影响，及其中枢致惊厥作用的可能机制。方法 酶解急性分离2周龄左右大鼠海马锥体神经元，采用全细胞膜片钳技术，记录利多卡因对单个海马锥体神经元GABA—CI^-电流的影响。结果 将钳制电位固定在-60mV，GABA以剂量依赖性方式诱导出内向电流；利多卡因明显抑制GABA诱导的CI^-电流(IGABA)，50％抑制浓度(IC50)4.05mmol／L，10mmol／L可使GABA浓度效应曲线明显右移，50％有效浓度(EC50)由7、72nlmol／L增加到17.2mmol／L，且最大电流明显降低。结论 利多卡因以非竞争性的方式，抑制海马锥体神经元GABAA-CI^-电流，可能是其中枢致惊厥作用的机制。     

异丙酚对大鼠海马神经元低电压激活钙电流的抑制作用

目的：观察异丙酚对大鼠海马锥体神经元低电压激活钙电流［low-voltage-activated calcium currents, I _Ca(LVA) ］的影响。方法：培养Wistar大鼠海马锥体神经元,采用全细胞膜片钳技术测定I _Ca(LVA) 。加用不同浓度（3、10、30、100、300 μmol/L）异丙酚后,计算I _Ca(LVA)抑制率,建立异丙酚的浓度-效应曲线,选择20 μmol/L异丙酚作I_Ca(LVA)的激活及失活曲线。结果：3 μmol/L的异丙酚对I _Ca(LVA)的电流幅度无影响;10、30、100、300 μmol/L的异丙酚对I _Ca(LVA)的电流幅度抑制率分别为(12.6±4.1)%、(29.2±5.7)%、(36.6±5.3)%、(31.6±2.6)%。拟合后的浓度-效应曲线的IC₅₀为16.8 μmol/L,Hill系数为0.15。激活曲线的半数最大激活膜电位（V _1/2）由(-10±1) mV 移动到(-11±2) mV;K分别为12±1和8±1;失活曲线的V _1/2分别为(-25±1) mV和(-25±5) mV,K分别为15±1和16±3。20 μmol/L异丙酚均未使I _Ca(LVA)的激活曲线及稳态失活曲线发生明显移动。结论：异丙酚对I _Ca(LVA)通道有抑制作用,异丙酚对中枢神经系统的麻醉作用可能与I _Ca(LVA)抑制有关。     

The Effect of Coriaria Lactone on NMDA Receptor Mediated Currents in Rat Hippocampal CAI Neurons

To investigate the exact mechanism of epileptogenesis induced by coriaria lactone (CL), the effect of CL on NMDA receptor mediated current (Iasp) in rat hippocampal CAI neurons was investigated by using nystatin perforated whole-cell patch clamp. 10-6-10-4 mol/L Asp acted on NMDA receptors and elicited an inward current (Iasp) at a holding potential (VH) of -40mV in presence of 10-6 mol/L glycine and absence of Mg2+ extracellularly. CL enhanced NMDA receptor mediated current induced by Asp, but had no effect on threshold concentration, EC50,Hill coefficient as well as maximal-effect concentration and reversal potential of Iasp. The effect had no relationship with holding potential. These results showed that CL could enhance NMDA receptor mediated current to increase [Ca2+]I of neurons by acting on Gly site, thereby inducing epilepsy.     

IGF-1对海马神经元抑制性突触传递的影响

目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对原代培养海马神经元抑制性突触传递的影响并探讨其可能机制。方法采用无血清培养基培养海马神经元,在10~14d时用于实验。电生理实验分为正常对照组和IGF-1处理组(实验前24h加入IGF-1,终浓度为10μmol/L)。细胞免疫化学实验分为正常对照组、IGF-1处理组和MAPKS转导通路抑制剂(PD98059)预处理组(IGF-1处理前1h加入PD98059,终浓度为10μmol/L)。采用全细胞膜片钳记录方法观察IGF-1对抑制性突触后电流(IPSC)的影响,用细胞免疫化学方法观察其对γ-氨基丁酸能细胞数目影响。结果IGF-1能够显著降低IPSC的频率,但与对照组比较其幅度差异无统计学意义;IGF-1能够明显减少GABA阳性细胞数目,应用PD98059后可阻断这种作用。结论IGF-1的上述作用可能参与海马对学习记忆功能的调节过程。     

腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的作用

目的在离子通道水平研究腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法采用新生24h的乳鼠,取出海马,清除表面血管,以胰酶消化和巴氏管吹打的方法制备海马神经元,细胞培养6～8d后,MAPⅡ染色鉴别神经元表面标志;采用全细胞膜片钳技术,对细胞进行封接、破膜并记录BKCa通道电流,以细胞旁方式给药观察不同浓度腺苷对BKCa通道的作用。结果原代培养的海马神经元上可以成功记录到BKCa电流,其为一组幅值较大,可以快速激活且几乎不失活的外向电流;腺苷(1～100μmol/L)可以增大BKCa电流,浓度越高,增长幅度越大;100μmol/L腺苷对BKCa电流的影响具有电压依赖性,同时它还可以使BKCa电流的激活曲线负向漂移。结论腺苷可以增大海马神经元BKCa电流幅值,这可能是腺苷作为内源性抗癫痫物质发挥抗癫痫作用的机制之一。     

左乙拉西坦对马桑内酯致痫海马神经细胞钠电流的影响

目的 探讨左乙拉西坦 (Levetiracetam, LEV) 对马桑内酯(coriaria lactone, CL)致痫SD大鼠海马神经元钠电流增加的影响.方法 利用膜片钳全细胞模式, 记录急性分离后CL致痫的大鼠海马神经元钠电流,并给予LEV进行干预,分为对照组、LEV 150 μmol/L组、LEV 300 μmol/L组和未处理组.另用LEV 300 μmol/L预处理40 min后再给予CL致痫,观察钠电流的变化情况.结果 CL致痫后钠电流增加,加入LEV 150 μmol/L后最大电流峰值增加了36.92%±2.84%(P＜0.05),与未处理组比较差异无统计学意义(P＞0.05).LEV 300 μmol/L组钠电流增加了16.58%± 1.56%(P＞0.05);但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).经LEV预处理后,CL仍使钠电流增加了32.86%±6.73%(P＜0.05),与未处理组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LEV未能抑制CL致痫海马细胞钠电流的增加,其抗癫痫作用可能不是通过抑制钠电流而产生的.     

无镁诱导培养大鼠海马神经元癫痫放电模型中延迟整流钾电流的变化

 摘要：目的 利用无镁细胞外液诱导原代培养大鼠海马神经元癫痫放电模型来检测延迟整流钾电流的变化。方法 采用新生24h内Wistar大鼠,分离海马神经元进行原代培养。体外培养至12-16d时,无镁细胞外液处理神经元3h并恢复正常细胞外液,应用全细胞膜片钳技术记录神经元的放电情况及延迟整流钾电流。结果 无镁处理后的神经元存在自发的“癫痫样”放电;无镁诱导可使神经元延迟整流钾电流增大。结论 延迟整流钾电流增大可能与无镁诱导体外培养大鼠海马神经元自发异常放电的基础病理机制相关。     

无镁诱导培养大鼠海马神经元与SH-SY5Y细胞自发性放电的变化

  目的 利用无镁细胞外液诱导原代培养大鼠海马神经元和SH-SY5Y细胞建立癫痫放电模型。方法 采用新生24 h内Wistar大鼠,分离海马神经元进行原代培养。对于体外培养至10 d的神经元和传代培养的SH-SY5Y细胞,无镁细胞外液处理细胞3 h并恢复正常细胞外液,应用全细胞膜片钳技术记录2种细胞的放电情况。结果 无镁处理后的神经元存在自发性的“癫痫样”放电;SH-SY5Y细胞未出现“癫痫样”放电。结论 细胞间通过突触联系形成网状结构可能是诱导“癫痫样”放电的必要条件之一。     

大鼠海马神经元及星形胶质细胞的体外培养

目的：改进大鼠海马神经元、星形胶质细胞及两者混合状态的体外培养方法,获得高纯度的海马神经细胞。方法：选取孕期18~20 d 的SD 大鼠胎鼠作为原代海马细胞培养的材料来源。断头后于冰板上剥离双侧海马,去除表面血管及薄膜,利用眼科剪分离为小块。随后使用冷平衡盐溶液洗涤3 次,将海马组织碎块移入酶消化液中。本方法选择Accutase 和0.1% DNase 作为酶消化液,37 ℃消化 15 min,期间轻柔振动。使用冷平衡盐溶液洗涤3 次,终止消化。0.1% DNase 加入Neurobasal 和B-27 的混合液对消化后的海马组织碎块进行轻柔吹打,获得单细胞悬液。将悬液过200 目筛,进行细胞计数。将过筛的单细胞悬液移入DMEM 培养基（DMEM+10%胎牛血清）中,按照每平方厘米2.5×104 的细胞密度进行接种。经PDL 孵育的塑料片置于培养基底部。细胞于37 ℃、5% CO2 培养箱内培养。4 h 后,依据所需细胞种类的不同,更换相应培养基。海马神经细胞于培养后7~10 d 可用于实验。结果：通过本方法可得到高纯度的大鼠海马神经细胞,且根据实验需求,通过更换培养基,可得到纯神经元、纯胶质细胞及两者混合的三种培养状态。培养的神经元及星形胶质细胞纯度均>98%。结论：该文在传统海马神经细胞体外培养方法基础上,进一步降低了实验操作难度,方法稳定有效。     

利多卡因对大鼠海马锥体神经元GABA_A-Cl~-电流的影响

目的　研究利多卡因对大鼠海马锥体神经元全细胞γ 氨基丁酸介导的氯电流 (GABA Cl-电流 )的影响 ,及其中枢致惊厥作用的可能机制。方法　酶解急性分离 2周龄左右大鼠海马锥体神经元 ,采用全细胞膜片钳技术 ,记录利多卡因对单个海马锥体神经元GABA Cl-电流的影响。结果　将钳制电位固定在 - 6 0mV ,GA BA以剂量依赖性方式诱导出内向电流 ;利多卡因明显抑制GABA诱导的Cl-电流 (IGABA) ,5 0 %抑制浓度 (IC50 )为 4 .0 5mmol/L ,10mmol/L可使GABA浓度效应曲线明显右移 ,5 0 %有效浓度 (EC50 )由 7.72mmol/L增加到17.2mmol/L ,且最大电流明显降低。结论　利多卡因以非竞争性的方式 ,抑制海马锥体神经元GABAA Cl-电流 ,可能是其中枢致惊厥作用的机制。     

氯胺酮对大鼠海马神经元高电压激活钙电流的作用

目的 观察氯胺酮对大鼠海马神经元高电压激活钙电流(ICa(HVA))的影响.方法 培养Wistar大鼠海马神经元,采用全细胞膜片钳技术测定ICa(HVA).加用不同浓度(10、30、100、300、1000μmol/L)氯胺酮后,计算ICa(HVA)抑制率,建立氯胺酮的浓度-效应曲线,选择100μmol/L氯胺酮作ICa(HVA)稳态激活(及失活)曲线.结果 10 μmol/L 的氯胺酮对ICa(HVA)的电流幅度无影响;30、100、300和1000μmol/L的氯胺酮对ICa(HVA)的电流幅度抑制率分别为(17.5±4.5)%、(25.5±6.9)%、(38.5±4.1)%和(42.3±4.6)%.拟合后的浓度-效应曲线的半数最大抑制浓度为68.2μmol/L,希尔系数为0.47.激活曲线的最大激活膜电位由(5.4±0.9)mV 变为(5.3±0.8)mV;失活曲线的半数最大激活膜电位从(-26.7±3.9) mV移动到(-32.8±4.2)mV,斜率从-0.0067±0.0002变为-0.0076±0.0002.结论 氯胺酮对ICa(HVA)通道有抑制作用,氯胺酮对中枢神经系统的作用可能与ICa(HVA)抑制有关.