兔抗人LOH12CR1 抗血清的制备方法

目的建立LOH12CR1蛋白抗血清的制备及鉴定方法。方法构建GST-LOH12CR1融合蛋白表达系统,诱导获得高表达的GST-LOH12CR1融合蛋白,用纯化的GST-LOH12CR1融合蛋白与弗氏佐剂混合免疫兔,获得特异性的兔抗人LOH12CR1抗血清,用western blot技术进行检测。结果获得了可用于在Western blot试验中检测内源性LOH12CR1表达的血清。结论成功制备了兔抗人的LOH12CR1抗血清,为进一步研究组织和细胞中LOH12CR1的内源性表达差异打下基础。     

制备钩端螺旋体高效价免疫血清的方法探讨

为了制备高效价勾体免疫血清,以满足该病的诊断需要,我们用常规免疫、快速免疫、加佐剂免疫三法制备免疫血清。通过比较,认为佐剂免疫法较为理想,现将结果报导如下: 材料和方法 1.菌株:国内标准株,黄疸出血群沃尔登型。 2.动物:2—3公斤健康家兔(本所供     

几种免疫血清制备方法的比较

为了制备高效价的兔抗鼠 Ig G、兔抗羊 Ig G、兔抗辣根过氧化酶免疫血清 ,为荧光标记二抗、酶标记二抗提供抗体 ,比较了不同的免疫方法的免疫效果。结果发现 ,皮内免疫法的免疫效果比较理想。     

兔抗乐果抗血清制备的初步实验研究

目的:对制备兔抗乐果抗血清进行初步研究。方法:采用生产乐果的中间体硫磷酯与1,4-二氨基丁烷反应合成乐果半抗原,利用碳二亚胺法,将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和包被原。将合成的免疫原免疫新西兰白兔6次,制备抗乐果的抗血清。用间接ELISA检测抗血清的效价,用间接竞争ELISA检测与其他结构类似物的交叉反应率。结果:通过偶联,获得免疫原和包被原,半抗原与BSA和OVA的偶联比分别为13∶1和11∶1。免疫原免疫新西兰白兔获得的抗乐果抗血清效价分别为1∶256和1∶128;与氧化乐果的交叉反应率为23%,与其他所测结构类似的农药交叉反应率均小于2%。结论:通过免疫原免疫新西兰白兔,获得抗乐果的抗血清,但其抗血清效价较低,与制备检测试剂盒的要求尚存在较大的差距。     

大肠杆菌抗血清的制备及应用

制备了大肠杆菌抗原和抗血清,并用抗血清检测药品中污染的相应抗原.在家兔耳静脉注射大肠杆菌原,获得相应抗体,用玻片法和试管法检测样品中污染的大肠杆菌.结果大肠杆菌混合抗血清可与药品中污染的大肠杆菌形成特异性凝胶,该混合抗血清可直接检测药品中污染的大肠杆菌.     

狂犬病疫苗的单向辐射状免疫扩散效力试验的改进

本文报告用周边有孔的圆塑料板代替玻璃板作单向辐射状免疫扩散(SRD)试验检测狂犬病疫苗的效力.疫苗是用PM株制备的人二倍体细胞疫苗(HDCV),效力为7.8IU/ml(第一国际标准疫苗)、两批用LEP株制备的纯化的鸡胚细胞疫苗(PCEC)和1批Merieux研究所制备的HDCV.抗糖蛋白血清系冻干的抗ERA株抗血清.免疫血清溶于含1%琼脂糖和0.1%NaN~3pH7.2的PBS中,最终浓度为4μl/ml.用     

疫苗检定用麻疹病毒抗血清的制备

目的:制备麻疹病毒抗血清,用于含麻疹病毒成分的联合减毒活疫苗的检定。方法:制备麻疹病毒Edm-3株病毒收获液,加入弗氏佐剂,对家兔和豚鼠分别经皮下多点或腹腔途径免疫3针,采血制备抗血清,经除菌过滤和补体灭活后,对抗血清进行中和效价、中和能力、细胞毒性及特异性检测。结果:用4种免疫方式制备的抗血清中和效价均高于1∶320...     

牛乳中抗幽门螺杆菌特异性抗体的间接ELISA法的建立

目的 建立抗幽门螺杆菌(Hp)特异性抗体的ELISA检测方法,用于牛乳中抗Hp特异性抗体的检测.方法 超声Hp全菌抗原接种奶牛,按多克隆抗体制备技术制备牛抗Hp抗血清.用纯化牛IgG免疫家兔.制备兔抗牛IgG多克隆抗体.硫酸铵盐析,DEAE-32柱层析分别纯化牛与兔IgG.兔抗牛IgG以辣根过氧化物酶标记.用Hp全菌抗原包被反应板,建立间接ELISA法用于牛乳抗Hp抗体的检测.结果 建立的抗Hp间接ELISA法的最佳包被抗原量为1.47μg/孔,HRP-兔抗牛IgG 1∶600稀释,标准曲线方程为A=0.0124 0.3988 lnC,相关系数r=0.999 8,线性范围为1.8～145μg/ml,回收宰在86.4%～92.8%,变异系数为9.4%～12.3%.结论 初步建立牛乳中抗Hp抗体的间接ELISA测定法,可用于Hp免疫牛乳中抗Hp特异性IgG的检测.     

以CpG为佐剂的人IL-24多克隆抗体的制备

目的：采用在原核表达系统表达的人IL-24蛋白及人IL-24真核重组质粒免疫新西兰兔，制备兔抗人IL-24多克隆抗体。方法：利用IPTG诱导hIL-24在大肠杆菌中表达，纯化hIL-24重组蛋白，纯化后的蛋白经SDS—PAGE分析，同时提取hIL-24真核重组质粒，用以免疫新西兰兔，并以CpG为佐剂制备多克隆抗体。Western-blot鉴定抗体的特异性，ELISA法测定抗体效价。结果：人IL-24经IPTG诱导后可在大肠杆菌中大量表达，表达量占细菌总蛋白的30％，纯化后的蛋白纯度高；原核表达的重组蛋白和真核重组质粒免疫新西兰兔，通过抗体效价测定，获得了抗血清效价达1：640的多克隆抗体。结论：原核表达的hIL-24蛋白和hIL-24真核重组质粒均能刺激家兔产生抗体．其多克隆抗体的效价较高。     

抗恩诺沙星抗血清的制备及其ELISA检测

目的:建立快速、灵敏的恩诺沙星残留酶联免疫检测方法(ELISA)。方法:采用混合酸酐法,将恩诺沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(Enrofloxac in-BSA)和包被抗原(Enrofloxac in-OVA)。通过背部多点免疫法免疫日本大白耳兔,制备抗恩诺沙星的特异性抗血清。结果:利用所获得的特异性抗血清,建立的恩诺沙星ELISA检测方法,其线性范围为5 ng.mL-1～2.5μg.mL-1(R2=0.9935),且与HPLC方法具有良好的相关性(R2=0.9892,n=9)。牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为98.4%～105.8%,91.7%～101.2%,97.0%～110.3%。运用所建立的方法,对大鼠体内血浆及药品中恩诺沙星的含量进行了测定。结论:本研究所建立的检测恩诺沙星的ELISA方法具有样品前处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,适合用于恩诺沙星的体内分析及动物性食品中恩诺沙星的残留分析。     

兔抗肠道病毒71型血清制备中免疫剂量对抗体效价的影响

目的:研究兔抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)血清制备中不同免疫剂量对抗体效价的影响。方法:将9只实验兔简单随机分为3组,每组3只。5、50和100 μg 3个剂量EV71灭活疫苗和弗氏佐剂均匀混合后,通过肌内注射途径分别免疫3组动物,于第0、7、14及28天各免疫1次,每7天采血,分离血清,检...     

用特异性抗体酶免疫测定法检测百日咳杆菌抗原

实验室诊断百日咳的血清学方法敏感性较低,当前酶免疫测定法是检测百日咳抗原最灵敏的方法之一。作者试图采用百日咳特异性抗体竞争酶标抗原(竞争法)的方法来检测患儿体内抗原。本文报道用三氯醋酸裂解百日咳杆菌细胞获得有效的蛋白成分作为抗原,与弗氏完全佐剂(ΠAΦ)和二醛纤维素分别混合,分5组免疫2500～3000g家兔20只,制备高价免疫血清。用溴化氰活化Sepharose4B与百日咳杆菌抗原结合制成免疫吸附剂,     

大肠杆菌抗血清的制备及应用

制备了大肠杆菌抗原和抗血清,并用抗血清检测药品中污染的相应抗原。在家兔耳静脉注射大肠杆菌原,获得相应抗体,用玻片法和试管法检测样品中污染的大肠杆菌。结果大肠杆菌混合抗血清可与药品中污染的大肠杆菌形成特异性凝胶,该混合抗血清中可直接检测药品中污染的大肠杆菌。     

心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究

目的构建H-FABP高效原核表达载体,并实现H-FABP的高效原核表达、纯化及多克隆抗体的制备。方法通过RT-PCR扩增人H-FABP的基因序列,将目的基因克隆入质粒pET28a构建原核表达重组质粒pET28a-H-FABP。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导H-FABP的表达,采用Q Sepharose F.F.阴离子层析柱等方法建立H-FABP的纯化工艺。用免疫胶体金法和Western blot鉴定纯化后重组蛋白免疫特异性,用重组表达蛋白制备兔抗H-FABP多克隆抗体。结果成功构建人H-FABP重组蛋白原核表达载体,重组蛋白以包涵体形式表达,其相对分子质量为15kD,与预期一致。亲和层析纯化产物的SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明获得纯度>95%的目的重组蛋白。制备的抗H-FABP多克隆抗体的抗血清ELISA效价可达1∶512000。结论本研究在原核系统中成功表达了H-FABP重组蛋白,并制备多克隆抗体,为H-FABP的结构和功能研究及开发临床诊断试剂盒打下了基础。     

高效价兔抗羊免疫血清制备及其在实验教学中的应用

<正>家兔经绵羊红细胞(SRBC)免疫后血清中可出现抗SRBC的抗体,采集免疫动物血液分离血清,即可获得抗SRBC的抗血清。用SRBC与相应抗血清混合,当有补体存在时,在一定条件下,SRBC被溶解破坏,故抗SRBC抗体又称为溶血素。动物免疫血清是医学教学、科研及临床实验工作中经常要用到的试剂。但目前市场上购买到的溶血素价格昂贵,效价也不高,因此为了节约经费,使用方便,提高实验课的教学质量,本实     

抗空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1多克隆抗体的制备与鉴定

目的 表达空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1,并制备针对该蛋白的多克隆抗体.方法 诱导培养工程菌E coli BL21 (DE3)表达空肠弯曲菌PEB1重组蛋白.经镍-琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化,透析并定量后,常规免疫新西兰兔.收集血清,盐析法粗提IgG,应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测抗体效价,并通过Western blot和玻片凝集试验检测抗体的特异性.结果 得到高纯度的空肠弯曲菌PEB1重组蛋白.用该蛋白免疫新西兰兔后,获得抗PEB1多克隆抗体.间接ELISA法检测抗体效价为1:2×104,双向琼脂扩散试验检测抗体效价为1:8.结论 运用纯化的空肠弯曲菌PEB1重组蛋白免疫新西兰兔,获得高效价的多克隆抗体.     

人血浆低密度脂蛋白(LDL)的分离纯化及鉴定

建立人血浆低密度脂蛋白(LDL)的分离纯化与鉴定方法。用密度梯度超速离心法分离人血浆中LDL,通过Sepharose 6B凝胶柱层析进一步纯化,采用免疫双扩散法、SDS-PAGE电泳法进行鉴定,用Bradford法进行定量检测,获得单一的蛋白条带,此条带蛋白可与apoB-100标准抗血清发生特异性反应,得到高纯度LDL10.26mg。本方法重复性好、可靠性高,为构建兔抗人血清载脂蛋白apoB-100多克隆抗体研究奠定基础。     

多次注射抗原会降低产生单克隆抗体的杂交瘤细胞的数量

作者用人绒毛膜促腺激素β链(β-HCG)、异硫氰酸荧光素(FITC)和鼠的独特型抗原分别对小鼠进行免疫。首次免疫用含约25～100μg抗原的PBS100μl与等量弗氏完全佐剂混合作腹腔注射,使用的β-HCG不经处理,半抗原FITC为FITC与血蓝蛋白的结合物,鼠独特型抗原是用单克隆抗体经戊二醛结合至卵白蛋白的复合物。2～3个月后,进行加强免疫,抗原剂量相同,但不含佐     

抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体,并对其特性进行初步鉴定.方法:重组表达蛋白,免疫动物制备人羧酸酯酶1的多克隆抗体,辛酸-硫酸铵法纯化抗体,对纯化的抗体进行EUSA、Western Blotting和免疫组化鉴定.结果:获得抗人羧酸酯酶1多克隆抗体.该抗体效价为1:64 000;Westem Blott...     

利福平及其蛋白偶联物致敏兔和利福平特异IgG的检测

用利福平及两种利福平－蛋白偶联物：利福平－牛血清白蛋白及利福平－－兔血清白蛋白免疫兔，用ELISA方法对兔抗血清中利福平特异IgG进行检测。利福平－牛血清白蛋白及利福平－兔血清白蛋白的偶联方式及偶联比例不同。利福平特异IgG的效价分别为：利福平免疫组1：10－1：100，利福平－兔血清白蛋白免疫组1：100－1：10000；利福平－牛血清白蛋白免疫组超过1：1000。抑制实验证明了抗血清的利福平特异性。这些利福平致敏动物模型是首次用利福平或利福平－蛋白偶联物致敏的动物模型。