缺氧环境对牙周膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究缺氧环境对牙周膜成纤维细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用氯化钴模拟法构建人牙周膜成纤维细胞缺氧模型。观察缺氧条件下牙周膜成纤维细胞形态变化,采用CCK-8检测细胞增殖情况,并用Western Blot方法检测凋亡相关因子p53、Bcl-2及caspase-7的表达变化。结果随着时间延长,缺氧组细胞数量减少,体积逐渐变小,细胞胞浆浓缩,细胞存活率降低。 Western Blot 结果显示缺氧组 p53、Bcl-2及caspase-7蛋白表达量随着缺氧时间延长逐渐升高。缺氧组p53蛋白、caspase-7表达高于常氧组,Bcl-2表达低于常氧组。结论缺氧环境可影响牙周膜成纤维细胞形态、增殖活性及凋亡相关蛋白的表达。     

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞系ECV304的抑制作用及其机制的实验研究

目的：探讨平阳霉素对人脐静脉内皮细胞系ECV304的抑制作用及其相关机制。方法：用不同浓度的平阳霉素作用ECV304细胞不同时间,以MTT法比较平阳霉素作用24、48及72h后的细胞抑制率,应用DNA电泳实验、流式细胞术分析细胞凋亡、坏死情况、细胞周期及Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果：MTT法显示随平阳霉素浓度升高和作用时间的延长,细胞生长抑制越明显DNA电泳证实合适浓度平阳霉素作用下细胞发生凋亡,过高浓度细胞则发生坏死;流式细胞术显示细胞凋亡率和坏死率随药物浓度和作用时间增加而增高,过高浓度细胞坏死占主导;平阳霉素各浓度作用24h后,G2—M期百分率增高,S期百分率降低,G0—G1期百分率无明显变化;Fas表达随药物浓度增加而递减,Bcl-2表达随药物浓度增加而升高。结论：平阳霉素能明显抑制ECV304细胞生长,并具有浓度和时间依赖性;平阳霉素可能通过诱导凋亡和坏死作用以抑制ECV304细胞的体外生长和增殖;细胞凋亡发生在G2—M期,是通过上调Fas蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达来实现的。     

人牙周组织中三种细胞的培养、形态学及增殖性研究

目的：研究牙周组织中三种主要细胞的形态、生长方式、增殖能力等生物学特性。方法：对人牙龈成纤维细胞(GFs)、牙周韧带细胞(PDLSs)及牙槽骨细胞(ABCs)进行分离、培养、传代，在倒置显微镜下观察其形态学及生长方式，用MTT法检测细胞的增殖活性。结果：三种细胞在镜下均表现出成纤维细胞的特征，但具有不同的增殖活性，GFs的增殖能力显著高于PDLSs和ABCs(P＜0．01)。结论：由于它们来源于不同的解剖部位，在体外培养中表现出不尽相同的特性，从而表明其在体内会发挥不同的作用。     

尼古丁对人牙周膜成纤维细胞中Fas/Apo-1（CD95）表达的影响

目的：研究尼古丁（nicotine）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）中Fas/Apo-1（CD95）表达的影响。方法：采用组织块培养法培养原代人牙周膜成纤维细胞并传代取处于对数生长期的第6代细胞用于实验,采用浓度为2mg/L的尼古丁处理第6代牙周膜成纤维细胞72h,通过免疫组织化学染色法检测尼古丁对人牙周膜成纤维细胞中Fas表达的情况。结果：证实尼古丁作用于人牙周膜成纤维细胞后,胞膜中Fas/Apo-1（CD95）抗原呈阳性表达。结论：提示尼古丁可通过Fas系统这一途径导致人牙周膜成纤维细胞的凋亡,从而加重牙周组织破坏的程度和影响牙周组织的再生。     

放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的？…

目的：观察放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的增殖抑制作用。方法：采用细胞计数法和图像分析法观察对人牙龈成纤维细胞的生长抑制作用。结果：此物质抑制作用明显，能抑制细胞的分裂、增殖、使细胞、细胞核面积增大，１００ｍｇ／Ｌ对与对照差别显著，且细胞无死亡现象。结论：此物质可明显抑制人牙龈成纤维细胞的生长、增殖，在牙周病病理变化过程中起重要作用。     

雌激素对牙周膜细胞生物学性质的影响

目的：明确雌激素对体外牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和碱性磷酸酶的影响，以探讨雌激素对牙周组织改建的影响。方法：SD大鼠来源的牙周膜成纤维细胞经传代培养至第四代，建立体外创伤模型，分别在普通培养基和含雌激素的培养基中培养，观察测量细胞迁移情况，运用MTT、酶联检测仪测定细胞的增殖速度，对细胞的ALP进行提取和测定。结果：MTT结果硅示加入雌激素对该细胞的增殖无明显影响；在含雌激素的培养基中成纤维细胞的迁移速度加快；同时牙周膜成纤维细胞的ALP表达娃著提高。结论：雌激素能明显促进牙周膜成纤维细胞的迁移，促进其分化。     

干扰素-γ对腭部瘢痕成纤维细胞的影响

目的:探讨γ干扰素对腭部瘢痕成纤维细胞的生物学作用。方法:以腭瘢痕成纤维细胞为研究对象,采用三维培养法,了解基因重组γ干扰素(IFN-γ)对瘢痕组织中成纤维细胞的生长增殖、组织收缩等生物学活动的影响。结果:IFN-γ可以抑制腭部瘢痕成纤维细胞的生长增殖及三维培养的胶原纤维凝胶的收缩。结论:IFN-γ是创伤愈合与瘢痕形成过程中的一种负性调节因子,对减少瘢痕的形成及收缩具有一定的作用。     

放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的增殖抑制作用

目的：观察放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞的增殖抑制作用。方法：采用细胞计数法和图像分析法观察对人牙龈成纤维细胞的生长抑制作用。结果：此物质抑制作用明显，能抑制细胞的分裂、增殖，使细胞、细胞核面积增大，１００ｍｇ／Ｌ对与对照组差别显著（Ｐ＜０．０５），且细胞无死亡现象。结论：此物质可明显抑制人牙龈成纤维细胞的生长、增殖，在牙周病病理变化过程中起重要作用     

bFGF对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK/ERK、NF-κB通路的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK／ERK、核转录因子-κB（NF—κB）信号通路的影响。方法：培养人涎腺腺样囊性癌细胞株（ACC-2），MTT比色法测定不同浓度bFGF对细胞增殖的影响；免疫沉淀法纯化蛋白并ERK试剂盒测定ERK活性；Western—blot测定p-ERK及NF—κB抑制物（I-κBa）表达。并观察丝裂原蛋白活化激酶激酶（MEK）抑制剂U0126对上述指标的干预作用。结果：MTT实验显示bFGF明显增强ACC-2细胞增殖，免疫沉淀法显示bFGF上调ERK活性，免疫印记法显示bFGF明显增强p-ERK1／2表达及抑制I-κBα表达。U0126可抑制bFGF的以上效应。结论：bFGF可促进人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖，其途径与上调ERK活性，激活ERK、NF—κB信号通路有关。     

人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性的研究

目的:体外原代培养人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,并对其生物学活性作初步探讨.方法:采用组织块法原代培养牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,绘制生长曲线,测定二者碱性磷酸酶活性;流式细胞术和免疫组化染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、骨形成蛋白的表达情况,观察对比两种细胞的生物学特性的异同.结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功率及细胞增殖活性明显高于牙周膜细胞.在牙周膜细胞中,Ⅰ、Ⅲ型胶原均为阳性表达,棕黄色颗粒克满整个胞浆内.在牙龈成纤维细胞中Ⅰ型胶原为弱阳性表达,Ⅲ型胶原阳性表达更弱.牙周膜细胞的ALP水平明显高于牙龈成纤维细胞.牙周膜细胞BMP2表达为强阳性,而牙龈成纤维细胞表达弱阳性.结论:牙周膜细胞具有较强的成骨能力,是理想的牙周组织工程的种子细胞.牙龈成纤维细胞易于培养成活,增殖力强,具有牙周膜细胞的一些特点,组织取材方便,也可作为牙周组织工程的种子细胞.     

三维培养的牙周成纤维细胞在循环张力作用下基质降解的变化

目的：研究培养在胶原胶中的牙周成纤维细胞受循环张力作用后胞外基质降解的变化。方法：植入牙周成纤维细胞的胶原胶受循环张力机械作用24h，应用组化染色、酶凝胶电泳和ALP、DNA分析，观察细胞受力后形态学变化，检测培养基及胶原胶中MMPs的表达变化、细胞的增殖、ALP活性的改变。结果：受力后，细胞沿应力方向排列，DNA含量增加，培养基中MMP-2的表达增加，ALP活性降低。结论：循环张力能改变细胞排列方向，促进了细胞增殖和胞外基质的改建。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究—细胞形态，生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的：建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法．；采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养，通过光镜，透射电镜，生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果：两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显判别，传代培养时牙龄纤维细胞有接触抑制现象，而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长，牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显，生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龄成纤维细胞；碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的判别。结论：体外培养的两种细胞在形态及排列上相似，但百细胞亚型的组成上存在差异。     

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞分泌整合素α2的影响

目的：通过研究槟榔碱对体外培养的人口腔黏膜成纤维细胞（FB）表达整合素α2的影响,探讨整合素α2在口腔黏膜成纤维性变（OSF）发病机制中的可能作用。方法：体外培养人正常口腔黏膜成纤维细胞（FB）,培养基中加入不同浓度（0、10、20、40、80、160μg/ml）的槟榔碱孵育,MTT法12h后检测FB的增殖水平。RT-PCR法24h后检测0、10、20、40μg/ml浓度组整合素α2mRNA的表达水平。结果：槟榔碱浓度为20μg/ml时,FB增殖活性开始下降,与对照组相比无统计学差异（p〉0.05）,40μg/ml时下降明显与对照组相比有统计学差异（p〈0.05）。正常对照组整合素α2mRNA表达量低,随槟榔碱浓度增高其表达量呈增高趋势（p〈0.05）。结论：槟榔碱具有刺激FB表达整合素α2的作用,提示FB分泌整合素α2增多,进而诱导胶原合成增多,可能是OSF发生机制之一。     

Fas转染及抗体处理对舌鳞癌细胞Tca8113移植瘤形成和增殖的影响

目的　研究Fas转染和抗Fas单克隆抗体对舌鳞癌细胞系Tca8113裸鼠体内移植瘤形成和增殖的影响,探讨相关机制。方法　脂质体法以真核表达重组质粒pBK-fas转染舌鳞癌细胞系Tca8113。部分转染细胞行抗Fas单克隆抗体处理。未转染细胞、Fas转染细胞、Fas转染抗体处理细胞分别接种裸鼠皮下。观测移植瘤生长,绘制生长曲线。RT-PCR检测肿瘤细胞Fas mRNA表达。流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡、增殖及Fas蛋白表达。结果　Fas转染和抗体处理延迟肿瘤形成,抑制肿瘤增殖。Fas转染上调移植瘤Fas mRNA表达,提高Fas蛋白表达强度和凋亡指数,但不影响Fas蛋白阳性表达率和增殖指数。抗体处理不影响Fas mRNA和蛋白表达,但可提高凋亡指数,降低增殖指数。结论　Fas转染抑瘤效应是上调Fas转录和表达、促进凋亡的结果。抗Fas单克隆抗体抑瘤效应则与激活凋亡和抑制增殖有关。     

口腔扁平苔藓凋亡相关基因的表达及意义

目的：探讨凋亡相关基因P53，Bcl-2,Fas,Fas-L的表达在口腔扁平苔藓（Oral Lichen Planus OLP)病变形成及发展中的作用。方法：采用免疫组化SABC法对28例OLP病损中凋亡调节蛋白P53，Bcl-2,Fas,Fas-L进行检测，并与正常口腔粘膜比较，结果：（1）P53蛋白在正常口腔粘膜中表达阴性，但可在OLP上皮基底细胞及部分棘细胞中表达。（2）Bcl-2蛋白在正常口腔粘膜及OLP病损上皮中表达很弱或阴性，但在OLP固有层浸润的淋巴细胞呈强阳性表达。（3）Fas和Fas-L在正常口腔粘膜及OLP病损上皮中表达差异不显著（P＞0．05），结论：口腔扁平苔藓病变的形成及发展部分归因于凋亡，P53和Bcl-2蛋白对OLP局部上皮病变及炎性细胞浸润的存在可能有一定作用。而Fas和Fas-L系统在OLP病变形成及发展中可能不起主要作用。     

内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶的影响

目的观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶-1,3量的影响,探讨基质金属蛋白酶在牙周炎致病机制中的可能作用。方法通过改良酶消化组织块法进行牙龈成纤维细胞的原代培养,用内毒素对其进行刺激,运用MTT法观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性的影响,通过免疫组化法检测内毒素对牙龈成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1,3的影响。结果MTT结果显示,低浓度内毒素在短期内可以促进牙龈成纤维细胞的增殖,但随着时间的延长,也表现为对细胞的毒性作用,抑制其增殖;高浓度内毒素抑制牙龈成纤维细胞的增殖;免疫组化研究结果表明,未受LPS刺激的牙龈成纤维细胞MMP-1,3表达弱阳性,受刺激后阳性表达增强,在12h时达到顶峰,且MMP-3的整体表达较MMP-1弱。结论LPS可以影响牙龈成纤维细胞的增殖活性;LPS可以促进牙龈成纤维细胞对基质金属蛋白酶的分泌,加快牙周细胞外基质的降解,加速牙周炎的进程。     

肿瘤坏死因子-α对舌癌细胞增殖活性和重组人骨形态蛋白2相关蛋白及受体的影响

［摘要］ 目的 研究肿瘤坏死因子（TNF）-α对经过重组人骨形态蛋白(rhBMP2)2处理后的舌癌细胞增殖活性和相关的信号通路Smad4及受体蛋白的影响。方法 复苏舌癌细胞,用MTT法检测TNF-α对舌癌细胞和经rhBMP2处理后的舌癌细胞的增殖活性的影响。RT-PCR和Western blot检测其对细胞内信号通路Smad4和受体mRNA及受体蛋白表达的影响。结果 结果表明TNF-α作用于舌癌细胞及经过rhBMP2处理的舌癌细胞后,细胞的增殖活性明显降低,后者降低更加明显。TNF-α可以诱导Smad4、BMP2受体mRNA及受体蛋白的表达。结论 TNF-α可以抑制舌癌细胞的增殖,将TNF-α和rhBMP2共同作用于舌癌细胞后,对细胞的增殖抑制更加显著。TNF-α可以提高Smad4、BMP2受体mRNA及受体蛋白的表达。     

口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞与PGA的生物相容性研究

目的：观察口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞在聚羟基乙酸(PGA)上的粘附生长情况，在体外形成活的黏膜样组织的能力。方法：口腔黏膜上皮细胞无血清、无饲养层体外培养、扩增至第二代，与PGA混合培养形成细胞一生物材料复合物；口腔黏膜成纤维细胞体外培养、扩增至第二代，与PGA混合培养形成细胞一生物材料复合物；①光镜、扫描电镜下观察两种细胞分别与PGA的粘附生长情况；②用MTT法检测口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞在PGA上的增殖情况，绘制细胞生长曲线。结果：口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞能够在PGA上粘附生长，其生长增殖能力优于平皿培养。结论：PGA与口腔黏膜上皮细胞或成纤维细胞具有良好的生物相容性，其降解产物无毒。不影响细胞生长及分泌基质。     

口腔癌相关成纤维细胞的体外生物学行为研究

目的探讨口腔鳞癌中癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts,CAFs)的体外生物学行为。方法组织块贴壁法培养CAFs及牙龈正常成纤维细胞(normal fibrolasts,NFs);通过形态观察,免疫组化染色,细胞增殖活性、贴壁率、迁移能力等测定,比较两种细胞的生物学行为差异。结果与NFs相比,CAFs特征性表达成纤维激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2),具有更高的增殖活性、贴壁率及迁移能力(P<0.05)。结论口腔癌CAFs特征性表达相关蛋白,体外增殖、粘附、迁移能力均高于NFs。     

牙周组织病

20062333盐酸米诺环素软膏牙周袋内药物释放特征的体内研究；20062334脉冲Nd：YAG激光照射对人牙周膜成纤维细胞的影响；20062335米诺环素对牙周膜细胞在根面上附着和增殖的影响；20062336牙周炎与类风湿关节炎的相关性研究；20062337十二烷基硫酸钠对人牙周膜细胞活性影响的实验研究；20062338NGFmRNA在人牙周膜成纤维细胞的表达。[编者按]