细胞融合构建红景天苷高转化菌株及固态发酵工艺优化

目的 构建红景天苷高转化菌株,并对红景天的固态发酵工艺进行优化.方法 以黑曲霉菌株H35和H42为出发菌株,将双亲株的原生质体分别进行紫外和热灭活后进行原生质体融合,通过重氮盐比色法初筛和HPLC复筛得到一融合菌株(Rc14);并运用"复杂定向调控技术"对红景天固态发酵工艺进行优化.结果 在最佳固态发酵工艺条件下,Rc14发酵后红景天苷含量比发酵前提高140%,酪醇含量提高277%,总有效成分含量增加了176%.结论 利用融合菌株Rc14固态发酵红景天的工艺在红景天的工业生产中具有很高的应用价值.     

栀子中京尼平苷的微生物转化研究

目的通过筛选一株高产β-葡萄糖苷酶菌株对栀子进行发酵,使得其中的京尼平苷转化为京尼平。方法通过底物特异显色筛选模型筛选菌株,并使用正交实验对发酵条件进行优化。结果筛选到一株产β-葡萄糖苷酶酶活可达到8.2 u/ml的青霉Penicillium nigricans,并优化了发酵转化条件,使得京尼平苷的转化率可达到95%以上。利用波谱法对发酵产物进行了结构鉴定,证明转化产物为京尼平。结论通过微生物转化的方法可以使栀子中主要成分京尼平苷转化成具直接作用的有效成分京尼平。     

灵丹菌质发酵工艺的初探

目的 筛选灵芝与丹参双向固体发酵菌株,优化发酵工艺参数,获得灵丹菌质最适的发酵组合及工艺参数.方法 由不同灵芝菌株与丹参药性基质组成不同的发酵组合,在一定条件下进行双向固体发酵,以菌丝长势,菌质药效、毒性、化学成分为指标进行发酵菌株筛选及发酵工艺参数优化.结果 灵芝菌株ZL30与丹参双向固体发酵时菌丝长势尤佳、菌质活血化瘀药效显著,为最优发酵菌株,其组合为最适发酵组合,最佳发酵工艺参数为:基质含水量70%、灭菌温度100℃、灭菌时间60 min、发酵终点40 d.结论 以药用真菌双向性固体发酵工程为原理和方法进行灵丹双向固体发酵及灵丹菌质的研发、利用,切实可行.     

微生物酶的方法提高红景天苷和酪醇的研究

目的 通过酶学方法短时间内提高红景天苷和酪醇的含量.方法 微生物固体和液体发酵法,通过硫酸铵沉淀法从黑曲霉H35和H42的发酵液中提取合成红景天苷和酪醇的红景天苷合成酶系和酪醇合成酶系.通过酶促反应提高红景天苷和酪醇的含量.结果 通过酶学的方法使得红景天苷和酪醇的含量分别提高了194.2%和83.8%.通过两种酶的协调作用使得红景天苷和酪醇的含量分别提高了139.9%和191.1 %.酪醇合成酶的最适反应pH和温度分别为5.5℃和40℃;红景天苷合成酶的最适反应pH和温度分别为5.0℃和45℃.酪醇合成酶在pH4～6.5温度低于65℃有较好稳定性;红景天苷合成酶在pR3.5～6.5温度低于60℃下具有较好的稳定性.结论 酶学方法可以在短期间内将红景天苷和酪醇的含量提高139.9%和191.1%,具有较高的实用经济效益.     

六神曲固态协同发酵工艺优化及物质动态变化研究

目的:优化六神曲固态协同发酵工艺并研究发酵过程中物质动态变化。方法:以枯草芽孢杆菌与赛氏曲霉为发酵菌种,蛋白酶和淀粉酶活力为指标,通过单因素实验确定最佳接种比例与发酵时间,采用正交试验优选发酵温度、湿度及接种量。采用HPLC测定六神曲发酵前后苦杏仁苷及青蒿素含量变化,另对发酵过程中两种菌株数量变化与酶活进行检测。结果:最佳发酵工艺为赛氏曲霉和枯草芽孢杆菌接种比例1∶2,时间8 d,温度30℃,湿度85%,接种量10%,蛋白酶与淀粉酶活力分别达到2.16 mg·min~(-1)·g~(-1)和74.84 mg·min~(-1)·g~(-1);苦杏仁苷在发酵后被分解代谢,青蒿素在协同发酵中被代谢但在自然发酵过程中含量基本不变,并且发现两种菌株数量变化与酶活有明显的相关关系。结论:协同发酵工艺条件稳定可行,为六神曲发酵工艺的规范化奠定基础。苦杏仁苷与青蒿素含量均不适合作为质量评价指标。     

西洋参冠瘿组织培养条件对红景天苷生物合成的影响

 目的 利用现代生物技术方法生物合成红景天苷,探索提高红景天苷含量的生物转化最佳条件,为工业化大生产提供科学依据。方法 以转基因西洋参冠瘿组织为培养体系,生物转化底物酪醇;利用HPLC对转化产物红景天苷进行含量测定;考察不同培养条件对西洋参冠瘿组织生长量及其转化产物红景天苷的影响。结果 在摇床培养中西洋参冠瘿组织培养基为“MS+蔗糖”中红景天苷转化率达到49.50％;“1/2MS+蔗糖”培养基的转化率为49.98％;“MS+蔗糖+0.5 mg·L-1 VB₆”培养基的转化率达55.54％;此外,还利用生物反应器对西洋参冠瘿组织生物转化红景天苷进行了初步研究,转化率为33.42％。结论 本实验通过考察不同培养条件对西洋参冠瘿组织生物合成红景天苷的影响,提高了红景天苷的转化率,并在摇瓶培养的基础上,初步实现了生物反应器对西洋参冠瘿组织生物合成红景天苷的生产,从而为该产品的工业化生产提供科学资料。     

薄层扫描法测定冀产红景天中红景天苷的含量

目的　通过冀产 3种红景天中有效成分红景天苷的含量测定 ,评估并比较其质量。方法　薄层扫描法。结果　河北雾灵山产 3种红景天 (红景天 Rhodiola rosea,狭叶红景天 R. kirilowii,小丛红景天 R. dumu-losa)中红景天苷的含量分别为 0 .6 %、0 .32 %、0 .0 0 4 9%。结论　冀产 3种红景天中 ,以红景天中的红景天苷含量最高 ,可进一步开发利用     

高山红景天内生真菌的分离及产红景天苷菌株的筛选

目的分离和鉴定珍贵药用植物高山红景天根及根茎中的内生真菌,并从中筛选出可产红景天苷的菌株。方法用PDA培养基,通过组织分离法从高山红景天根及根茎中分离内生真菌,并采用传统的鉴定方法对纯化后的菌株进行分类鉴定。通过薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对分离得到的内生真菌发酵产物进行检测来获得产红景天苷的菌株。结果分离获得内生真菌20株,初步鉴定为3目、5科、9属。其中镰孢霉属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)和曲霉属(Aspergillus)为优势种群。经TLC和HPLC法筛选得到一株可代谢产生活性物质红景天苷的内生真菌G5。结论高山红景天内生真菌在数量和种类上存在极其丰富的多样性;而且其内生真菌具有产生与其宿主相同或相似生理活性成分的能力。     

基于UPLC技术的女贞子中主要成分炮制变化规律研究及酒女贞子特色质量标准的探讨

采用UPLC技术建立了女贞子中红景天苷和特女贞苷的同步测定方法,通过测定二者在不同炮制时间的酒女贞子(炮制12,15,18,21,24 h)中的含量探讨女贞子炮制中主要成分的变化规律,并且采用同一方法探讨建立了酒女贞子的特色质量标准。采用Waters Acquity UPLCBEH C18色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm)进行分离,乙腈-0. 2%甲酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长280 nm,流速0. 5 m L·min^-1,柱温40℃。在上述色谱条件下2成分分离良好,红景天苷和特女贞苷分别在10. 19~326,49. 53~1 585 ng线性关系良好,平均加样回收率分别为103. 4%,101. 7%,RSD分别为0. 81%,0. 79%。不同炮制时间的酒女贞子中红景天苷的含量随炮制时间延长逐渐升高,而特女贞苷含量则随炮制时间延长逐渐降低。27批次女贞子药材中红景天苷的质量分数在0. 042 5%~0. 192 4%,特女贞苷在0. 829 7%~5. 218%;25批酒女贞子中前者在0. 229 2%~1. 045 8%,后者在0. 743 8%~3. 645 4%。与女贞子药材相比,酒女贞子中特女贞苷含量和红景天苷含量的比值明显减小。依据实验结果,该文暂定女贞子药材中特女贞苷不低于0. 80%,特女贞苷含量/红景天苷含量不小于15;而酒女贞子中红景天苷不低于0. 20%,特女贞苷不低于0. 70%,二者比值不大于8。该文所建立方法的简便可靠,可用于女贞子样品中红景天苷和特女贞苷的测定,所建立的标准可区分女贞子和酒女贞子。     

女贞子中红景天苷的提取纯化工艺优选

目的:优选女贞子中红景天苷的提取、纯化工艺.方法:采用HPLC测定红景天苷含量,以红景天菅含量及浸膏得率的综合评分为指标,通过正交试验考察溶剂、料液比、时间及次数对红景天苷提取工艺的影响;通过单因素试验筛选大孔树脂型号,并优选其纯化工艺条件.结果:优选的提取工艺为加6倍量水回流提取3次,每次1h;D4020型大孔树脂纯化女贞子中红景天苷的工艺条件为上样液质量浓度0.5 g·mL-1,吸附流速1 BV·h-1,用5 BV的20％乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,减压回收,即得红景天苷粗品,其纯度达16.34％.结论:按优选的工艺条件提取、纯化后,女贞子中红景天苷含量提高了2.12倍.     

特女贞苷与红景天苷的大鼠在体胃肠吸收比较

特女贞苷与红景天苷是女贞子炮制前后含量变化较大的2种活性成分。为探讨女贞子炮制增效机制,该实验采用大鼠在体胃肠灌流模型,用HPLC测定给药后不同时间点大鼠胃与小肠灌流流出液中特女贞苷与红景天苷含量并计算吸收速率常数和吸收百分率,结果在特女贞苷的胃肠灌流流出液中均可检出其次级苷红景天苷。特女贞苷与红景天苷在小肠中的吸收速率常数分别为0.055 3,0.144 2 h^-1,4 h累计吸收率分别为24.46%,60.14%,在胃中吸收速率常数分别为5.70,8.26 h^-1,4 h累计吸收率分别为34.21%,47.23%。实验证明特女贞苷在大鼠胃与小肠内均可被代谢为红景天苷,红景天苷较特女贞苷更利于胃肠吸收。结果提示女贞子炮制后补肝肾药效增强与特女贞苷转化为红景天苷后更利于机体吸收有关。     

微波辅助提取红景天苷的工艺研究

目的 优选红景天中红景天苷的微波辅助提取工艺.方法 利用HPLC法测定红景天中红景天苷,运用正交试验,以红景天苷转移率为考察指标,筛选最佳微波提取工艺;并将其与加热回流提取法及超声提取法进行比较.结果 微波提取红景天中红景天苷的最佳提取工艺参数:微波功率中档(462 W),料液比为1∶10,提取3次,每次90 s,在此条件下,红景天中红景天苷的转移率高达99.86％.结论 微波辅助提取工艺具有效率高、时间短、能耗低、环保等优点,为红景天苷的工业化生产和新药开发提供了参考.     

薄层扫描法测定冀产红景天中红景天苷的含量

目的 通过冀产3种红景天中有效成分红景天苷的含量测定，评估并比较其质量。方法 薄层扫描法。结果 河北雾灵山产3种红景天（红景天Rhodiola rosea,狭叶红景天R.kirilowill,小丛红景天R.dumulosa)中红景天苷的含量分别为0.6%,0.32%,0.0049%。结论 冀产3种红景天中，以红景天中的红景天苷含量最高，可进一步开发利用。     

干燥与贮藏条件对高山红景天根部红景天苷含量的影响

目的:评价干燥与贮藏条件对高山红景天根部红景天苷含量的影响。方法:采用Waters高效液相色谱仪测定3种干燥方式、3种贮藏温度处理的高山红景天根部红景天苷的含量。结果:不同干燥、贮藏条件下高山红景天根部红景天苷的含量分别在0.11%~0.23%和0.11%~0.25%之间变化。结论:高山红景天采收后,直接80℃烘干或保湿贮存一段时间后再80℃烘干处理,红景天苷的含量均不会发生大的变化。     

红景天超微粉碎前后红景天苷的溶出度分析

目的:研究超微粉碎前后红景天中红景天苷的溶出度。方法:用HPLC法测定红景天苷含量,对不同时间提取超微粉与普通粉的提取液进行含量分析。结果:红景天超微粉碎后红景天苷的溶出量和溶出速率显著提高;当r=0.9991(n=5),实验结果表明红景天苷在0.2μg～1.0μg范围内具有良好的线性关系。红景天苷平均回收率为99.45%,RSD=1.24%,表明本方法重复性良好。结论:分析表明本方法准确可靠,超微粉碎有助于红景天苷的溶出。     

蔷薇红景天中红景天苷含量测定

利用高效液相色谱法测定不同采收时期的野生蔷薇红景天和经人工移栽种植后红景天中红景天苷含量。结果表明:①8月底采收的红景天根茎中红景天苷含量最高,高达1.7%,根中红景天苷含量要略低于根茎,茎和叶中含量较低;②经人工移栽种植后,红景天中红景天苷含量有所降低,其中种植在海拔894 m红景天根和根茎含量最高,分别为1.397%和1.48%。     

星点设计-效应面法优化超高压提取红景天中红景天苷

目的:优选超高压提取法提取红景天中红景天苷的最佳工艺.方法:采用星点设计结合效应面法对红景天中红景天苷的超高压提取的工艺参数进行优选,并与回流提取、超声提取和微波提取进行比较.结果:超高压提取红景天中红景天苷的最佳工艺条件为73.3％乙醇,压力255.5 MPa,液固比29.5( mL∶g),提取时间2 min,提取1次;此提取条件下红景天苷的提取率为9.29 mg·g-1,分别高出回流提取31.6％、超声提取20.3％和微波提取9.7％.结论:超高压提取作为一种新兴的中药提取技术,具有提取率高、提取温度低、耗时短、能耗少等优点,为红景天苷提取提供一个全新的方法.     

红景天药材有效成分没食子酸红景天苷及酪醇的含量测定

目的:对红景天药材有效成分没食子酸、红景天苷、酪醇的含量进行测定。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)对红景天药材有效成分进行测定,色谱柱为Eclipse XDB-C8(4.6mm×250mm,5μm),流动相为V(0.5%磷酸水溶液):V(甲醇)=95:5,柱温40℃,流速为1.0ml/min,以波长为278nm条件下对红景天药材有效成分没食子酸、红景天苷、酪醇的含量进行检测。结果:没食子酸、红景天苷、酪醇样品溶液与对照品溶液线性关系良好,经过精密度实验、重现性实验、回收率实验检验后的色谱条件下对红景天药材有效成分含量测定后,其药材中没食子酸、红景天苷、酪醇平均含量分别为0.1797%、3.0551%、0.7830%,RSD分别为0.64%、0.72%、0.85%。结论:利用HPLC对红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇的含量进行测定,可对红景天药材质量的控制及真伪优劣评价提供理论依据。     

不同产地不同采收期蔷薇红景天中红景天苷的含量测定

目的 对不同产地、不同采收时期的蔷薇红景天中主要活性成分红景天苷含量进行对比研究.方法 以红景天苷为指标,采用HPLC法,测定了蔷薇红景天药材中的红景天苷含量.色谱条件为PLATISTLTMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),水∶甲∶乙腈为流动相,检测波长为275nm.结果 蔷薇红景天苷的含量在0.52～5.2μg范围内峰吸光度与浓度线性关系良-好(r =0.999 8).由于产地和采收时间不同,蔷薇红景天中红景天苷含量有差异,以8月采收的新疆塔城额敏县的蔷薇红景天的含量最高,其为1.297％,RSD为1.519％.结论 该方法操作简便,结果准确,重复性好,实验结果可用于指导合理采收开发蔷薇红景天资源.     

红景天苷大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的 筛选红景天苷的大孔树脂纯化工艺.方法 以红景天苷质量浓度为指标,考察多种型号大孔吸附树脂纯化红景天苷的吸附及洗脱条件.结果 SP-825型大孔吸附树脂为分离纯化红景天苷的最佳大孔吸附树脂,最佳工艺:上样红景天苷质量浓度为1.713～2.570 g/mL,洗脱剂为10％乙醇,洗脱剂用量为30 BV,体积流量为2 BV/h.结论 SP-825型大孔吸附树脂能显著提高样品液红景天苷的纯度,具有吸附量大、洗脱率高、经济环保等优点,适合于规模化生产.