黑斑息肉病LKB1基因胚系突变和肿瘤易感性研究

目的　检测黑斑息肉病患者LKB 1基因胚系突变及特点 ,并调查国内黑斑息肉病患者的肿瘤发生率和肿瘤发生特点。方法　 (1)对 12例确诊的黑斑息肉病患者 (9例家族性 ,3例散发性 )取血 ,提取血脱氧核糖核酸 (DNA) ,分别以多聚酶链反应 (PCR)扩增LKB 1的 9个外显子 ,并逐一测序 ;(2 )综合分析作者搜集的 5个大的黑斑息肉病家系 32例患者和 7例散发性患者 ,并结合国内近 10年来报道的较大家系和有关文献 34篇共计 16 9例患者 ,总结恶性肿瘤的发生率和特点。结果　 (1) 12例患者中 ,7例有LKB 1的胚系突变 ,多数突变为病理性突变 ;(2 )综合分析 16 9例患者中 ,恶性肿瘤发生率为 2 0 1% ,家族性患者 90例中恶性肿瘤发生率为2 0 .0 %。发病较多的肿瘤为结肠癌 12例 ,胃癌 5例 ,直肠癌、小肠癌和宫颈癌各 3例 ,卵巢癌和骨肉瘤各 2例 ,病理类型以低分化黏液腺癌为多 ,患者平均确诊年龄 32 2岁。结论　 (1)LKB 1基因胚系突变是本病重要的分子遗传学基础 ,LKB 1基因突变检测可用于多数患者的遗传学诊断 ;(2 )黑斑息肉病患者是典型的肿瘤高发人群 ,常见肿瘤依次为结直肠癌、胃癌、小肠癌、宫颈癌和卵巢癌等 ,恶性肿瘤发病年龄轻 ,分化较差。     

黑斑息肉病LKB1基因胚系突变和肿瘤易感性研究

目的检测黑斑息肉病患ＬＫＢ１基因胚系突变及特点,并调查国内黑斑息肉病患的肿瘤发生率和肿瘤发生特点。方法（１）对１２例确诊的黑斑息肉病患（９例家族性,３例散发性）取血,提取血脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）,分别以多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＬＫＢ１的９个外显子,并逐一测序;（２）综合分析作搜集的５个大的黑斑息肉病家系３２例患和７例散发性患,并结合国内近１０年来报道的较大家系和有关献３４篇共计１６     

Fabry病家系的α-半乳糖苷酶A基因突变研究

目的 通过检测3个Fabry病家系基因突变类型明确基因诊断,并进行家系成员的基因型检测.方法 通过PCR和直接测序的方法,对3个Fabry家系的先证者及部分家系成员外周血DNA进行α-半乳糖苷酶A编码GLA基因7个外显子及其相邻内含子的DNA序列检测.结果 （1）先证者1的GLA基因7号外显子内1142位点发生碱基缺失（1142delG）,1142位碱基G的缺失导致蛋白质翻译在390位氨基酸提前终止,该突变国内外均未见报道;（2）先证者2的GLA基因6号外显子内902位点存在1个错义突变,碱基G被A取代,导致其编码的第301位氨基酸由精氨酸变为谷氨酰胺（902G＞A,R301Q）;（3）先证者3的GLA基因3号外显子内484位点存在1个错义突变,碱基T被C取代,导致其编码的第142位氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸（484T＞C,C142R）.在3个家系的部分成员中进行基因检测,检出GLA突变基因携带者共6例,其中男性半合子1例,女性杂合子5例,突变类型均与相应先证者符合.100条正常X染色体对照中均未发现上述位点异常.结论 本研究在3个Fabry病家系中检出3种GLA基因突变,其中1142delG为新发现的突变,并在3个家系的部分家系成员中检出男性半合子1例,女性杂合子5例.     

von Hippel-Lindau病家系调查及基因学研究(附二例报告)

目的探讨vonHippel-Lindau病(VHL)基因突变类型及改良的基因诊断方法。方法调查1例VHL病Ⅰ型家系及1例Ⅱ型家系,分别绘制树状图;抽取2个家族共8位成员的外周血,提取基因组DNA。改良方法进行3个外显子翻译区及剪接区的扩增,扩增产物经纯化后直接测序。将所得突变类型与人类基因突变数据库(HGMD)核对。结果VHL病I型家系4代12位家族成员中,有双肾透明细胞癌Ⅱ级合并视网膜血管母细胞瘤1例,中枢神经系统血管母细胞瘤合并视网膜血管母细胞瘤1例,突变基因携带者1例。Ⅱ型家系7位家族成员中,有双肾透明细胞癌Ⅱ级合并双肾多发囊肿1例,肾上腺嗜铬细胞瘤1例。Ⅰ型家系中,5例接受检测者中2例基因测序均见VHL基因第478位与479位核苷酸分别发生C→T及T→C突变,导致第89位编码氨基酸由亮氨酸转变为丝氨酸。Ⅱ型家系3例接受检测者中,2例基因测序见VHL基因第452位核苷酸发生G→T突变,导致第80位编码氨基酸由丝氨酸转变为异亮氨酸。测序获得突变类型与HGMD核对,发现I型家系中VHL基因第478位核苷酸与479位核苷酸的多点突变,为VHL基因第89位氨基酸位点未曾报道过的突变类型。2个家系的基因突变位点均...     

强直性脊柱炎一家系全外显子组测序分析

目的:对一强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)家系进行全外显子测序,筛选该家系的易感基因,为其发病机制提供理论依据。方法:收集1组AS家系成员的临床资料,其中男性患者2例,年龄分别为48岁和18岁,病程分别为23年和4年。提取相关家系成员外周血DNA进行全外显子测序,测序结果与人类数据库比对,过滤掉同义突变及高频突变,整合家系成员单核苷酸非同义突变,寻找致病基因。结果:家系成员共得原始数据80 G,数据具有较高质量值,通过对家系患者与正常人测序结果比对分析,同时经过多个生物数据库数据过滤,发现JAK2基因12号外显子上存在的杂合突变c.1709A>G (p.Tyr570Cys)为该家系的可能致病基因突变。另外,该家系MUC3A基因c.1151T>C突变可能是该家系患病成员肠道症状的原因之一。结论:运用全基因组外显子测序寻找AS易感基因是可行的,JAK2基因c.1709A>G突变可能是导致该家系AS的致病突变及位点。     

家族性VHL综合征患者家系突变类型及二次打击的分析

目的 分析家族性希佩尔·林道(VHL)综合征患者家系的突变类型、临床特征，探索VHL患者发病的分子遗传学机制，及其二次打击的类型。方法 收集VHL患者家系资料，并在先证者外周血和肾癌标本中提取DNA,通过高通量测序(NGS)检测患者VHL基因胚系突变位点，并通过UCSCXena数据库、甲基化特异性PCR法(MSP)、微卫星稳定性检测来明确患者的第二次打击位点。结果 NGS测序发现胚系突变位点位于第3外显子上的c.500G>A R167Q突变，依据UCSCXena数据库、MSP分析、微卫星稳定检测结果提示患者存在单核苷酸多态性，未见明确杂合性缺失、甲基化、体系突变。结论 第3外显子的胚系突变是该家族性肾癌先证者出现临床特征的基础，第二次打击位点是疾病发生的关键，对家族性肾癌家系的胚系突变和第二次打击位点的研究对患者及患者家系的诊断及治疗有指导意义。数据库的利用能够为家族性肾癌突变、甲基化位点的筛选进行指导。     

遗传性弥漫型胃癌上皮型钙黏素基因种系突变的检测

目的 研究遗传性弥漫型胃癌上皮型钙黏素基因(CDH1)种系突变情况。方法 对符合初筛标准的5个胃癌家系(A、B、C、E、F)先证者取血,提取基因组DNA,利用PCR方法扩增上皮型钙黏素基因的16个外显子,以变性高效液相色谱技术检测,对可疑突变者双向测序。结果 B家系先证者CDH1基因第10号外显子1507位碱基出现杂合性C→T转换,导致编码谷氨酸的密码子CAG转变为终止密码子UAG,从而产生截短蛋白。该先证者异时性患有乳腺侵润性小叶腺癌和弥漫型胃癌,免疫组化研究显示乳腺癌组织中上皮型钙黏素表达完全缺失,表明乳腺癌组织中CDH1基因完全失活。结论 中国胃癌家系中存在遗传性弥漫型胃癌家系,并检测到一种新的CDH1基因种系截短突变,乳腺侵润性小叶腺癌可能系遗传性弥漫型胃癌肿瘤谱的一部分。     

瘢痕疙瘩家系外周血Smad2基因的突变检测

目的 对一瘢痕疙瘩家系进行Smad2基因的突变检测,以明确Smad2基因突变是否与这一家系发病有关.方法 以瘢痕疙瘩家系中4个患者的瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤、外周血为研究对象,以其配偶的外周血为正常对照,采用PCR及基因序列分析,对所有标本的Smad2基因的所有外显子进行突变检测.结果 基因测序在所有标本中Smad2基因的1～11外显子及其邻近内含子均未发现突变.结论 此瘢痕疙瘩家系的致病基因,可能不是Smad2基因.     

中国人恶性高热家系蓝尼定受体-1基因的筛查

目的 筛查中国人恶性高热(MH)家系的蓝尼定受体-1(RYR1)基因.方法 提取确诊为MH的先证者及家系其他成员外周血白细胞的基因组DNA,采用PCR扩增先证者RYR1基因的部分外显子,并进行直接测序,采用Fok Ⅰ限制酶分析验证先证者及家系其他成员基因突变情况.结果 先证者RYR1基因第6 724位碱基C突变为T(c.6724 C＞T),所编码第2 206位氨基酸由苏氨酸变为甲硫氨酸(p.T 2206 M),此突变在白种人已报道;先证者的4个子女中有2个为该错义突变携带者,为MH易感者.结论 中国人MH易感者携带与白种人MH易感者相同的RYR1基因突变.     

薄基底膜肾病并发局灶节段性肾小球硬化症一家系的COL4A3和COL4A4基因突变分析

目的 探讨薄基底膜肾病(TBMN)合并局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)的遗传学机制.方法 对一病理学诊断为TBMN合并FSGS患者及其家系的COL4A3和COL4A4基因突变,应用与COL4A3和COL4A4基因连锁的微卫星标记连锁分析方法进行分析.PCR扩增COIAA3和COL4A4全部98个外显子后,直接测序筛查突变.同时测序排除已为公认的FSGS相关基因NPHS1、NPHS2、WT1、TRPC6、ACTN4、CD2AP突变导致FSGS的可能.结果 微卫星标记连锁分析显示此家系与COL4A3和COL4A4基因连锁.直接测序在此家系中发现疾病患者COL4A4基因1214位的鸟嘌呤突变为腺嘌呤,导致Ⅳ型胶原α4链第405位甘氨酸突变为谷氨酸,并且发现COL4A3基因一多态性IVS1-4C＞T.此多态性随疾病分布,可能与致病相关.未发现FSGS相关基因的突变.结论 此家系是在TBMN的基础上发生FSGS.Ⅳ型胶原α4链突变及随疾病分布的基因多态性是否导致TBMN合并FSGS或使其易感性增加尚待更多家系进一步研究.     

色素沉着息肉综合征患者肿瘤LKB1基因杂合性缺失及其对肿瘤易感性的研究

目的 研究色素沉着息肉综合征（Ｐｅｕｔｚ－Ｊｅｇｈｅｒｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＰＪＳ）患者肿瘤的ＬＫＢ１基因杂合性缺失,探讨其肿瘤易感性机制。方法 以微分离技术分离６例与ＬＫＢ１连锁的色素沉着息肉综合征患者１４个肿瘤和相应正常组织的石蜡切片,提取ＤＮＡ,选择与ＬＫＢ１紧密连锁的Ｄ１９Ｓ８８６和Ｄ１９Ｓ５６５微卫星标志,经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增,以测序仪检测和分析其杂合性缺失。结果 ５７％的易感肿     

瘢痕疙瘩家系Fas基因死亡域突变的实验研究

目的 探讨瘢痕疙瘩家系标本中Fas基因（外显子7～9）有无突变以及Fas基因突变在瘢痕疙瘩形成中的意义。方法 实验标本来自南方医科大学南方医院整形外科2005年收集的A、B两个瘢痕疙瘩家系。采用PCR及基因测序技术，分别以A家系2例男性患者的瘢痕疙瘩组织为研究对象，以其周围正常皮肤及外周静脉血作为自身对照，其配偶的外周静脉血作为正常对照，并以B家系2例患者（母亲与儿子）的外周静脉血作为不同家系之间的对照，共检测10份标本中Fas基因外显子7～9基因序列。结果 10份瘢痕疙瘩家系标本Fas基因的7、8外显子均未发生突变，2例瘢痕疙瘩组织标本均在外显子9编码区的11bp和53bp两个位点上存在单个碱基基因突变或多态性改变。结论 瘢痕疙瘩Fas基因死亡域外显子9区段的基因结构异常，极有可能与Fas蛋白的功能改变有关，从而导致局部瘢痕疙瘩形成。     

迟发性家族性局灶节段肾小球硬化的足细胞分子基因突变研究

目的 了解迟发性家族性局灶节段肾小球硬化（FSGS）的足细胞分子基因致病突变特点。 方法 研究对象为上海瑞金医院肾脏科1997年9月至2007年10月收集的31个迟发性家族性FSGS家系。诊断标准：（1）成员年龄大于12岁；（2）1个家系中有2例或2例以上患者经肾活检证实为FSGS，或家系成员中有1例肾活检证实为FSGS，另有1例成员有蛋白尿或肾功能不全。100例健康人为对照组。外周血基因组DNA 经PCR扩增后直接对NPHS2、ACTN4、TRPC6基因行测序分析。 结果 发现ACTN4基因新错义突变L316P，该家系患病成员起病年龄平均（38.7±7.4）岁，肾功能损害进展相对缓慢，家系3例患病成员均为突变杂合子。发现TRPC6基因新杂合错义突变Q889K，该家系患者起病年龄平均（38.0±4.2）岁，肾功能损害进展也较缓慢，家系中临床表现存在个体差异，家系中3例患病成员均为突变杂合子。发现TRPC6静止突变G467G。所有家系中未发现NPHS2致病突变。健康对照组200条染色体亦未发现以上突变。 结论 在31例迟发性FSGS家系中发现2个家系携带致病相关突变：ACTN4新突变L316P和TRPC6新突变Q889K。在中国人群家族性迟发性FSGS中，ACTN4及TRPC6基因突变是致病原因之一，尚未发现NPHS2相关致病突变。     

11个Fabry病家系的α-半乳糖苷酶A活性及GLA基因检测

目的 建立Fabry病α-半乳糖苷酶A（α-gal A）酶活性及基因检测体系,并对基因型临床表型进行分析。方法 检测11个Fabry病家系先证者及家系成员外周血粒细胞α-gal A活性及GLA基因。酶活性检测采用底物荧光法,基因检测采用PCR直接测序法,并进行临床评估。结果 在11个Fabry病家系中检出9种GAL基因突变,包括5个错义突变（R301Q、I91T、G132R、F273L、D165Y）,2个无义突变（W236X、R342X）,1个单碱基缺失（1082delG）和1个大片段缺失（44 bp nt．1077）,其中4种为新突变（D165Y、F273L、1082delG、44 bp nt．1077）。11个家系中通过基因及酶活性检测,确诊男性半合子13例,女性杂合子12例。男性半合子α-gal A酶活性显著下降,女性杂合子α-gal A酶活性部分下降,1/4女性杂合子的α-gal A酶活性处于正常范围内。结论 确诊了11个Fabry病家系的GLA基因突变类型,并筛出所有家系中先证者以外的患者14例。外周血粒细胞α-gal A酶活性和GAL基因检测是筛查和诊断Fabry病的有效手段。     

典型和非典型遗传性非息肉病性大肠癌的研究

目的：研究中国人遗传非息肉病性大肠癌（HNPCC）的临床、病理及其hMLH1和hMSH2基因种系突变的特点。方法：随访13个典型HNPCC家系54例患者,并与19个非典型HNPCC家系的38例患者进行比较。对典型和非典型HNPCC各6个家系的先证者进行了hMLH1和hMSH2基因的PCR-SSCP检测,对异常者进行测序确定突变类型。结果：典型HNPCC盲肠、升结肠肿瘤占39.7％,横结肠肝区癌为5.0％;非典型组直肠癌占65.8％,2组差异无显著性意义。异时性多原发癌为11.5％,典型HNPCC患者的3、5、10年的生存率分别为64.0％、45.3％和31.2％,而非典型HNPCC组分别为54.4％、42.3％和26.8％,2组差异无显著性意义。12例先证者中,PCR-SSCP共检测到MLH111外显子（c3、c1）、hMLH1 12外显子（c8）、hMLH1 18外显子（c4）、hMSH2 11外显子（c13）、hMSH2 1外显子（c6）,hMSH2 13外显子（c11）和hMSH2 15外显子（c4）的异常条带。除MLH1 11外显子（c3）为内含子多态性外,6例（50％）发现7个外显子的突变,测序证实错义突变4处、插入突变7外,无义突变1处。结论：中国人的典型HNPCC是一种发病年龄早、近段结肠多见预后较好的大肠癌,而通过比较,发现中国非典型HNPCC与典型HNPCC非常相似。中国人的典型HNPCC家系的错配修复基因突变hMSH2多见,而非典型的hMLH1突变多见。     

四例脂蛋白肾病患者载脂蛋白E基因突变筛查

目的 通过对4例脂蛋白肾病患者及家系成员载脂蛋白E(apoE)基因的分析， 研究脂蛋白肾病的发病机制。 方法 调查患者家系情况，对其中2例患者的家系成员进行尿常规筛查及血肌酐、血脂和血清脂蛋白的检测。PCR法扩增4例患者apoE基因的外显子， DNA测序， 发现突变后，寻找限制性内切酶酶切位点。使用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法筛查正常对照及其家系成员。 结果 4例脂蛋白肾病患者中有2例携带杂合的apoE基因缺失突变 (142-144-0)，2例患者携带杂合的apoE点突变 (Arg25Cys)，2种突变均可见于尿液检查正常的亲属，并均表现为apoE升高。 结论 4例脂蛋白肾病的患者中发现两种apoE基因的突变，apoE Arg25Cys和apoE(142-144-0)。结合既往的研究结果，apoE(142-144-0)同时见于5例(本研究2例，前期研究3例)患者，为中国脂蛋白肾病患者常见的致病性基因突变。患者家系成员中的携带者可以不表现出肾脏病。     

黑斑息肉病及其合并恶变的临床分析

目的 总结黑斑息肉病及其合并恶变的临床特征。提高其诊断和治疗的水平。方法 对1982年2月至2001年8月间收治的28例黑斑息肉病（其中5例并发消化道恶性肿瘤）患的临床资料进行回顾性分析。结果 本组13例(46.4%)有明确的家族史，皮肤黏膜色素沉着（100%），腹痛（78.6%)。便血（57.1%)为主要临床表现，恶变（17.9%)。肠梗阻（67.9%)，消化道出血（57.1%)为主要并发症；恶变患确诊时的平均年龄30岁，22例予内镜高频电凝切除术，10例予息肉切除，恶变的5例予肠切除，恶变的病理组织学分型均为黏液腺癌。结论 黑斑息肉病患是典型的恶性肿瘤高发人群。发病年龄轻。病理分化程度较差。故应定期复查内镜，内镜高频电凝切除术是提高黑斑息肉病远期疗效的有效方法。     

常染色体隐性遗传Alport 综合征一家系COL4A3及COL4A4基因突变分析

目的 通过对有近亲婚配史的Alport综合征一家系Ⅳ型胶原α3和α4链的 COL4A3/COL4A4 基因分析，明确常染色体隐性遗传Alport综合征的基因突变,为该病的基因诊断和家系遗传咨询提供更为全面的理论基础｡ 方法 PCR扩增先证者DNA COL4A3/COL4A4 基因的共98个外显子，经直接测序，寻找突变位点，对有意义的突变经限制性内切酶AvaⅡ酶切在家系中分析验证｡ 结果 在该患者中共发现1个错义突变和10个序列变异｡其中在COL4A3 基因上发现一个位于42号外显子上的错义突变 G3725A,导致蛋白质Gly1242Asp的突变｡错义突变在患者中是纯合子，携带者中是杂合子，其他正常家系成员及筛查100条正常人染色体，未发现该突变｡10个序列变异为单核苷酸多态性改变｡ 结论 报道了一个国内较少见的常染色体隐性遗传Alport 综合征家系，同时经基因突变筛查发现Ⅳ型胶原α3链的一个新的致病性的基因突变｡     

Gene analysis，treatment,and follow-up of sixteen Chinese patients with Bartter syndrome

Objective To analyze the mutations of causal genes in sixteen Chinese patients with suspicious Bartter syndrome, and follow up their treatment results. Methods Mutations were identified by the next generation sequencing and the multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA). Clinical and biochemical features at the first presentation as well as follow-up results were reviewed. Results 15 different CLCNKB gene mutations were identified in sixteen patients with BS, including 11 novel ones. A novel missense mutation and a novel small deletion were found from SLC12A1 gene. A novel gross deletion was found in CLCNKA gene. A recurrent missense mutation was identified from BSND gene. The whole gene deletion mutation of CLCNKB gene was the most frequent mutation (32%), and the rate of gross deletion was up to 50 percent in this group of Chinese patients. The most common clinical manifestations were development retardation (15/16), polydipsia and polyuria (15/16). All of the patients were detected with hypokalemia, hypochloremia and metabolic alkalosis. Indomethacin treatment had significant improvement to the stature and weight restoration. Conclusion The present study has found 19 mutations, including 14 novel ones, which enriches the human gene mutation database (HGMD) and provides valuable references to the genetic counseling and diagnosis of Chinese population.