低温缺氧对新生鼠肺组织内皮素转换酶-1表达的影响

目的：研究低温缺氧因素对内皮素转换酶-1（endothelin converting enzyme-1,ECE-1）表达的影响,并探讨其在肺出血发生过程中的作用。方法：将日龄5-7 d的Wistar新生鼠,随机分为正常组（C）、缺氧组（H1）、低温组（H2）和低温缺氧组（H3）。C组置室温空气中,H1组给予缺氧干预（FiO25%~6%）6 h,H2组置低温环境中[温度（10±1）℃]6 h,H3组置低温缺氧环境中6 h（干预条件同上）。各组开胸取肺,观察大体改变,并行切片HE染色观察病理学改变,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）方法检测肺组织中ECE-1 mRNA的表达情况。结果：C组肺外观无明显改变;H1、H2、H3各组肺大体均有改变,包括肺水肿、点状肺出血和局灶性肺出血;ECE-1mRNA在H1、H2、H3中表达均增强,与C组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：低温、缺氧均可使新生鼠肺组织内ECE-1表达增强,ECE-1可能通过促进内皮素-1生成加速从而参与了低温缺氧所致肺出血的形成过程。     

葡萄糖对血管内皮细胞的内皮素转换酶-1b表达的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖损伤血管内皮细胞及其对内皮素转换酶-1b表达的影响。方法 将人脐静脉内皮细胞株ECV304分别培养在含0mmol／L(对照组)、5．5mmol／L(处理组1)、11．1mmol／L(处理组2)、22mmol／L(处理组3)、33mmol／L(处理组4)葡萄糖的培养基中。经葡萄糖培养24h后，噻唑蓝法测定细胞增殖活性，硝酸还原酶法测定培养上清液中一氧化氮浓度及比色法检测培养上清液中丙二醛的浓度，逆转录聚合酶链反应法检测细胞中内皮素转换酶-1b mRNA。结果 发现随着葡萄糖浓度的增加，内皮细胞增殖呈浓度依赖性抑制；一氧化氮浓度呈浓度依赖性增加：丙二醛浓度呈浓度依赖性增加；内皮素转换酶-1b mRNA的表达呈浓度依赖性增加。结论 高浓度葡萄糖可损伤内皮细胞并诱导血管内皮细胞的内皮素转换酶-1b mRNA表达，此变化可能与糖尿病患者高血糖致血管病变有关。     

正常SD大鼠心血管系统内皮素转换酶表达水平及意义

目的：探讨正常ＳＤ大鼠心脏及血管（动脉、静脉）内皮素转换酶（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ＥＣＥ）ｍＲＮＡ的分布。方法：半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测组织中的ＥＣＥ ｍＲＮＡ,同时以甘油醛－３－磷酸脱氢酶（Ｇｌｙｃｅｒ－ａｌｄｅｌｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＧＡＰＤＨ）作内参照。结果：正常ＳＤ大鼠心脏各部位及血管（动脉、静脉）ＥＣＥ ｍＲＮＡ的     

正常人及大鼠心脏内皮素转换酶的分布

目的:了解正常人和大鼠心脏各部分内皮素转换酶(Endothelin-conveerting en-zyme,ECE)的分布。方法:采用半定量RT-PCR法检测ECE mRNA表达,同时根据外源性的巨内皮素-1转变为内皮素-1的量判定ECE活性。结果:正常人心脏各部位心肌均存在ECE,ECEmRNA表达和活性的分布特点一致:心房显著高于心室,左、右心房间及左、右心室和室间隔间无显著性差异。大鼠的ECE mRNA表达和活性分布规律与人相似。结论:正常人和大鼠心脏各组分均存在ECE,且两者的分布规律相似。     

内皮素转换酶--内皮素与动脉粥样硬化关系的研究进展

内皮素(endothelin，ET)是目前所知的最强的长效缩血管活性多肽。主要由血管内皮细胞合成，其通过自分泌、旁分泌或内分泌等作用，在正常生理活动及某些疾病．尤其是血管病变有关疾病的发生、发展中起重要作用。内皮素转化酶(endothelin—converting enzyme，ECE)是ET生物合成的关键酶，在体内ET生物活性调节上起着极为重要的作用，     

人气道上皮细胞内皮素转换酶-1反义RNA构建

目的　研究内皮素转换酶 -1(ECE -1)反义RNA对人气道上皮细胞ECE -1表达的抑制作用。方法　构建ECE -1反义RNA表达载体 ,用脂质体 (FuGENG 6)转染人气道上皮细胞株 (16HBE) ,G418筛选得到稳定表达反义ECE -1RNA的细胞株 (anti -16HBE)。RT -PCR检测转染细胞ECE -1mRNA的表达 ,Westernbloting检测细胞ECE蛋白表达情况。结果　①经酶切及DNA测序鉴定证明 ,0 7kb的ECE -1DNA片段反向连接到带有萤光蛋白基因为报告基因的pEGPC1表达载体 ;荧光倒置显微镜显示大量细胞分泌荧光蛋白并能反复传代稳定表达 ;②anti -16HBE细胞ECEmRNA基因表达 (ECE/actinβ 0 0 12 5± 0 0 5 8)比 16HBE细胞 (ECE/actinβ 0 13 4 7± 0 0 67)明显低 (P <0 0 5 ) ;而Westerbloting亦显示anti -16HBE细胞ECE表达量比 16HBE细胞明显低。结论　ECE反义RNA表达载体可抑制人气道上皮细胞ECE -1表达与分泌     

糖尿病血管病变中内皮素转换酶及相关因子

内皮素转换酶(endothelinconvertingenzyme,ECE)是膜结合Ⅱ型金属蛋白酶,存在于各种细胞和组织中,是内皮素(endo thelin,ET)生物合成的关键酶,对体内ET生物活性的调控起着极其重要的作用。ET是长效缩血管活性多肽,主要由血管内皮细胞合成,通过自分泌、旁分泌等方式在正常生理活     

BigET-1类似物的内皮素转换酶活性的影响

目的探讨不同BigET-1类似物对内皮素转换酶(ECE)活性的影响、ECE对底物的作用机制,以寻找ECE 的抑制物.方法克隆人ECE的cDNA,将其亚克隆至表达载体,然后把该表达载体导入CHO-K1细胞内使其表达.将该ECE分别加入不同浓度的多种BigET-1类似物中,无BigET-1类似物的作为对照.ECE的活性则通过放免法直接测定ET-1的生成量而反映的.结果在多种BigET-1类似物中[Phe21]BigET-1(18-34)和[Ala31]BigET-1(18-34)以不同的形式抑制了ECE的活性,前者为竞争性抑制,其抑制常数Ki为(20.6±3.8)μmol/L;后者为非竞争性抑制,其抑制常数Ki为(35.6±8.1)μmol/L.结论 ECE能够识别其底物BigET-1的活性部位和C末端的2个区域,此2个区域也以不同的形式被该酶所识别.     

BigET-1类似物的内皮素转换酶活性的影响

目的探讨不同BigET-1类似物对内皮素转换酶(ECE)活性的影响、ECE对底物的作用机制,以寻找ECE 的抑制物.方法克隆人ECE的cDNA,将其亚克隆至表达载体,然后把该表达载体导入CHO-K1细胞内使其表达.将该ECE分别加入不同浓度的多种BigET-1类似物中,无BigET-1类似物的作为对照.ECE的活性则通过放免法直接测定ET-1的生成量而反映的.结果在多种BigET-1类似物中[Phe21]BigET-1(18-34)和[Ala31]BigET-1(18-34)以不同的形式抑制了ECE的活性,前者为竞争性抑制,其抑制常数Ki为(20.6±3.8)μmol/L;后者为非竞争性抑制,其抑制常数Ki为(35.6±8.1)μmol/L.结论 ECE能够识别其底物BigET-1的活性部位和C末端的2个区域,此2个区域也以不同的形式被该酶所识别.     

新药开发前沿动向2.——内皮素转换酶和内皮素转换酶抑制剂

内皮素转换酶（ＥＣＥ），是体内将ｂｉｇＥＴ转换成活性的ＥＴ的肽链内切酶。本文介绍了多肽性ＥＣＥ抑制剂和非多肽性ＥＣＥ抑制剂的研究进展，有可能为心血管系统等疾病开发出新药。     

Physiological relevance of hydrolysis of atrial natriuretic Peptide by endothelin-converting enzyme-1

Endothelin-converting enzyme-1 (ECE-1) is a membrane-bound metalloprotease that cleaves biologically inactive big endothelin-1 (ET-1) into active ET-1. ET-1 is involved in the cardiovascular homeostasis and the development of cardiovascular diseases including pulmonary arterial hypertension and heart failure. Atrial natriuretic peptide (ANP) is an endogenous hormone that is released from the heart in response to myocardial stretch and overload. ANP was shown to be hydrolyzed by neutral endopeptidase 24.11 (NEP) which shares important structural features with ECE-1. Previous in vitro studies using recombinant soluble ECE-1 suggested that ECE-1 cleaved several biologically active peptides including ANP in addition to big ET-1. However, physiological relevance of ANP-degrading activity by ECE-1 has stayed unclear. Here, we aimed to investigate whether endogenous ECE-1 is able to hydrolyze ANP using live-cell based assay and ECE-1-deficient mice. Chinese hamster ovary (CHO) cells, which lack detectable levels of ECE activity, degraded ANP in the medium efficiently when transfected with ECE-1 cDNA. ANP peptide contents in the E14-15 embryos were significantly higher in ECE-1+/- mice compared with ECE-1+/+ mice. These observations strongly suggest that ECE-1 is involved in the physiological degradation of ANP in vivo. Thus, pharmacological inhibition of ECE-1 may provide a novel strategy to treat various cardiovascular diseases by suppressing and potentiating the ET and ANP pathway, respectively.     

Expression of COX-2 and mPGES-1 in rabbit coronary atherosclerotic tissues and effects of atorvastatin

目的 通过观察环氧化酶Ⅱ(cyclooxygenase-2,COX-2)、诱导型前列腺素合成酶Ⅰ(membrane associated prostaglandin E-1,mPGES-1)在兔动脉粥样硬化(AS)斑块中的表达水平及阿伐他汀对其的干预作用.方法 取40只体质量为2.0～2.2 kg的3月龄健康雄性新西兰兔,随机分为正常对照组8只(普通饲料);高脂模型组32只(高胆固醇饲料).8周后将高脂模型组再分为模型组、阿伐他汀治疗Ⅰ组、Ⅱ组及Ⅲ组[剂量分别为2.5、5及10 mg/(kg·d),n=8].6周后取各组兔冠状动脉,检测其COX-2及mPGES-1的表达;同时,采血检测各组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)浓度.结果 模型组血清TC、TG、HDL-C、LDL-C及VLDL-C水平与正常对照组比较差异显著(P＜0.05);而阿伐他汀治疗Ⅱ组及Ⅲ组上述各项指标与模型组比较差异显著(P＜0.05);阿伐他汀治疗l组各项血脂水平较之模型组无显著差异(P＞0.05).与正常对照组比较,模型组动脉粥样硬化组织的COX-2及mPGES-1表达显著增高(P＜0.05);与模型组比较,治疗Ⅱ组、Ⅲ组动脉粥样硬化组织的COX-2及mPGES-1表达明显下调(P＜0.05).结论 阿伐他汀可能通过降低COX-2/mPGES-1表达、降低血脂,进而发挥其对AS的治疗作用.     

兔动脉粥样硬化组织COX-2、mPGES-1表达及阿伐他汀的影响

目的通过观察环氧化酶Ⅱ(cyclooxygenase-2,COX-2)、诱导型前列腺素合成酶Ⅰ(membrane associatedprostaglandin E-1,mPGES-1)在兔动脉粥样硬化(AS)斑块中的表达水平及阿伐他汀对其的干预作用。方法取40只体质量为2.0～2.2 kg的3月龄健康雄性新西兰兔,随机分为正常对照组8只(普通饲料);高脂模型组32只(高胆固醇饲料)。8周后将高脂模型组再分为模型组、阿伐他汀治疗Ⅰ组、Ⅱ组及Ⅲ组[剂量分别为2.5、5及10 mg/(kg.d),n=8]。6周后取各组兔冠状动脉,检测其COX-2及mPGES-1的表达;同时,采血检测各组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)浓度。结果模型组血清TC、TG、HDL-C、LDL-C及VLDL-C水平与正常对照组比较差异显著(P<0.05);而阿伐他汀治疗Ⅱ组及Ⅲ组上述各项指标与模型组比较差异显著(P<0.05);阿伐他汀治疗Ⅰ组各项血脂水平较之模型组无显著差异(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组动脉粥样硬化组织的COX-2及mPGES-1表达显著增高(P<0.05);与模型组比较,治疗Ⅱ组、Ⅲ组动脉粥样硬化组织的COX-2及mPGES-1表达明显下调(P<0.05)。结论阿伐他汀可能通过降低COX-2/mPGES-1表达、降低血脂,进而发挥其对AS的治疗作用。     

成纤维细胞生长因子受体1在大鼠各组织中的表达

目的研究成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)mRNA及蛋白在大鼠各组织中的表达。方法采用实时定量荧光聚合酶链式反应测大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉等组织中FGFR1 mRNA表达;采用酶联免疫吸附法及免疫组织化学法检测各组织中FGFR1蛋白的表达。结果 FGFR1 mRNA和蛋白在大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉中均有表达,主要分布于细胞膜。FGFR1 mRNA在大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉中表达量分别为2.623 0±0.524 9、1.003 0±0.077 2、6.755 0±0.278 4、1.613 0±0.320 1、4.833 0±0.421 5、6.123 0±0.348 7,FGFR1蛋白在以上各组织中的表达量分别为(10.670 0±1.197 0)、(0.356 0±0.105 5)、(0.860 0±0.163 9)、(5.152 0±0.801 4)、(0.186 0±0.046 7)、(2.110 0±0.161 9)μg·g-1,FGFR1 mRNA在各组织中的表达从高至低依次为心脏、肌肉、肾脏、脂肪、血管和肝脏;FGFR1蛋白在各组织中的表达量从高至低依次为脂肪、血管、肌肉、心脏、肝脏、肾脏。FGFR1 mRNA和蛋白在各组织中的表达量比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 FGFR1在大鼠各主要组织器官中均有表达,主要分布于细胞膜,且在各组织中的表达存在一定差异。     

细胞间黏附分子-1在尿毒症大鼠脑组织中的表达及意义

目的检测尿毒症大鼠脑组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达,探讨ICAM-1在尿毒症脑病发病中的作用机制。方法采用5/6肾大部分切除术建立尿毒症大鼠模型,并设立假手术组作为对照。S-P免疫组织化学方法测定ICAM-1蛋白在各组大鼠海马及皮质区的表达。同时进行组织切片HE染色观察脑组织病理学改变。结果 (1)与假手术组比较,模型组大鼠脑组织病理改变明显,可见海马及皮质神经元细胞水肿、固缩,脑微血管管壁增厚、管腔变窄闭塞。(2)免疫组化染色结果示,假手术组大鼠海马ICAM-1蛋白表达低或不表达,模型组大鼠海马区ICAM-1表达量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);而假手术组和模型组皮质区ICAM-1阳性血管数差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ICAM-1可能通过介导炎性细胞的浸润参与尿毒症脑病发病的病理生理过程。     

氯沙坦钾通过调控ACE2对慢性香烟烟雾诱导的大鼠肺动脉重构的治疗作用

目的：观察慢性香烟烟雾诱导大鼠肺动脉高压的形成,探讨氯沙坦钾通过调控血管紧张素转换酶2（angiotension con－verting enzyme,ACE2）的表达对大鼠肺动脉高压的治疗作用。方法：将健康雄性SD大鼠48只按析因设计分为对照组、对照+氯沙坦钾组、香烟暴露组和香烟暴露+氯沙坦钾组。香烟暴露组和香烟暴露+氯沙坦钾组大鼠在标准毒理香烟暴露箱中接受被动吸烟,对照组和对照+氯沙坦钾组同时在同种毒理箱中暴露于新鲜空气。氯沙坦钾给药采用每天腹腔内注射,正常对照组给等量生理盐水注射。建立香烟诱导的肺动脉高压大鼠模型后,用插入导管法检测右室收缩压（right ventricular systolic pressures,RVSP）;图像分析法观察肺结构变化;放射免疫法检测大鼠肺组织血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）水平;Western blot分析法检测ACE2的蛋白表达;进一步给予氯沙坦钾干预后检测其对大鼠肺动脉高压的治疗作用。结果：香烟暴露6个月后,香烟暴露组大鼠RVSP升高,肺动脉内膜增生、肺动脉壁明显增厚,管腔狭窄;与对照组相比,肺组织匀桨中AngⅡ含量较对照组明显升高（P＜0.05）;Western blot法检测肺组织ACE2的蛋白表达水平降低（P＜0.05）;给予氯沙坦钾干预后,香烟暴露+氯沙坦钾组大鼠肺小动脉重构程度改善,RVSP降低,肺组织AngⅡ含量减少,ACE2蛋白表达增加（P＜0.05）。结论：慢性香烟烟雾可诱导肺小动脉重构,甚至肺动脉高压,还可刺激肺组织AngⅡ水平升高和ACE2的蛋白表达减弱。氯沙坦钾通过促使ACE2蛋白表达增加而改善肺动脉高压病程中肺小动脉的重构。氯沙坦钾使ACE2表达升高可能是其对肺动脉高压病程中肺小动脉重构作用机制的一部分。     

血管内皮生长因子在子宫内膜异位症组织中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症发生发展中的作用.方法:采用免疫组织化学技术(LSAB法),分别检测VEGF在子宫内膜异位症(25例)和非异位症(25例)患者子宫内膜组织中的表达.结果:异位子宫内膜组织中VEGF的阳性表达率为72%,而非异位症的子宫内膜组织中无VEGF表达.结论:VEGF可能在子宫内膜异位症的发生、发展中起着重要作用.     

ORC1在大鼠血管平滑肌细胞增殖过程中的表达

目的检测不同增殖状态大鼠血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)中起始识别复合物1(origin recogn ition comp lex 1,ORC1)的表达。方法采用组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉原代培养VSMCs;提取细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定不同增殖状态VSMCs中ORC1 mRNA表达;采用免疫荧光、激光共聚焦显微镜检测不同增殖状态VSMCs中ORC1蛋白表达。结果经光镜、免疫荧光鉴定证实分离培养的细胞为VSMCs;处于静止状态的VSMCs无ORC1 mRNA表达,血清刺激6 h后ORC1 mRNA表达量明显增加,12~24 h达到高峰,继后逐渐减少;处于静止期的VSMCs无ORC1蛋白表达,处于增殖状态的VSMCs中有大量ORC1蛋白表达。结论ORC1可能在VSMCs增殖过程中起重要作用。     

5-脂氧化酶、白三烯在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的表达

目的探讨5-脂氧化酶（5-LO）、白三烯B4（LTB4）、白三烯C4（LTC4）在动脉粥样硬化大鼠主动脉及血液中的表达及其意义。方法选取正常雄性SD大鼠25只,随机分为正常对照组和动脉粥样硬化组。正常对照组普通饲料喂养,动脉粥样硬化组高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化大鼠模型,14周后处死大鼠,采血,全自动生化仪检测血脂,ELISA法检测血清及主动脉中5-脂氧化酶、白三烯B4、白三烯C4的含量。结果动脉粥样硬化组血脂较正常组明显升高（P〈0.01）,动脉粥样硬化组血液中及主动脉中5-脂氧化酶、白三烯B4、白三烯C4的含量较正常组升高（P〈0.05）。结论 5-LO、LTB4、LTC4在动脉粥样硬化大鼠主动脉及血液中表达均增高,5-LO/LTS通路可能是动脉粥样硬化潜在的干预靶点。     

血管黏附蛋白1在大鼠重症失血性休克中的表达

目的 观察重症失血性休克及复苏过程中大鼠小肠及血清中血管黏附蛋白1(VAP-1)的表达和活性变化,探讨抑制其功能对休克预后的影响.方法 将实验大鼠随机分为假手术组、休克组、休克复苏组、复苏对照组和复苏实验组,每组10只.建立重症失血性休克及复苏大鼠模型,采用蛋白质印迹和real-time RT-PCR法检测假手术组、休克组、休克复苏组休克前、休克1h、复苏1h时小肠组织中VAP-1表达及其编码基因含量,ELISA法检测血清中VAP-1含量及其活性.复苏实验组加用20 mg/kg 2-溴乙胺,复苏对照组加用1 mL/kg生理盐水,比较两组复苏后的血压、复苏24 h后小肠黏膜损伤情况(Chiu's评分)和小肠黏膜上皮细胞凋亡情况(TUNEL),并比较大鼠24 h生存率.结果 重症失血性休克组大鼠小肠组织VAP-1蛋白水平以及其编码基因mRNA水平、血清中VAP-1含量及其活性均较假手术组升高(均P＜0.05),复苏后上述各值均有所下降,但仍高于假手术组.相对于生理盐水对照组,休克复苏后1h和24 h使用20 mg/kg2-溴乙胺的复苏实验组大鼠血压升高(P值分别为0.010和0.039),且复苏实验组Chiu's评分及肠黏膜上皮细胞凋亡指数均低于生理盐水复苏对照组(P值分别为o.022和0.002),休克大鼠24 h生存率也高于复苏对照组(90％vs 60％).结论 重症失血性休克能使大鼠VAP-1的表达、活性增高,而液体复苏能减轻这种增高;抑制其活性能改善重症失血性休克及复苏后的低血压以及小肠黏膜的损伤和细胞凋亡,提高大鼠24 h生存率.