多药耐药肺炎克雷伯菌gyrA基因新亚型的发现

目的调查多药耐药肺炎克雷伯菌中喹诺酮类耐药相关基因的存在与变异状况。方法收集绍兴市人民医院2007年10月-2009年6月住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌共20株,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析1种染色体介导的喹诺酮类耐药相关基因(gyrA基因)和5种质粒介导的喹诺酮类耐药相关基因〔qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb、qepA基因〕。结果 gyrA基因83位密码子17株菌(85.0%)有突变,87位密码子7株菌(35.0%)有突变,各分为4种突变方式;SX007株存在同义突变的gyrA基因新亚型,SX001、002、003、006、017株同时存在有义突变和同义突变的gyrA基因新亚型;另检出aac(6′)-Ⅰb-Cr基因2株(10.0%),qnrB基因1株(5.0%),qnrS基因4株(20.0%);qnrA和qepA基因未检出。结论该组多药耐药肺炎克雷伯菌gyrA基因突变率高,这是喹诺酮类耐药的主要原因,其他耐药基因阳性率比较低。     

多药耐药肺炎克雷伯菌抗菌制剂外排泵基因研究

目的了解20株多药耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)的灭菌剂、消毒剂、抗菌药物等抗菌制剂外排泵基因存在情况。方法运用PCR法对20株多药耐药肺炎克雷伯菌mdfA、tehA、smr、qacE△1等抗菌制剂外排泵基因进行检测。结果检出mdfAt、ehA、smr、qacE△1等4种外排泵基因,阳性率分别为:85.0%、5.0%、20.0%、75.0%;mdfA、qacE△1阳性率高,多数菌株能同时检出多种外排泵基因;在肺炎克雷伯菌中检出mdfA、tehA、smr基因为国内首次报道。结论多耐药肺炎克雷伯菌易检出多种外排泵基因,与医院多药耐药肺炎克雷伯菌耐药机制相关的可移动遗传元件主要有mdfA、qacE△1,耐药菌外排泵携带率高,开发抑制剂显得十分重要。     

多药耐药肺炎克雷伯菌抗菌制剂外排泵基因研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKPN)抗菌制剂外排泵基因的存在状况。方法收集连云港市第二人民医院2008年11月-2009年10月住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌20株,采用PCR法检测mdfAt、ehA、oqxA、qacE△1等4种抗菌制剂外排泵基因。结果 20株多药耐药肺炎克雷伯菌mdfA、tehA、oqxA和qacE△1基因检出阳性率分别为85.0%、15.0%、10.0%和95.0%。结论 MDRKPN抗菌制剂外排泵基因携带率较高,肺炎克雷伯菌多药耐药的表型可能与携带抗菌制剂外排泵基因相关。     

多药耐药肺炎克雷伯菌15种抗菌制剂外排泵基因研究

目的 调查一组多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)中抗菌制剂外排泵基因的存在情况.方法 收集2008年8月-2010年5月浙江省杭州市和湖州市6所医院共47株MDRKP,采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析15种抗菌制剂外排泵基因.结果 47株MDRKP共检出emrB、mdfA、ramA、qacE△1、oqxA、tehA、smr-Kpn、sugE、tetB、emrD和tetA 11种抗菌制剂外排泵基因,阳性率分别为100.00％、100.00％、100.00％、82.98％、80.85％、29.79％、8.51％、4.26％、4.26％、2.13％、2.13％,其余4种基因未检出;可分为10种阳性检出模式,其中以emrB+ mdfA+ ramA+ oqxA+ qacE△1阳性模式为主,占53.19％.结论 携带这11种抗菌制剂外排泵基因是导致本组菌呈多药耐药的一个重要原因,在肺炎克雷伯菌同时检测这15种抗菌制剂外排泵基因为国内首次报道.     

201株肺炎克雷伯菌耐药性分析及其gyrA基因分析

目的 了解肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因gyrA的分布,给临床用药提供依据.方法 收集2003-2009年临床分离的肺炎克雷伯菌201株,采用琼脂稀释法进行药敏检测;利用引物特异性PCR结合测序识别gyrA基因耐药基因.结果 201株肺炎克雷伯菌对甲氧苄啶和氨苄西林有很高的耐药性,但是对亚胺培南和阿米卡星较为敏感;同时,检测到60株占29.9％存在gyrA基因突变.结论 随着抗菌药物的大量使用,肺炎克雷伯菌耐药性较严重,易导致肺炎克雷伯菌产生多药耐药性,给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战.     

多药耐药肺炎克雷伯菌毒力基因研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)中5种毒力基因存在情况,为临床治疗提供参考依据。方法收集2008年8月-2010年5月杭州市和湖州市6所医院共47株MDRKP,采用PCR及序列分析方法检测5种毒力基因(arr、magA、rmpA、hofA和ompT)。结果 47株MDRKP中检测到arr和magA两种毒力基因,检出率分别为29.8%和17.0%;6所医院A、B、C、D、E、F的MDRKP分离株中毒力基因arr的检出阳性率分别为26.7%、81.8%、0、14.3%、0、0,6所医院A、B、C、D、E、F的MDRKP分离株中毒力基因magA的检出阳性率分别为0、0、0、0、0、88.9%。结论 MDRKP中毒力基因arr和magA具有一定的携带率,在MDRKP中检出毒力基因arr和magA为国内首次报道。     

肺炎克雷伯菌多药耐药株的耐药机制研究

目的 调查1株多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)58种耐药相关基因与可移动遗传元件的存在情况. 方法 对分离自我国内地的1株MDRKP,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析58种β-内酰胺类、氨基糖苷类,喹诺刚类和其他广谱抗菌药物耐药相关基因与可移动遗传元件. 结果 该株MDRKP检出TEM-1、SHV-11(均测序比对证实)、tetA、mafA、trbC、tnp513、ISEcp1基因,且gyrA基因存在突变,其余50种基因未检出. 结论 该菌株耐Ⅰ～Ⅲ代头孢菌素抗菌药物,可能与同时产TEM-1型和SHV-11型β-内酰胺酶引起牵制耐药机制有关,该株MDRKP表型为多药耐药与gyrA基因突变及获得可移动遗传元件和多种耐药基因相关,在肺炎克雷伯菌中检出ISEcp1为国内首次报道.     

肺炎克雷伯菌临床分离株获得性耐药基因检测及指标聚类分析

目的调查肺炎克雷伯菌临床分离株中36种获得性耐药基因和3种整合子遗传标记的存在状况,以及获得性耐药基因和整合子遗传标记的相关性。方法收集江苏某市级医院2005年8月-2006年2月住院患者痰液标本中分离的肺炎克雷伯菌共20株,采用聚合酶链反应的方法分析21种β-内酰胺类获得性耐药基因、15种氨基糖苷类获得性耐药基因以及3种整合子遗传标记,并用指标聚类分析分析β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药基因与整合子遗传标记的相关性。结果 20株肺炎克雷伯菌共检测到7种β-内酰胺类获得性耐药基因、5种氨基糖苷类获得性耐药基因和1种整合子遗传标记基因,其余26种基因均未检测到。结论β-内酰胺类耐药基因比氨基糖苷类耐药基因检出率高,与表型相符;指标聚类分析显示,TEM、LEN、DHA、OXA-1、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、rmtB基因与Ⅰ类整合子遗传标记intⅠ1相关联,提示这些基因可能位于Ⅰ类整合子上。     

新生儿感染肺炎克雷伯菌的喹诺酮类耐药株gyrA基因研究

目的了解湖南地区新生儿感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA基因的流行情况。方法采用PCR法对20株肺炎克雷伯菌进行gyrA基因检测,采用法国生物梅里埃公司生产的VITEK2-COMPACT全自动细菌鉴定检测16种抗菌药物的体外抗菌活性,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析。结果 gyrA基因耐药决定区的突变,其中17株都有第83位的改变,3株发现有第87位的改变。结论本省儿童感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要。     

多药耐药肺炎克雷伯菌9种可移动遗传元件标记研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌可移动遗传元件的存在状况。方法收集连云港市第二人民医院2008年11月-2009年10月住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌20株,采用PCR法检测接合性质粒遗传标记(traAt、rbC)、转座子遗传标记(tnpUt、np513)、插入序列遗传标记(IS26、ISEcp1)、整合子遗传标记(intⅠ1、intⅠ2i、ntⅠ3)9种可移动遗传元件的遗传标记。结果 20株多药耐药肺炎克雷伯菌9种可移动遗传元件标记检出阳性率traA 10.0%t、rbC 60.0%t、npU 45.0%t、np513 60.0%I、S26 100.0%I、SEcp1 60.0%i、ntⅠ95.0%、intⅡ0i、ntⅢ0。结论该组20株多药耐药肺炎克雷伯菌可移动遗传元件遗传标记的携带率较高,尤其是插入序列26和Ⅰ类整合子;肺炎克雷伯菌多药耐药的表型可能与携带多种可移动遗传元件导致耐药基因高表达相关。     

肺炎克雷伯菌的分布与药敏性分析

目的 统计2009-2010年肺炎克雷伯菌的分布、药敏性及流行状况,指导临床用药,控制医院感染.方法 对2010年分离出肺炎克雷伯菌的162例住院患者进行标本、科室分布的统计及药敏分析;对其中多药耐药肺炎克雷伯菌作ESBLs、AmpC酶、碳青霉烯酶、新德里金属β-内酰胺酶(NDM)-1等试验.结果 162株肺炎克雷伯菌主要来自痰液,占76.54％,其次为尿液及伤口分泌物,分别占8.64％、6.79％;主要分布于ICU、呼吸内科,分别占51.23％、22.84％;产ESBLs肺炎克雷伯菌检出84株,检出率为51.85％,产AmpC酶检出20株,检出率为12.355％,产KPC酶检出17株,检出率为10.49％,没有检测到产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)-1菌株.结论 肺炎克雷伯菌耐药率比较高并且耐药因子多样,对多药耐药肺炎克雷伯菌有必要进行耐药机制的检测,以便控制医院感染.     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌traA、tnp513基因研究

目的为了解大肠埃希菌(ECO)、肺炎克雷伯菌(KPN)traA基因和tnp513基因携带状况。方法应用PCR检测ECO、KPN traA基因和tnp513基因。结果29株ECO traA基因阳性24株(82.8%),tnp513基因阳性24株(82.8%);25株KPN traA基因均阴性,tnp513基因阳性23株(92.0%)。结论ECO、KPN耐药性高可能与traAt、np513高携带率有关。     

gyrA、parC及mdfA基因测序鉴定肺炎克雷伯菌

目的 探讨gyrA、parC和mdfA基因测序鉴定临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌的必要性.方法 采用gyrA、parC和mdfA基因测序方法对经法国生物梅里埃公司API 20 E系统(API LAB plus)和MicroScan WalkAway 96 Plus全自动细菌鉴定系统鉴定为克雷伯菌属或产气肠杆菌的19株临床分离株进行分子鉴定.结果 19株菌gyrA、parC、mdfA基因PCR扩增均阳性,基因序列经GenBank中的BLASTn程序进行同源性比较分析,表明与2株完成全基因组测序的肺炎克雷伯菌肺炎亚种NTUH-K2044(Accession:AP006725.1)和MGH 78578(Accession:CP000647.1)最为接近,均为99.0％同源,证实19株均为肺炎克雷伯菌.结论 采用gyrA、parC和mdfA基因测序鉴定肺炎克雷伯菌结果准确.     

儿童感染肺炎克雷伯菌的喹诺酮类耐药株gyrA及parC基因突变分析

目的 了解湖南地区儿童感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势,以及由染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA及parC的流行及变异情况,为治疗儿童肺炎克雷伯菌感染提供依据.方法 以VITEK-2Compact全自动微生物系统检测分离菌株的耐药性,采用PCR法对36株耐喹诺酮类肺炎克雷伯菌进行gyrA及parC基因检测,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析.结果 发现36株耐喹诺酮类肺炎克雷伯菌均发生了gyrA基因耐药决定区的突变,其中33株有第83位丝氨酸的改变,3株发现有第87位氨基酸的改变,而parC基因在所有耐药株中均有第80、91位氨基酸的改变.结论 儿童感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA及parC基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要.     

整合子及其相关基因盒在临床产ESBLs肺炎克雷伯菌的分布

目的检测Ⅰ~Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用K-B纸片扩散法对108株产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株进行药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)分析108株产ESBLs肺炎克雷伯菌株的Ⅰ~Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果108株菌中有58株(53.70%)含有Ⅰ类整合子,未检测到Ⅱ类整合子及Ⅲ类整合子阳性菌;在Ⅰ类整合子阳性菌中,有52株携带Ⅰ类整合子相关基因盒,占89.66%;分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

多药耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶及整合子检测与分析

目的了解新疆维吾尔自治区多药耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶和整合子分布,为有效控制医院感染提供重要依据。方法收集2010年5月-2011年12月医院各种标本5 208份,使用VITEK-2Compact系统进行菌株的鉴定和药敏试验,对14株肺炎克雷伯菌进行改良Hodge试验,亚胺培南-EDTA协同试验,使用PCR技术检测blaNDM、blaIMP、blaIMI、blaVIM、blaGES、blaKPC、Ⅰ^Ⅲ类整合酶及整合子可变区,并测序明确基因型。结果 14株肺炎克雷伯菌对阿米卡星和妥布霉素的耐药率均为71.42%,对亚胺培南和美罗培南及其他抗菌药物的耐药率均为100.00%;14株多药耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验有13株表现为阳性,阳性率92.86%;亚胺培南-EDTA纸条法协同试验检测均表现为阴性;PCR检测多药耐药肺炎克雷伯菌均携带KPC-2基因和Ⅰ类整合子;7株整合子可变区扩增出dfrA12-aadA2基因。结论新疆维吾尔自治区发现的多药耐药肺炎克雷伯菌携带KPC-2基因和Ⅰ类整合子,耐药机制与KPC-2和Ⅰ类整合子有关。     

耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌中整合子及相关基因盒的分布

目的 了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌整合子及相关基因盒的分布,分析整合子与耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌多药耐药的关系.方法 采用革兰阴性杆菌药敏卡检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)法检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因(intⅠ1、intⅡ2、intⅢ3)及Ⅰ类整合子可变医基因盒,并分析可变区上游启动子的类型.结果 74株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中有67株检测到Ⅰ类整合酶基因,检出率为90.5％,2株检测到Ⅱ类整合酶基因,检出率为2.7％,未检测到Ⅲ类整合酶基因阳性菌株;55株(74.3％)成功扩增出Ⅰ类整合子可变区,主要携带甲氧苄啶及早期使用的氨基糖苷类抗菌药物耐药基因,可变区启动子大多为弱启动子;携带Ⅰ类整合子菌株对常用抗菌药物的耐药率与Ⅰ类整合子阴性菌株之间的差异无统计学意义.结论 Ⅰ类整合子及相关基因盒在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中分布广泛.所携带的整合子具有非常强的从周围环境中捕获耐药性基因盒的能力.