吉西他滨对舌鳞癌细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的:了解吉西他滨对舌鳞癌Tca8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)和碘化丙锭(PI)染色法,检测细胞增殖抑制率和细胞周期变化;采用TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性,PAGE-银染法显示端粒酶电泳图像。数据采用SPSS10.0中独立样本t检验法或单因素方差分析法进行统计学检验。结果:吉西他滨能够显著抑制Tca8113细胞增殖,并具有时间和浓度依赖性,5.0μg/ml组72h增殖抑制率均值为72.2%,高于0μg/ml组(F=161.854,P<0.05)。细胞周期检测显示:吉西他滨作用72h后,S期细胞比例下降,5.0μg/ml组均值为18.1%,低于0μg/ml组38.5%(t=5.801,P<0.05)。TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性(A值)随吉西他滨作用浓度增加和时间延长而下降:72h,0和5.0μg/ml组A值分别为1.32±0.12、0.28±0.02(F=811.208,P<0.05)。结论:吉西他滨能够有效抑制Tca8113细胞增殖,可以降低细胞端粒酶活性。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法反义寡核苷酸(AS-ONS)作用于Tca8113细胞;采用MTT法测定AS-ONS对Tca8113细胞的毒性;倒置相差显微镜观察细胞生长状况及形态学改变;透射电镜观察细胞超微结构;测定Tca8113细胞端粒酶活性。结果AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,其生长抑制随剂量的增加而增强,具有浓度依赖性;AS-ONS对于Tca8113细胞端粒酶活性抑制作用具有时间依赖性。不同浓度AS-ONS作用于Tca8113细胞,其细胞毒性作用较弱;在倒置显微镜下可见AS-ONS组随药物浓度增高,细胞生长出现抑制。透射电镜观察到AS-ONS组作用的细胞细胞膜破损,细胞核内染色质凝聚,边集,并穿过核膜溢入胞质中,胞质部分溶解,线粒体空胞变性;AS-ONS对端粒酶活性抑制效果非常明显。结论反义寡核苷酸AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,并具有剂量依赖性和时间依赖性;靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸可明显地抑制Tca8113细胞端粒酶活性,细胞增殖受到明显抑制。     

链球菌722制剂对人舌鳞癌Tca8113细胞直接作用的实验研究

本文作者报告了链球菌７２２制剂对人舌鳞状细胞癌Ｔｃａ８１１３细胞直接作用的观察，结果表明，虽然癌细胞在０．２～１．０ＫＥ／ｍｌ浓度持续作用下，丧失了集落形成的能力，镜下连续观察见细胞生长抑制；抽去７２２后细胞立即恢复原生长速度增殖。在荷人舌癌裸小鼠的瘤内、瘤周和腹腔内注射，由于裸小鼠先天缺乏Ｔ细胞免疫功能，均未见移植瘤缩小。提示：７２２对癌细胞的直接作用是暂时和可逆的，其抗癌作用主要是通过促进机体     

阿霉素诱导鸟嘌呤-四联体形成对Tca8113细胞端粒酶及细胞周期的影响

目的：探讨阿霉素影响端粒酶活性、端粒酶mRNA表达、细胞周期及周期蛋白表达的分子作用机制。方法：采用端粒重复序列扩增法（TRAP）、改良TRAP—G4法和RT—PCR法检测Tca8113细胞端粒酶活性变化、端粒酶hTERT和TP1mRNA水平；流式细胞仪分析细胞周期；采用Western印迹法测定CyclinB1和CyclinA表达水平。采用SPSS10．0软件包对数据进行t检验。结果：所有实验浓度阿霉素均可降低Tca8113细胞端粒酶活性．当端粒酶作用底物变为5＇-（GGGATr），GGGTT-3’时，端粒延伸反应完全受到抑制；5μg/ml阿霉素作用24h后，hTERT和TP1mRNA表达降低，CyclinB1表达明显增强，G2／M期细胞百分率显著下降。结论：阿霉素抑制端粒酶活性、降低端粒酶表达、影响细胞周期及CyclinB1表达的作用机制与其诱导鸟嘌呤-四联体形成有关。     

热休克诱导人舌鳞癌Tca8113细胞HSP70表达的研究

目的:研究热休克恢复期人舌癌Tca8113细胞热休克蛋白(HSP70)的表达和热动力学变化,为人舌鳞癌的免疫治疗提供理论基础。方法:通过人舌鳞癌细胞Tca8113在43℃加热30min,运用免疫组化和流式细胞技术检测在各时间点细胞HSP70的表达,各时间点再次以相同条件加热后用MTT法测各组细胞活性,以期了解Tca8113细胞HSP70表达的动态变化。结果:热休克后恢复2h即出现HSP70的表达,8~12h达到高峰,之后逐渐减少,48h后基本恢复至加热2h后的水平,热休克后恢复12h细胞活性最强。结论:HSP70的迅速表达与缓慢降解对维持Tca8113细胞的生理功能有重要作用。为进一步研究HSP70在人舌癌热疗联合免疫治疗初步提供了理论依据。     

EGCG对舌鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的EGCG(0、10、20、40、80mg/L)对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用流式细胞术及DAPI荧光染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果:CCK-8法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果显示,经10mg/L EGCG处理的Tca8113细胞凋亡率还不能认为与对照组有区别,其余EGCG处理组细胞凋亡率均高于对照组并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);DAPI染色在免疫荧光显微镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体等。结论:EGCG对Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用,且呈现时间及浓度依赖性。     

阿霉素作为G-四联体配体对Tca8113细胞影响的研究

目的：观察阿霉素作为G-四联体配体对Tca8113细胞端粒酶活性、增殖及凋亡的影响，探讨G-四联体结构生物学功能。方法：通过TRAP法和改良TRAP—G4法，分析阿霉素对Ra8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的影响。研究分2个实验组进行，用药组培养液含2．5μmol几阿霉素，非用药组培养液加相应体积生理盐水，细胞培养1、3、5和7d后．利用TRAP法检测其端粒酶活性；流式细胞仪分析其细胞周期和凋亡率，并对2实验组间凋亡率进行t检验；Giemsa染色和SA—β—gal染色观察凋亡和衰老细胞。结果：TRAP和改良TRAP—G4检测表明，阿霉素通过诱导G4形成抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应。在2．5μmol／L阿霉素作用下，Tca8113细胞端粒酶活性在3d后出现降低：用药组细胞增殖受抑制，停滞于G0—G1期和S期；所有观察期内2实验组间细胞凋亡率差异有统计学意义（P〈0．05）：用药组出现衰老和凋亡细胞。结论：阿霉素诱导G-四联体形成，可抑制Tca8113细胞端粒酶活性，降低其增殖活性．促进衰老和凋亡发生。     

人舌鳞癌Tca8113细胞荷瘤裸鼠体内诱导耐药性的实验研究

目的：探讨人舌鳞癌细胞荷瘤裸鼠体内化疗药物持续刺激状态下,肿瘤的生长及其耐药性的变化情况。方法：采用BALB／c-nu／nu裸鼠皮下接种Tca8113细胞悬液,待裸鼠成瘤后,采用卡铂（Carboplatin,CBP）进行小剂量长期暴露法诱导肿瘤耐药,以观察体内肿瘤耐药性的产生、肿瘤的生长变化及其各种耐药蛋白的表达。用免疫组化法检测部分耐药蛋白表达情况,RT-PCR检测相关耐药基因表达情况。结果：诱导后Tca8113／卡铂在免疫组化和RT-PCR检测中,MRP、GST-π等表达升高,TopoⅡ表达降低。结论：利用荷瘤裸鼠体内给药诱导肿瘤耐药性的产生可以更好地模拟临床舌鳞癌MDR的发生发展过程及其生物学特性,为多药耐药性及其逆转的进一步研究提供了一个有价值的研究平台。     

超声加热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的机制探讨

目的:通过检测超声加热处理后Tca8113细胞凋亡的主要相关参数变化,探讨超声加热诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:应用超声热辐射系统,分别对Tca8113细胞进行不同温度、时间的加热处理,流式细胞仪连续检测42℃超声加热10min后Tca8113细胞早期凋亡和继发性坏死的动态变化,以及不同处理组的线粒体跨膜电位(ΔΨm)、Caspase-3活性的变化。采用SAS6.12统计软件包进行方差分析,比较各组均数间的显著性水平。结果:42℃超声加热(10min)Tca8113细胞后1h,即检测到细胞早期凋亡,6～8h达到高峰,以后迅速下降,12h后保持在较低水平,细胞的继发性坏死伴随着凋亡出现,在高水平保持一段时间,10h后开始下降。其与早期凋亡呈正相关(r=0.7909,P=0.0064);无论温度梯度(38℃～44℃,10min)还是时间梯度(42℃,10min～60min)的超声加热,均能导致ΔΨm显著降低(P<0.01)、Caspase-3活性显著升高(P<0.01),且两者具有显著相关性(温度梯度组r=0.89189,P=0.0029,时间梯度组r=0.9679,P=0.0003)。结论:超声加热能诱导Tca8113细胞凋亡,导致ΔΨm降低、Caspase-3活性水平升高。说明超声加热通过线粒体-Caspase途径,诱导Tca8113细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的研究

目的探讨维生素E琥珀酸酯（VES）对人舌鳞癌Tca8113细胞的凋亡诱导作用及其可能的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测VES对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用;应用流式细胞仪分析不同质量浓度VES处理后舌鳞癌细胞的凋亡率;Fas中和抗体进行阻断实验;以细胞免疫化学法和流式细胞仪检测VES处理后肿瘤细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达的变化。结果不同质量浓度的VES处理后,舌鳞癌细胞的生长受到明显的抑制,肿瘤细胞的凋亡率显著上升,呈现时间依赖性和剂量依赖性;Fas中和抗体进行阻断后,细胞凋亡率显著下降;VES处理后细胞Fas蛋白表达增强;流式细胞仪检测细胞表面Fas平均荧光强度也显著升高。结论VES对舌鳞癌细胞具有凋亡诱导作用,其作用机制与肿瘤细胞表面Fas蛋白表达的上调有关。     

阿霉素诱导鸟嘌呤-四链体形成对Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的影响

目的探讨阿霉素诱导端粒重复序列核苷酸形成G4及其抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的功能作用。方法通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移实验来分析不同质量浓度的阿霉素对d（TTAGGG）3、d（TTAGGG）4和d（TTAGGG）5迁移速度的影响以及对d（TTAGGG）4、d（TTAGAG）4、d（TTAGGG）5和d（TTAGGGT）电泳的影响;用二甲基硫酸盐（DMS）甲基化保护实验分析d（TTAGGG）4和d（TTAGAG）4中G的甲基化作用;利用经典端粒重复序列扩增法（TRAP）和改良TRAP- G4检测法分析阿霉素抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的特点。结果质量浓度为5.00 μg/mL阿霉素可使部分线性d（TTAGGG）4和d（TTAGGG）5转变成有二级结构的复合物,呈现为新的高速迁移条带。质量浓度为1.25 μg/mL阿霉素可保护端粒重复序列中G免遭甲基化作用。质量浓度为2.50、1.25 μg/mL阿霉素在TRAP检测中可部分抑制端粒延伸反应,而在TRAP- G4检测中可完全抑制端粒延伸反应。结论阿霉素可通过诱导端粒重复序列形成分子内G4结构抑制端粒酶介导的端粒延伸反应。     

羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌细胞的抑制作用及端粒酶活性的影响

目的 :观察体外羟基喜树碱、平阳霉素单独和联合应用对人舌癌Tca 8113细胞的生长抑制及端粒酶活性的影响。方法 :采用MTT法、软琼脂克隆形成法、透射电镜观察法、流式细胞术 ,TRAP PCR ELISA法研究。结果 :羟基喜树碱、平阳霉素单用及合用对Tca 8113细胞均有很好的抑制作用 ,且以合用效果最强 ,羟基喜树碱、平阳霉素使Tca 8113细胞的克隆形成率降低 ,超微结构、细胞周期发生明显变化 ,抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性。结论 :羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌Tca 8113细胞在体外有很好的抑制作用且联合应用效果更佳。     

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。     

表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞Tca8113的抑制增殖作用

目的:了解表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞的抑制增殖作用。方法:应用不同浓度(0、50、100、200nmol/L)的AG1487处理培养的舌鳞癌细胞Tca8113,采用MTT方法和流式细胞技术测定AG1487对细胞生长曲线和细胞周期分布的影响。结果:经不同浓度AG1487处理的肿瘤细胞,随抑制剂浓度的增加,其生长曲线逐渐向下移动,即随浓度的增加,抑制细胞增殖的作用逐渐增强。同时,AG1487使细胞周期的分布发生改变,G1期细胞显著增加,而S期细胞则明显减少;AG1487对细胞周期的影响具有明显的时间和剂量依赖关系。结论:表皮生长因子受体抑制剂AG1487可对舌鳞癌细胞产生明显的增殖抑制作用。     

醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞生长及人类错配修复基因1甲基化水平的影响

目的 研究醋酸棉酚（ GAA）对人舌鳞癌 Tca8113细胞增殖的影响和对人类错配修复基因 1（hMLH1）甲基化水平的影响,初步探讨其抗肿瘤机理。方法 应用 MTT法检测 GAA对Tca8113细胞生长的影响;应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应（nMSP）检测 Tca8113细胞在 GAA作用 48、72 h后hMLH1基因甲基化状态的改变情况。结果 MTT检测显示,作用 24~72 h,GAA对Tca8113细胞生长具有抑制作用;nMSP检测显示,以终浓度 30、15 μmol•L-1的GAA作用于 Tca8113细胞 48、72 h后, hMLH1基因甲基化条带的平均光度值降低,与未经药物处理组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 GAA能抑制舌鳞癌细胞的生长,并能降低 hMLH1基因的甲基化水平。 GAA去甲基化作用可能是其具有抗肿瘤作用的机制之一。     

反义hTR对舌鳞癌细胞系Tca8113作用的初步探讨

目的：观察反义hTR对人舌鳞癌细胞系Tca8113的影响及其与细胞周期和凋亡的关系。方法：脂质体介导真核表达载体PBBS212－hTR转染Tca8113细胞系，运用流式细胞仪技术观察细胞周期的改变和凋亡，并结合免疫组化和原位杂交技术分析转染前后某些基因表达的变化，结果：转染反义hTR的Tca8113细胞克隆生长减缓，群体倍增时间较未转染和转染空质粒组明显延长，流式细胞仪显示转染细胞PI指数下降，有亚二倍体凋亡峰出现，转染后细胞p21基因表达水平显著增高，裸鼠移植瘤实验显示转染后的Tca8113致瘤性减弱，结论：反义hTR可引起细胞通过细胞周期关卡受阻而显著抑制Tca8113细胞的生长，同时激活了某些凋亡程序而导致细胞凋亡，端粒酶可能是肿瘤基因治疗的理想靶点。     

转染BMP-II型突变受体基因对Tca8113舌癌细胞增殖的影响

目的：明确转染BMP-Ⅱ型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用，以进一步探讨BMPs对口腔上皮恶变的作用机制。方法：用FuGENll6(Transfection Reagent Kit)真核转染试剂盒将携带BMP-Ⅱ型突变受体cDNA的真核表达载体转染Tca8113细胞(命名为Tca8113ZR细胞)；然后对Tca8113ZR和Tca8113细胞分别进行生长曲线、MTT检测，FCM分析，BrdU标记检测细胞的增殖活性及DNA合成；以观察转染前后舌癌细胞生物学性状的变化。结果：Tca8113ZR细胞和Tca8113细胞相比，形态未见明显变化，但是细胞的增殖活力明显下降。结论：BMPs信号表达水平的改变在口腔上皮组织的恶变过程中起着十分重要的调控作用。     

c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用

我们采用c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染的方法，通过一系列实验，观察对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的抑制作用。     

TGF-β1/iNOS在Tca8113细胞系中的表达

目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究TGF-β1和iNOS在舌鳞癌浸润转移中的作用提供实验依据。方法:应用SP免疫组化方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中TGF-β1和iNOS的蛋白、mRNA表达情况进行检测。结果:SP免疫组化检测到TGF-β1/iNOS蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞胞浆中呈强阳性表达,RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中TGF-β1/iNOS的mRNA条带明显。结论:TGF-β1/iNOS的蛋白和mRNA在舌鳞癌Tca8113细胞株中同时呈高水平表达。     

EGFR 抑制剂对舌鳞癌多药耐药细胞 Tca8113／CBP耐药蛋白的影响

目的：探讨表皮生长因子受体（ EGFR）抑制剂在舌鳞癌多药耐药中的作用。方法：免疫细胞化学技术和Western blot方法检测舌癌细胞系Tca8113及多药耐药细胞系Tca8113／CBP EGFR的表达,Western blot检测EGFR受到抑制后舌癌多药耐药细胞Tca8113／CBP耐药蛋白MRP,GTS-π的表达。结果：细胞系Tca8113和Tca8113／CBP均有EGFR的表达（P＞0．05）,EGFR受到抑制后细胞Tca8113／CBP的多药耐药蛋白MRP,GST-π的表达均下降（P＜0．05）。结论：抑制EGFR可下调舌癌多药耐药细胞耐药蛋白的表达。