自体肿瘤瘤苗对荷瘤鼠Th1、Th2型细胞因子及细胞毒作用的影响

目的研究经处理的H22肝癌细胞肿瘤瘤苗作为全细胞瘤苗对H22荷瘤小鼠体内Th1/Th2细胞比例和细胞因子的影响以及CTL的杀伤活性.方法用加重组白细胞介素2、重组粒细胞单核细胞集落刺激因子及福氏不完全佐剂制成疫苗,建立荷瘤小鼠模型,用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、荷瘤组、正常组小鼠脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测单个核细胞中的Th1和Th2细胞,并取血检测血清中IL-10、IFN-γ水平.结果效靶比为200:1时,免疫小鼠脾细胞体外杀伤亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于荷瘤组的13.6%,正常组的7.5%,以及对S180细胞的9.1%(P均＜0.05).瘤苗免疫组Th1细胞及Th1/Th2细胞的比值显著升高(P＜0.01),血清IFN-γ较对照组明显升高(P＜0.01);血清IL-10较对照组明显降低(P＜0.01).结论肿瘤细胞加小剂量IL-2和GM-CSF及佐剂组成的肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应.     

吉西他滨对卵巢癌移植瘤小鼠的免疫调节作用

目的:观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)对卵巢癌移植瘤小鼠肿瘤免疫微环境的调节作用.方法:C57BL/6小鼠皮下注射卵巢癌ID8细胞构建卵巢癌移植瘤模型,实验组腹腔注射GEM,对照组注射生理盐水,观察肿瘤生长情况.流式细胞术检测小鼠脾脏及肿瘤组织的调节性T细胞(regulatoryT cells,Treg)及髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC),实时定量PCR检测小鼠肿瘤组织arginase-1(Arg-D和Foxp3 mRNA的表达,流式细胞仪检测小鼠脾脏CD8+T细胞的比例,ELLSE法检测小鼠血清IFN-γ及IL-2的表达.结果:GEM处理后的移植瘤小鼠肿瘤生长明显受到抑制[(366.8±44.88) vs (499.3±24.14)mm3,P＜0.01].移植瘤小鼠肿瘤组织及脾脏Treg比率明显降低[(12.71±2.31)％ vs (20.36±2.65)％、(10.09±1.69)％ vs (13.79±1.31)％,均P＜0.01].实验组的相关基因mRNA表达较对照组显著降低[Foxp3:(4.30±0.46)vs (6.35±0.58);Arg-1:(16.32±0.38)vs(13.26±0.37);均P＜0.01].实验组血清中的IFN-γ和IL-2含量明显高于对照组[IFN-γ:(71.90±2.28)vs (53.91±3.91) pg/ml;IL-2:(51.46±1.69)vs (40.90±1.50) pg/ml,均P＜0.01].结论:GEM下调卵巢癌移植瘤小鼠免疫抑制活性,并可上调小鼠抗肿瘤免疫原性,该结果可为GEM作为卵巢癌免疫治疗干预措施提供实验依据.     

树突状细胞对肿瘤浸润淋巴细胞抗小鼠肝癌活性影响的研究

目的探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性,并将H22-DC-TIL过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用。方法从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性、血清TNF活性、抑瘤作用以及瘤体病理改变,并与对照组相比较。结果①H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性[杀伤率为(71.31±3.11)%],明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性[杀伤率分别为(50.11±3.03)%,(30.31±2.89)%],也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-脾淋巴细胞和未经DC激活的脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性[杀伤率分别为(49.80±3.21)%,(48.76±3.60)%和(19.23±2.71)%]和对Hepal-6细胞杀伤活性[杀伤率分别为(39.40±3.21)%,(38.62±2.87)%和(18.73±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤率分别为(26.38±2.51)%,(25.82±2.70)%和(18.34±3.01)%],同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。②H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性[活性为(30.43±1.35)%、(31.40±1.80)%、(35.30±1.20)%],并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/ml],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-脾淋巴细胞组、未经DC激活的脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。该组瘤体内淋巴细胞浸润程度也高于对照组,其瘤体生长明显受到抑制。结论①H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。②H22-DC-TIL具有很强的特异性抗小鼠肝癌作用。     

可诱导表达的白细胞介素12基因治疗小鼠原位移植性肝癌

目的 评估RU486系统诱导表达的白细胞介素12(IL-12)基因对小鼠原位移植性肝癌的治疗效果.方法 小鼠肝脏接种H22肝癌细胞,制备原位移植性肝癌模型.采用水流动力学注射法,将含有RU486调控系统的小鼠IL-12表达质粒pRS22注射到小鼠体内,腹腔注射RU486(250μg/kg)诱导质粒表达,检测血清中IL-12、干扰素γ(IFN-γ)和一氧化氮(NO)的表达水平.采用HE染色和免疫组织化学方法检测瘤细胞增殖活性和肿瘤血管生成情况.结果 注射生理盐水+RU486组、pRS-LacZ+RU486组、pRS22+芝麻油组和pRS22+RU486组小鼠肝脏肿瘤体积分别为(409.90±137.03)mm3、(271.80±182.63)mm3、(251.00±76.55)mm3和(46.48±47.19)mm3,肿瘤细胞增殖细胞核抗原(PCNA)阳性率分别为(82.10±4.62)%、(83.45±2.34)%、(77.46±2.99)%和(50.67±8.09)%,肿瘤组织微血管密度分别为(74.58±18.47)个/400倍视野、(63.60±13.36)个/400倍视野、(53.52±11.74)个/400倍视野和(25.38±10.87)个/400倍视野.与注射生理盐水+RU486组、pRS-LacZ+RU486组和pRS22+芝麻油组相比,pRS22+RU486组小鼠生存期明显延长(接种瘤细胞后第50天仍然有1只小鼠存活),血清中IL-12、IFN-γ和NO的表达水平分别为(11.52±7.46)ng/ml、(2.68±0.32)ng/ml和(5.10±3.27)μmol/L.结论 RU486系统能有效地调控IL-12基因的表达,可诱导的IL-12能够有效地抑制小鼠原位移植性肝癌的生长,延长小鼠的生存期.     

IL-2和IL-12基因联合治疗小鼠头颈鳞癌的实验研究

目的观察白细胞介素-2(IL-2)基因与白细胞介素-12(IL-12)基因联合治疗小鼠头颈鳞癌的疗效. 方法建立小鼠头颈鳞癌动物模型,在荷瘤部位将脂质体包裹的IL-2基因和IL-12基因直接注入肿瘤中,观察肿瘤大小变化,并检测此两种基因在肿瘤细胞中的蛋白表达情况、小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)和细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性. 结果 IL-2基因和IL-12基因联合治疗组,肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于单独治疗组和对照组(P<0.01).在注射有IL-2、IL-12基因的肿瘤组织中,其相对应的IL-2、IL- 12蛋白水平明显升高,小鼠脾细胞NK活性和CTL杀伤活性增强. 结论 IL-2、IL-12基因治疗可抑制小鼠头颈鳞癌生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答.二者联合应用,可产生协同效应并加强其抗肿瘤效果.     

肝癌细胞特异性IL-1a反义RNA对小鼠移植肝癌的抑制

目的:构建肝癌细胞特异性小鼠IL-1a反义RNA表达载体,观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制.方法:构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL-1a反义RNA表达载体pafpIRES2-antiIL-1a1和pafpIRES2-antiIL-1a2,经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定进行鉴定.反义RNA表达载体转染小鼠H22肝癌细胞,分H22/mock组、H22/antiIL-1a1组、H22/antiIL-1a2三组,RT-PCR检测IL-1a的表达水平.以转染后的H22细胞皮下接种建立荷肝癌小鼠模型,观察移植瘤体积和重量,MTT法检测荷瘤小鼠脾脏中分离的NK细胞对H22细胞的杀伤活性.结果:经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定证实成功构建能够在肝癌细胞中特异性表达IL-1a反义RNA的表达载体pafpIRES2-antiIL-1a1和pafpIRES2-antiIL-1a2,转染H22细胞后细胞中IL-1a表达水平明显下降,以pafpIRES2-antiIL-1a2更为显著.成功建立荷肝癌小鼠模型,与H22/mock组小鼠相比, H22/antiIL-1a2组小鼠移植瘤体积较小,生长显著减慢(P<0.05). H22/antiIL-1a1、H22/antiIL-1a2组荷瘤小鼠的NK细胞对H22细胞的杀伤活性明显增强(P<0.05或P<0.01).结论:成功构建的肝癌细胞特异性IL-1a反义RNA表达载体可有效抑制小鼠移植肝癌的生长,其机制与靶向阻断IL-1a表达、上调NK细胞的杀伤活性有关.     

GM-CSF基因修饰肺癌细胞疫苗的抗肿瘤活性及其与化疗的协同作用

目的评价粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰肿瘤疫苗的抗肿瘤活性,探讨其与化疗联合应用的抗肿瘤效果。方法以小鼠肺癌Lewis细胞系接种C57BL/6小鼠建立动物模型。利用含GM-CSF基因的重组质粒GM-CSF-pIRES2-EGFP,转染小鼠肺癌细胞系Lewis和LA795细胞,分别制备自体(Lewis细胞)和同种异体(LA795细胞)肿瘤疫苗。小鼠皮下接种Lewis细胞(1×107个)后5 d,采用GM-CSF分泌性肿瘤疫苗接种3次,同时设PBS组和单纯疫苗组作为对照,检测疫苗治疗前后脾细胞对Lewis细胞杀伤活性的变化,以及血清白介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。观察GM-CSF分泌性肿瘤疫苗接种及联合化疗对小鼠生存期的影响。结果GM- CSF分泌性自体或同种异体肿瘤疫苗,均可诱导小鼠脾细胞对Lewis细胞杀伤活性增高,第3次接种后分别为(42.0±2.5)%和(39.6±7.3)%;同时血清中Th1类细胞因子IFN-γ的水平升高,而Th2类因子IL-4的水平无显著变化。GM-CSF分泌性肿瘤疫苗治疗组小鼠生存期与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而化疗联合疫苗组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P<0.05)。结论GM-CSF基因修饰的肿瘤疫苗可刺激机体产生特异性免疫反应;化疗的联合应用有助于提高肿瘤疫苗的治疗效果。     

重组白介素-12治疗小鼠Lewis肺癌的实验研究

背景与目的:白介素-12(interleukin-12,IL-12)是具有抗瘤活性的细胞因子,本研究建立稳定表达小鼠IL-12(murineinterleukin-12,mIL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewislungcarcinoma,LLC)细胞系LLC/mIL-12,评估mIL-12重组质粒及LLC/mIL-12瘤苗治疗小鼠Lewis肺癌移植瘤的疗效。方法:脂质体转染LLC获得LLC/mIL-12瘤苗。于C57BL/6小鼠皮下接种LLC细胞2×106个,成瘤后将小鼠随机分成4组(n=10),第1、4、7天瘤内注射质粒或瘤苗,第14天处死小鼠,观察肿瘤生长曲线、脾细胞中CTL细胞和NK细胞活性以及肿瘤浸润淋巴细胞。结果:LLC/mIL-12瘤苗组和pcDNA3.1( )-mIL-12质粒组肿瘤体积显著缩小,mIL-12能增强NK细胞和CTL细胞活性,两者均以LLC/mIL-12治疗组更显著,LLC/mIL-12和pcDNA3.1( )-mIL-12治疗组有大量CD4 、CD8 淋巴细胞浸润。结论:mIL-12基因能增强NK细胞和CTL活性,LLC/mIL-12及pcDNA3.1( )-mIL-12均能产生抗瘤免疫反应,且前者作用更强。     

肝癌H-22细胞膜抗原肽提取物对小鼠免疫功能的影响及其抑瘤作用

目的应用小鼠肝癌H-22细胞膜相关抗原肽(TAP)提取物免疫小鼠,观察其对小鼠自身移植肿瘤生长及免疫学参数的影响,为制备肿瘤疫苗提供实验依据.方法采用微酸洗脱法制备分子量≤3000 Da的细胞膜TAP提取物,皮下免疫小鼠,检测胸腺细胞增殖反应、T细胞亚组百分数的变化,脾细胞Con A反应性、IL-2和IFN-γ活性、CTL杀伤活性的变化及抑瘤效应.结果 TAP提取物免疫后,移植肿瘤的发生率降低(P＜0.01),平均出现时间延迟(P＜0.001),生长速度减慢;同时,脾细胞Con A反应性(P＜0.01)、IFN-γ(P＜0.05)和IL-2分泌活性和CTL杀伤活性(P＜0.05)不同程度增强;胸腺细胞3H-TdR自发掺入率(P＜0.05)及CD4 和CD8 T细胞百分数(P＜0.05)也有不同程度增高.结论小鼠肝癌H-22细胞膜TAP提取物具有免疫原性,能有效激发免疫系统功能,抑制自身移植肿瘤的生长.     

IL-12转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其机制

背景与目的:卵巢恶性肿瘤发病率、复发率、转移率均较高,有研究表明IL-12具有明显的抗肿瘤作用.本研究探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用机制及其对裸鼠皮下种植瘤成瘤能力的影响.方法:应用脂质体转染技术将含有小鼠IL-12全长基因的质粒转染到SKOV3细胞(SKOV3/IL-12组),同时以空白质粒载体转染SKOV3细胞(SKOV3/neo组)和未转染SKOV3细胞作为对照.ELISA法检测3组细胞上清中IL-12表达.MTT法检测3组SKOV3细胞的抑制率和细胞倍增时间.建立裸鼠皮下卵巢癌种植模型,分别接种SKOV3/IL-12、SKOV3/neo、SKOV3细胞,观察肿瘤生长情况.ELISA法检测裸鼠血清中IL-12及γ-干扰素(gamma interferon,IFN-γ)的表达,免疫组化法检测裸鼠种植瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)及干扰素诱生蛋白-10(IFN-gamma-inducible protein 10,IP-10)的表达.结果:转染48、60 h后细胞上清中IL-12蛋白表达量,SKOV3/IL-12组[(473.0±38.0)pg/ml、(522.0±32.0)pg/ml]高于SKOV3/neo组[(16.0±1.3)pg/ml、(18.0±1.6)pg/ml]及SKOV3组[(16.0±1.2)pg/ml、(17.0±1.4)pg/ml](P＜0.01).SKOV3/IL-12组细胞增殖抑制率为63.7%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),SKVO3/IL-12组细胞倍增时间(45.8±2.7)h明显长于SKOV3/neo细胞组(27.6±2.2)h和SKOV3组(28.2±2.1)h(P＜0.01).裸鼠皮下卵巢癌种植模型中,SKOV3/IL-12组裸鼠成瘤率(5/8)低于对照组(8/8)(P＜0.01);平均成瘤时间[(15.0±5.0)天]长于SKOV3/neo组[(7.9±3.2)天]和SKOV3组[(7.8±2.4)天](P＜0.01);SKOV3/IL-12组种植瘤体积、重量和裸鼠体重低于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01),种植瘤生长速度缓慢,抑瘤率达61.3%.SKOV3/IL-12组裸鼠血清中IL-12、IFN-γ表达量高于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01).SKOV3/IL-12组裸鼠种植瘤中IP-10阳性率(100%)高于对照组(P＜0.01),VEGF阳性率(62.5%)及MVD低于对照组(P＜0.01).结论:转染IL-12能有效地抑制SKOV3细胞生长;转染IL-12的SKOV3/IL-12细胞在裸鼠皮下的成瘤能力降低;IL-12可通过诱导IFN-γ诱生IP-10抑制肿瘤血管形成而实现其抗卵巢癌的作用.     

肉苁蓉苯乙醇总苷抗肝癌作用的实验研究

目的：研究肉苁蓉苯乙醇总苷（CPhGs）的抗肝癌作用,并探讨其可能的作用机制。方法：采用前肢右侧腋部皮下注射法建立小鼠肝癌H22荷瘤模型,实验设空白对照组、肝癌H22荷瘤模型组、肝复乐阳性治疗组（1 351.5 mg/kg）、CPhGs高剂量组（500 mg/kg）、中剂量组（250 mg/kg）、低剂量组（125 mg/kg）,共6组,每组10只。除空白对照组和模型组外,其余各组分别灌胃给予肝复乐或CPhGs,连续10 d。期间监测小鼠的一般状况,观察各组H22荷瘤小鼠瘤体生长情况,实验结束时,摘眼球取血,酶联免疫（ELISA）法检测血清白介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和甲胎蛋白（AFP）含量;分离脾脏、肝脏,称质量,计算脏器系数;完整剥取瘤体,计算各组小鼠的肿瘤抑制率;HE染色观察瘤体病理组织学变化。结果：荷瘤模型组动物腋下肿瘤出现早且生长最快,CPhGs低、中剂量组次之,高剂量组和阳性治疗组瘤体生长较慢。与模型组比较,CPhGs中、高剂量组瘤质量均明显降低（P < 0.05）,各剂量组抑癌率随CPhGs剂量增加依次升高（P < 0.05）;阳性治疗组和CPhGs各剂量组脾脏系数均明显升高及肝脏系数均明显降低（P < 0.05）;CPhGs中、高剂量组和阳性治疗组IL-2含量均明显升高（P < 0.05）,而AFP含量均明显降低（P < 0.05）;CPhGs各剂量组和阳性治疗组TNF-α含量均明显降低（P < 0.05）。病理结果发现CPhGs各剂量组小鼠肝癌细胞生长受到抑制、数目较少、异质性降低、并伴有大量坏死细胞。结论：CPhGs能降低肝癌H22荷瘤小鼠肝脏损伤,并对其肿瘤生长有抑制作用,可能与CPhGs降低荷瘤小鼠血清中AFP含量及提高荷瘤小鼠免疫能力有关。     

重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与吉西他滨联合对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460的体内外抑制作用

目的 观察重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rmhTRAIL)与吉两他滨(GEM)联合应用对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460在体内外的抑制作用.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法,检测系列浓度的rmhTRAIL和GEM单独或联合应用时对人肺癌NCI-H460细胞生长的抑制作用.将NCI-H460细胞裸鼠移植瘤模型分为6组:对照组(腹腔注射生理盐水)、rmhTRAIL组、GEM组、rmhTRAIL+GEM组、GEM+顺铂(DDP)组和rmhTRAIL+GEM+DDP组,分别给药.每3～4 d测量1次裸鼠移植瘤大小,用药后21 d,处死裸鼠,剥取肿瘤称重.结果 rmhTRAIL和GEM单独或联合应用时对NCI-H460细胞的生长抑制作用呈剂量依赖性,且系列浓度的rmhTRAIL和GEM的联合具有协同抑制作用.rmhTRAIL组、rmhTRAIL+GEM组、GEM+DDP组和rmhTRAIL+GEM+DDP组的相对肿瘤体积分别为4.75±3.04、2.53±1.25、4.52±2.87和1.69±0.97,均显著低于对照组(8.82±5.62,均P＜0.05);肿瘤重量分别为(2.23±0.29)g、(1.12±0.77)g、(2.51±0.87)g和(0.60±0.18)g,均显著低于对照组[(4.71±0.97)g,均P＜0.01].rmhTRAIL+GEM组的相对肿瘤体积和肿瘤苇量均显著低于rmhTRAIL组和GEM组(P＜0.05和P＜0.01).rmhTRAIL+GEM+DDP组的相对肿瘤体积和肿瘤重量均显著低于rmhTRAIL组和GEM+DDP组(P＜0.05和P＜0.01).结论 在体内外实验中,rmhTRAIL与吉西他滨联合对人肺癌细胞株NCI-H460的生长均显示出协同抑制作用.     

Aglaroxin C对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制作用及对其脏器的影响

目的:探讨楝酰胺衍生物Aglaroxin C对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的影响及在实验剂量下对小鼠各脏器有无影响。方法:建立BALB/C小鼠H22腋下实体瘤模型,并随机分为Ⅰ组（尾静脉给药对照组）、Ⅱ组（尾静脉给药组,0.1 mg每只）、Ⅲ 组（瘤内给药对照组）、Ⅳ组（瘤内给药组,0.05 mg每只）、Ⅴ组（瘤内给药组,0.1 mg每只）,每组各5只。隔天给药(Aglaroxin C)一次,共4次。每日测量小鼠体重。末次给药24小时后切除肿瘤及各组小鼠主要脏器并称重,计算抑瘤率、脏器系数。用各组肿瘤及各脏器制作病理切片,苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE染色）,并在光镜下观察其细胞形态学变化。结果:Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组的瘤体质量分别为（2.11±0.50） g、(1.59±0.14) g、(2.30±0.64) g、(1.66±0.12) g、(1.06±0.14) g,Ⅱ组瘤体质量明显小于Ⅰ组（P＜0.01),Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组比较差异有统计学意义（P＜0.01)。Ⅴ组的抑瘤率最高达53.91%。显微镜下观察肿瘤病理切片,给药组坏死肿瘤细胞明显增多,对照组肿瘤细胞坏死轻微;各组小鼠体质量组间变化无明显统计学意义（P＞0.05）;显微镜下观察各脏器病理切片,各给药组与对照组相比,无明显异常;脏器系数各剂量组与对照组组间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:Aglaroxin C对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的生长有抑制作用,在实验剂量下对小鼠各脏器无明显影响。     

融合基因mGM-CSF/hIL-2在肝癌细胞瘤苗特异性免疫治疗中的作用

背景与目的:手术切除是治疗肝癌的主要方法,但对其术后的复发转移却无更好的办法。近年来,免疫学的发展使肝癌的治疗有了更好的治疗方法。本研究旨在通过制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌瘤苗,观察其特异性抗肿瘤免疫作用。方法:用含hIL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体,在体外转染H22细胞,制成疫苗,皮下接种小鼠,同时建立荷瘤小鼠模型。用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、空载组、未转染组小鼠脾细胞对亲本H22细胞的杀伤活性。取血检测血清中IL-10、IFN-γ水平,观察小鼠存活期。结果:成功制备了含有hIL-2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗。免疫小鼠脾细胞体外对H22细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对S180细胞的9.1%,以及空载组和未转染组的13.6%和7.5%(P<0.05)。转基因瘤苗免疫组血清IFN-γ为(12.83±0.75)pg/mL,较空载瘤苗组的(7.83±0.65)pg/mL明显升高(P<0.01),血清IL-10[(4.58±0.34)pg/mL]较空载瘤苗组的(8.15±0.28)pg/mL明显降低(P<0.01)。同时,转基因瘤苗免疫组小鼠存活期为(40±6)d,较对照组[空载瘤苗组(30±3)d,未转染组(19±4)d]明显延长。结论:转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠存活期。     

参归丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的减毒增效作用及其机制

探讨参归丸的抑瘤作用及对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的增效减毒作用。方法 建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,随机分为模型组、顺铂组、参归丸组、参归丸加顺铂联合组,另设正常对照组。观察各组小鼠一般状况,计算有效体重变化;检测各给药组的抑瘤率、q值、肿瘤指数、肝脏、脾脏、胸腺、肾脏的器官指数。血常规检测白细胞计数,ELISA检测血清低氧诱导因子（HIF1α）的浓度,血生化检测乳酸脱氢酶（LDH）活力。结果 参归丸组和联合组的一般状况优于模型组和顺铂组;各治疗组的瘤体质量皆小于模型组的瘤体质量( P＜0.05),联合组的抑瘤率高于单用参归丸或顺铂组的抑瘤率,联合用药疗效具有相加效应;参归丸组有效体重增加、脾脏和胸腺指数高于顺铂组(P＜0.05);参归丸组和联合组血清HIF1α浓度低于模型组( P＜0.05);顺铂组血清LDH活性高于其他治疗组( P＜0.05)。结论 参归丸具有抑瘤作用和对顺铂化疗的增效减毒作用,其机制可能在一定程度上与降低小鼠血清中HIF1α浓度和LDH活性有关。     

槐耳颗粒联合沙利度胺抑制鼠肝癌H22细胞种植瘤的实验

目的探讨槐耳颗粒和沙利度胺治疗肿瘤的作用机制。方法将雄性昆明小鼠(每组10只)分为对照组（A组）、槐耳颗粒组(B组)、沙利度胺组(C组)和槐耳颗粒+沙利度胺组(D组)。用H22细胞给小鼠皮下注射,复制皮下瘤模型。观察各组移植瘤质量和抑瘤率,采用免疫组织化学法检测各组瘤组织VEGF、CD31蛋白表达。结果与对照组比较,3个用药组小鼠的移植瘤重和瘤组织CD31阳性率显著低于对照组(P＜0.01),槐耳颗粒+沙利度胺组VEGF表达显著低于对照组VEGF表达(P＜0.01);与沙利度胺组和槐耳颗粒组比较,槐耳颗粒+沙利度胺组小鼠瘤质量和瘤组织CD31阳性率显著降低 (P＜0.05)。结论槐耳颗粒和沙利度胺联合用药有明显抑制肿瘤生长的作用,其机制可能是通过下调VEGF蛋白表达和降低微血管密度,促进肿瘤细胞凋亡;并且两者有协同作用。     

RNA干扰技术裸鼠体内沉默缺氧诱导因子1α的表达对宫颈癌的抑瘤效应

目的 观察体内沉默缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达后对宫颈癌的抑瘤效应,并探讨其可能的机制.方法 将实验用宫颈癌Siha细胞分为空白对照组(转染空载体)、无关对照组(转染无关对照质粒)和实验组(稳定转染pU-HIF-1α-shRNA的真核表达载体),接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-shRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用.采用免疫组化SP法和Western blot 法,检测HIF-1α和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)蛋白在肿瘤组织中的表达.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测HIF-1α、GLUTI和己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)mRNA的表达.采用酶显色法,检测肿瘤组织中的乳酸含量.采用原位末端标记(TUNEL)法,检测细胞凋亡.结果 实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组和无关对照组明显减慢(P＜0.05).接种50 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为(1.90±0.28)g,也明显轻于空白对照组[(2.95±0.77)g]和无关对照组[(2.54±0.56)g,P＜0.01].实验组肿瘤组织中HIF-1α mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.45±0.04和1.25±0.92,GLUT1mRNA和蛋白的相对表达量分别为0.32±0.02和1.25±0.48,均明显低于空白对照组和无关对照组(均P＜0.05).实验组中HK Ⅱ mRNA和乳酸的含量均明显低于空白对照组和无关对照组(均P＜0.05),但凋亡细胞数较空白对照组和无关对照组明显增多(均P＜0.01).结论 以HIF-1α为靶点的基因治疗,可通过下调靶基因GLUT1和HKⅡ的表达来降低宫颈癌Siha细胞的糖酵解水平,促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥抑制宫颈癌生长的作用.     

五倍子酸对H22肝癌细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的 观察五倍子酸(trihydroxybenzoic acid,TBA)对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法 建立移植性H22肝癌细胞荷瘤小鼠模型,每组10只,TBA高、中、低剂量组TBA溶液0.50g/kg、0.25g/kg、0.13g/kg灌胃给药;对照组0.5%羧甲基纤维素钠溶液0.2mL/10g灌胃给药;阳性对照组CTX 20mg/kg腹腔注射,每天固定时间给药一次,连续给药10d。观察各组小鼠实体瘤重,计算抑瘤率,HE染色检测肿瘤组织细胞形态变化。结果 TBA 0.50g/kg、0.25g/kg和0.13g/kg组小鼠平均瘤重不同程度下降,其中TBA 0.25g/kg组平均瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),TBA三组抑瘤率分别为24.83%、45.52%和15.86%。结论 TBA灌胃给药可以不同程度抑制H22肿瘤的生长。