自噬基因Beclin1在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,以手术、铂类和紫杉烷类药物为主的治疗方案已被确立为卵巢癌治疗的标准,但其死亡率仍位居妇科肿瘤之首。自噬是一种高度保守的细胞代谢过程,参与细胞的病理、生理等过程。近年来研究发现自噬与肿瘤有重要而复杂的关系。Beclin1是自噬体形成过程中重要的靶点,具有抑制肿瘤生长的作用,但目前Beclin1与卵巢癌的关系尚不清楚。本文将从Beclin1与卵巢癌发生发展、治疗及耐药的关系这三个方面进行综述,以期为卵巢癌早期诊断及肿瘤的治疗提供新的思路。     

自噬相关基因Beclin1 在乳腺癌发生发展及治疗中的作用

乳腺癌是女性最常见的、发病率位居恶性肿瘤首位的肿瘤。自噬是一种高度保守的溶酶体依赖性分解代谢途径,参与细胞的生理和病理过程,是细胞维持自稳态的重要机制之一,并对肿瘤的生物学有着复杂且重要的作用。Beclin1 是第一个在哺乳动物中发现的与自噬相关的抑癌基因,其作为自噬体形成过程中的重要分子之一,是调控细胞自噬活性的关键靶点。近年来的研究发现,Beclin1 与乳腺癌的发生发展及预后密切相关。其不仅可以降低乳腺癌的发生概率,也能促进乳腺癌的进展。同时,Beclin1 也参与影响乳腺癌的辅助治疗效果,既可以影响化疗药物诱导的乳腺癌细胞的凋亡,也是乳腺癌内分泌治疗耐药的主要原因之一。Beclin1 与HER2 之间的相互作用也影响着靶向药物的疗效。因此本文就Beclin1 与乳腺癌的发生发展及其在治疗中的作用进行综述。     

自噬相关基因Beclin1与乳腺癌病理相关性分析

目的 探讨自噬相关基因Beclin1在乳腺癌中的表达情况和与乳腺癌相关病理的相关性.方法 选取120例乳腺癌患者作为研究对象,将其分为恶性组,所有患者均行手术或空心针穿刺病理证实为乳腺癌患者,取同期120例良性乳腺肿瘤患者作为良性组,另取同期120例健康者的乳腺组织进行分析,将其分为对照组.分析三组患者自噬相关基因Be...     

自噬相关基因Beclin1在外阴鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关基因Beclin1在外阴鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学的方法检测Beclin1蛋白在50例外阴鳞癌、 30例外阴上皮内瘤变及10例正常外阴组织中的表达情况,RT-PCR的方法检测25例外阴鳞癌、13例外阴上皮内瘤变及10例正常外阴组织中Beclin1 mRNA的表达情况.结果:Beclin1蛋白在外阴癌、外阴上皮内瘤变、正常外阴组织中阳性率分别为52.0%、86.6%、90.0%,Beclin1蛋白在外阴癌组织中的表达明显低于外阴上皮内瘤变及正常外阴组织,具有统计学差异(P<0.05).Beclin1 mRNA在外阴癌中的相对表达量为(0.318±0.031),显著低于外阴上皮内瘤变(0.634±0.037)及正常外阴组织(0.702±0.042).Beclin1蛋白在外阴鳞癌中的表达与肿瘤临床分期、分化程度、有无淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄无关(P>0.05).结论:Beclin1在外阴鳞癌组织中表达下调,提示自噬活性的改变可能对外阴鳞癌的发生、发展起一定的作用.     

自噬基因Beclin 1与肿瘤的关系

自噬基因Beclin 1是近十多年来发现的与自噬相关的一种抑癌基因,主要通过诱导自噬、促进凋亡而抑制肿瘤的发生发展.但也有证据表明其在肿瘤的发展中起着积极的作用.本文就Beclin 1基因与肿瘤,尤其是消化系统肿瘤的关系进行综述.     

自噬基因Beclin1与肿瘤的关系

自噬基因Beelin 1是近十多年来发现的与自噬相关的一种抑癌基因,主要通过诱导自噬、促进凋亡而抑制肿瘤的发生发展。但也有证据表明其在肿瘤的发展中起着积极的作用。本文就Beclin1基因与肿瘤,尤其是消化系统肿瘤的关系进行综述。     

自噬基因Beclin1与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性研究

背景与目的:有研究表明自噬的抑制与肿瘤的发生有关,沉默自噬基因Beclin1可导致多种恶性肿瘤的发生.本研究探讨Beclin1基因在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用,并分析其过表达对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响.方法:用免疫组化检测25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织的Beclin1表达;构建真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,脂质体法分别将质粒pcDNA3.1/Beclin1、pcDNA3.1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,并用流式细胞仪检测凋亡情况.结果:正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中Beclin1表达的积分光密度(integrated optical density,IOD)值均较高,两者之间的差异无显著性(P＞0.05);交界性卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达降低,而在上皮性卵巢癌中Beclin1表达的IOD值最低,与正常卵巢组织比较差异有显著性(P＜0.05).ocDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后细胞生长抑制率为(68.75±5.10)%,而pcDNA3.1转染组为(10.91±4.20)%,两者之间差异有显著性(P＜0.05).pcDNA3.1/Beclin1转染后72 h SKOV3细胞的凋亡率为19.07%,高于pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P＜0.05).结论:Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展有关;自噬基因Beclin1的过表达可抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并诱导其凋亡.     

宫颈癌组织中自噬相关蛋白Beclin1的表达及临床意义

目的 检测宫颈癌组织中自噬相关蛋白Beclin1的表达情况,探究其与宫颈癌临床病理参数及患者预后的关系.方法 运用免疫组化方法检测Beclin1蛋白在40例宫颈癌组织、癌旁正常组织中的表达情况.结果 Beclin1蛋白在宫颈癌中的阳性表达率为42.5％,在癌旁正常组织中的阳性表达率为95.0％,两者相比差异具有统计学意...     

Toll样受体8在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达及其激动剂对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察Toll样受体8(TLR8)在人官颈癌细胞株HeLa中的表达,探讨TLR8激动剂CL075对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,检测13种肿瘤细胞系中TLR8 mRNA和经CL075作用后HeLa细胞中环氧化酶2(COX-2)、Bcl-2和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达水平;采用免疫荧光技术对HeLa细胞中TLR8蛋白的表达进行定位观察;采用流式细胞术检测不同浓度CL075作用下HeLa细胞的细胞周期和凋亡的变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HeLa细胞的增殖状态。结果 与其他肿瘤细胞株相比,HeLa细胞中TLR8mRNA的表达水平最高,达703.7±20.6。TLR8蛋白主要定位于HeLa细胞的胞浆中。0.1、0.5和1.0 μg/ml的CL075分别作用于HeLa细胞48 h后,G2/M+S期细胞所占的比例逐渐增高,其中1.0μg/ml CL075作用组G2/M+S期细胞所占的比例最高,达(57.67±1.73)％,明显高于空白对照组[(39.02±2.33)％,P＜0.01]。经不同浓度的CL075处理后,HeLa细胞的凋亡水平与空白对照组相比,无明显改变(P＞0.05);但经顺铂处理后,凋亡细胞明显增多(P＜0.01)。MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,CL075作用于HeLa细胞48和72 h后,HeLa细胞的增殖能力明显增强(P＜0.01)。CI075作用于官颈癌HeLa细胞24和48 h后,COX-2、Bcl-2和VEGF mRNA的表达水平明显升高(P＜0.05)。结论宫颈癌HeLa细胞中TLR8的表达水平及其与配体相互作用的信号,可能是肿瘤发生和发展的重要因素之一。TLR8可能是宫颈癌治疗的一个潜在靶点。     

Modulatory effects of Beclin 1 on expression of angiopoietin and Tie-2 receptor in human cervical cancer cells

Aim: To investigate the effect of Beclin 1, an autophagy gene, on the expression of angiopoietin (Ang) protein and the Tie-2 receptor in CaSki human cervical cancer cells. Materials and Methods: Beclin 1 overexpression (pcDNA3.1-Beclin1) and knockdown (pSUPER-Beclin1) plasmids were independently transfected into CaSki cells, and stably transfected cells were selected. Real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot analyses were performed to detect the mRNA and protein expression of Beclin 1, Ang-1, Ang-2, and Tie-2. MTT assays were employed to determine cell proliferation rates. Results: In the cells transfected with pcDNA3.1-Beclin1, the expression of Beclin 1, Ang-2, and Tie-2 was markedly increased, but expression of Ang-1 was dramatically reduced. MTT assays revealed that the proliferation of these cells was also significantly suppressed. In the CaSki cells transfected with pSUPER-Beclin1, the expression of Beclin 1, Ang-2, and Tie-2 was inhibited. Conclusion: Overexpression of Beclin 1 can inhibit the proliferation of CaSki cells, which may be attributed to an imbalance among the expression of Ang-1, Ang-2 and Tie-2.     

Over-expression of the Beclin1 gene upregulates chemosensitivity to anti-cancer drugs by enhancing therapy-induced apoptosis in cervix squamous carcinoma CaSki cells

The purpose of this study was to investigate whether the autophagy-related gene, Beclin1, plays a role in the regulation of chemosensitivity to anti-cancer drugs in cervical cancer CaSki cells. Expression of the Beclin1 protein was up-regulated in pcDNA3.1-Bec transfectants and led to cell arrest in the G₀/G₁ phase of the cell cycle. The MTT assay indicated that over-expression of Beclin1 sensitized CaSki cells to chemotherapeutic drugs (cisplatin, paclitaxel, 5-fluorouracil, and epirubicin) and induced greater degrees of cytotoxicity than vector-only controls. After treatment with anti-cancer drugs, flow cytometric analysis indicated that the Beclin1-transfected group showed a greater increase in apoptosis than did the non-transfected group. Furthermore, pSUPER-Bec transfectants did not lead to a significant increase of resistance to each of these anti-cancer drugs. These results suggest that Beclin1 plays an important role in the regulation of potent anti-tumor activity, and over-expression of Beclin1 in CaSki cells may enhance apoptosis signaling induced by anti-cancer drugs.     

核糖体蛋白 S7对宫颈癌 HeLa 细胞凋亡的影响

目的：初步探讨核糖体蛋白 S7（RPS7）对宫颈癌 HeLa 细胞凋亡的影响。方法用构建的带增强绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的 RPS7重组表达质粒 pIRES2-EGFP-RPS7转染 HeLa 细胞作为实验组,以转染空载体 pIRES2-EGFP 的细胞作为对照组,流式细胞仪检测带绿色荧光细胞的含量, Western blotting 检测细胞中 RPS7蛋白表达;用带有荧光染料藻蓝蛋白（APC）的磷脂结合蛋白-V （Annexin-V）试剂对瞬时过表达和稳定干扰 RPS7的细胞进行染色,流式细胞仪分析细胞凋亡水平。结果在获得的瞬时过表达RPS7的 HeLa 细胞中,细胞凋亡水平明显高于转染空载体的细胞[（10．00±0．60）％∶（5．73±0．61）％],差异有统计学意义（t ＝8．63,P ＝0．001）。另一方面,抑制 RPS7表达的Sh-RPS7细胞凋亡水平低于对照细胞[（3．08±0．49）％∶（5．97±0．63）％],差异有统计学意义（t ＝6．40,P ＝0．003）。结论上调 RPS7表达具有促进 HeLa 细胞凋亡的作用,而下调 RPS7表达可抑制HeLa 细胞的凋亡。     

白桦酯醇诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及作用机制的研究

目的:研究白桦酯醇(betulin)体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.方法:以不同浓度的白桦酯醇处理HeLa细胞,采用MTT法检测白桦酯醇作用24、48和72 h时对细胞生长抑制的情况;倒置相差显微镜下观察对HeLa细胞形态学变化的影响;TUNEL法检测对细胞凋亡的影响;FCM检测细胞的凋亡率;蛋白质印迹法检测对HeLa细胞中caspase-3和多聚ADP-核糖聚合酶[poly (ADP-ribose) polymerase,PARP]蛋白表达的影响.结果:不同浓度的白桦酯醇能抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖关系(P＜0.01);倒置相差显微镜下观察结果显示,白桦酯醇处理24 h后,细胞体积缩小,核固缩,细胞的折光性减弱,且随着白桦酯醇浓度的增加上述形态变化增强,呈典型的凋亡形态学改变;TUNEL法及FCM检测结果显示,经不同浓度白桦酯醇处理24 h后,HeLa细胞发生凋亡,且随药物浓度的增加凋亡率明显增高;蛋白质印迹法检测结果显示,随加药浓度的增加,HeLa细胞中caspase-3和PARP蛋白表达均呈不同程度的上调.结论:在一定的浓度范围内,白桦酯醇可在体外抑制Hela细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调caspase-3及PARP蛋白的表达有关.     

脂筏对子宫颈癌细胞生长的影响

 目的　探讨脂筏对子宫颈癌细胞生长的影响并初步探讨其作用机制。方法　将HeLa细胞系分为不处理对照组、脂筏干扰剂组及NADPH氧化酶抑制剂组,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定各组培养24 h后的细胞存活率,Western blot法检测各组细胞内缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白相对含量。结果　与对照组相比脂筏干扰剂组细胞的生长速度明显减慢（0.612±0.051 与 0.984±0.034）,NADPH氧化酶抑制剂组显示了类似的效应（0.591±0.074与0.984±0.034）,差异有统计学意义（t＝4.062,P＜0.05）。与对照组相比脂筏干扰剂组及NADPH氧化酶抑制剂组HIF-1α的表达量也明显降低（1.79±0.14与 2.56±0.22;1.54±0.12 与 2.56±0.22）,差异有统计学意义（t＝2.423,P＜0.05）。结论　脂筏可能通过NADPH氧化酶激活途径激活HIF-1α及其下游原癌基因促进子宫颈癌细胞的生长,脂筏干扰剂及NADPH氧化酶抑制剂可能成为子宫颈癌药物治疗新的研究方向。     

SPINK1 contributes to proliferation and clonal formation of HT29 cells through Beclin1 associated enhanced autophagy

We aimed to explore the molecular mechanism that were involved in SPINK1-induced proliferation and clonogenic survival of human colorectal carcinoma (CRC) HT29 cells. Initially, we generated HT29 cells either permanently silencing or overexpressing SPINK1 protein. The results showed that SPINK1 overexpression (OE) significantly stimulated the proliferation and clonal formation of HT29 cells at the varied time points. Secondly, we found SPINK1 OE enhanced the ratio of LC3II/LC3I and the level of autophagy-related gene 5 (ATG5), whereas SPINK1 knockdown (Kd) reversed the above outcome under normal culturing and/or fasting condition in the cells, indicating its role in autophagy enhancement. Moreover, LC3-GFP-transfected SPINK1-OE HT29 cells strengthened the fluorescence intensity compared with the untransfected control. Chloroquine (CQ) significantly decreased the level of autophagy in both control and SPINK1-OE HT29 cells. The autophagy inhibitors, CQ and 3-Methyladenine (3-MA), remarkably inhibited the proliferation and colony formation of SPINK1-OE HT29 cells, while ATG5 upregulation resulted in the growth of the cells, suggesting the important function of autophagy in cell’s growth. Thirdly, SPINK1-induced autophagy was independently of mTOR signaling as p-RPS6 and p-4EBP1 were activated in SPINK1-OE HT29 cells. Instead, Beclin1 up and down regulation were clearly observed in SPINK1-OE and SPINK1 Kd HT29 cells, respectively. Moreover, Beclin1 silencing apparently reduced autophagy in SPINK1-OE HT29 cells, indicating that SPINK1-induced autophagy was closely associated with Beclin1. Collectively, SPINK1-promoted proliferation and clonal formation of HT29 cells were closely associated with Beclin1 associated enhanced autophagy. The above findings would open a new window for probing the role of SPINK1-related autophagic signaling in the pathogenesis of CRC.     

白桦脂酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用及机制

目的 探讨白桦脂酸（BA）对人宫颈癌HeLa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法 将4×10⁶个HeLa细胞接种于裸鼠右肩背部皮下,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,24只荷瘤裸鼠随机分为BA高剂量（80mg／kg）、中剂量（40mg／kg）、低剂量（20mg／kg）组及空白对照组（含溶剂）,每组6只,隔日腹腔注射连续给药21d,停药24 h后处死裸鼠,测量裸鼠体重、移植瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数;免疫组化法检测瘤组织内caspase-3、CytoC蛋白表达。结果 裸鼠处死后,BA处理组的移植瘤体积均明显小于空白对照组（P＜0.01）,其中高、中、低剂量组抑瘤率分别为56.2％、40.4％和24.6％ （P＜0.01）;HE染色法显示BA处理组小鼠的移植瘤组织出现明显凋亡及坏死改变;TUNEL检测对照组和BA低、中、高剂量组的凋亡指数分别为（8.36±2.78）％、（20.98±3.01）％、（28.74±4.77）％和（39.34±6.15）％（P＜0.05）;免疫组化法示BA处理组的肿瘤组织caspase-3、CytoC蛋白表达水平较空白对照组明显升高（P＜0.01）。结论 BA对人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调caspase-3、CytoC蛋白的表达及诱导细胞凋亡有关。