CIK细胞对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的 探讨细胞因子激活的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 体外分离健康人外周血单个核细胞,干扰素-γ、白细胞介素-2、CD3单抗诱导培养14 d,流式细胞仪测细胞表型,LDH法测定不同效靶比时CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性.12只BALB/c裸鼠分为两组,每组6只.每只裸鼠皮下接种1×106个EC9706细胞,治疗组裸鼠同时每只经尾静脉注入3×107个CIK细胞,每周1次,连续3周,观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率、肿瘤体积变化.成瘤后3周,眼眶取血,流式细胞仪检测人CIK细胞;处死裸鼠,取瘤块称重,计算抑瘤率,观察肿瘤病理特点.结果 CIK细胞中CD3+CD56+细胞占42.50%,CIK细胞表面NKG2D表达率为67.10%.效靶比10:1、20:1、30:1时CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性分别为(28.81±0.47)%、(37.78±0.22)%、(44.31±1.06)%,差异有统计学意义(P<0.01).对照组和CIK细胞治疗组成瘤时间分别为(9.00±1.26)d、(15.67±4.37)d,差异有统计学意义(P<0.01);瘤重分别为(3.24±0.11)g、(2.10±0.10)g,差异有统计学意义(P<0.01),CIK治疗组的抑瘤率为35.19%.HE染色显示CIK细胞治疗组有较多的淋巴细胞浸润和坏死区.结论 CIK细胞对EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,可能成为治疗食管癌的免疫效应细胞.     

沉默EC9706核干细胞因子基因对裸鼠移植瘤生长的作用

观察由RNAi诱导的EC9706核干细胞因子（NS）基因沉默对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠15只,分为3组,siRNA干预组皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706细胞,无关siRNA对照组皮下注入pRNAT-U6.1-siC转染的EC9706细胞,空白对照组皮下注入正常EC9706细胞,接种5周分别测定各组裸鼠移植瘤体积,并应用RT-PCR技术检测裸鼠移植瘤组织中NS mRNA的表达。结果:无关siRNA对照组及空白对照组于第4天在接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA干预组于第6天在接种部位发现肉眼可见肿块。第5周各组裸鼠成瘤率均为100%。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组瘤体大小分别为（1 806.40±77.75） mm3、（1 702.20±88.60） mm3和（847.00±82.25） mm3,3组相比差异有统计学意义（P<0.05）。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组移植瘤组织中NS mRNA的表达量分别为0.681±0.033、0.685±0.034和0.497±0.056,3组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论:沉默EC9706细胞的NS基因可抑制裸鼠移植瘤生长,降低裸鼠体内NS mRNA的表达。沉默NS基因有可能成为治疗食管癌的新策略。      

人微管不稳定蛋白基因真核表达载体的构建与表达及对食管癌细胞的作用

目的 构建人微管不稳定蛋白基因(stathmin)真核表达载体,研究其对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增stathmin cDNA,克隆至pMDl8-T载体并酶切鉴定后,亚克隆至pEGFP-C2真核表达载体.将测序鉴定正确的重组载体和空载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.通过荧光显微镜观察转染细胞荧光蛋白的表达,采用Western blot检测转染细胞中增强型荧光蛋白(EGFP)和stathmin融合蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪分析细胞的增殖状态,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定后获反向插入质粒;亚克隆至pEGFP-C2载体后,经酶切与测序鉴定,重组载体pEGFP-stathmin构建成功.重组载体和空载体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.通过荧光显微镜观察到,转染细胞中呈现绿色荧光;经Western blot证实,重组载体表达46 000的融合蛋白.与空载体转染细胞相比,转染重组载体的EC9706细胞形态变大,增殖速度减慢,细胞分裂阻滞于G2/M期,细胞克隆形成数减少,裸鼠体内成瘤性降低(P＜0.05).结论 构建的真核表达载体pEGFP-stathmin在食管癌EC9706细胞中能够稳定表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和成瘤性.     

全反式维甲酸诱导荷瘤裸鼠EC9706食管癌细胞凋亡的机制

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导荷瘤裸鼠EC9706食管癌细胞凋亡的作用机制.方法 将食管癌EC9706细胞接种于裸鼠,成瘤后将裸鼠分为ATRA作用组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用组、联合用药组和空白对照组,每组10只,腹腔内连续给药10 d后处死裸鼠.采用原位末端标记(TUNEL)法,检测各组裸鼠移植瘤组织中的细胞凋亡情况.采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测caspase-3和survivin蛋白及mRNA的表达水平.结果 ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组的细胞凋亡率分别为44.3%、39.7%和91.0%,均明显高于空白对照组(0.7%,均P＜0.01).空白对照组caspase-3蛋白表达水平为46.12±0.33,caspase-3 mRNA的相对表达量为0.14±0.03,均显著低于ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组(P＜0.05).空白对照组survivin蛋白表达水平为96.07±0.13,survivin mRNA的相对表达量为0.84±0.04,均显著高于ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组(均P＜0.05).ATRA作用组与5-Fu作用组的细胞凋亡率、caspase-3和survivin蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义(均P＞0.05),但单药组与联合用药组的差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 ATRA可诱导荷瘤裸鼠EC9706细胞产生凋亡,其作用机制与下调survivin蛋白和mRNA的表达以及上调caspase-3蛋白和mRNA的表达有关.     

通路抑制剂LY294002对子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察磷脂酰肌醇3激酶通路抑制剂LY294002对子宫内膜癌裸鼠移植瘤细胞增殖、凋亡及p-AKT表达的影响.方法:体外培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞,12只裸鼠皮下接种Ishikawa细胞后建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型,随机分为2组,每组6只,分别给予腹腔注射生理盐水和LY294002干预,观察2组移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算移植瘤体积、抑瘤率等,观察药物对移植瘤的抑制作用,移植瘤组织标本进行HE染色镜下观察移植瘤的坏死程度、范围及细胞凋亡情况,并用免疫组织化学方法检测移植瘤组织内p-AKT的表达.结果:1)用药组裸鼠移植瘤体积增长相对缓慢(2 027.30±251.16)mm3,对照组肿瘤体积增长明显(3 110.60±599.66)mm3,差异有统计学意义(t=4.082,P=0.005),且抑瘤率为(32.49±16.39)%.2)HE染色见用药组较对照组移植瘤细胞凋亡及坏死面积显著增加;免疫组化结果显示用药组p-AKT的表达低于对照组(χ2=6.133,P<0.05).结论:PI3K通路抑制剂LY294002能够抑制子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,促进其凋亡.     

全反式维甲酸对EC9706荷瘤裸鼠抑瘤作用的实验研究

目的：观察全反式维甲酸的体内抗肿瘤作用，探讨其体内抑瘤的作用机制。方法：采用裸鼠EC9706人食管癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验研究，应用全反式维甲酸10d后处死裸鼠，观察荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况，测定肿瘤生长抑制率；HE染色对肿瘤组织进行细胞形态学观察，TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡，免疫组织化学法检测凋亡相关基因bax及bcl-2蛋白的表达情况。结果：全反式维甲酸对裸鼠EC9706人食管癌细胞实体瘤生长具有明显的抑制作用，抑瘤率达60％以上。组织学观察及TUNEL检测结果显示，肿瘤组织中散在凋亡细胞和凋亡小体。免疫组织化学检测结果显示，凋亡相关基因bax蛋白表达增加，bcl-2蛋白表达下降。结论：全反式维甲酸具有较强的体内抗肿瘤作用，作用机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

白桦脂酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用及机制

目的 探讨白桦脂酸（BA）对人宫颈癌HeLa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法 将4×10⁶个HeLa细胞接种于裸鼠右肩背部皮下,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,24只荷瘤裸鼠随机分为BA高剂量（80mg／kg）、中剂量（40mg／kg）、低剂量（20mg／kg）组及空白对照组（含溶剂）,每组6只,隔日腹腔注射连续给药21d,停药24 h后处死裸鼠,测量裸鼠体重、移植瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数;免疫组化法检测瘤组织内caspase-3、CytoC蛋白表达。结果 裸鼠处死后,BA处理组的移植瘤体积均明显小于空白对照组（P＜0.01）,其中高、中、低剂量组抑瘤率分别为56.2％、40.4％和24.6％ （P＜0.01）;HE染色法显示BA处理组小鼠的移植瘤组织出现明显凋亡及坏死改变;TUNEL检测对照组和BA低、中、高剂量组的凋亡指数分别为（8.36±2.78）％、（20.98±3.01）％、（28.74±4.77）％和（39.34±6.15）％（P＜0.05）;免疫组化法示BA处理组的肿瘤组织caspase-3、CytoC蛋白表达水平较空白对照组明显升高（P＜0.01）。结论 BA对人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调caspase-3、CytoC蛋白的表达及诱导细胞凋亡有关。     

尼美舒利联合顺铂对肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制探讨

目的 研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利(NIM)单独以及与顺铂联合对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长、Ki67及Caspase-3表达的影响,并进一步探讨其机制.方法 将裸鼠用统计学中的依体重按随机数字表法分为4组:对照组、尼美舒利组、顺铂组和联合用药组(尼美舒利+顺铂).将肺腺癌A549细胞接种至裸鼠皮下,并给予相应的药物治疗21d,观察移植瘤生长情况.免疫组化法检测Caspase-3及Ki67的表达变化.结果 尼美舒利联合顺铂对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用较单独用药明显,抑瘤率尼美舒利组为44.33％,顺铂组为53.61％,联合用药组为80.41％ (P ＜0.05).Caspase-3的表达率在联合用药组(67.43±23.57)％、顺铂组(48.40±20.37)％、尼美舒利组(38.65±15.37)％明显高于对照组(27.63±13.03)％,P＜0.05,联合用药组Caspase-3表达率(67.43±23.57)％高于顺铂组(48.40±20.37)％和尼美舒利组(38.65±15.37)％,P＜0.05.Ki67的表达率在联合用药组(24.34±15.90)％、顺铂组(40.85±22.47)％、尼美舒利组(53.33±19.67)％低于对照组(80.43±16.88)％,P＜0.05,且联合用药组Ki67的表达率(24.34±15.90)％低于顺铂组(40.85±22.47)％和尼美舒利组(53.33±19.67)％,P＜0.05.结论 尼美舒利可抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,与顺铂联合可增强顺铂对肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞Ki67表达,增强Caspase-3表达,抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

miR-486-5p对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨miR-486-5P对裸鼠皮下人胃癌移植瘤生长的影响及其可能的作用机制.方法:建立胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤模型,经miR-486-5P过表达质粒处理后,观察裸鼠皮下移植瘤生长情况,采用Western blotting及免疫组织化学法检测miR-486-5p靶基因神经纤毛蛋白-2(NRP2)的表达水平.结果:成功构建胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤模型;实验组移植瘤内miR-486-5p的表达水平明显高于对照组(P＜0.05),miR-486-5p可明显抑制裸鼠皮下胃癌移植瘤的生长;与阴性及空白对照组相比,实验组平均瘤体质量明显下降[(0.404±0.080) vs (0.748±0.122)、(0.788±0.176)g,均P＜0.05];移植瘤平均体积明显减小[(0.333 ±0.039) vs (0.597 ±0.175)、(0.594±0.216)cm3,均P＜0.05],实验组的抑瘤率达46.99％;实验组经miR-486-5p过表达质粒处理后,免疫组化检测结果显示,NRP2蛋白主要定位于胃癌细胞质内,呈棕黄色颗粒;实验组NRP2蛋白的IHS得分显著低于阴性及空白对照组[(2.2±0.84) vs (6.4±0.89),(6.2±1.48),均P＜0.01];阴性对照组与空白对照组的得分差异无统计学意义(P＞0.05);Western blotting检测结果显示,实验组移植瘤组织中NRP2蛋白的相对表达量显著低于阴性及空白对照组[(0.04±0.006) vs (0.70 ±0.03),(0.68±0.02),P＜0.01].阴性和空白对照组间的IHS得分值、抑瘤率及NRP2蛋白表达水平的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:miR-486-5p可明显抑制裸鼠皮下胃癌SGC-7901细胞移植瘤的生长,其作用机制可能与抑制NRP2的表达有关.     

小干扰RNA沉默Bcl-2表达增强食管癌细胞放射敏感性研究

目的 探讨Bcl-2基因的特异性小干扰RNA (siRNA)对食管癌细胞(EC9706细胞)Bcl-2蛋白表达和凋亡的影响及放射增敏作用。方法 化学合成Bcl-2基因的siRNA,通过脂质体转染法转入EC9706细胞。流式细胞仪检测转染前后Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡,成克隆分析siRNA联合X线照射对EC9706细胞的放射敏感性影响。结果 Bcl-2 siRNA1、Bcl-2 siRNA2、Bcl-2 siRNA3转染后Bcl-2蛋白在EC9706细胞中的阳性表达率分别为25.13％、38.87％、30.55％,较对照组的84.28％明显下降(t =4.01、3.04、3.64,P均＜0.05)。Bcl-2 siRNA1转染组凋亡率为33.86％,明显高于空白对照组的5.51％(t=6.55,P＜0.01)和阴性siRNA1转染组的5.59％(t=6.54,P＜0.01);Bcl-2 siRNA1联合X线照射的细胞凋亡率为56.76％,明显高于单纯照射组的24.51％(t=3.59,P＜0.05)。成克隆分析的Bcl-2 siRNA1转染加照射组D0、Dq、SF2值均低于单纯照射组,放射增敏比为1.33(D0值之比)。结论 Bcl-2基因的特异性siRNA可明显增强EC9706细胞的放射敏感性,具有良好临床应用前景。     

TSA联合基因工程腺病毒H101治疗食管癌皮下移植瘤的研究

目的 研究曲古霉素A(TSA)对基因工程腺病毒H101杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响,探讨HDAC抑制剂在腺病毒载体基因治疗中应用的可能性和作用机制.方法1)先成瘤后治疗组,构建裸鼠食管癌移植瘤模型,待肿瘤长至肉眼可见的肿块(约8mm ×7mm)后分组.TSA治疗组:每只每次瘤内注射1.0 μmol/L TSA;...     

阿米洛利对食管癌EC9706细胞侵袭能力的影响及其作用机制

 【摘要】　目的　研究阿米洛利对人类食管癌EC9706细胞体外侵袭能力的影响,探讨其可能的作用机制。方法　食管癌细胞EC9706经阿米洛利处理后,采用Transwell小室法检测其对细胞侵袭能力的影响,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法分别检测阿米洛利对细胞尿纤溶酶原激活物（uPA）mRNA及蛋白相对于β-actin表达的影响。结果　经10、20、40、80 μmol／L阿米洛利作用24 h后,EC9706细胞体外侵袭人工重组基膜的能力降低,并随着阿米洛利浓度的增加,EC9706细胞的穿膜细胞数由对照组的（96±7）个分别下降为（78±6）、（57±6）、（33±4）、（15±3）个（F＝43.46,P＜0.01）。随着阿米洛利浓度的增加,uPA mRNA的表达由对照组的（0.623±0.065）分别下降为（0.526±0.054）、（0.389±0.041）、（0.312±0.038）、（0.247±0.025）（F＝6.71,P＜0.01）,uPA 蛋白由对照组的（0.732±0.064）分别下降为（0.644±0.057）、（0.533±0.058）、（0.391±0.036）、（0.267±0.043）（F＝ 6.71,P＜0.01）。结论　阿米洛利能抑制食管癌细胞的侵袭能力,其作用机制可能与抑制uPA系统的表达有关。     

胰岛素样生长因子1受体在食管鳞癌组织中的表达及RNA干扰沉默其表达对EC9706细胞增殖能力的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)在食管鳞癌组织中的表达及其与患者临床特征之间的关系,以及RNA干扰沉默其表达对人食管癌EC-9706细胞体外增殖能力的影响.方法 采用免疫组化法,检测80例食管鳞癌组织和18例正常食管上皮组织中IGF-1R的表达,通过RNA干扰技术沉默EC9706细胞中IGF-1R的表达,通过绘制生长曲线、四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和平板克隆形成试验,观察IGF-1R对细胞体外增殖能力的影响.结果 食管鳞癌组织中IGF-1R表达的总阳性率为86.3%,强阳性率为51.3%;正常食管上皮组织中IGF-1R表达的总阳性率为61.1%,强阳性率为11.1%.食管鳞癌组织中IGF-1R表达的总阳性率和强阳性率均高于正常食管组织(P＜0.01).有淋巴结转移患者组织中IGF-1R表达的总阳性率和强阳性率均高于无淋巴结转移患者(P＜0.01).IGF-1R的表达随肿瘤组织分化程度的增高而降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).不同年龄组间IGF-1R表达差异无统计学意义(均P＞0.05).Ⅲ～Ⅳ期患者组织中IGF-IR表达的总阳性率和强阳性率均高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P＜0.01).稳定干扰后的EC9706细胞IGF-1R蛋白表达下降,生长缓慢,细胞倍增时间较实验对照组和空白对照组延长.培养48 h后,稳定转染细胞抑制率为17.3%,高于实验对照组(2.7%,P＜0.01).稳定转染细胞较实验对照组和空白对照组细胞克隆形成能力减弱(P＜0.05).结论 IGF-1R在食管鳞癌组织中呈高表达,与食管鳞癌的发生、转移、分化程度和临床分期相关;RNA干扰沉默IGF-IR的表达,可以使EC9706细胞的体外增殖能力降低.

Abstract：

Objective To explore the correlation of IGF-1R expression with clinical features of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and to investigate the effect of silencing IGF-1R by siRNA on the proliferation of esophageal cancer cell line EC9706 cells. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expresion of IGF-1R in 80 specimens of ESCC and 18 specimens of normal esophageal mucosa.IGF-I R siRNA was transfected into esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells, and the effect of RNAi was assessed by Western blot. The proliferation of EC9706 cells was determined by drawing growth curve, MTT assay and plate colony-forming assay. Results The total and strong positive rates of IGF-1R expression were 86.3% and 51.3% in ESCC, and 61.1% and 11.1% in normal esophageal epithelium,respectively. The total and strong positive rates of IGF-1 R expression in patients with lymph node metastasis were 94.4% and 74.1%, significantly higher than 69.2% and 3.9%, respectively, in those without lymph node metastasis (P ＜ 0. 01 ). A significantly higher IGF-1 R expression was associated with lower histological grade ( P ＜ 0.05 ). The total and strong rates of IGF-1 R expression in 39 patients of stages Ⅲ and Ⅳ were 97.4% and 71.8%, significantly higher than the 75.6% and 31.7%, respectively, in 41 cases of stages Ⅰ and Ⅱ (P ＜ 0. 01 ). IGF-1 R RNAi significantly inhibited IGF-1R expression and the growth of EC9706cells. The clone formation rate of RNAi-IGF-1R transfected cells was 19.1%, significantly lower than that of 52. 3% in non-transfected cells and 49.0% in empty vector-transfected EC9706 cells ( P ＜ 0.05 ).Conclusions The overexpression of IGF-1R is colerated with lymph node metastasis, differentiation and clinical stage. Down-regulation of IGF-1R can inhibit the proliferation of esophageal cancer EC9706 cells in vitro.     

NF-κBp65对食管鳞癌细胞上皮间质转化的影响*

目的:探讨NF-κ Bp65对食管鳞癌细胞EC9706上皮间质转化的影响。方法:NF-κ Bp65反义寡核苷酸（NF-κBp65-ASODN ）转染食管鳞癌细胞EC9706,采用RT-PCR、免疫细胞化学及流式细胞术检测NF-κ Bp65-ASODN 转染前后EC9706细胞中NF-κ Bp65、上皮性标志物E-cadherin 及间质性标志物Vimentin mRNA 及蛋白表达的变化,观察转染前后细胞形态学的改变,细胞划痕实验检测转染前后细胞运动能力的变化。结果:转染NF-κ Bp65-ASODN 的EC9706细胞,其NF-κ Bp65mRNA（0.14±0.06）及蛋白（免疫细胞化学:11.33± 1.40% ,流式细胞术:11.78%）的表达低于转染前（mRNA :0.45± 0.05;蛋白:免疫细胞化学:17.17± 1.66% ,流式细胞术:15.76%）（P<0.05）,上皮性标志物E-cadherin mRNA（0.36± 0.08）及蛋白（免疫细胞化学:17.58± 1.86% ,流式细胞术:14.98%）的表达高于转染前（mRNA :0.22± 0.06;蛋白:免疫细胞化学:14.42± 1.63% ,流式细胞术:12.22%）（P<0.05）,间质性标志物Vimentin mRNA（0.75± 0.07）及蛋白（免疫细胞化学:16.00± 1.41% ,流式细胞术:12.90%）的表达低于转染前（mRNA :0.89± 0.09;蛋白:免疫细胞化学:19.50± 0.89% ,流式细胞术:17.76%）（P<0.05）。 转染NF-κ Bp65-ASODN 后,EC9706细胞形态发生改变,细胞迁移距离（0.45± 0.08）较转染前（0.81± 0.11）明显缩短（P<0.05）。 结论:NF-κ Bp65可能参与食管鳞状细胞癌的上皮转化。NF-κ Bp65-ASODN 转染可抑制食管鳞癌细胞上皮间质转化,上皮性标志物E-Cadherin 表达上调、间质性标志物Vimentin 表达下调,且细胞形态发生改变、细胞运动能力降低。      

CEA siRNA载体的构建和转染人食管癌EC9706细胞的沉默作用

Objective: To construct the small interfering RNA (siRNA) expression vector of carcino-embryonic antigen (CEA) and inhibit the expression of CEA in EC9706 cells by RNA interference. Methods: Two pairs of oligonucleotide sequences were designed and synthesized according to the encoding sequence of mRNA of CEA. The annealed oligonucleotide frag-ments were cloned into pRNAT-U6.2 expression vector and identified by sequencing. The recombinant plasmid pRNAT-U6.2-CEA was transfected into EC9706 cells. The expression of CEA in the stable transfected cells was assayed by real time PCR and Western blot. Results: DNA sequencing showed that the oligonucleotide fragments were correctly inserted into pRNAT-U6.2 vector, and CEA expression in the transfected cells was down-regulated significantly by pRNAT-U6.2-CEA at both the mRNA and protein levels. Conclusion: The siRNA expression vector of CEA is successfully constructed and inhibits CEA expression in EC9706 cells. This facilitates further studies of the function of CEA at the molecular level.