姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡作用研究

目的 探讨姜黄素对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡作用.方法 不同浓度的姜黄素处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,并行凋亡相关蛋白Fas、P53、Bcl-2的免疫组化测定.结果 在10、30、50、70 μmol/L浓度范围内,姜黄素可剂量依赖性抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的作用.30、40、50 μmol/L三个不同浓度姜黄素处理组的凋亡指数与对照组比较差异有统计学意义(P ＜ 0.05),细胞凋亡率与药物浓度正相关.30、40、50 μmol/L不同浓度姜黄素处理组Fas、P53、Bcl-2凋亡细胞阳性率与对照组比较差异具有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 姜黄素可显著抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈剂量依赖关系.     

阿霉素作为G-四联体配体对Tca8113细胞影响的研究

目的：观察阿霉素作为G-四联体配体对Tca8113细胞端粒酶活性、增殖及凋亡的影响，探讨G-四联体结构生物学功能。方法：通过TRAP法和改良TRAP—G4法，分析阿霉素对Ra8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的影响。研究分2个实验组进行，用药组培养液含2．5μmol几阿霉素，非用药组培养液加相应体积生理盐水，细胞培养1、3、5和7d后．利用TRAP法检测其端粒酶活性；流式细胞仪分析其细胞周期和凋亡率，并对2实验组间凋亡率进行t检验；Giemsa染色和SA—β—gal染色观察凋亡和衰老细胞。结果：TRAP和改良TRAP—G4检测表明，阿霉素通过诱导G4形成抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应。在2．5μmol／L阿霉素作用下，Tca8113细胞端粒酶活性在3d后出现降低：用药组细胞增殖受抑制，停滞于G0—G1期和S期；所有观察期内2实验组间细胞凋亡率差异有统计学意义（P〈0．05）：用药组出现衰老和凋亡细胞。结论：阿霉素诱导G-四联体形成，可抑制Tca8113细胞端粒酶活性，降低其增殖活性．促进衰老和凋亡发生。     

塞来昔布增强博来霉素对人舌鳞状细胞癌Tca8113杀伤作用的研究

目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)增强博来霉素(bleomycin)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法 用含不同浓度的塞来昔布和博来霉素培养液培养Tca8113细胞24、48、72 h后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率,并采用金正钧法判断药物合用的相互作用;流式细胞术检测Tca8113细胞周期进程和诱导细胞凋亡的作用.结果 小剂量的塞来昔布(10 μmol/L)可增强博来霉素对Tca8113细胞的生长抑制作用,增强博来霉素阻滞Tca8113细胞周期进程的作用,其阻滞G1期细胞进入S期的作用最为明显,导致G0、G1细胞的数量增加[(60.93±0.32)%],S期[(30.57±0.78)%]、G2及M期[(8.50±0.50)%]细胞减少,同时,细胞凋亡率[(1.87±0.11)%]显著提高.结论 小剂量的塞来昔布可增强博来霉素对Tca8113细胞的毒性作用,阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡.     

NS-398对Tca8113细胞体外增殖的抑制作用

目的:探讨环氧合酶-2抑制剂NS-398对Tca8113细胞的生长抑制作用。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法,观察NS-398对Tca8113细胞生长的抑制作用,检测NS-398与Tca8113细胞间的时-效关系和量-效关系;通过流式细胞仪(FCM)研究NS-398对Tca8113细胞周期的影响和作用,采用SAS8.1统计软件包进行数据处理,均数比较采用t检验和重复测量方差分析。结果:含0、25、50、75、100、125、150、200μmol/LNS-398的Tca8113细胞培养液,在分别培养48、72、96、120h后,随着作用时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用也增强。NS-398在浓度150μmol/L作用96h后,抑制作用明显(药物浓度:P<0.05;时间:P<0.001),NS-398可引起Tca8113细胞G0/G1期细胞的大量增加,S期和G2/M期细胞比例数减少,阻滞细胞生长于G0/G1期(P<0.001)。结论:NS-398可抑制Tca8113细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;这种作用可能与阻止细胞周期进展有关,NS-398可能在口腔鳞癌治疗中发挥重要作用。     

NS-398诱导舌鳞癌细胞凋亡及其对E2F-1蛋白表达的影响

目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及其对细胞核转录因子E2F-1蛋白表达的影响。方法NS-398作用于舌癌Tca8113细胞,噻唑蓝法检测细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞周期及其凋亡率的改变,放射免疫法测定细胞上清液中前列腺素E2(PGE2)含量,Western blot法检测细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达的变化。结果NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强。NS-398(50μmol/L)可引起Tca8113细胞G0/G1期细胞的逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例数减少,并随着时间的延长细胞上清液中PGE2含量降低,细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达下调。结论NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,阻断细胞生长停滞于G0/G1期;该效应可能与其诱导细胞凋亡和降低细胞产生前列腺素E2有关;E2F-1蛋白可能参与了这些过程。     

白藜芦醇对人舌癌细胞Tca增殖及凋亡影响的研究

目的探讨白藜芦醇对人舌癌细胞Tca的增殖及凋亡影响。方法应用MTT比色法检测白藜芦醇对Tca细胞体外生长的抑制作用;平板克隆检测白藜芦醇处理前后Tca细胞的克隆形成能力;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;Hoechst33258荧光染料染色,显示凋亡细胞形态。结果MTT实验观察,白藜芦醇对Tca细胞生长有抑制作用,随浓度升高和时间延长,作用增强,呈剂量-时间效应关系;白藜芦醇作用Tca细胞48 h和72 h后,半数细胞抑制作用所需浓度约为(IC50)100μmol/L和75μmol/L。白藜芦醇(75μmol/L)处理后,细胞的克隆形成能力明显下降。白藜芦醇(100μmol/L)作用48 h后使G1期细胞的比例增加;Hoechst33258染色,可见细胞呈明显的凋亡特征。结论白藜芦醇可抑制人舌癌细胞Tca增殖,使细胞周期呈G1阻滞并可诱导细胞发生凋亡。     

丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及p27Kip1蛋白表达的影响

目的 通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖影响及p27Kip1蛋白表达改变,探讨丁酸钠调控人口腔癌细胞增殖的分子机制.方法 人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞经不同浓度丁酸钠[0 mmol/L(空白对照组),2、4、6、8 mmol/L(4个实验组)]作用后,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化检测p27Kip1蛋白的表达.结果 丁酸钠能够呈时间剂量依赖性抑制Tca8113细胞的增殖,丁酸钠处理后的Tca8113细胞出现了凋亡形态变化;细胞周期阻滞于G0～G1期,丁酸钠2 mmol/L组G0～G1期达(63.2±2.4)%,4 mmol/L组G0～G1期达(77.2±3.8)%,空白对照组G0～G1期达(48.1±2.4)%,P＜0.05;p27Kip1蛋白表达水平明显上调.结论 丁酸钠能够抑制人口腔癌细胞的增殖,该作用可能与p27KiP1蛋白表达上调及G0～G1期细胞周期阻滞有关.     

β-榄香烯对Tca8113细胞株诱导分化的研究

目的：研究β-榄香烯对Tca8113（口腔舌鳞癌细胞株）细胞株诱导调亡机制。方法：应用MTT比色法和流式细胞仪测定细胞周期的变化，并应用电子显微镜技术观察诱导分化后的亚细胞结构。结果：β-榄香烯对Tca8113细胞株有明显的抑制作用。流式细胞仪分析不同的药物浓度、不同的作用时间细胞凋亡的发生均有显著意义，Gl期细胞减少，S期细胞增多。亚细胞结构细胞线粒体肿胀变性，核固缩。结论：β-榄香烯能抑制Tca8113细胞增殖，促进细胞凋亡，阻止S期细胞过程。     

紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的作用

目的：研究紫草素对体外培养的口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察紫草素对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用光镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术及流式细胞术观察紫草素对Tca8113细胞凋亡的影响。采用SPSS12．0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果：MTr检测显示．紫草素在0-50μmol／L浓度范围内。对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性（P〈0．01）．电镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体,DNA琼脂糖凝胶电泳观察到典型梯状条带,流式细胞仪结果显示亚G1期细胞明显增加,各组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．01）。结论：紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用．可用于口腔鳞癌化学防治的新尝试。     

阿霉素诱导鸟嘌呤-四联体形成对Tca8113细胞端粒酶及细胞周期的影响

目的：探讨阿霉素影响端粒酶活性、端粒酶mRNA表达、细胞周期及周期蛋白表达的分子作用机制。方法：采用端粒重复序列扩增法（TRAP）、改良TRAP—G4法和RT—PCR法检测Tca8113细胞端粒酶活性变化、端粒酶hTERT和TP1mRNA水平；流式细胞仪分析细胞周期；采用Western印迹法测定CyclinB1和CyclinA表达水平。采用SPSS10．0软件包对数据进行t检验。结果：所有实验浓度阿霉素均可降低Tca8113细胞端粒酶活性．当端粒酶作用底物变为5＇-（GGGATr），GGGTT-3’时，端粒延伸反应完全受到抑制；5μg/ml阿霉素作用24h后，hTERT和TP1mRNA表达降低，CyclinB1表达明显增强，G2／M期细胞百分率显著下降。结论：阿霉素抑制端粒酶活性、降低端粒酶表达、影响细胞周期及CyclinB1表达的作用机制与其诱导鸟嘌呤-四联体形成有关。     

阿霉素对Tca8113细胞端粒酶活性及端粒结合蛋白表达的影响

目的 观察阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡对端粒酶活性及端粒结合蛋白(TRF)表达的影响;探讨端粒酶和TRF在细胞凋亡途径中的作用机制.方法 通过Tca8113细胞MTT实验,确定后续实验中阿霉素作用浓度.将Tca8113培养细胞分成用药组和对照组,培养5 d和7 d后,利用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用Giemsa 染色进行凋亡形态学观察;通过端粒酶酶联免疫吸附实验对端粒酶活性进行定性和定量分析;利用免疫组化和免疫荧光标记法分别检测TRF表达和表达水平.结果 5 μg/ml阿霉素作为后续研究的作用浓度.在5 μg/ml阿霉素作用5 d和7 d后,用药组细胞凋亡率分别为(36.4±1.7)%和(54.2±2.1)%,与对照组比较差异有统计学意义(P ＜ 0.05);Giemsa 染色显示用药组出现明显凋亡细胞;TRAP检测结果表明,用药组端粒酶活性降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);端粒酶活性随阿霉素作用时间延长而降低(P ＜ 0.05);用药组与对照组细胞均有TRF表达,在细胞核内呈均匀蓝染状态,而在诱导凋亡细胞核和凋亡小体内呈点状弥散分布,但两组间TRF表达水平差异无统计学意义(P ＞ 0.05).结论 阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡使其细胞内端粒酶活性受抑制,TRF表达特点发生改变,但未改变TRF表达水平.     

阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡对端粒酶及端粒结合蛋白的影响

目的 探讨端粒酶和端粒结合蛋白（TRF）在细胞凋亡过程中的作用机制。方法 甲基噻唑四唑法（MTT）检测阿霉素对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用。通过姬姆萨染色和流式细胞仪观察和检测5mg／L阿霉素诱导凋亡情况；利用酶联免疫吸附实验分析端粒酶活性；采用免疫组化和免疫荧光标记法观察和检测TRF表达及其水平。结果 5mg／L阿霉素处理Tca8113细胞5d和7d后，出现明显凋亡；端粒酶活性降低呈时间依赖性；TRF在细胞核内表达，其表达水平无统计学意义（P〉0．05）。结论 阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡可降低端粒酶活性，但不改变TRF表达水平。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法反义寡核苷酸(AS-ONS)作用于Tca8113细胞;采用MTT法测定AS-ONS对Tca8113细胞的毒性;倒置相差显微镜观察细胞生长状况及形态学改变;透射电镜观察细胞超微结构;测定Tca8113细胞端粒酶活性。结果AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,其生长抑制随剂量的增加而增强,具有浓度依赖性;AS-ONS对于Tca8113细胞端粒酶活性抑制作用具有时间依赖性。不同浓度AS-ONS作用于Tca8113细胞,其细胞毒性作用较弱;在倒置显微镜下可见AS-ONS组随药物浓度增高,细胞生长出现抑制。透射电镜观察到AS-ONS组作用的细胞细胞膜破损,细胞核内染色质凝聚,边集,并穿过核膜溢入胞质中,胞质部分溶解,线粒体空胞变性;AS-ONS对端粒酶活性抑制效果非常明显。结论反义寡核苷酸AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,并具有剂量依赖性和时间依赖性;靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸可明显地抑制Tca8113细胞端粒酶活性,细胞增殖受到明显抑制。     

β-catenin表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移的影响

目的：探讨β-catenin表达下调对Tca8113细胞增殖、周期、凋亡和迁移的影响。方法：用脂质体2000将β-catenin siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,Western blotting技术检测转染后Tca8113细胞中β-catenin蛋白的表达,CCK-8试剂分析转染后对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测下调β-catenin表达对Tca8113细胞周期及细胞凋亡的影响;Boyden chamber实验分析β-catenin表达下调对Tca8113细胞迁移能力的影响。结果：β-catenin siRNA能明显下调Tca8113细胞中β-catenin蛋白的表达,显著抑制Tca8113细胞的增殖。β-catenin siRNA组中的G0/G1期的细胞百分比明显高于未处理组和对照siRNA组。此外,β-catenin siRNA组中细胞凋亡的比率明显高于未处理组和对照siRNA组,其凋亡变化与caspase-3和bax蛋白表达的上调和bcl-2表达的下降密切相关。与未处理组和对照siRNA组相比,β-catenin siRNA组中Tca8113细胞的迁移能力显著下降,组间具有统计学意义。结论：β-catenin在舌鳞状细胞癌的发生发展中可能具有重要的作用。     

EGCG对舌鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的EGCG(0、10、20、40、80mg/L)对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用流式细胞术及DAPI荧光染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果:CCK-8法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果显示,经10mg/L EGCG处理的Tca8113细胞凋亡率还不能认为与对照组有区别,其余EGCG处理组细胞凋亡率均高于对照组并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);DAPI染色在免疫荧光显微镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体等。结论:EGCG对Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用,且呈现时间及浓度依赖性。     

岩黄连总碱抑制Tca8113细胞及其端粒酶活性的实验研究

目的:研究中草药岩黄连总碱(yanhuanglian total alkalions,YHL-TA)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响及其抗癌机制。方法:采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测YHL-TA浓度分别为0.200、0.100、0.050、0.025g/L和空白对照组Tca-8113细胞增殖的情况,同时用以PCR为基础的TRAP-ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性的改变。所有数据采用SPSS13.0进行统计学分析。结果:岩黄连总碱能明显抑制Tca8113细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性。72h时,0.200、0.100、0.050、0.025g/L岩黄连总碱组细胞增殖抑制率分别为(66.0±4.0)%、(57.5±3.2)%、(45.3±3.3)%、(37.9±5.5)%。72h时,0.100、0.050g/L组端粒酶活性低于空白对照组(P<0.05)。结论:岩黄连总碱可以明显抑制Tca8113细胞株的增殖及其端粒酶活性,抑制端粒酶活性可能是岩黄连总碱抗舌癌的机制之一。     

姜黄素和Dickkopf-1联用对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响研究

目的:探讨姜黄素和分泌蛋白DKK1(Dickkopf-1)联用对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:CCK8实验检测0、5、10、20、40、80μmol/L的姜黄素作用于人口腔鳞状细胞癌CAL27、Tca8113、SCC-4细胞24、48、72 h的细胞增殖情况,计算IC50值;实验分为对照组、姜黄素组、Dickkopf-1组、姜黄素+Dickkopf-1组,各组细胞处理48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、CyclinD1蛋白表达。结果:不同浓度的姜黄素作用于CAL27、SCC-4、Tca8113细胞24、48、72 h后的细胞抑制率均显著高于0h时的细胞抑制率,且随着时间延长及浓度增加细胞抑制率增加(P<0.01),根据IC50值选择Tca8113细胞及30μmol/L的姜黄素作为后续研究。结论:姜黄素和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂Dickkopf-1均能抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和促进凋亡,两者联用的效果强于单独用姜黄素或Dickkopf-1。     

TGF-β_1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖和凋亡影响的研究

目的　研究TGF β1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖与凋亡的影响。方法　以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113诱导产生的耐药细胞系Tca8113/CDDP为研究对象。应用ELISA法检测转化生长因子TGF β1在Tca8113/CDDP细胞中的表达水平。另在体外用不同浓度的TGF β1对Tca8113/CDDP细胞进行作用 ,通过吉姆萨(Giemsa)染色、MTT比色法和DNA琼脂糖凝胶电泳 ,观察Tca8113/CDDP细胞的凋亡情况。结果　ELISA检测可知Tca8113/CDDP细胞内和无血清培养液中的TGF β1的表达水平均低于Tca8113(P <0 .0 1)。体外诱导凋亡实验 ,TGF β1的浓度高于 0 .1ng/ml时 ,Tca8113/CDDP即有显著的凋亡特征出现 ,细胞皱缩脱落。Geimsa染色可见凋亡小体形成 ;MTT法显示Tca8113/CDDP细胞的凋亡与TGF β1的浓度有一定的相关性 ;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯状条带。结论　Tca8113/CDDP自身的TGF β1的表达水平与其增殖状态有关 ;外源TGF β1(0 .1ng/ml)可以显著的诱导Tca8113/CDDP凋亡。     

羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌细胞的抑制作用及端粒酶活性的影响

目的 :观察体外羟基喜树碱、平阳霉素单独和联合应用对人舌癌Tca 8113细胞的生长抑制及端粒酶活性的影响。方法 :采用MTT法、软琼脂克隆形成法、透射电镜观察法、流式细胞术 ,TRAP PCR ELISA法研究。结果 :羟基喜树碱、平阳霉素单用及合用对Tca 8113细胞均有很好的抑制作用 ,且以合用效果最强 ,羟基喜树碱、平阳霉素使Tca 8113细胞的克隆形成率降低 ,超微结构、细胞周期发生明显变化 ,抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性。结论 :羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌Tca 8113细胞在体外有很好的抑制作用且联合应用效果更佳。     

雷帕霉素对人体舌癌细胞增殖、迁移及LRG-1信号通路的作用机制研究

目的:探讨雷帕霉素对人体舌癌细胞增殖、迁移及LRG-1信号通路的作用机制研究。方法:将人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞分为舌癌组和干预组,舌癌组不做任何处理,干预组采用不同浓度雷帕霉素处理,显微镜下观察Tca8113细胞形态、MTT检测其增殖、Transwell小室检测迁移,免疫组化检测LRG-1阳性表达,免疫组化检测LRG-1蛋白水平。结果:舌癌组Tca8113细胞互相积堆,排列密切生长,数目较多,给予雷帕霉素药物干预后,随着浓度的增加Tca8113细胞逐渐出现凋亡,细胞质出现泡状结构,细胞数目减少,异常形态的出现异常。浓度25μmol/L组在48 h、60 h及72 h细胞增殖较多,中高浓度(50、100μmol/L)细胞增殖较少,舌癌组Tca8113细胞增殖高于其他3组(P<0.05);中高浓度(50、100μmol/L)与舌癌组及25μmol/L组相差较大(P<0.05)。舌癌组Tca8113细胞中LRG-1呈强阳性表达,表达率在86%,中高浓度(50、100μmol/L)与舌癌组及25μmol/L组相比LRG-1阳性表达率较低(P<0.05);中高浓度(50...