辐射损伤诱导HR24L多种修复蛋白复合物的形成

目的 探讨辐射损伤后HR24L修复蛋白复合物的形成，为HR24L参与切除修复和重组修复提供生化证据。方法 利用质粒共转染和免疫共沉淀技术检测HR24L复合物中关键修复蛋白的存在及其在辐射损伤后的变化。结果 20J／m^2紫外线照射损伤后2h，可检测到HR24L，复合物中存在有XPA。20Gyγ射线照射后2h，检测到Ku70参与HR24L复合物的形成，照射后8h可见Rad52存在。结论 辐射损伤后，切除修复蛋白和重组修复蛋白参与HR24L复合物形成的生化证据，进一步支持HR24L参与多种修复途径的论点。     

三氧化二砷提高恶性淋巴瘤细胞放射敏感性的观察

目的研究三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞辐射敏感性的影响。方法采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态，流式细胞仪检测细胞的DNA含量和Bcl-2蛋白的表达。结果0．5—2.0μmol／L三氧化二砷和1-4Gyγ射线均能抑制B淋巴瘤细胞株Raji细胞生长，诱导细胞凋亡，流式细胞仪检测Raji细胞亚G1期细胞明显增多，Bcl-2蛋白的表达明显降低，呈现时间剂量依赖效应，联合应用比单独应用抑制作用显著。结论三氧化二砷能够提高恶性淋巴瘤细胞的放射敏感性。     

神经上皮细胞转化基因1对细胞辐射敏感性的影响及其机制探讨

目的 探讨神经上皮细胞转化基因1(Net1)对细胞辐射敏感性的影响及相关的分子作用机制.方法 运用实时荧光定量PCR检测辐射后细胞中Net1基因表达水平的变化;采用RNAi干扰技术抑制细胞中Net1的表达,用克隆形成率分析细胞的辐射敏感性;利用免疫共沉淀技术发现Net1的结合蛋白.结果 电离辐射损伤后,细胞中的Net1 mRNA水平显著上升(t=-10.52,P＜0.05);与对照组相比,siRNA沉默细胞中的Net1表达后明显增加了细胞的辐射敏感性(t=15.31、11.65,P＜0.05);无论在正常状态下还是在细胞受到辐照后,Net1都能与非同源末端连接修复蛋白Ku70、Ku80和DNA-PKcs结合.结论 Net1对细胞的辐射防护作用可能是通过与非同源末端连接修复蛋白相互作用来调控辐射损伤修复实现的.     

黄连素对乳腺癌细胞生长、迁移和放射敏感性的影响

目的 研究黄连素对乳腺癌细胞生长、迁移和放射敏感性的影响.方法 选取人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7,用MTT法检测细胞的生长和增殖;划痕愈合法观察细胞迁移能力;细胞流式技术测定细胞周期改变;磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞凋亡;Western blot法测定蛋白表达水平;细胞克隆形成法观察黄连素与辐射的联合作用.结果 黄连素明显抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的生长,并显现剂量-效应和时间-效应关系,MCF-7和MDA-MB-231细胞对黄连素表现出同样的敏感性.黄连素可以诱导剂量依赖性的G0/G1期细胞阻滞,40 μmol/L的黄连素处理后MDA-MB-231和MCF-7细胞早期凋亡分别高达86.63％和66.62％,与未处理的对照组相比,差异均有统计学意义(t=75.15和43.75,P＜0.01).黄连素明显降低了细胞周期调节相关蛋白Cyclin B1和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,而增加了促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平,但不影响细胞周期调节蛋白Cyclin D1的表达水平.低剂量(≤5μmol/L)黄连素可以明显降低细胞的迁移能力.采用单靶多击模型拟合曲线发现,与单独照射组相比,5 μmol/L黄连素预处理4h后MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的辐射增敏比分别为1.12和1.22.结论 黄连素通过调节细胞凋亡和细胞周期阻滞抑制乳腺癌细胞生长和迁移,并可提高乳腺癌细胞的放射敏感性.     

吩噻嗪衍生物协同放射对HeLa细胞增殖的抑制效应比较研究

目的 探讨吩噻嗪衍生物对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及与放射联合应用抑制肿瘤的协同效应。方法 采用MTT法和细胞克隆形成法检测细胞的增殖活性和细胞辐射敏感性。结果 比较了6种吩噻嗪衍生物对HeLa细胞增殖的抑制效应，发现化合物α-氯-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD2）、α-三氟甲基-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD3）和α-氯-N-二乙胺基乙基吩噻嗪（PTZD5）的作用比较明显，在10μmol／L浓度能产生出显著抑制效应，40-50μmol／L浓度作用3和4d，细胞增殖完全被抑制而死亡。PTZD2或PTZD3与放射联合应用，显示出明显抗HeLa细胞增殖的协同效应，10μmol／L PTZD3对2和4Gy照射细胞的增殖抑制的增强比分别为3．5和1．8。实验结果还表明，在照射前18h用药的协同作用更加显著。结论 吩噻嗪衍生物具有程度不同的抑制HeLa细胞增殖的作用，与放射联合应用具有抗肿瘤的协同效应，而且照射前18h用药的效应最佳。     

反义STAT3寡核苷酸对B16细胞辐射敏感性的研究

目的 探讨反义STAT3转染鼠恶性黑色素瘤B16细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化。方法 利用反义寡核苷酸转染B16细胞后,以不同剂量γ射线照射。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察。用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化。结果 反义STAT3转染后加以γ射线照射,B16细胞的增殖相比于两者单独作用组受到明显抑制,细胞凋亡水平也增加。结论 反义STAT3寡核苷酸联合γ射线对B16细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了鼠黑色素瘤B16细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段。     

Ku蛋白在肿瘤发生中的作用及其靶向抑制策略

Ku蛋白参与辐射诱导的DNA损伤修复,严重影响着肿瘤细胞的辐射敏感性。细胞内Ku蛋白异常表达与肿瘤发生和发展存在密切关系。目前,研究者试图抑制Ku蛋白表达来增强肿瘤细胞的辐射敏感性,为进一步靶向治疗奠定基础。     

氨甲蝶呤辐射增敏作用与RAD51的相关性研究

目的 探讨同源重组修复蛋白RAD51与氨甲蝶呤辐射增敏作用的相关性.方法 分别采用Western blot和RT-PCR法,观察γ射线、氨甲蝶呤及二者联合应用对人骨肉瘤细胞RAD51表达的影响,克隆形成实验观察氨甲蝶呤对RAD51高表达前后骨肉瘤细胞辐射增敏作用的影响.结果 氨甲蝶呤在蛋白质和RNA水平抑制RAD51的表达,氨甲蝶呤和射线联合应用可明显降低RAD51的表达水平;HOS细胞和RAD51高表达的HOS-RAD51细胞加药前后的辐射增敏比分别为1.51和0.99,表明氨甲蝶呤对HOS细胞具有较好的放射增敏性.结论 RAD51可能参与了氨甲蝶呤的辐射增敏作用.     

高效反义STAT3对A549细胞辐射敏感性的影响

目的 探讨高效反义STAT3转染肺腺癌A549细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化,为提高恶性肿瘤的辐射敏感性提供新的探索思路和途径。方法 用自行设计成功的高效反义STAT3(AS10)转染A549细胞后,以不同剂量γ射线照射,通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst 33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察;用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化;Western blot检测STAT3蛋白表达及磷酸化变化情况,以及其下游基因表达变化情况。结果高效反义STAT3(AS10)转染后,加以γ射线照射,A549细胞的增殖相比于单独作用组受到明显抑制,细胞早期凋亡水平也增加,STAT3蛋白及其下游Bcl-Xl、Cyclin D1蛋白表达变化明显下降,STAT3蛋白磷酸化水平也降低。结论 反义STAT3(AS10)联合γ射线对A549细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了A549细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段。     

人类解旋酶样转录因子介导辐射凋亡细胞DNA修复蛋白的降解

目的 探讨人类解旋酶样转录因子(HLTF)转染对辐射诱导细胞凋亡时DNA修复相关蛋白水平的影响。方法 将野生型和RING结构域突变型 HLTF 分别转染人肺癌细胞A549,⁶⁰Co γ射线15 Gy照射诱导细胞凋亡, 用Western blot 检测HRAD17和HRAD52蛋白水平的变化,免疫共沉淀检测特定复合物的存在。结果 γ射线诱导细胞凋亡时, 野生型 HLTF 转染组与对照组相比,DNA修复蛋白HRAD17和HRAD52水平明显降低,而RING结构域突变组与对照组相比则没有明显变化;辐射诱导细胞凋亡时,HLTF可与HRAD17和HRAD52形成复合物。结论 HLTF可介导辐射诱导的凋亡细胞中HRAD17和HRAD52的降解, 其机制可能是通过蛋白质复合物的相互作用使DNA修复蛋白泛素化而降解。     

电离辐射诱导PC12细胞分化的蛋白质组学分析

目的探索辐射诱导PC12细胞分化的分子机理，筛选神经系统辐射损伤的分子靶标。方法16Gyγ射线照射PC12细胞，照射48h，提取正常与照射后细胞总蛋白，进行双向电泳分析，并对部分差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果电泳中共发现差异表达蛋白质位点876个。鉴定出表达水平增高的蛋白泛素羧端水解酶L1，表达水平降低的蛋白HP1α类似蛋白。结论应用蛋白质组技术鉴定出部分辐射后差异表达蛋白质，为辐射诱导PC12细胞分化的分子机理研究提供了线索。     

UHRF1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231辐射敏感性的影响及作用机制

目的 了解基因UHRF1的不同表达水平对乳腺癌细胞MDA-MB-231辐射敏感性的影响及潜在的作用机制。方法 利用克隆形成实验观察细胞存活;流式细胞术测定细胞周期;利用DNA片段分析和Annexin V试剂盒测定细胞凋亡;Western blot 测定蛋白表达变化;利用经典的染色体分析,观察染色体畸变(着丝粒环和双着丝粒)。 结果 与对照相比较,UHRF1转染可将D₀值由2.08 Gy提高至3.17 Gy,即降低MDA-MB-231细胞对X射线的辐射敏感性。利用siRNA抑制UHRF1的表达,可将X射线照射后细胞的生存率由41%降低至17%,即增强了细胞的辐射敏感性。UHRF1的高表达,可诱导G₂/M期阻滞,抑制细胞凋亡,下调促凋亡蛋白Bax,上调DNA损伤修复蛋白Ku70和 Ku80的表达水平,而且,抑制X射线诱导的染色体畸变。结论 UHRF1的高表达可以抑制细胞凋亡,促进DNA损伤修复。因此,通过抑制UHRF1的表达,可作为临床提高乳腺癌放疗疗效的新靶标。     

siRNA抑制STAT3基因对HepG2细胞辐射敏感性的影响

目的 研究瞬时转染的siRNA抑制STAT3基因表达对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响。方法 以人肝癌HepG2细胞作为研究对象，脂质体包裹化学合成的siRNA进行转染。采用实时RT-PCR和Westernblotting法分别从mRNA水平和蛋白水平检测STAT3基因的表达及编码蛋白磷酸化活化的改变，用CCK-8法和Hoechst33258DNA染色法检测辐射敏感性的变化。结果STAT3特异性的siRNA转染后HepG2细胞中STAT3基因mRNA拷贝数、STAT3蛋白表达和磷酸化水平均明显降低。mRNA水平的抑制效率可达70％。siRNA转染联合60Coγ射线照射后HepG2细胞增殖活力显著低于对照组（P〈0．05）。结论 针对人STAT3基因的siRNA能够抑制HepG2细胞STAT3基因的表达，降低STAT3蛋白活化水平，进而产生辐射增敏作用。     

组蛋白去乙酰酶阻滞剂的放射增敏作用

放射治疗是肿瘤的重要治疗手段之一,辐射可以导致细胞DNA双链断裂。细胞主要通过同源重组修复和非同源末端连接修复方式修复DNA双链断裂。随着对双链DNA损伤修复机制认识的深化,组蛋白去乙酰酶（HDAC）阻滞剂成为提高放射敏感性的一种新策略。HDAC可分为4类。HDAC阻滞剂可非特异性地或特异性地阻滞这4类HDAC,使组蛋白乙酰化水平提高,染色体解螺旋,核小体结构改变。一方面使DNA更易受到辐射的影响;另一方面通过降低E2F1转录因子活性抑制损伤修复蛋白Ku80、Rad51等的表达,使其不能募集DNA损伤修复蛋白,且不能形成相应的蛋白复合物,使同源重组修复和非同源末端连接修复作用延缓,在伴有或不伴有肿瘤细胞凋亡增加的情况下,提高放射敏感性。现已有一些临床试验在进行中,并取得了初步的结果。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌CNE-1细胞辐射敏感性的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人鼻咽癌CNE-1细胞辐射敏感性的影响及相关机制.方法 将细胞分为对照组、EGCG单独处理组、UVC或X射线单独照射组,EGCG联合UVC或X射线照射组.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度EGCG处理24、48和72 h对CNE-1细胞生长的影响,以及EGCG联合紫外线(UVC)及X射线对CNE-1细胞生长的影响.克隆形成实验检测EGCG对CNE-1细胞的放射增敏作用.流式细胞术检测细胞周期变化.Annexin V-FITC法检测细胞凋亡.Western blot法检测相关蛋白表达水平.结果 EGCG可抑制CNE-1细胞的生长,并有剂量·效应关系(r=0.817)和处理时间-效应关系(r=0.364).EGCG在低剂量50μmol/L,预处理2h,可增加CNE-1细胞对UVC和X射线的辐射敏感性.相比于单独照射组,EGCG联合UVC照射组细胞的S期阻滞消失(t=18.68,P＜0.05),sub-G1峰的比例则明显增高(t =6.67,P ＜0.05).而且,Annexin V-FITC检测结果揭示,EGCG联合UVC照射组的细胞中早期凋亡细胞比例显著增加(t=10.28,P ＜0.05).但与单独照射组细胞相比,EGCG联合X射线照射组细胞的S期及G2/M期阻滞更明显(t=7.11和6.99,P＜O.05),无明显的sub-G1峰出现.EGCG联合UVC照射可使凋亡相关蛋白Bax表达增加(t=5.42,P ＜0.05),Caspase-3表达增加(t=4.14,P＜0.05),Bcl-2的表达变化并不明显(t=1.85,P＞0.05),而其联合X射线对于细胞周期相关蛋白Cdc2 p34表达的影响不大(t=1.04,P＞0.05).结论 EGCG可抑制鼻咽癌CNE-1细胞的生长.EGCG与UVC联合损伤作用与促进细胞发生早期凋亡相关,涉及到凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3;而EGCG和X射线的联合损伤作用可能与周期阻滞相关.     

低剂量率辐射生物效应的研究进展

辐射的剂量率能显著影响放射治疗的生物效应，降低剂量率就降低了生物效应。然而。当剂量率降低到一定阈值以下，DNA损伤不能激活细胞的探测器——共济失调毛细血管扩张症突变（ATM）基因以及ATM基因介导的损伤修复途径，因而出现细胞高的致死性，即“反剂量率效应”。在持续低剂量率照射下，主要有两条修复途径参与双链断裂（DSB）的修复，即非同源末端连接（NHEJ）修复和同源重组（HR）修复。这些修复系统在亚致死性损伤和产生剂量率效应中起重要作用。如果损伤得以完整和精确的修复，细胞的辐射敏感性就会发生改变；如果损伤不能被修复。则会诱导细胞凋亡。p53基因在低剂量率辐射引起的细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡过程中起关键作用。     

鸦胆子油乳注射液联合热疗对人膀胱癌细胞株BIU-87细胞增殖及p-Akt表达的影响

目的探讨鸦胆子油乳注射液(简称鸦油乳)联合热疗对人膀胱癌细胞株BIU-87膀胱癌细胞形态、增殖、细胞周期及磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达的影响。方法采用倒置光学显微镜观察鸦油乳(10 ml/L)与热疗单独或联合对人BIU-87膀胱癌细胞形态学的影响;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测鸦油乳(5、10、20、30 ml/L)与热疗单独或联合对人BIU-87膀胱癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测鸦油乳(10 ml/L)与热疗单独或联合对人BIU-87膀胱癌细胞周期的影响;用蛋白质印迹法(Western blotting)检测鸦油乳(10 ml/L)与热疗单独或联合作用于人BIU-87膀胱癌细胞24 h后p-Akt蛋白的表达。结果倒置光学显微镜结果显示,热疗组、鸦油乳组和鸦油乳联合热疗组的细胞数均明显减少,部分细胞变圆、体积变小、核固缩,但鸦油乳联合热疗组变化最明显,活细胞数最少。与热疗组和鸦油乳组比较,鸦油乳联合热疗对BIU-87膀胱癌细胞增殖的抑制作用显著增强(P<0.05),呈时间和剂量依赖性;鸦油乳联合热疗作用于人BIU-87膀胱癌细胞24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为84、62、35 mg/L,低于单药鸦油乳的101、79、57 mg/L。鸦油乳联合热疗组作用24 h后人BIU-87膀胱癌细胞S期比率为(16.79±2.78)%,显著低于热疗组的(29.52±3.31)%和鸦油乳组的(26.34±0.86)%(P<0.05)。鸦油乳联合热疗组p-Akt蛋白的相对表达量为(0.51±0.02),显著低于热疗组的(0.98±0.05)和鸦油乳组的(0.70±0.04)(P<0.05)。结论鸦油乳联合热疗能增强对人BIU-87膀胱癌细胞的增殖抑制作用,下调p-Akt蛋白表达可能是其作用机制之一。     

NADH在辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤中的防护作用

为研究细胞辅酶NADH在细胞辐射凋亡损伤中的防护作用，将L02肝细胞经5．0Gy照射后加入不同浓度（0－600μg/ml）的NADH，培养6、12、24h，观察细胞凋亡率并检测3组Fas，Bax，Bcl－2蛋白表达，透射电镜观察细胞凋亡形态。结果表明，辐射可以诱导细胞凋亡损伤，NADH抑制细胞辐射诱导的凋亡呈剂量依赖性，并可以上调Bcl－2蛋白和下调Fas、Bax蛋白表达。提示NADH对L02肝细胞有明显的抗辐射亡损伤作用，其作用机制可能与Fas、Bcl－2和Bax的调控有关。     

AT细胞对电离辐射敏感原因的探讨

AT细胞具有对电离辐射和拟辐射物质的高敏感性以及DNA合成抑制市性，存在复杂的基因异质性，本从AT细胞的遗传学互补性分析，DNA损伤修复缺陷以及DNA拓扑酶学研究三方面对AT细胞辐射敏感性的分子机理等进行了讨论，认为DNA双链修复缺陷与重接忠实性下降可能是AT细胞电离辐射敏感性的原因。     

辐射敏感性影响因素研究

辐射敏感性受到许多因素的影响。以生殖细胞损伤、细胞遗传学损伤、细胞凋亡、DNA损伤和修复作为观察终点，结果显示辐射敏感性存在着年龄差别，遗传因素、性别、生活习惯(如吸烟)、小剂量照射等因素对辐射敏感性也存在不同程度的影响。